DATOS DESFASADOS (OUTLIERS) Cuando en un conjunto de resultados (repeticiones) se observa que hay algunos valores muy desfasados del

comn, es necesario considerar la posibilidad de descartarlos (OUTLIERS), al atribuirles error humano, por ejemplo, los siguientes valores en mg/ml se obtuvieron para el anlisis de nitritos en una muestra de alimento para bebs: 10.10, 9.95, 9.97, 10.99, 9.97 mg/ml. Como puede observar el valor de 10.99 mg/ml es un resultado que aparentemente est desfasado respecto a los otros y podra ser considerado un dato desfasado (outlier). Con el fin de rechazarlo se hacen algunos ensayos, de los cuales, el ms empleado en situaciones simples es el test Q de Dixon: QCalculado = | valorsospechoso valorms verticales indican valor absoluto.
cercano

| / valormximo valormnimo, donde las barras

Si el Q calculado, excede el valor de Q tabulado (cuyo valor depende de la confianza requerida y de n, ver tabla adjunta) para un cierto grado de confianza (95 %, 99%), entonces el valor sospechoso se rechaza. Ejemplo: Los siguientes valores en mg/L, se obtuvieron al medir la micotoxina M1 en muestras de leche: 0.403, 0.410, 0.401, 0.380. Es la ltima medida un outlier, de tal manera que se puede rechazar con una confianza del 95 %? De la tabla, para n = 4 y para un 95 % de confianza (P =0.05), se tiene Q tabulado = 0.831 Y Q calculado = | 0.380-0.401| / 0.410 0.380 = 0.7 Como Q tabulado es mayor que Q calculado, entonces el dato no se rechaza!. En la prctica, cuando se presentan valores sospechosos y se han hecho pocas mediciones (replicas), se recomienda realizar ms mediciones. En el caso anterior, antes de rechazar se hicieron tres determinaciones ms, y se obtuvieron 0.400, 0.413 y 0.411 mg/ml, de tal forma que: Q calculado = | 0.380 0.400| / 0.413 0.380 = 0.606 y como Q tabulado (n = 7, 95%) = 0.570, entonces el valor sospechoso se rechaza! Nota: 95 % de confianza indica que hay un 5% de error en tal rechazo. En general el rechazo tiene un considerable efecto sobre la precisin, de tal manera que la desviacin estndar para el ejemplo anterior, es de 0.011 mg/ml y sin el rechazo tiene un valor de 0.0056 mg/ml (verifquelo!). SENSIBILIDAD: Mide la capacidad de un mtodo de un instrumento para discriminar entre pequeas diferencias de la concentracin de analito, por ejemplo cuando se compara la sensibilidad de la balanza granataria que pesa de 0.1 g en 0.1 g y reporta valores como 10.3 g y la balanza analtica que pesa de 0.0001g en 0.0001g y reporta valores como 10.0025 g, podemos decir que es mucho ms sensible la balanza analtica, porque discrimina entre 10.0025 g y 10.0026 g, mientras la granataria slo lo hace entre 10.1g y 10.2 g. La sensibilidad de un mtodo analtico es funcin de la pendiente de calibracin y de la precisin. Segn la IUPAC la sensibilidad de calibracin es la pendiente de la curva de calibracin (ver Curva de Calibracin) a la concentracin de

inters y no tiene en cuenta la precisin, mientras la Sensibilidad Analtica si tiene en cuenta la precisin. LIMITE DE DETECCIN: Mnima cantidad de analito que puede detectarse con cierto grado de confianza. Es decir la concentracin de analito que genera una seal significativamente diferente a la seal del blanco de fondo. En general se acepta que su valor corresponde al producto del valor que se obtuvo para la muestra sin analito (blanco) por 3 ( 3 del blanco). Por ejemplo cuando se analiza una muestra que no contiene al analito y da un valor de 0.002 g/ml, el lmite de deteccin es de 3 * 0.002 g/ml = 0.006 g/ml. Lo cual significa que 0.006 g/ml es la mnima cantidad del analito que se puede detectar con cierto grado de confianza, aunque no la suficiente para considerar el resultado como un dato analtico. LMITE DE CUANTIFICACIN: Mnima cantidad de analito que se puede determinar con confianza. En general, se acepta que es equivalente a 10 veces la seal debida al blanco (segn la USP). A partir de esta concentracin de analito se pueden reportar resultados cuantitativos. Para el caso anterior el lmite de cuantificacin para el analito es de 10 * 0.002 mg/ml = 0.02 mg/ml. De manera ms explcita, si al aplicar el mtodo empleado a la determinacin del analito se encuentra que tiene menos de 0.006 mg/ml, se informa que no se detect analito, con el mtodo empleado!. Si se encuentra entre 0.006 y 0.02 mg/ml de analito, entonces reportamos que hay trazas (se sabe que hay pero no cunto!). Si se encuentra que hay 0.02 mg/ml ms entonces reportamos el resultado como dato cuantitativo, por ejemplo que hay 0.03 mg/ml de analito en la muestra analizada. En nuestra vida cotidiana cuando observamos que a cierta distancia, 50 metros por ejemplo, viene alguien, pero no sabemos con exactitud quien, entonces decimos: viene alguien! (limite de deteccin), y cuando se encuentra a una distancia an ms corta, 20 metros por ejemplo, entonces decimos: viene Natalia! (lmite de cuantificacin).
cuantificable 5-10 lmite de cuantificacin para el A partir de esta concentracin se reportan los resultados obtenidos con confianza!

analito.

analito

3 lmite de deteccin para el analito Se detecta pero no se cuantifica!

blanco a la

seal del blanco (debida matriz sin analito).

Fig. 4. Lmites de Deteccin y Cuantificacin INTERVALO DE CONCENTRACIN DE LINEALIDAD: Intervalo de concentraciones comprendidas entre el Limite de Cuantificacin (L.C.), y el Limite de Linealidad (L.L.), rango de concentracin de la curva de calibracin en la cual esta se comporta linealmente. Es el intervalo de concentraciones de un analito, por ejemplo de Licopeno (pigmento del tomate), que puede determinarse mediante una curva de calibracin. Los valores por debajo y por encima del intervalo no son confiables para la determinacin del licopeno bajo las condiciones de calibracin indicadas. L.L

seal

L.C.

[C] Fig. 5. Intervalo de Calibracin SELECTIVIDAD: Capacidad que tiene un procedimiento analtico para no confundir al analito con otros componentes de la muestra (interferencias). En general esta capacidad que depende del tipo de muestra y del mtodo analtico escogido, presupone un tratamiento de la muestra para la eliminacin de las interferencias. Por ejemplo, un mtodo que al analizar Licopeno en el tomate genere unos resultados exclusivamente debidos a l, se dice que es ms selectivo que otro mtodo que tenga dificultad para diferenciar el licopeno de otros pigmentos, los cuales pueden falsear los resultados. Es necesario, adems, establecer la diferencia entre selectividad y especificidad: la selectividad da cuenta del analito pero es posible que en el anlisis se incluyan otras sustancias; la especificidad se relaciona con la capacidad del mtodo de reportar datos exclusivamente del analito de inters. Por ejemplo la determinacin de calcio y magnesio mediante complexometra a pH = 10: a dichas condiciones el mtodo es selectivo para estos analitos, sin embargo en el resultado se consideran por ejemplo cationes divalentes como Zn2+, Mn2+, entre otros. Cuando aadimos trietanolamina, NaCN u otros enmascarantes, los resultados se deben exclusivamente a calcio, al magnesio o a otro, de acuerdo a la estrategia analtica empleada, y el mtodo es especifico para dicho analito. CURVA DE CALIBRACIN: Todos lo resultados analticos dependen de la medicin final de una propiedad fsica (X) del analito, como el color, la conductividad, la emisin de luz etc., la cual debe variar de manera conocida y reproducible con la concentracin CA del analito. Con frecuencia la propiedad fsica medida es directamente proporcional a la concentracin, es decir: X= K CA donde K es una constante de proporcionalidad. Con muy pocas excepciones, los mtodos analticos necesitan la determinacin emprica de K con patrones qumicos (Estndares reactivos de alta pureza) para los cuales se conoce CA . Al proceso de determinacin de K se le denomina calibracin, y es un paso importante en la mayora de los anlisis. En la figura se muestra una curva de calibracin comn que se utiliza para la determinacin de Calcio en muestras de Alimentos concentrados. Para ello, se prepar

una serie de soluciones estndar (de concentraciones conocidas) de CaCO3, grado alta pureza, mezclando cuidadosamente cantidades conocidas del analito y agua. Luego se tom una alcuota de cada estndar y se hizo reaccionar con un reactivo que imparte color al calcio. A continuacin se leyeron en un colormetro, el cual report una intensidad de color para cada concentracin del estndar de calcio. Terminadas las lecturas de intensidad de color para los estndares, se construy un grfico de Intensidad de color (seal) vs. Concentracin de calcio (curva de calibracin). Como es deseable, la lnea obtenida se aproxima a una recta. Sin embargo, obsrvese que no todos los datos caen exactamente en la recta, lo cual se debe a errores aleatorios en el proceso de medicin. Por lo tanto, se debe intentar trazar la mejor lnea recta a travs de los puntos. La tcnica estadstica conocida como mtodo de los mnimos cuadrados nos da los medios para la elaboracin objetiva de una ecuacin para esta lnea, as como para especificar las incertidumbres asociadas con su uso. Tambin se da por hecho que cualquier desviacin de los puntos individuales respecto a una lnea recta es consecuencia del error en la medicin; es decir, se asume que los patrones se han preparado cuidadosamente con lo cual los errores indeterminados en el proceso de preparacin son despreciables comparados con los del proceso de medicin. Luego de construir la curva de calibracin, muestras del alimento se sometieron a tratamientos qumicos previos (Incineracin, dilucin y transformacin en un compuesto coloreado - Derivatizacin) y luego se les midi la intensidad del color con un Colormetro). El valor obtenido se lleva al grfico en el eje Y, despus de lo cual nos desplazamos en lnea recta hasta el intercepto de la curva de calibracin y de all al eje de las X cuyo valor es la concentracin de la muestra leda (a este proceso se denomina Interpolacin). Grfico Intensidad de la seal vs. Concentracin del Estndar [ ] de la muestra

Color de la muestra Color estndares (seal)

[ ] Estndares (reactivos puros)

Fig. 6. Curva de calibracin Tabla # 1. La distribucin t-Student Nro. de grados de libertad (n-1) 95% 1 12.71 2 4.30 3 3.18 4 2.78 5 2.57 6 2.45 7 2.36 8 2.31 98% 31.82 6.96 4.54 3.75 3.36 3.14 3.00 2.90 99% 63.66 9.92 5.84 4.60 4.03 3.71 3.50 3.36

9 2.26 2.82 10 2.23 2.76 12 2.18 2.68 14 2.14 2.62 16 2.12 2.58 18 2.10 2.55 20 2.09 2.53 30 2.04 2.46 50 2.01 2.40 1.96 2.33 Tabla # 2. Valores crticos de Q para 95 % (P = 0.05) Tamao de muestra 4 5 6 7 8 9 10 Valor crtico 0.831 0.717 0.621 0.570 0.524 0.492 0.464

3.25 3.17 3.05 2.98 2.92 2.88 2.85 2.75 2.68 2.58