Facultad de Medicina Humana

Escuela profesional de Medicina Humana Laboratorio de DENGUE Y RABIA

CURSO: LABORATORIO DOCENTE : MC.RICHARD MELENDEZ

INTEGRANTES

CORDOVA AREVALO, JHOANA VERONICA DIBURGA DEL AGUILA, CAMILA

CICLO

VI

PUCALLPA PERU 2011

DENGUE Definicin: El Dengue es una enfermedad vrica, infecciosa, contagiosa tropical caracterizada por fiebre y dolor intenso en las articulaciones y msculos, inflamacin de los ganglios linfticos y erupcin en la piel. La enfermedad del dengue es endmica en algunas zonas de los trpicos y han aparecido epidemias en pases tropicales y templados. No suele ser fatal y con frecuencia tiene una evolucin de seis a siete das, pero la conducencia es larga y lenta. Una forma ms grave pero rara es la fiebre hemorrgica del dengue. Carece de tratamiento especfico. Esta enfermedad es transmitida por la picadura de un mosquito tropical. Este mosquito, en la mayora de los casos, suele ser el Aedes aegypti, as como otras especies de este gnero, o incluso, en casos muy raros por el Culex. El Aedes aegypti se distingue de las otras especies por su morfologa y por la forma en que se posa en la piel, al momento de picar. La infeccin del dengue es causada por un virus de la familia Flavovirus. Este virus tiene cuatro variedades, es decir, hay cuatro virus del dengue semejantes entre s, pero no iguales, identificados por nmeros:

Dengue 1 Dengue 2 Dengue 3 Dengue 4

Cualquiera de estas cuatro variedades o serotipos puede producir la enfermedad. El ms frecuente en el dengue clsico es el serotipo 1, que a su vez es el menos frecuente en el dengue hemorrgico.Sinnimo usados frecuentemente para referirse al dengue: Fiebre roja, Fiebre rompehuesos Fiebre Dandy. El dengue es una enfermedad vrica febril y aguda que se caracteriza por un comienzo repentino, fiebre que dura de tres a cinco das (rara vez ms de siete das, y suele ser difsica), cefalea intensa, mialgias, cutralgia, dolores musculares y articulares, adenopatas y una erupcin urticariana o morbiliforme sincrnica con el retorno de la fiebre. Hay falta de apetito en el enfermo, provocando as alteraciones en el aparato digestivo y debilitamiento del cuerpo. Para la fecha en que la fiebre muestra defervescencia suele aparecer una erupcin generalizada. En cualquier momento de la fase febril pueden aparecer fenmenos hemorrgicos de poca intensidad, como petequias, epistaxis o neurotrorragia. En las personas de piel oscura la erupcin a menudo no es visible; la recuperacin puede acompaarse de fatiga y depresin duraderas. Las epidemias tienen carcter explosivo, pero la tasa de letalidad es muy baja, siempre que no aparezca el dengue hemorrgico. El diagnstico diferencial incluye todas las enfermedades epidemiolgicamente importantes incluidas bajo los rubros de fiebres vricas transmitidas por artrpodos, sarampin y otras enfermedades febriles sistemticas. El agente patgeno es un arbovirus que se transmite al hombre por la picadura del Aedes Aegypti.

Fuente de Infeccin : La fuente de infeccin es el hombre. Modo de transmisin : Por la picadura de mosquitos infectantes, el Aedes Aegypti. LaM hembra del mosquito pica a una persona cuya sangre contiene el virus y puede transmitir la enfermedad en dos (2) tiempos. a.- Inmediatamente al picar a otro husped cercano. b.- Despus de un perodo de incubacin en el mosquito de 8-10 das durante el cual se multiplican en las glndulas salivales. No se transmite persona-persona. Perodo de Incubacin : Va de 3 a 15 das, con un promedio de 5 6 das. Perodo de Trasmisibilidad: Los enfermos pueden infectar a los mosquitos transmisores desde el da anterior al comienzo, hasta el quinto da del inicio de los sntomas. Inmunidad y Resistencia : Todos somos susceptibles; la inmunidad es especfica y por siempre para un tipo de virus. Puede ocurrir infeccin por cada uno de los virus. Dengue durante la vida de la persona. FISIOPATOLOGIA La inmensa mayora de las infecciones vrales NO estn asociadas a alteraciones de la hemostasis; una pequea cantidad de virus producen hemorragias como manifestacin frecuente, muchos de ellos tienen nombres exticos como fiebre de la floresta de Kyasamur o del Valle Riff; el virus del Dengue y de la Fiebre Amarilla causan hemorragias. Estos virus producen alteraciones de la coagulacin por varios mecanismos, revisaremos someramente las alteraciones presentes en el Dengue. La interaccin entre hemostasis, inmunidad e inflamacin es extremadamente compleja. Mediadores inmunitarios y de inflamacin tienen actividades hemostticas, protenas de la coagulacin intervienen en la respuesta inflamatoria y alteran la respuesta inmunolgica y clulas como los monocitos tienen funciones inmunolgicas y hemostticas, por lo tanto, una revisin profunda de la fisiopatologa de esta enfermedad va ms all de lo que se propone esta publicacin. Las alteraciones de la coagulacin en el Dengue se deben a : Plaquetas : - Disminucin de la trombopoyesis. - Aumento del consumo plaquetario. - Disfuncin plaquetaria. Alteracin Vascular : - Alteracin de la permeabilidad endotelial con elevacin del hematocrito, y acumulo del lquido intersticial y en cavidades serosas. - Dao del endotelio vascular. Su integridad es importante porque debe presentar una superficie No trombognica, regula la trombina, regula la actividad de la protena C, sintetiza substancias que actan en la coagulacin como prostaciclina, activador e inhibidor del plasmingeno, antitrombina, interaccin con plaquetas, etc. Alteraciones de factores de coagulacin : - Alteracin en la sntesis por dao heptico. - Aumento del consumo por coagulacin intravascular, la cual puede aparecer cuando la enfermedad es grave, o el shock no es tratado rpidamente.

Monocitos : Los monocitos y macrfagos son las clulas predilectas de la infeccin por virus del Dengue. Los monocitos son importantes como defensa contra infecciones vrales. Adems, tienen papel en la coagulacin, producen enzimas fibrinolticas, coagulantes y sustancias pro coagulantes; tambin eliminan factores de la coagulacin activados y anticoagulantes biolgicos. PATOGENIA Ha llamado la atencin que el Dengue se presenta en algunas personas como una enfermedad grave, con hemorragias y/o shock y en otros como infeccin febril sin complicaciones. Para explicar esta diversidad hay varias hiptesis. 1.- La ocurrencia de una infeccin previa es un factor de riesgo para que aparezca el Dengue hemorrgico. La presencia de anticuerpos heterotpicos al comienzo de la infeccin forma complejos anticuerpos-virus que facilitan una mayor entrada a ms monocitos y macrfagos, causando una enfermedad severa. Los mecanismos como desde este punto llevan a una enfermedad grave, no son bien conocidos; para algunos es una enfermedad por inmunocomplejos, que activas el complemento con toda su cascada de eventos como liberacin de sustancias vasoactivas, activacin de granulocitos, monocitos etc, con el resultado final de aumento de la permeabilidad y dao vascular. La presencia de inmuno-complejos en las plaquetas explicara la trombocitopenia y disfuncin plaquetara. 2.- Otros piensan que los linfocitos T atacan a la gran cantidad de monocitos y macrfagos infectados, producindose liberacin de numerosas sustancias responsables de las alteraciones hemostticas y vasculares. 3.- Una tercera hiptesis, seala que la aparicin de Dengue hemorrgico no se debe a la preexistencia de anticuerpos, ya que se ha visto en pacientes con infeccin primaria y el 98% de todas las infecciones secundarias no se presentan como casos graves. La virulencia de determinadas cepas o factores del husped, seran la explicacin para que la expresin clnica de esta enfermedad sea tan diferente.

LABORATORIO Alteraciones analiticas de inters Leucopenia por neutropenia, con desviacin a la izquierda y linfocitosis y monocitos relativas .los eosinofilos desaparecen en la fase aguda pero en la convalescencia se observa marcada eosinofilia.existe una forma hemorrgica grave con aparicin de anemia, alteraciones de la coagulacin ( trombocitopenia,descenso del tiempo de protrombina,etc.) y shock. Pruebas de laboratorio para dengue Examen de sangre, leucocitos, plaquetas, hematcrito. Pruebas de la funcin heptica. Cituria. Pruebas especficas para dengue. Aislamiento del virus (antes de las 72 horas). Serologa IgM al 6 to da.

1.- Aislamiento Viral : - Tomar muestras del paciente durante los cuatro (4) primeros das del comienzo de la enfermedad. - Obtener 5-6 ml. de sangre de forma estril y sin anticoagulantes en tubo con tapa y rotulado adecuadamente. - Colocar el tubo con sangre a 4C (en nevera) durante 1-2 horas para permitir la retraccin de cogulo. Centrifugar a 1500 2000 RPM, durante 5 minutos. - Tomar el suero (liquido claro sobrenadante) y pasarlo a otro tubo estril que deber colocarse inmediatamente en hielo seco. - Llene la planilla del caso con el mayor nmero de datos posibles sobre el paciente.

2.- Diagnstico Serolgico : Para el diagnstico serolgico es necesario la obtencin de sueros pareados. El Primer suero deber obtenerse lo ms rpido posible despus de la aparicin de los primeros sntomas de la enfermedad (en los primeros cinco das). El segundo suero del par deber tomarse dos semanas despus del primero. Estos sueros se obtendrn como se describi anteriormente; pero en este caso, en el que se determinar presencia de anticuerpos, todo el proceso puede realizarse a temperatura ambiente, conservando finalmente los sueros obtenidos en el congelador de la nevera hasta su envo al Laboratorio donde se realice el diagnstico (el primer y segundo suero deben enviarse juntos). El diagnstico definitivo de infeccin por dengue, es hecho solamente en el laboratorio y depende del aislamiento viral, de la deteccin del antgeno viral o el RNA viral en el suero o tejido, o deteccin de anticuerpos especficos en el suero del paciente 1. 2. 3. 4. 5. Una muestra sangunea en la fase aguda debe tomarse, tan pronto sea posible luego del inicio de la enfermedad febril. Una muestra sangunea en la fase de convalecencia, idealmente debe ser tomada de 2-3 semanas despus Cinco pruebas serolgicas han sido usadas en el diagnstico de infeccin por dengue : Inhibicinhemaglutinacin (IH), Fijacin de complemento (FC), Neutralizacin (NT), Prueba de inmunocapturaenzimtica de la inmunoglobulina M (MAC-ELISA) Inmunoglobulina indirecta G (ELISA). La prueba de IH (inhibicinhemaglutinacin), es la ms frecuentemente usada, es sensible, fcil de realizar, requiere un equipo mnimo, pero los anticuerpos IH pueden persistir por tiempos prolongados, de hasta 48 aos o ms, por lo que esta prueba es ideal para estudios seroepidemiolgicos. Los ttulos de anticuerpos IH, empiezan aparecer a niveles detectables para el da 5-6 de la enfermedad, los ttulos de anticuerpos en la fase de convalecencia son generalmente superiores a 640 en infecciones primarias.

El contraste, en la respuesta anamnsica inmediata en infecciones secundarias o terciarias por dengue, los ttulos de anticuerpos durante los primeros pocos das de la enfermedad se elevan a 5.120-10.240 o ms. Por lo que ttulos mayores o iguales de 1.280 en la fase aguda o convaleciente temprana son considerados evidencia presuntiva de infeccin reciente por dengue. La prueba FC (fijacin de complemento), no es usada rutinariamente en el diagnstico serolgico de dengue. Es ms difcil de realizar, requiere personal altamente capacitado, se basa en el principio de que el complemento es consumido durante las reacciones antgeno-anticuerpo. Los anticuerpos CF aparecen posteriores a los anticuerpos HI, son especficos de infeccin primaria, y persisten por perodos cortos. En NT (neutralizacin) es la ms especfica y sensible prueba serolgica para los virus dengue. La mayora de los protocolos usados en los laboratorios incluyen las placas sricas de dilucin y reduccin. En general los ttulos de anticuerpos neutralizantes aumentan al mismo tiempo o ms lentamente que los anticuerpos HI y ELISA, pero ms rpido que los anticuerpos CF. MAC-ELISA, es una prueba rpida y sencilla que requiere equipo poco sofisticado. El desarrollo de anticuerpos IgM anti dengue, puede presentarse para el da quinto de la enfermedad. Cerca del 93% de los pacientes desarrollan anticuerpos IgM detectables entre los 6-10 das del inicio de la enfermedad, en el 99% de los pacientes entre los das 10-20 tienen anticuerpos IgM detectables. Los ttulos de anticuerpos IgM en infeccin primaria, son significativamente mayores que en infecciones secundarias, aunque no es infrecuente obtener ttulos de IgM de 320 en casos secundarios. En muchas infecciones primarias, la IgM detectable puede persistir por ms de 90 das, aunque lo normal es que ya no se detecten niveles a los 60 das de la infeccin. MAC-ELISA, es una invaluable herramienta para la vigilancia del dengue. El reas donde el dengue no es endmico, se usa en la vigilancia clnica de las enfermedades virales, con la certeza de que cualquier positivo indica infeccin reciente en los ltimos 2-3 meses. Una apropiada serovigilancia, por MACELISA durante una epidemia determina rpidamente su diseminacin. Es de especial ayuda en pacientes hospitalizados, quienes son generalmente admitidos en fase tarda de la enfermedad. Se debe enfatizar que esta prueba no se debe usar en la forma de toma de decisiones en relacin con el manejo del paciente. Indirecta IgG-ELISA, es comparable con la prueba IH, y es usada para diferenciar una infeccin primaria o secundaria por dengue. Esta prueba es simple y fcil de realizar. No es especfica y tiene reacciones cruzadas con otros flavivirus.

Aislamiento viral Cuatro sistemas de aislamiento viral han sido usados para el virus dengue, inoculacin intracerebral en ratones de 1-3 das de edad, cultivos de clulas de mamferos (LLC-MK2), inoculacin intratorcica de mosquitos adultos y el uso de cultivos de clulas de mosquitos. El mtodo seleccionado de aislamiento viral depende de las facilidades disponibles en el laboratorio. Las tcnicas de inoculacin en el mosquito son las ms sensibles y es el mtodo de eleccin para casos fatales o pacientes con enfermedad hemorrgica severa. La lnea celular del mosquito es el mtodo de eleccin para la vigilancia virolgica rutinaria. Identificacin viral El mtodo de eleccin para la notificacin del virus del dengue es IFI; anticuerpos monoclonales seroespecficos, producidos en cultivos tisulares o lquido asctico de ratones e IgG conjugada fluorescena-isothiocyanate. Esta prueba es fcilmente realizada en cultivos celulares infectados, cerebro de mosquito o tejido macerado, cerebro macerado de ratones o bien en tejidos fijados en formalina. Este es el mtodo ms simple y ms rpido, permite adems detectar virus mltiples en pacientes con infecciones concurrentes. El aislamiento viral sirve para caracterizar la cepa viral y esta informacin es crtica para la vigilancia del virus y los estudios patognicos. El aislamiento del virus del dengue procedente de suero humano, depende de varios factores: de la forma en que el suero fue manipulado y almacenado y del nivel de viremia que vara considerablemente dependiendo de los das de evolucin de la enfermedad. La viremia usualmente tiene un pico corto antes del inicio de la enfermedad y puede ser detectable en promedio entre los das 4-5. Conforme aumentan los ttulos de IgM, el virus tiende a desaparecer. Nueva tecnologa diagnstica TR-PCR (Reaccin de cadena de polimerasa-transcriptasa reversa): Es un mtodo rpido, sensible, simple y reproducible con los adecuados controles. Es usado para detectar el RNA viral en muestras clnicas de humanos, tejido de autopsia y mosquitos. Tiene una sensibilidad similar al aislamiento viral con la ventaja de que problemas en el manipuleo, almacenaje y la presencia de anticuerpos no influyen en su resultado. Sin embargo, debe enfatizarse que la PCR no sustituye el aislamiento viral. SONDA DE HIBRIDACION: la sonda de hibridacin detecta cidos nucleicos virales. No es un mtodo usado rutinariamente. Su ventaja es que puede ser usado en tejidos de autopsia y muestras clnicas humanas. Es menos sensible que la TR-PCR, pero ms que la PCR.

INMUNOHISTOQUIMICA: Uno de los mayores problemas en el diagnstico de laboratorio del dengue es el de confirmar los casos fatales. En muchos enfermos slo una simple muestra sangunea es obtenida y las pruebas serolgicas, en estos casos, son de valor limitado. Por otro lado, muchos pacientes mueren al momento o poco despus de los estados de efervecencia, cuando el aislamiento viral es difcil. Con los nuevos mtodos de inmunohistoqumica, es ahora posible detectar el antgeno viral en una gran variedad de tejidos. Estos nuevos mtodos involucran la conjugacin enzimtica con fosfatasas y peroxidasas en conjunto con anticuerpos mono y policlonales.

RABIA: La rabia es una enfermedad aguda del sistema nervioso central (encefalomielitis) que una vez que aparecen los signos y sntomas de la enfermedad es mortal en menos de 10 das. Generalmente es transmitida por la mordedura de un animal rabioso: perro, murcilagos, gatos, etc

ESTRUCTURA DEL VIRUS DE LA RABIA La seleccin y el desarrollo de una tcnica de diagnstico estn condicionados por el conocimiento de la estructura del virus. El virus de la rabia (gnero Lyssavirus) pertenece a la familia Rhabdoviridae y comparte con los miembros de esta familia numerosas caractersticas estructurales. El virin (partcula viral), en forma de bala, est constituido por una nucleocpside rodeada por una envoltura lipdica de origen celular. En esta envoltura se encuentran dos protenas de origen viral: la protena M (matriz), localizada en la pared interna de la envoltura, y la protena G (glicoprotena), que atraviesa la envoltura. La nucleocpside contiene al genoma de ARN asociado a 3 protenas: la protena N (nucleoprotena), unida muy estrechamente al ARN, la ARN-polimerasa-ARNdependiente o protena L (large) y la fosfoprotena NS (Non Structural). El genoma de ARN est formado por alrededor de 12,000 nucletidos, es linear, monocatenario (una sola cadena), no segmentado y de polaridad negativa.

FISIOPATOGENIA: El virus de la rabia aparentemente se multiplica dentro del msculo estriado del sitio de inoculacin.Luego penetra al sistema nervioso perifricos en las uniones neuromusculares (las glicoproteinas G de la membrana se unen a los receptores nicotnicos de la acetilcolina) y se propaga a lo largo de los nervios hasta el sistema nervioso central. Ah se multiplica casi exclusivamente en la sustancia gris y puede entonces propagarse por nervios autonmicos hasta las glndulas salivales y otros tejidos como la piel, medula suprarrenal, hgado, msculo estriado, corazn y pulmn.En condiciones experimentales se ha encontrado viremia pero se piensa que no juega un rol importante en la adquisicin de la infeccin. DIAGNSTICO CLNICO: El diagnstico clnico de la rabia en los seres humanos puede tambin ser difcil, puesto que los pacientes pueden presentar sndromes paralticos o parecidos al sndrome de Guillain - Barr. Si se presentan espasmos como respuesta a estmulos tctiles, auditivos, visuales u olfatorios (aerofobia, hidrofobia, por ejemplo) alternados con perodos de lucidez, agitacin, confusin, y signos de disfuncin autonmica, entonces se encuentra involucrado el cerebro. Estos espasmos ocurren en algn momento en todos los pacientes que padecen rabia y en quienes la excitacin es prominente, en tanto que los espasmos inspiratorios espontneos ocurren continuamente hasta la muerte; su presencia a menudo facilita el diagnstico clnico. La excitacin es menos evidente en la rabia paraltica, y los espasmos fbicos aparecen en slo el 50% de esos pacientes. Durante las etapas tempranas de la rabia paraltica, entre los signos ms notables se incluyen el miodema en los sitios de percusin, generalmente en la regin del pecho, msculo deltoide y muslo, y la piloereccin. Puede ser dividido en 5 etapas. Periodo de incubacin: dura 1 a 3 meses. La enfermedad producida por mordeduras ms cercanas al SNC evolucionan ms rpidamente que las producidas en las zonas ms lejanas (los miembros inferiores). Periodo prodrmico: dura 2 7 das. Consiste en sntomas parecidos a la gripe (malestar, decaimiento, anorexia, cefalea, fiebre baja, dolor de garganta, vmitos, etc) y dolor y parestesia a nivel de la herida ya cicatrizada. Sndrome neurolgico agudo: 2 7 das. Comienza con ansiedad y confusin. Luego aparece delirio, comportamiento anormal, alucinaciones, insomnio, hidrofobia (espasmos musculares dolorosos al ver o escuchar el ruido del agua), aerofobia (al soplar la cara del paciente se producen contracciones musculares en la misma ocasionando muecas), fotofobia, alteraciones del ritmo respiratorio y temblores. Parlisis muscular de los miembros inferiores que puede afectar luego a los m. superiores e incluso los m. respiratorios.

Coma o Convulsiones. Muerte: la principal causa es la parlisis respiratoria DIAGNSTICO: Seleccin de las muestras La seleccin de las muestras condiciona la sensibilidad del diagnstico y las tcnicas que sern utilizadas. Esto es porque no todas las tcnicas de diagnstico pueden aplicarse a todas las muestras. La naturaleza de las muestras vara segn el animal: Para las pequeas especies silvestres, enviar el animal entero para permitir su identificacin precisa. Para los carnvoros domsticos (perros, gatos) o salvajes (zorros, zorrillos), enviar la cabeza del animal. Para las grandes especies (bovinos, equinos), proceder a la necropsia y enviar el encfalo. Envo de las muestras Es conveniente respetar ciertas reglas cuando se enva una muestra para diagnstico de rabia. El acondicionamiento debe garantizar por una parte la buena conservacin del material, requisito esencial para un buen diagnstico de laboratorio, y por otra, velar por la proteccin del personal de los servicios de transporte que no est vacunado contra la rabia. Hay que insistir tambin en la importancia de la ficha de informaciones claras que debe acompaar cada muestra. 1) DIAGNTICO POSTMORTEM DE LA RABIA EN ANIMALES Y EN SERES HUMANOS DETECCIN DE ANTGENOS La tcnica de anticuerpos fluorescentes (FA) constituye un mtodo rpido y sensible de diagnosticar la infeccin rbica en animales y en seres humanos. La prueba se basa en el examen microscpico, bajo luz ultravioleta, de impresiones, frotis o secciones congeladas de tejido luego del tratamiento con suero o globulina antirrbicos conjugados con isotiocianato de fluorescena. Para aumentar la sensibilidad de la prueba se recomienda emplear impresiones bilaterales (o frotis) de muestras de tejido del hipocampo (cuernos de Ammn) y del tallo enceflico; algunos laboratorios tambin tien muestras de cerebelo. Para el diagnstico de la rabia se ha elaborado un ensayo de inmunosorcin ligada a enzimas (ELISA) llamado inmunodiagnstico enzimtico rpido de la rabia (RREID), basado en la deteccin del antgeno de nucleocpsida del virus rbico en el tejido ceflico.

AISLAMIENTO DEL VIRUS IN VITRO El aislamiento del virus puede ser necesario para confirmar los resultados de las pruebas de deteccin de antgenos y para caracterizar mejor el virus aislado. Las clulas de neuroblastoma murino (NA C1300) son ms susceptibles a la infeccin del virus de campo que cualquiera otras lneas celulares ensayadas. El aislamiento del virus en cultivos celulares (con clulas de neuroblastoma) es tan eficaz como la inoculacin del ratn para demostrar la existencia de pequeas cantidades de virus rbico. Adems, reduce el tiempo necesario para el diagnstico de 10-15 das a 2 das , elimina la necesidad de contar con animales experimentales, y es considerablemente menos costoso. IDENTIFICACIN DEL VIRUS EMPLEANDO ANTICUERPOS MONOCLONALES: Hasta la fecha, varios cientos de lyssavirus aislados de seres humanos, de animales domsticos, y de animales salvajes del Africa, de las Amricas, del Asia y de Europa Occidental han sido comparados empleando anticuerpos monoclonales. Esos estudios demuestran que el virus de la rabia puede distinguirse de otros Lyssavirus, y que los virus rbicos aislados de cierta zona geogrfica o especie tienen patrones singulares de reactividad, tanto en los componentes de nucleoclapsidia como de glucoprotena del virin. Son notables las diferencias existentes entre los virus aislados de murcilagos de los aislados de carnvoros terrestres, lo cual confirma los hallazgos epidemiolgicos anteriores. 2) DIAGNSTICO INTRA VITAM DE LA RABIA EN SERES HUMANOS La eleccin de las tcnicas de diagnstico intra vitam vara considerablemente segn la etapa de la enfermedad; la deteccin de antgenos por lo general es sensible durante los primeros das, mientras que los anticuerpos neutralizantes de virus en el lquido cefalorraqudeo y suero usualmente tienden a aparecer despus de los 7-10 das de contrada la enfermedad. El antgeno vrico puede detectarse mediante la tcnica FA en impresiones corneales o bipsias de piel de pacientes con rabia; sin embargo, las muestras positivas por FA son ms comunes durante las etapas finales de la enfermedad. La piel para la biopsia por lo general se toma de la zona de la nuca, con folculos de pelos que contengan nervios perifricos. Las impresiones corneales (nunca raspaduras) se obtienen de pacientes encefalticos, tocando ligeramente la parte central de la cornea con un portaobjetos de microscopio. La calidad de las muestras tanto de las impresiones corneales como de las biopsias de piel es fundamental; deben refrigerarse inmediatamente despus de la recoleccin y hasta el momento en que se lleve a cabo la prueba. No obstante, la sensibilidad de la tcnica AF para el diagnstico intra vitam es limitada, a saber:

Se ha demostrado la existencia del antgeno de la rabia en impresiones corneales obtenidas de pacientes y de animales infectados natural y experimentalmente. Sin embargo, mientras que un resultado positivo indica que hay rabia, uno negativo no necesariamente elimina la posibilidad de que haya infeccin. Aunque el antgeno de la rabia puede detectarse en biopsia de piel cuando aparecen los primeros signos clnicos, la proporcin de los resultados positivos tiende a aumentar a medida que avanza la enfermedad. En las biopsias de piel de la nuca, slo algunos pacientes muestran signos positivos, especialmente durante la fase temprana de la enfermedad clnica. No obstante, la sensibilidad general de la prueba AF es ms elevada en las biopsias de piel que en las impresiones corneales. El virus de la rabia puede aislarse en cultivos celulares y de cieros tejidos y lquidos, especialmente la saliva y el lquido cefalorraqudeo. Las muestras de saliva deben mantenerse congeladas luego de su recoleccin; el contenido de la escobilla debe expresarse en el medio de recoleccin; la escobilla debe ser retirada, y la muestra debe enviarse congelada para su ulterior examen. El material de biopsia y el lquido cefalorraqudeo deben congelarse despus de su retiro. Al medio de recoleccin no se le deben agregar agentes conservadores en ningn caso. En algunas raras ocasiones, ser necesario examinar las biopsias de encfalo para detectar la presencia de antgenos o virus de la rabia; de ser posible, en la bsqueda del antgeno se debe emplear la tcnica AF. Sin embargo, aun en las etapas avanzadas de la enfermedad, la biopsia, la saliva o el lquido cefalorraqudeo pueden estar libre de virus.

TRATAMIENTO: Tratamiento de la rabia: una vez comenzada la sintomatologa de la rabia el tratamiento es de sostn (control del dolor, sedacin, etc). La rabia es la nica enfermedad en que resulta eficaz la vacunacin posexposicin gracias al perodo de incubacin inusualmente largo del virus. Las vacunas que se utilizan en la actualidad son la vacunas celulares y la vacuna FuenzalidaPalacios. Todas las vacunas para uso humano contienen solo virus de la rabia inactivado (muerto).