Tema 9. Propiedades Bioqumicas y Biofsicas del Tejido Muscular. La estructura del Msculo Estriado.

Una de las propiedades distintivas de los seres vivos es su capacidad motil. Aunque a nivel microscpico, la energa trmica se manifiesta como movimiento y agitacin molecular, alcanzando las molculas velocidades muy importantes (varias decenas de metros por segundo), visible incluso en el microscopio como movimiento browniano de las partculas y organelas, los seres vivos han encontrado soluciones para poderse mover, movilizar sus clulas y/o impulsar el flujo de los fludos que les atraviesan. Todo esto lo hacen de forma controlada empleando una serie de mecanismos moleculares que se han ido perfeccionando durante la evolucin. En estas lecciones finales de la Biomecnica nos vamos a detener en el anlisis de los movimientos musculares, especialmente del msculo esqueltico, el otro gran componente de la Biomecnica responsable de la dinmica de nuestro cuerpo. Como hemos visto en lecciones anteriores, incluso la posicin, la forma y la respuesta esttica de nuestro sistema osteoarticular depende de la presencia de los distintos grupos musculares. Recordemos que el tejido muscular es el ms abundante en nuestro cuerpo. El 40 al 45 % de nuestra masa corporal corresponde a los 215 pares musculares que simtricamente, a derecha e izquierda, lo integran. Sus funciones son muy diversas. En nuestros movimientos ms importantes intervienen algo menos de 80 de estos pares musculares. Como hemos sealado anteriormente, la interesantsima fase actual de la Investigacin biomdica en la que nos encontramos est haciendo aumentar de forma explosiva el conocimiento sobre los componentes moleculares que integran la maquinaria de nuestras clulas completando su identificacin y aumentando progresivamente la informacin existente sobre su papel funcional. Por tanto, en los apartados siguientes aparecen un nmero creciente de componentes cuya participacin en las propiedades musculares tratamos de al menos bosquejar. Esta participacin se encuentra completamente demostrada en muchos casos, pero en otros es slo an tentativa y preliminar. Estructura bsica del citoesqueleto del msculo estriado. El sarcmero. La unidad estructural de msculo estriado es la fibra muscular, el miotubo, un sincitio multinucleado proveniente de la fusin de centenares de mioblastos y cuyo citoplasma limitado por el sarcolema, una delgada membrana se encuentra repleto de miofibrillas, el verdadero corazn de la maquinaria contractil. Cada fibra muscular est recubierta por una capa densa de tejido conjuntivo (el endomisio) . Entre los miotubos es posible detectar algunas clulas mononucleadas, denominadas clulas satlites, que son mioblastos quiescentes en el organismo adulto, pero que contribuyen a la regeneracin muscular si se producen lesiones. Las fibras musculares se agrupan en fascculos recubiertos por una densa vaina conjuntiva (el perimisio) que se ensamblan formando el msculo limitado por otra membrana conjuntiva (el epimisio). En los extremos del msculo, estas membranas se funden con los tendones cuya estructura hemos visto en lecciones anteriores y que insertndose en los huesos transmiten la fuerza muscular al aparato locomotor del organismo (Ver esquema en la Figura siguiente). El miotubo contiene un citoesqueleto especializado formado en su parte principal por las miofibrillas, enormes agregados macromoleculares de 1 mm de dimetro en los vertebrados y de longitudes muy diversas dependiendo del tipo de msculo, pero que puede alcanzar varios centmetros y que dispuestas de forma paralela rellenan el sarcoplasma del miotubo. Son responsables del carcter estriado de este tejido, observable incluso a simple vista, pero sobre todo a nivel microscpico, y ms especficamente utilizando luz polarizada.

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Figura M1. A la derecha vemos como el msculo est formado por distintos niveles de estructuras desde el nivel macroscpico hasta el molecular. A la derecha dos esquemas ms detallados de cmo se estructura el sarcmero en su relacin con el sarcolema y con los discos Z (arriba) incluyendo los filamentos de titina. En el esquema inferior de la derecha se puede ver la estructura detallada de los filamentos y la lnea M tal como se describe en el texto a continuacin. Este sistema de observacin condujo a la nomenclatura de las bandas detectadas en las miofibrillas y denominadas A (bandas anisotrpicas, birrefringentes que desvan la luz polarizada) e I (isotrpicas carentes de birrefingencia y atravesadas con mayor facilidad por la luz polarizada) que se repiten intercaladas a lo largo de la miofibrilla, interrumpidas por unas lneas oscuras denominadas lneas Z (zwischen, en alemn entre). En el centro de la banda A aparece una banda ms clara, la banda H (helles, claro en alemn) en cuyo centro aparece una lnea ms oscura, la lnea M (media). Este patrn de bandas le da este carcter estriado permite identificar al sarcmero, unidad elemental de las miofibrillas, representada en la Figura, que se extiende de una lnea Z a la siguiente yque por tanto abarca una banda A (con su banda H y lnea M centrales) y dos semibandas I a sus lados. Siguiendo descendiendo a niveles ms finos hasta alcanzar el nivel molecular, podemos observar que el sarcmero est formado a su vez por una serie de estructuras y filamentos. Evidentemente la fuerza desarrollada por esta maquinaria citoesqueltica tiene que transmitirse a los rganos, estructuras y contenidos objetivo funcional de la actividad muscular. Por tanto, es crucial que dicha maquinaria se encuentre slidamente imbricada con la membrana celular, el sarcolema. Como se puede ver en la figura siguiente, las miofibrillas se encuentran asociadas entre s mediante una red de filamentos intermedios especialmente robusta a nivel de las lneas Z que finalmente se anclan en el sarcolema a travs de unas estructuras especiales denominadas costmeros. Peor conocida en cuanto a sus componentes son las estructuras que probablemente con el mismo objetivo anclan a la membrana las lneas M. En el interior de este enorme armazn podemos ver como se integran las mitocondrias, responsables en mayor o menor medida dependiendo del tipo muscular, de producir la energa qumica (el ATP) necesario para impulsar la contraccin. Anclados en el misma red, pero en la periferia en posiciones cercanas al sarcolema aparece uno

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de los mltiples ncleos que se encargan de modular la disponibilidad de los centenares de protenas diferentes que se integran en la compleja maquinaria muscular. Siempre que nos sea posible indicaremos como muchos de los componentes del dispositivo muscular se integran en una red de sealizacin intra e intercelular, cuyo objetivo es conseguir adecuar el patrn de expresin gentica de los ncleos a las necesidades de diferentes componentes moleculares cuya presencia sea requerida y la coordinacin de cada miotubo con los dems componentes de la fibra muscular. No aparece en estas figuras (pero s en la Figura M6 ms abajo) la compleja red de vesculas y cisternas que se ramifican desde el sarcolema incorporndose a un retculo endoplsmico muy desarrollado y diferenciado (denominado en el caso del msculo retculo sarcoplsmico). Tampoco se ve cmo estas estructuras de conexin con el sarcolema se extienden por el exterior de la fibra prolongndose en las fibras de una matriz extracelular especializada con propiedades de membrana basal que hemos descrito en lecciones anteriores (reflejada en una de las figuras de la leccin correspondiente). Estas estructuras colaboran en la difusin por la fibra de las seales emitidas por las terminaciones nerviosas que mediante sus placas motoras inervan la musculatura y son responsables del carcter voluntario de su contraccin. Finalmente, este problema de transmitir la fuerza muscular a las estructuras vecinas se hace ms evidente a nivel del punto donde terminan las miofibrillas y la fibra muscular se ancla y/o transforma en un tendn. En ese punto la estructura se especializa an ms apareciendo lo que se denomina uniones miotendinosas, que describiremos brevemente al final de esta leccin. Dos tipos de filamentos forman el armazn de los sarcmeros. A nivel ultraestructural la banda A se corresponde con la presencia de abundantes filamentos gruesos (de 12 a 16 nm de dimetro), mientras que las semibandas I se corresponden con la presencia de los llamados filamentos finos (de 8 nm de dimetros y equivalentes a los microfilamentos detectables en el citoplasma de cualquier clula eucaritica) que se anclan a las bandas Z de los extremos del sarcmero. Estos filamentos aparecen intercalados en una zona de solapamiento en los extremos de la banda A formando una malla regular con simetra hexagonal en el msculo de los vertebrados que aparece en el corte transversal representado a la derecha de la figura . De hecho vemos como la banda H corresponde con la zona de la banda A donde slo se encuentra la parte central de los filamentos gruesos. Si descendemos an ms en la descripcin molecular de estas estructuras, vemos en la figura que los filamentos gruesos estn compuestos por un amasijo de las colas de las molculas de miosina, una protena filamentosa con la forma similar a un chupa-chups, y los filamentos finos de actina por molculas globulares de esta protena ensambladas en forma de un doble collar helicoidal de cuentas. Slo 9 protenas dan cuenta del 96% de la protena que encontramos en el miotubo, la miosina representa aproximadamente el 43% y la actina el 22%. Hoy sabemos que existe un tercer componente estructural que contribuye a la organizacin del sarcmero formado por la molcula gigantesca de la titina (o conectina), un elemento elstico conector de los filamentos gruesos con las lneas Z que representa el 10% de la protena del miotubo. Composicin del filamento grueso. Los avances del conocimiento gentico de varios organismos incluyendo al hombre nos permiten hablar de la superfamilia gnica de las miosinas formada por ms de 15 familias de protenas derivadas de un tronco comn. Todas ellas muestran afinidad por la actina, ligan e hidrolizan ATP por la cabeza globular del chupa-chups. Muchas tienen tambin colas alfa-helicoidales carboxiterminales de distinta longitud y funcin. La familia que forma los filamentos gruesos musculares es la miosina II, compuesta por un dmero de dos cadenas pesadas de unos 230000 de peso molecular cuyos extremos carboxiterminales de algo ms de 1000 aminocidos, formando entre ambas una estructura helico-helicoidal, coil-coiled, de 160 nm de longitud con aminocidos unos hidrofbicos y otros cargados positiva y negativamente distribudos estratgicamente facilitan su integracin en el eje del filamento grueso. El extremo aminoterminal de la miosina forma una estructura globular donde reside la actividad ATPsica. En el segmento intermedio de unin de la cabeza con la cola se ensamblan otras dos subunidades (de otra familia gnica diferente, la calmodulina), las llamadas cadenas ligeras de la miosina al ser ms pequeas, de 16000 a 21000 de peso molecular. La cadena ligera reguladora conserva la afinidad por el calcio tpica de las calmodulina, se suelta ms fcilmente que la cadena ligera esencial y se localiza ms abajo en el cuello de la cadena pesada. Este segmento intermedio es especialmente sensible al ataque de proteasas, como tripsina o papana, y se le denomina gozne por razones que se entendern al describir el modelo actual de la contraccin (ver la leccin siguiente) Unas trescientas molculas de miosina formadas cada una por seis cadenas (dos pesadas, dos ligeras reguladoras y dos ligeras

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esenciales) se agregan para formar los filamentos gruesos con un empaquetamiento helicoidal bipolar con una parte central desnuda en la que no aparecen cabezas, sugiriendo que en las lneas M existe una interaccin cola con cola de las miosinas simtricas. Los dos extremos del filamento grueso muestran una serie de protuberancias regulares, las cabezas de las miosinas, en nmero aproximado de tres cabezas cada 14.3 nm en el caso de los msculos de los vertebrados de forma que cada 3 repeticiones las cabezas vuelven a encontrarse en posiciones equivalentes respecto la hlice del filamento (ver figura M3).

Figura. M2. A la izquerda aparece representada una molcula de titina con la estructura de sus repeticiones de forma que coinciden con la estructura del filamento grueso donde aparecen las cabezas de la miosina y las molculas de protena C separadas con repeticiones de 43 nm. En el filamento grueso existen otros componentes, protenas que contienen en su secuencia motivos de 43 nm compuestos por unos 80 a 100 aminocidos semejantes a los que aparecen en protenas de la matriz extracelular como la fibronectina y/o cierto tipo de inmunoglobulinas. Estos motivos que en los componentes de la matriz extracelular intervienen en los mecanismos de adhesin aqu participan en la interaccin entre las protenas sarcomricas. El ms importante de entre ellos es la titina, cuya parte aminoterminal se extiende desde las lneas Z hasta la lnea M por su extremo carboxiterminal incorporndose en la prte central del sarcmero en el interior del filamento grueso (ver ms abajo). Se supone que la titina juega un papel de referencia, de sustrato sobre el que se establece la arquitectura de los filamentos gruesos y de la lnea M. Otros componentes con motivos semejantes son las protenas C (PM 140000) distribuda mayoritariamente en las zonas del filamento grueso donde emergen las cabezas, formando una serie de bandas transversales espaciadas 43 nm. a lo largo del filamento grueso que quizs contribuyen a mediar las interacciones entre las miosinas y las titinas, participando en la regulacin del ensamblaje y la localizacin de los filamentos gruesos. Sabemos mucho menos de otra protena denominada H (PM 58000). La enzima AMP-deaminasa interviene en el metabolismo de la adenosina y su deficiencia aparece asociada a un tipo de miopatas especfica del msculo esqueltico. Aparece ligada a las bandas A siendo inactiva cuando se encuentra en estado soluble. Composicin de los filamentos finos. Los filamentos de actina se encuentran anclados en las lneas Z, recorren las bandas I penetrando entre los filamentos gruesos donde se produce la interaccin entre las subunidades de actina y las cabezas de la miosina. Tienen una longitud determinada y estn tambin polarizados con su extremo de crecimiento ms rpido anclado a la lnea Z. Dos protenas, la tropomodulina y CapZ bloquean sus dos extremos, la primera el que mira al centro del sarcmero y la segunda el que se ancla a la lnea Z. La CapZ es un heterodmero

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sensible a la molcula sealizadora intracelular fosfoinositol 4, 5, bisfosfato, que interviene en el ensamblaje del sistema sarcomrico durante la miognesis posiblemente regulando la dinmica de la actina. Varios estudios han puesto de relieve la importancia de la tropomodulina (40000 de PM) en la organizacin y la longitud de los filamentos finos as como en la actividad contrctil. Su sobreexpresin produce unos filamentos finos ms cortos y unas miofibrilllas que degeneran y la reduccin en su sntesis, a unos filamentos anormalmente largos. El filamento fino tambin muestra una estructura repetitiva con dos grupos de 7 monmeros de actina cubriendo cada vuelta de hlice de la doble espiral que lo conforma. En los surcos de esta doble espiral aparecen incoporadas dos molculas de tropomiosina, formada por dmeros alfa helicohelicoidales como las colas de la miosina donde se ensamblan dos subunidades de 284 aminocidos, y unos 37000 de peso molecular cubriendo la longitud del surco correspondiente a la repeticin de 7 subunidades de actina. Como veremos ms abajo, la funcin de la tropomiosina adems de estabilizar el filamento fino, es regular la interaccin entre las cabezas de la miosina y las subunidades de actina. En este proceso interviene otra protena, la troponina, un complejo de tres subunidades diferentes que se liga principalmente a los dmeros de tropomiosina. Las subunidades de la troponina se distinguen con tres letras, la troponina C (18000 de PM) de la familia de las calmodulinas y con una estructura en forma de pesa (dos glbulos separados por un eje helicoidal) interacciona con el calcio. La troponina I (20000 de PM) es capaz de inhibir completamente la actividad ATPsica de la actomiosina, una combinacin de miosina y actina, in vitro. Su afinidad por los distintos componentes del filamento fino cambia dependiendo de las condiciones fisiolgicas (unin de calcio a la Troponina C, estado de fosforilacin,etc.). Finalmente, la troponina T, la subunidad ms grande (unos 30000 de PM), es la responsable principal de la interaccin del complejo troponina con la tropomiosina. Tambin asociada con el filamento fino encontramos la inelstica Nebulina, otra protena enorme (PM entre 600 a 900 kDaltons) cuyo extremo carboxi terminal se inserta en la lnea Z, mientras que su extremo aminoterminal se extiende hasta el extremo interior de los filamentos finos. Sus propiedades la hacen la mejor candidata a especificar la longitud precisa de los filamentos finos. Diferentes isoformas de distinto tamao por splicing alternativo correlacionan con la longitud de filamentos finos en distintas fibras musculares. El 97% de su secuencia est formada por 185 motivos modulares de unos 35 aminocidos cada uno. Los 154 centrales estn organizados en 22 superrepeticiones de 7 mdulos que se corresponden con la periodicidad de las 7 actinas por complejo TM/TN. Los mdulos aminoterminales de la nebulina interaccionan con la tropomodulina. Sin embargo, es posible que la nebulina tenga propiedades funcionales adicionales ms complejas, como intervenir en la interaccin entre los filamentos finos y los gruesos, con las regiones perifricas de las lneas Z y con la desmina, la protena de filamento intermedio especfica del msculo, lo que sugiere que puede ayudar al alineamiento de las lneas Z de una miofibrilla con las vecinas. Componentes de la lnea M. La aparicin de las lneas M constituye el paso final del ensamblaje de las miofibrillas durante la miognesis. Una serie de protenas forman un nmero variable de puentes electrodenso dependiendo del tipo de msculo. Sorprende el escaso nmero de componentes conocidos, a pesar de su compleja estructura. Entre ellos destacan dos protenas con motivos tipo fibronectina e inmunoglobulina y con afinidad por la miosina y la titina, la miomesina (186000 de PM) y la protena M (165000 de PM) regulable por fosforilacin por protein kinasa A, as como una serie de componentes potencialmente reguladores tales como la protena con dedos de Zinc MURF-1 y la proteasa calpana3/p 94 implicadas en diferentes funciones celulares como la transcripcin, la sealizacin, la ubiquitinizacin y la autolisis. Finalmente, asociadas a la lnea M aparecen una serie de complejos enzimticos glicolticos como la enolasa y la isoforma MM de la creatin kinasa que intervienen en el metabolismo energtico muscular y cuya eficiencia puede variar dependiendo de su estado particulado o soluble como hemos descrito para la AMP-deaminasa. La titina, el elemento responsable de la elasticidad muscular. Es la protena ms grande identificada hasta el momento (PM entre 3 a 3,7 millones de daltons). Se le ha incluido en el tercer elemento filamentoso del msculo estriado. Se extiende desde la lnea Z y sus extremos carboxiterminales se solapan en la lnea M formando un sistema filamentoso contnuo en las mifibrillas. En la parte que solapa con la banda I, contiene dominios con propiedades elsticas funcionando quizs como un resorte que dote a la miofibrilla de ciertas propiedades de rigidez. Interacciona con muchos delos componentes sarcomricos. Tiene propiedades reguladoras como una actividad Ser/Thre kinasa en su

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extremo carboxiterminal. Todo esto unido a su integracin muy temprana durante el proceso de miofibrillognesis sugiere que pueda servir como molde y estabilizador sarcomrico. De nuevo la mayor parte de su secuencia est formada de dominios multimodulares del tipo de las superfamilias de la FN y de las Inmunoglobulinas. De forma simplificada podemos distinguir cuatro zonas en la molcula. La parte aminoterminal de la titina asociada a la lnea Z es crtica para el mantenimiento de la estructura miofibrilar. La zona siguiente posiblemente asociada a los filamentos finos en la banda I funciona como un resorte molecular. La regin de la titina que solapa con la banda A posiblemente interacciona con el filamento grueso funcionando como molde para su formacin. Finalmente, la zona carboxiterminal localizada en la lnea M con su sitio de fosforilacin y su dominio kinasa puede funcionar como molde de la lnea M y como un potencial sistema transductor de seales. La lnea Z. De tamao variable segn los tipos msculares (de 30 nm a 160 nm en el msculo cardiaco) define los lmites laterales del sarcmero y proporciona el sitio de anclaje para los filamentos finos, incluyendo la titina y la nebulina. Constituyen el armazn principal de la fuerza generada por la contraccin. En la periferia de la lnea Z se localizan abundantes molculas del tipo de los filamentos intermedios (desmina y quizs vimentina) que anclan las lneas Z vecinas entre miofibrillas adyacentes. Durante el ensamblaje del msculos, los llamados cuerpos Z, precursores de los discos Z (lnea Z) son las primeras estructuras identificables observadas sugiriendo que son la seal inicial del sarcmero naciente. Hace una decena de aos la !-actinina era la .unica protena identificada en las lneas Z. Hoy sabemos que es una red compleja de protenas entre las que se encuentran numerosas molculas transductoras de seales que facilitan su papel como sensor biomecnico de los cambios de tensin en el sarcolema. Muchas de ellas pueden intercambiarse desplazndose a los ncleos y a otras zonas subcelulares vecinas sirviendo transmitiendo seales. La !-actinina (97000 de PM) es un miembro de la superfamilia de la espectrina capaz de entrecruzar los filamentos de actina. Su dominio globular N-terminal interacciona con la actina. La secuencia central con una estructura helicoidal compuesta de cuatro dominios tipo espectrina forma dmeros antiparalelos. capaces de anclar los filamentos de actina a los de titina (Ver figura M3).

Figura M3. Esquema tentativo de la lnea Z del msculo de vertebrados.

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En los vertebrados superiores existen cuatro genes que codifican por isoformas de !-actinina , dos de los cuales ( el 2 y el 3) se expresan en el tejido muscular (curiosamente, un 18 % de la poblacin humana es deficiente para el gen 3 sin que se haya detectado ninguna diferencia fenotpica en sus msculos, sugiriendo que su funcin es redundante). Aunque es uno de los componentes prominentes de los discos Z, estos pueden formarse en ausencia de !-actinina, lo que indica que otras protenas deben contribuir a la formacin de esta estructura. Durante la ltima dcada, se han empezando a identificar otros componentes de la lnea Z. Por un lado, el dominio globular de la !-actinina se une a varios miembros de la familia CPR (protenas ricas en cistena) y a la zixina. Las cuatro repeticiones de espectrina del dominio central de la !"actinina se asocian a otros componentes como las protenas MLP y ALP-enigma, la protena FATZ, la calsarcina-2/miozenina, la miotilina e incluso la titina. La parte carboxiterminal de la !-actinina se une a la protena cifer/ZASP/oracle, la miopaladina y la titina (a travs de otro dominio diferente). Todas estas interacciones suministran un sustrato tensil en el que se integran otras protenas como la filamina, la teletonina (T-cap) la obscurina y la protena MURF-3. La protena MLP (protena LIM muscular) es un miembro de la familia de protenas ricas en cistena (CRP). Acta aqu como protena de unin o de andamiaje estabilizando el disco Z estabilizando el anclaje de los filamentos finos al disco Z. Su posible translocacin al ncleo sugiere que puede intervenir en la sealizacin y en la regulacin de la transcripcin. Organizadas de forma similar y con funcin semejante tenemos la familia de protenas ALP-enigma (enigma, ALP (protena asociada a la !-actinina) y cifer/ZASP/oracle). Vienen definidas por la existencia de un dominio aminoterminal PDZ (Postsynaptic density protein 95/ Drosophila Disks large/ Zona occludens-1) a travs del cual interactan con otras protenas como la propia !-actinina o la tropomiosina y varios dominios LIM carboxiterminales. Los dominios LIM (acrnimo derivado de los miembros fundadores de la familia: Lin-11 de C. Elegans, Isl-1 de la rata y Mec-3 de C. Elegans) pueden servir para que se anclen a la lnea Z factores de sealizacin, como isoformas de la protena kinasa C, calcineurina y el receptor de la insulina. La familia FATZ (protena del disco Z ligante de filamina, !-actinina y teletonina) adems de ligarse a estos componentes de la lnea Z ancla la calcineurina, una protena fosfatasa reguladora de la transcripcin a travs del factor de transcripcin NF-AT3, a la lnea Z. La filamina sirve de unin del disco Z con los filamentos intermedios y tambin liga SHIP-2, una inositol polifosfato 5 fosfatasa que regula la ruta de sealizacin de la insulina. La teletonina tambin llamada Tcap puede actuar como un dispositivo tipo cerrojo que fija la titina al disco Z. La localizacin y funcin de otras protenas como la molcula gigante obscurina y la protena muscular de dedos de anillo (Ring finger) MURF-3 no est demasiado clara. Esta ltima es capaz de interactuar con los microtbulos incorporando esta otra clase de filamentos en el gigantesco armazn del citoesqueleto muscular. Otras protenas mencionadas son capaces de interaccionar con otros factores de transcripcin como la familia CARP (protena de respuesta a la adriomicina en el corazn) que a travs de su interacdcin con la miopaladina colaboran en regular la estructura sarcomrica coordinndola con las vas de regulacin de la expresin gnica y la respuesta al stress del miocito. La miopodina, una protena asociada a la actina recientemente identificada muestra unos cambios dinmicos de localizacin dependiendo de la fase de diferenciacin muscular translocando entre los discos Z y los ncleos. Otros componentes citoesquelticos. Como hemos mencionado al principio de esta leccin, los filamentos intermedios y sus protenas asociadas ensamblan este citoesqueleto especializado con la membrana, con el sarcolema, incorporando en su interior los diferentes orgnulos subcelulares (mitocondrias, ncleos, cisternas sarcolmicas y retculo sarcoplsmico). La insolubilidad y la rigidez de las fibras helicoidales tpicas de los filamentos intermedios les hacen muy apropiados para este papel biomecnico de transmisin y robustecimiento integral de la fibra muscular. El principal componente molecular de la red de filamentos intermedios en el msculo es la desmina (PM 52000) que conecta los discos Z (quizs interaccionando con la nebulina) con el sarcolema, los ncleos, las mitocondrias y posiblemente los microtbulos. Se encuentra especialmente enriquecida en los costmeros y en las uniones miotendinosas. Participa en los procesos iniciales de formacin de la fibra muscular pero el msculo puede formarse en su ausencia aunque la arquitectura muscular soporta mal los esfuerzos asociados a la actividad muscular y acaba disrupta y degenerada. En el msculo tambin se expresan aunque en menor proporcin otras protenas tipo filamento intermedio como son la vimentina,

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nestina, sinemina y paramina, especialmente durante la fase de desarrollo del msculo. Recientemente se han identificado dos nuevas protenas, desmulina y sincolina con afinidad por el complejo citoesqueltico subsarcolmico (DGC) que describiremos a continuacin. En el msculo tambin se expresan citoqueratinas que se concentran en los costmeros. No podemos olvidar el papel cada vez ms evidente de los componentes tipo filamento intermedio nucleares como son las lminas y protenas asociadas como la emerina cuya alteracin es causa de miopatas y distrofias musculares. Existe cada vez ms evidencia experimental de que estructuras relacionadas con los filamentos intermedios como los desmosomas y sus componentes (adherinas, placoglobina, placofilina y desmoplaquina) intervienen en la conexin entre los elementos citoesqulticos y las placas de adhesin en el sarcolema. Otra protena gigante que interactua con los filamentos intermedios es la plectrina interviene en la asociacin de la desmina con los discos Z. Otro componente citoesqueltico con un papel cada vez ms reconocido en el msculo esqueltico y en el corazn son los microtbulos y protenas asociadas, localizados con diferentes orientaciones (transversal, longitudinal y oblicua segn los tipos musculares) entre las miofibrillas a nivel de la zona de transicin entre las bandas A e I, con el sarcolema, el complejo de Golgi y los ncleos. Su participacin en los procesos de miofibrilognesis es evidente gracias a la posibilidad de utilizar agentes despolimerizantes y/o estabilizantes de los mismos. La conexin del citoeaqueleto con la membrana: Anclaje, transmisin de las fuerzas y transduccin de las seales mecnicas. El msculo estriado est rodeado por una membrana basal rica en diferentes colgenos y laminina que suministra estabilidad estructural a las fibras. Unas placas distribudas regularmente, los costmeros (Figura M4), conectan la maquinaria contrctil con esta estructura extracelular tanto a nivel de los discos Z como de las lneas M. Adems, los costmeros son puntos de organizacin del citoesqueleto submembranoso formado por tres redes: uno basado en la espectrina, el complejo distroglicano y los complejos de adhesin focal/integrinas. Una serie de protenas con afinidad con el RNA como raver1 forman complejos que quizs interviene en el procesamiento de los mRNAs musculares que se localizan en los costmeros y otros sitios de anclaje de filamentos finos. Ampliamente distribuidas en todos los tejidos mediante mltiples isoformas especficas, las integrinas son protenas heterodimricas que atraviesan la membrana y median la conexin entre el citoesqueleto de actina y la matriz extracelular. Intracelularmentese asocian con protenas como la talina, vinculina y !actinina . Sirven tambin de molculas sealizadoras detectando y transmitiendo el stress mecnico y activando las vas de transduccin de seales, modificando los patrones de transcripcin y la organizacin citoesqueltica. La kinasa de adhesin focal, FAK, participa como efector de las integrinas, colocalizando en los costmeros y en las uniones miotendinosas. En el msculo este proceso de transmisin de la carga mecnica puede involucrar adems de seales qumicas los efectos biomecnicos a travs de la interconexin fsica de estas estructuras con las lneas Z y con otros puntos de la miofibrillas provocando cambios conformacionales en este gran armazn estructural. La distrofina, otra protena de elevado PM (427000), es el componente esencial del complejo distroglicano (DGC) en el que se integra un receptor transmembranoso que se liga a la laminina y los sarcoglicanos. Las mutaciones en la distrofina son responsables del distrofia muscular de Duchene, una de las enfermedades genticas musculares mejor caracterizadas en la especie humana. Su ausencia o alteracin debilita las conexiones mediadas por la membrana sarcolmica provocando su deterioro cuando se produce la contraccin muscular. Adems colabora en la organizacin de otros componentes como la vinculina y la espectrina. Alteraciones en los sarcoglicanos, protenas con un slo segmento transmembrana asociadas al #distroglicano, son responsables de la distrofia muscular del cinturn (Limb Girdle Muscular Distrophy = Distrofia Muscular del Cinturn de las Extremidades). Otros componentes del complejo distroglicano son la !-distrobrevina y las sintrofinas, que parecen intervenir en la conexin entre la distrofina y una molcula de sealizacin cada vez ms importante, el NO (xido ntrico), pues su domino PDZ carboxiterminal se asocia con la isoforma neuronal de la NO sintasa tambin presente en el sarcolema. Finalmente, la funcin de la espectrina muy bien caracterizada en el caso del citoesqueleto membranoso del eritrocito, no se ha explorado demasiado en el caso del msculo. Enriquecida en los

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costmeros y en conjuncin con la protena asociada anquirina contribuye a localizar las protenas integrales de la membrana como la Na, K-ATPasa. Tambin interacciona con la protena del disco Z MLP interviniendo pues en la unin entre estas estructuras. Las anquirinas, una familia de protenas perifricas de membrana que presentan una gran diversidad de isoformas por splicing alternativo se expresan tambin en los msculos esquelticos y cardiaco, contribuyendo a fijar una serie de componentes de la membrana (canales y bombas inicas, molculas de adhesin, etc) al aparato contrctil y a su conexin con las invaginaciones del sarcolema y del retculo sarcoplsmico (triadas, uniones entre los tbulos T y el retculo saroplsmico) colaborando en la localizacin de los receptores de rianodino y de IP3 en el mismo. Todo esto sugiere su participacin en los procesos de acoplamiento de la excitacin-contraccin controlando la distribucin de los diferentes canales inicos participantes en este proceso (ver la leccin siguiente).

Figura M4. A la izquierda aparece un esquema de cmo se piensa que puede estar organizado el disco intercalado a travs de los que se acoplan las clulas cardiacas (ver ms abajo) y a la derecha, la unin miotendinosa en el msculo estriado esqueltico. La unin miotendinosa, el lugar de la transduccion de la fuerza en el msculo esqueltico. Esta estructura reforzada constituye el punto de terminacin de las miofibrillas. En ella el sarcolema se encuentra altamente invaginado e interdigitado con la matriz tendinosa que le rodea. Los filamentos finos terminan en una capa densa subplamalmica conectados a complejos glicodistrofnicos, placas de adhesin focal, integrinas, vinculina, talina, plectina, desmina y sus protenas asociadas completando la integridad de la arquitectura muscular. La red vesicular del sarcolema y del retculo sarcoplsmico. Para facilitar la llegada de las seales reguladoras de la contraccin muscular (leccin siguiente) a los componentes reguladores del sarcmero es importante sealar la existencia en el msculo estriado de una compleja red de vesculas y cisternas que rodean completamente a las miofibrillas individuales (Figura M5).

Tema 9

Fig. M5. Ramificaciones y cisternas del retculo sarcoplsmico y del sarcolema (tbulos T). Triadas. Su componente principal deriva del retculo endoplsmico que en el msculo se llama retculo sarcoplsmico. El sistema es especialmente importante a nivel de la zona de transicin de las bandas A con las I recubierta por una serie de sacos transversales conocidos con el nombre de cisternas terminales. Estas cisternas rodean tbulos ms pequeos parte del sistema T constituido por invaginaciones de la membrana sarcolmica que permite la trasnmisin muy rpida al retculo sarcoplsmico y a los sarcmeros de la seal nerviosa iniciadora de la contraccin. Esta asociacin entre tbulos T y las cisternas se conoce como triadas. Como veremos, los iones calcio son decisivos en este control. En la membrana del retculo sarcoplsmico existe gran cantidad de una bomba de calcio dependiente de ATP que contribuye a mantener muy bajos los niveles citoplsmicos de este in. En el interior del retculo hay grandes cantidades de protenas con afinidad por calcio como la calsecuestrina que colaboran a la eficiencia del bombeo de este in hacia el interior de las cisternas. En la membrana del retculo se encuentran tambin unos canales de calcio indirectamente sensibles a los cambios de voltaje denominados receptores de rianodinio (un alcaloide de origen vegetal que desencadena la apertura de estos canales). Estn formados por tetrmeros de protenas de gran tamao (PM 565000) cuya parte mayoritaria se encuentra en la cara citoslica donde forma una estructura compleja denominada pie (Figura) que cubre los 12 nm que separan la membrana sarcoplsmica y la sarcolmica del tbulo T. El receptor es regulado por el NO (xido ntrico). Estos canales se abren en respuesta a un sensor de voltaje presente en la membrana del tbulo T conocido como receptor de dihidropiridina, otro canal de calcio sensible a voltaje que se abre cuando llega el potencial de accin que se extiende por la membrana sarcolmica desde la placa motora. Parece que la seal que produce la apertura del receptor de rianodinio es el calcio que llega al pie a travs del receptor de dihidropiridina o un cambio conformacional inducido por el contacto directo entre ambos.

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