INTERFERENCIAS BIOLGICAS DE LA TRANSMISIN DE SIMPLES MUTACIONES

Araceli Lantigua Cruz

10

Los avances de la aplicacin de la nueva tecnologa para el estudio del ADN y las observaciones de las investigaciones relacionadas con el Proyecto Genoma Humano, han logrado esclarecer contradicciones y expresiones anormales que no tenan explicacin o cuyas explicaciones confundan ms que aclaraban el fenmeno. Interrogantes como las siguientes: Por qu en el sndrome frgil X hay hombres asintomticos y portadores? Por qu en sndromes neurolgicos como el Praderr-Willi y el Angelman teniendo fenotipos diferentes tienen el mismo tipo de aberracin cromosmica en 15q11-q13? por qu una mujer fenotpicamente sana tiene hijos acondroplsicos en dos matrimonios diferentes? Por qu en algunas enfermedades genticas dominantes los sntomas aparecen mucho ms temprano en los hijos que en sus padres? A responder estas interrogantes a la luz de los nuevos conocimientos va dirigido este captulo que aborda fenmenos biolgicos que dificultan la identificacin de herencias mendelianas y que en algunos textos aparecen con el nombre de patrones no clsicos de herencias mendelianas.

MUTACIONES DINMICAS
Este trmino se aplica a genes que presentan en alguna regin de su estructura tripletes de bases repetidos en un nmero de veces tal, que define el alelo o gen denominado normal. La mutacin consiste en el incremento del nmero de veces que se repite el triplete y su expresin est en correspondencia con este incremento. Se trata de un gen que crece y su crecimiento tiene un lmite a partir del cual su expresin puede ser nula y causar un defecto del desarrollo. El sndrome a partir del cual se introduce esta nueva categora gentica recibe el nombre de Sndrome Frgil X, es la segunda causa gentica y primera causa hereditaria de retraso mental. Al gen detectado a partir de este sndrome, se le ha denominado FRM1. La mutacin del gen FMR1, que da origen a este sndrome consiste en el incremento de repeticiones del triplete CGG del extremo 5' de su primer exn, cuyo alelo normal tiene un promedio de 30 repeticiones. 122

Este incremento se produce por etapas. De ah el trmino de "gen que crece". El primer crecimiento o premutacin oscila entre 43 y hasta 200 repeticiones sin que tenga un efecto fenotpico muy especfico. A partir de las 200 repeticiones se produce la mutacin completa y se expresa el sndrome. El riesgo de transformarse en una mutacin completa depende del nmero de repeticiones de la premutacin, de modo tal que cuando el portador de la premutacin en una familia afectada, tiene un rango de menos de 90 repeticiones, la probabilidad de amplificarse hacia una mutacin completa de un rango de repeticiones mayor de 200, es menor que cuando la premutacin tiene un rango de ms de 90 repeticiones. El gen FMR1 se encuentra en la regin q27.3 del cromosoma X y por lo tanto, se hereda ligado al X con caractersticas especiales pues el incremento del nmero de tripletes se produce durante las gametognesis y los hombres aparentemente normales pueden ser hemicigticos para la premutacin y transmitir el gen a todas sus hijas, quienes a su vez pueden darle nietos varones afectados por retraso mental sin existir antecedentes familiares del defecto. Este tipo de mutacin explica el fenmeno gentico de anticipacin o de observacin de la aparicin ms temprana de sntomas en las nuevas generaciones, independientes del sexo del individuo que trasmiti la mutacin. La anticipacin es un fenmeno usual en enfermedades genticas progresivas del sistema nervioso central y su presencia es un elemento clnico que obliga a la bsqueda molecular de mutaciones debidas a un incremento de secuencia de bases repetidas. Desde el punto de vista molecular se describen dos grupos de sndromes debidos a mutaciones dinmicas: 1. Expansiones inestables por repeticiones muy largas, fuera de secuencias codificantes.
Enfermedad Frgil X Distrofia miotnica Locus Xq 27.3 19q13 Gen FMR1 MD Alelo N Premutacin 6-54 5-35 50-200 42-1000 Mutacin >200-1000 >1000 Triplete 5' CGG, exon 1 Defecto molecular Hipermetilacin CpG.

3'GTG Afectan el ltimo exon procesamiento del transcripto primario 5'CGC Afecta funcin de promotor Hipermetilacin CpG. Perdida de GAA funcin del gen.

Epilepsia juvenil mioclnica Frgil E Ataxia Friedreich

21q22.3

JME

2-3

Intermedio

40-80

Xq28

FRAXE

6-25 6-34

50-200 Intermedio

>200-1000 67-1700

5'CCG Intron 1.

9q13-q21.1 FRDA

123

2. Expansiones CAG de repeticiones ms cortas dentro de secuencias codificantes.

Enfermedad Huntington Kennedy Ataxia espinocerebelar 1 Ataxia espinocerebelar 2 Ataxia espinocerebelar 3 Machado-Joseph. Ataxia espinocerebelar 6 Ataxia espinocerebelar 7 Atrofia dentatorubralpalidoluisiana. Locus 4p16.3 Xq21 6p23 12q24 14q32 19p13 3p12-21.1 12p Gen HD KD SCA1 SCA2 SCA3 SCA6 SCA7 DRPLA Herencia AD LXR AD AD AD AD AD AD Alelo N 6-35 9-35 6-38 14-31 12-39 4-17 7-35 3-35 Mutacin 30->1000 38-62 32-83 32-77 62-86 21-30 36-200 49-88

Caractersticas comunes a este ltimo grupo

Todas tienen una herencia autosmica dominante, excepto la enfermedad Kennedy que tiene una herencia recesiva ligada al cromosoma X. El alelo expandido es transcripto y traducido. El trinucletido repetido codifica para un segmento de poliglutamina de la protena especfica de cada enfermedad. Hay un umbral crtico de repeticiones por debajo de la cual no es patogentico y por encima del cual causa la enfermedad. El tamao de la amplificacin de la mutacin correlaciona con la edad de comienzo de los sntomas de cada enfermedad, aunque no se puede hacer una prediccin en un paciente individual. La enfermedad Kennedy se debe a una mutacin de un gen para el receptor de andrgeno.

La patognesis de estas enfermedades parece estar relacionada con la longitud de poliglutaminas. Cuando el segmento excede el umbral normal de repeticiones, se producen agregados de protenas que pueden matar a las clulas. Las diferencias clnicas de cada enfermedad reflejan muerte de clulas diferentes y la muerte neuronal causada por los agregados de protenas son un rasgo comn a estas enfermedades por repeticiones CAG, as como para las enfermedades de Alzheimer y Parkinson y las enfermedades por priones.

124

IMPRONTA GENMICA
Investigaciones sobre la expresin gentica en diferentes especies de reproduccin sexual, incluyendo al humano, han acumulado suficientes evidencias que rompen definitivamente con la creencia de que el genoma haploide, contenido en los gametos, no presenta diferencias que impidan la expresin mendeliana de una mutacin. Una nueva categora gentica hace su aparicin bajo la denominacin de impronta genmica (genomic imprinting) y que se define como la huella, que deja en el genoma del nuevo individuo la contribucin cromosmica haploide materna y paterna. Este fenmeno biolgico se identifica como epigentico o sea factores adicionales que no modifican la secuencia del ADN de genes especficos pero que si modifican su expresin. La metilacin del ADN es un importante mecanismo epigentico en el control de la represin de la transcripcin de ciertos genes. Este patrn de metilacin tiene diferencias en dependencia de que el gen en cuestin sea heredado por va materna o paterna. El mecanismo epigentico de impronta genmica, asegura que dentro de una clula, slo uno de los dos alelos heredados a travs de la gametognesis materna y paterna, se exprese, aun cuando la secuencia de bases de ambos genes se encuentre intacta. El fenmeno epigentico de impronta genmica es un mecanismo que normalmente ocurre, que puede explicar la competencia de regiones de ADN que actan como potencializadores o silenciadores de genes comprometidos en el proceso de la embriognesis. El gen XIST relacionado con la inactivacin de uno de los dos cromosomas X de la mujer, es un ejemplo de un gen ligado al cromosoma X que desarrolla impronta genmica, ya que la expresin del alelo XIST heredado por el gameto materno se encuentra preferencialmente reprimido en los tejidos de origen trofoblsticos. En ejemplos de triploidias, en las que se encuentra una doble dosis del genoma haploide paterno, el tejido trofoblstico se encuentra muy desarrollado. La evidencia de la impronta genmica se ha venido investigando en la expresin de ciertas mutaciones del humano que tienen una gran diversidad en su expresin. Esto significa que existen enfermedades genticas que pueden tener variaciones en su expresin en un rango tan variable que puede ir desde la no expresin hasta una severidad extrema de sta, dependiendo de que la mutacin bajo un control de impronta, haya sido heredada por la va del padre o de la madre. Ejemplos de evidencias de impronta genmica en el humano son los sndromes producidos por delecin de la regin q11-q13 del cromosoma 15. Atendiendo a que esta aberra-

125

cin cromosmica sea heredada por va paterna o materna se expresarn los sndromes Prader Willi o Angelman respectivamente, cuyos fenotipos son bien diferentes entre s. Otros ejemplos se relacionan con el incremento en la severidad de la expresin fenotpica de la mutacin, como se ha planteado en la Distrofia Miotnica, para explicar la forma neonatal que se observa en hijos de madres afectadas y que a su vez, han heredado la mutacin por va materna. No es difcil comprender ahora, que podran existir mutaciones de simples genes que se transmiten de acuerdo con las leyes de Mendel pero que al modificarse su expresin en dependencia del origen materno o paterno de la mutacin y teniendo como nica evidencia el examen clnico de la expresin de la mutacin, sea extremadamente difcil encontrar los criterios que nos permitan seguir la segregacin de la mutacin en cuestin para identificar una herencia mendeliana de las estudiadas previamente.

DISOMAS UNIPARENTALES
El descubrimiento de las disomas uniparentales emerge como resultado de observaciones en el uso de la biotecnologa en funcin de caracterizaciones moleculares de diversas mutaciones. No siempre una pareja cromosmica est formada por cromosomas transmitidos en los gametos masculino y femenino. En los aos 1988 y 1989 se reportaron dos nios afectados por fibrosis qustica que adems presentaban una baja talla inusual. Los estudios moleculares detectaron que los cromosomas 7 donde se encuentra el gen de la fibrosis qustica de ambos nios fueron heredados de un mismo padre. Despus de estos hallazgos las disomas uniparentales son un fenmeno relativamente frecuente. No se sabe cuantas veces una pareja cromosmica es el resultado de una no disyuncin en cualquiera de las dos meiosis de la ovognesis o la espermatognesis, pero existen numerosas evidencias de que un par cromosmico especfico ha sido transmitido por el vulo o el espermatozoide por una sola va parental, dando lugar a una disoma uniparental materna o paterna. La repercusin fenotpica de este fenmeno es objeto de estudio actual y se puede predecir que sus variaciones dependern de los genes de los cromosomas involucrados y del tipo de disoma que puede ser isodisomas (defecto generado en la segunda meiosis) o heterodisomas (defecto generado en la primera meiosis). El mecanismo ms probable para la produccin de disomias uniparentales, es la no disyuncin con perdida del cromosoma procedente del gameto monosmico normal que generara una trisoma en el cigoto. Es probable que muchos cigotos trismicos para un determinado cromosoma, elimine a uno de los cromosomas en exceso, a lo que se ha denominado rescate trismico. El origen del cromosoma eliminado da lugar a cigotos 126

dismicos con los dos cromosomas procedentes uno de cada progenitor o cigotos con los dos cromosomas de un solo padre o disomias uniparentales. Cada da aparecen nuevas evidencias de disomias uniparentales de los 23 pares de cromosomas humanos, al menos ya se ha demostrado la presencia de disomias uniparentales para 15 de ellos. Los sndromes Angelman (happy puppet), Beckwith-Wiedemann (EMG) y PraderWilli son los ejemplos ms estudiados.

MOSAICISMOS GERMINALES
Se trata de mutaciones que aparecen en las clulas germinales de los progenitores, que a su vez originan gametos afectados con un rango de probabilidades que depende del nmero de generaciones celulares germinales con la mutacin. Sospecha de este tipo de mutacin es la recurrencia de un defecto especfico que parece como si fuera una nueva mutacin, con carcter dominante y que sin historia familiar anterior se repite en dos o ms hijos, aparentando cuando ocurre en la misma pareja, una herencia autosmica recesiva. El ejemplo ms ilustrativo es el de la Acondroplasia, baja talla desproporcionada cuya mutacin se caracteriza por un cambio de bases en el gen receptor para el factor de crecimineto fibroblstico 3 (FGGFR3). Un simple cambio de una base nitrogenada por otra (G380R o Gli380Arg) en el dominio transmembrana de la protena, se expresa por la displasia sea que caracteriza a esta mutacin. Se han descrito casos de individuos clnicamente no afectados por esta displasia sea que han tenido recurrencia de la mutacin en la descendencia, en los que se ha demostrado molecularmente mosaicismo de la mutacin en tejido gonadal. Mosaicismos somticos. Se trata de mutaciones que ocurren a nivel de clones celulares somticos durante el desarrollo prenatal, ocasionando asimetras corporales con anormalidades de los tejidos involucrados (mosaicismo poscigticos) o pueden ser posnatales generando en clulas somticas tumoraciones.

HERENCIA MITOCONDRIAL
Existen otras mutaciones de simples genes que se diferencian de las anteriores porque el gen afectado o mutado est en el ADN mitocondrial. Las mitocondrias tienen reproduccin intracelular independiente (por fisin) y aunque se encuentran afectados tanto hembras como varones, los hombres afectados no trans127

miten la enfermedad pues el espermatozoide no contribuye con mitocondrias en la fecundacin. Las mitocondrias slo se transmiten a travs del vulo cuyo citoplasma es mucho ms grande (Figura 10.1).

II

III

Figura 10.1. Ejemplo de herencia mitocondrial.

Es difcil hacer un anlisis predictivo de la probabilidad que una mujer afectada tenga hijos sanos o enfermos pues esto depende del nmero de mitocondrias normales y anormales de cada vulo. El ADN mitocondrial (ADNmt) se encuentra empaquetado en un cromosoma circular que tine 16 kb de longitud. Cada mitocondria tiene varias copias de este cromosoma y cientos por clulas. El ADNmt ha sido completamente secuenciado y se conoce que codifica para dos tipos de ARN ribosomal, para 22 ARN de transferencia y para 13 polipeptidos que son subunidades de enzimas que participan en la cadena respiratoria ya que las otras unidades de estas enzimas son codificadas por el ADN nuclear. Las mitocondrias son distribuidas al azar en las divisiones celulares. Generalmente el ADNmt es idntico en la mayora de las personas y a este hecho se le denomina homeoplasmia, sin embargo cuando aparece una mutacin en este ADN se producen dos tipos de ADNmt, el no mutado y el mutado recibiendo el nombre de heteroplasmia. La homeoplasma puede estar presente para el ADNmt no afectado y para el ADNmt mutado, en estos casos todos sus hijos tienen riesgo de padecer la enfermedad. Cuando se trata de heteroplasmia existe la probabilidad de que al distribuirse las mitocondrias al vulo este reciba todas las mitocondrias con el ADN mutado o todas las mitocondrias con el ADN no mutado, por lo cual el individuo puede estar o no afectado. Tambin el vulo 128

puede recibir ambos ADN y presentar heteroplasmia. En resumen una mujer afectada por una mutacin mitocondrial puede tener hijos no afectados. Hay heterogenidad en la mutaciones del ADNmt reportadas. Esto unido al porcentaje de mitocondrias con el ADNmt mutado explica la gran expresividad de las enfermedades con este tipo de herencia. Se han reportado 60 mutaciones mitocondriales. Un ejemplo de este tipo de mutacin se observa en "la Anemia Inducida por Cloranfenicol", la Atrofia Optica de Leber, el sndrome Diabetes-Sordera, la sordera inducida por aminoglucsidos, la encefalopata MELAS, la epilepsia mioclnica MERRF, la cardiomiopata hipertrfica con miopata.

OTRAS CARACTERSTICAS DE LA TRANSMISIN DE SIMPLES MUTACIONES Y DE SU EXPRESIN Herencia dignica

La expresin de un defecto se debe a la coincidencia de genotipo doble heterocigtico para mutaciones que en simple dosis y aisladas no expresan el defecto en cuestin. Un ejemplo se ilustra en casos dobles heterocigticos para una forma de Retinosis Pigmentaria (RP), donde la persona solamente est afectada por esta tipo de RP, si es heterocigtica adems para una mutacin del gen "protena 1 del segmento externo" ( RON1) que se encuentra en el cromosoma 11 y sta coexiste con la mutacin del gen que codifica la protena periferina y que se encuentra en el cromosoma 6.

Prdida de heterocigocidad
Es un fenmeno caracterstico de la expresin de genes supresores tumorales. Ocurre en diversos tipos de cncer, donde existe una primera mutacin que determina la presencia de un genotipo heterocigtico y una segunda mutacin sobre el gen tipo salvaje o no mutado, determinando un genotipo homocigtico recesivo o hemicigtico, si esta segunda mutacin determina la prdida del cromosoma no afectado por la mutacin perdindose el genotipo heterocigtico y desarrollndose el tumor. Se conoce como "hiptesis de los dos golpes de Knudson". En el retinoblastoma hereditario la primera mutacin es germinal, es decir el individuo es heterocigtico para la primera mutacin. La segunda mutacin tiene un efecto ms temprano y en mltiples clulas, lo que explica que este tipo de tumor maligno se desarrolle, en estos casos, en el primer ao de la vida , en ambos ojos y de forma mltiple. Otro ejemplo en el que se observa este fenmeno es en 129

la neurofibromatosis 1 (NF1). Los neurofibromas que caracterizan a esta enfermedad gentica, son el efecto de prdida de heterocigocidad del gen que expresa la protena neurofibromina que tiene tambin funcin de regulacin del ciclo celular resultando ser un gen supresor tumoral.

RESUMEN
Las mutaciones dinmicas, anormalidades del fenmeno epigentico de impronta genmica, las disomas uniparentales, los mosaicismos gonadales y somticos, y la herencia mitocondrial son fenmenos que dificultan seguir la segregacin de una mutacin de acuerdo con los criterios clsicos para la identificacin de una herencia mendeliana. Pensar en ellos facilita la interpretacin de la anticipacin, la severidad de la enfermedad selectiva al origen materno o paterno del gen mutado, incomprensiones de la segregacin de mutaciones en herencias autosmicas recesivas en las que el individuo homocigtico ha recibido la doble dosis gnica de solo uno de los padres heterocigtico para esa mutacin. Trasmisin de una aparente mutacin de novo en un hijo afectado a un hermano de ste y la trasmisin de las enfermedades a partir de una mujer a hijos de ambos sexos.

130