Universidad Andrs Bello Facultad de Ciencias Biolgicas Escuela de Ingeniera en Biotecnologa

INFORME DE PRCTICA PROFESIONAL

Identificacin:
Nombre estudiante: Sebastin Andrs Silva Pino Carrera: Ingeniera en Biotecnologa. Institucin donde realiz la prctica: Centro Regional de Investigacin (CRI) La Platina (INIA) Divisin/Departamento/Unidad o rea: Biotecnologa y Mejoramiento Gentico. Supervisor Directo: Nombre: Dr. Patricio Hinrichsen Ramrez Cargo: Investigador. Bioqumico, Dr. Gentica de plantas y animales Duracin de la prctica 1 Semestre Fecha de inicio: 14 de marzo 2011 Fecha de trmino: 8 de Julio 2011
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ndice
Antecedentes de la institucin: ................................................................................................................ 3 Descripcin del tipo de institucin, misin, objetivos, estructura organizacional, infraestructura y principales actividades o temas a los que se dedica ............................................................................ 3 Estructura Organizacional. .................................................................................................................. 4 Descripcin de la Divisin/Departamento o unidad especifica en la cual se desempe como estudiante en prctica (si corresponde). .............................................................................................. 5 Antecedentes del tema o proyecto. .......................................................................................................... 5 Ttulo del proyecto, tema o actividad asignada. .................................................................................. 5 Objetivos ............................................................................................................................................. 6 Descripcin detallada de las actividades realizadas ............................................................................ 6 Resultados/conclusiones: autoevaluacin del cumplimiento de los objetivos .................................. 10 Descripcin de la organizacin interna del equipo de trabajo ............................................................... 15 Conocimientos aplicados....................................................................................................................... 16 Nuevos conocimientos adqueridos. ....................................................................................................... 16 Principales fortalezas y debilidades respecto de conocimientos de su formacin profesional. ............. 17 Perspectivas profesionales..................................................................................................................... 17 Referencias. ........................................................................................................................................... 18

Tablas y Figuras
Tabla 1 Listado de Muestras y cuanntificacion RNA............................................................................ 10 Fig 1 Gel Integridad RNA ..................................................................................................................... 14 Fig 2 Gel Integridad RNA ..................................................................................................................... 14

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Antecedentes de la institucin:
Descripcin del tipo de institucin, misin, objetivos, estructura organizacional, infraestructura y principales actividades o temas a los que se dedica
El Instituto de Investigaciones Agropecuarias (INIA) de Chile es el organismo estatal de investigacin y desarrollo agropecuario siendo una corporacin de derecho privado y dependiente del Ministerio de Agricultura. Cuenta con 10 Centros Regionales de Investigacin uno de ellos La Platina.

El Centro Regional de Investigacin (CRI) La Platina, misin a partir del ao 2001 realizar investigacin principalmente en las reas hortofrutcolas y del medio ambiente para la Regin Metropolitana y zona central del pas, debido a que en la RM se concentra cerca del 50% de la hortalizas y frutales, alrededor del 40% de la poblacin urbana del pas y en donde se genera cerca del 20% del PIB nacional y un 22,5% de las exportaciones primarias del pas.

Las principales actividades de investigacin se dirigen al manejo agronmico de las especies, utilizando nuevas variedades para mejorar la competitividad, racionalizar el uso de agua para el riego, manejo de plagas anlisis de madurez y calidad, en las cuales la biotecnologa se utiliza como una importante herramienta al quehacer de la investigacin. As, a travs del desarrollo de proyectos con fondos concursables del estado y convenios con el sector privado, publicaciones cientficas, seminarios, cursos de capacitacin, soluciona problemas tecnolgicos que abarcan el rea geogrfica central y aporta tecnologas especficas a ciertos rubros o empresas. (1)

Para desarrollar las actividades, La Platina, cuenta las siguientes instalaciones, las cuales se ubican en Santa Rosa 11610 - La Pintana Santiago.
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Laboratorio de cultivo de tejidos y micropropagacin. Laboratorio de biologa molecular. Laboratorio de poscosecha. Invernaderos de alta seguridad para el trabajo con especies transgnicas.

Cmaras de cultivo climatizadas. Colecciones vivas de germoplasma y de material segregante. Banco de germoplasma para la conservacin de semillas.

Estructura Organizacional.
La estructura organizacional del Centro Regional de Investigacin (CRI) La Platina (2): Ricardo Vial Ortiz Secretario Regional Ministerial de Agricultura de la Regin Metropolitana.

Guido Herrera Director Regional.

Arturo Campos Subdirector Regional de Investigacin y Desarrollo.

Jaime Del Canto Subdirector Regional de Administracin y Finanzas.

Patricio Hinrichsen Investigador.

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Descripcin de la Divisin/Departamento o unidad especfica en la cual se desempe como estudiante en prctica (si corresponde).
El departamento de Mejoramiento Gentico y Biotecnologa se cre con el propsito de ofrecer soluciones tecnolgicas de clase mundial en el mbito de la produccin hortofrutcola, con la idea de desarrollar tecnologas que permitan mantener y aumentar la competitividad de la hortofruticultura chilena, agregndole valor a la produccin primaria, generando nuevas variedades de mayor productividad y que satisfagan las demandas por calidad de parte de los consumidores. Ello implica generar variedades y tecnologas que estn orientados a dar sustentabilidad a la produccin, a bajar los costos, a minimizar el uso de agroqumicos y, en general, a mejorar la calidad de los productos que llegan al consumidor (3). El mejoramiento gentico incluye diversas disciplinas como el cultivo de tejido para micropropagacion, la genmica, uso de marcadores genticos moleculares, desarrollo de variedades transgnicas, caracterizacin de plagas, en especies de importancia para la zona como la vid, cerezos, tomates zapallo y porotos.

Antecedentes del tema o proyecto.

Ttulo del proyecto, tema o actividad asignada.
Se me asigno trabajar junto a un tesista de doctorado dentro del proyecto: Estudios de expresin de genes relacionados al metabolismo de giberelinas en segregantes de uva de mesa con fenotipos contrastantes para tamao de baya, para el cual se necesita la extraccin de 420 muestras de RNA.

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Objetivos
El objetivo asignado fue la extraccin de RNA toral de segregantes contrastantes, para poder identificas posteriormente genes involucrados en el desarrollo de la baya que se expresan diferencialmente en respuesta a la disponibilidad de Gas en la baya e identificar genes candidatos de inters y medir sus niveles de expresin mediante qPCR.

Descripcin detallada de las actividades realizadas

Se trabajo con muestras obtenidas de segregantes apirenos y semillados de una poblacin obtenida del cruzamiento Ruby Seedless x Sultanina, seleccionando fenotipos contrastantes para tamao de baya, a las cuales se extrajo RNA total mediante el siguiente mtodo.

Protocolo Hot Borate para extraccin UVA. Da 1 1) Encender bao termorregulador a 80C. 2) Hacer buffer de extraccin (XT + PVP + DTT + NP-40

a. Para 3 gramos de Muestra:

15mL Buffer XT 150uL DTT 1M DECP (autoclavar) 150 uL NP-40 Directo 1% 0.3g PVP en directo en molienda.

Agregar a tubos Oak Ridge de 50mL e incubar a 80C por 10 minutos. 3) Agregar el tejido molido en nitrgeno lquido junto al PVP al tubo con el buffer caliente. 4) Vrtex por 30s.

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5) Incubar con agitacin a 42C por 90min (optativo agregar 100uL Protena K 20mg/mL) cada 15min agitar por inmersin suave. 6) Agregar 0.08 volmenes (1.2mL) de KCl 2M revolviendo en hielo durante 30min. 7) Centrifugar a 12K (12.000g) por 20min a 4C. Recuperar el sobrenadante en otro tubo. 8) Agregar 1 volumen de LiCl 4M, mezclar suavemente y dejar a 4C O.N. o 2Hrs a temperatura ambiente. Da 2 1) Centrifugar a 20.000g por 40min a 4C. Descartar sobrenadante. 2) Resuspender el pellet en 500uL de Agua estril DEPC mas 50uL de acetato de sodio 3M. Transferir a eppendorf de 2mL 3) Agregar 500uL de cloroformo/alcohol isomilico y hacer Vrtex por 30seg. 4) Centrifugar 5min a 14000 rpm a 4C. recuperar sobrenadante en otro tubo. 5) Aadir 400uL de agua DEPC al extracto de cloroformo. Vrtex por 30seg. Centrifugar a 14000rpm por 5min a 4C. 6) Recuperar sobrenadante y juntarlo con el 1 sobrenadante. Agregar 30uL de acetato de sodio 3M 7) Aadir un volumen de isopropanol (880mL), mezclar suavemente por inmersin e incubar en hielo por 1 hora. 8) Centrifugar 14000 rpm por 30-40min a 4C. Debe verse pellet. 9) Lavar cuidadosamente el pellet con 400uL de EtOH 80% DEPC. Centrifugar 10min. Eliminar el exceso de etanol con una jeringa de 1mL, secar en estufa el tubo abierto por 5min. Resuspender el pellet en 30uL de agua DEPC. 10) Analizar integridad en gel de agarosa al 1%, y cuantificar en espectrofotmetro (260nm).

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Reactivos. 0.2 Na Borato decahidratado (Borax. FW 381.4) 30mM EGTA (FW 380.4) 1% (w/V) SDS 1% deoxycholate, sodium salt Buffer XT

1% Nonidet P-40 (igepal) 2% (w/v) PVP 0.1 (V/v) antifoam A Optativo

Buffer XT Para disolver, agregue los componentes en agua DEPC precalentada. Ajustar pH 9.0 con NaOH 5M. Autoclavar. El DTT, NP-40, PVP y antifoam se agregan solo inmediatamente antes de usar el buffer. KCL 2M LiCl 4M No se autoclava. Acetato de Sodio 3M (CH3COONa) Cloroformo/Alcohol isoamlico (1:1) Isopropanol EtOH 80% DEPC.

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DTT = Ditiotreitol. Agente reductor. Rompe puentes disulforo. Permiten desplegar completamente una protena y separar las subunidades de una multimrica PVP = Polyvinylpyrrolidone (PVP), Tambin llamado Polyvidone, absorbe polifenoles durante la extraccin de los cidos nucleicos. Tambin es antioxidante y agente quelante. LiCl = precipitacin del RNA (mejor a bajas T) SDS = inhibe la actividad ribonucleasa. Rompe puentes disulfuro, agente reductor. Na Borato = Remueve carbohidratos y polisacridos, e inhibe la produccin de polifenoles. Isopropanol = Precipita del RNA desde la solucin con acetato de sodio. NP-40 = Nonilfenoxypolietoxyletanol = Detergente no inico. Lisa la membrana plasmtica de las clulas y paredes celulares. Acetato de Na = Hace mas bsico el pH para mejorar la calidad del RNA e inactivar los RNAsas y DNAsas. Solubiliza el RNA, precipita protenas separando selectivamente de otras molculas. KCl = Sal de potasio, facilita la remocin de polisacridos cargados positivamente. Cloroformo/alcohol isoamlico = Separa protenas que estn unidad a RNA/DNA. ETOH = Lava el RNA precipitando, ya que en el isopropanol aun quedan sales en el precipitado, pero al pasar todo al etanol, en la parte acuosa se disolvern las sales y el RNA precipitado. DECP = Dietilpirocarbonato. Inhibidor no especifico de RNAsa. Reacciona con grupos amino, hidroxi y tiol de las protenas. No se puede utilizar con buffer TRIS o HEPES, si con PBS y MOPS.

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Resultados/conclusiones: autoevaluacin del cumplimiento de los objetivos

Tabla 1 .Estado Muestra

Nombre Muestra 27 (clon 1) 27 (clon 2) 19 (clon 1) 19 (clon 2) 91 (clon 1) 91 (clon 2) 27 (clon 1) 27 (clon 3) 91 (clon 3) 19 (clon 3) 19 (clon 1) 19 (clon 2) 19 (clon 3) 91 (clon 1)

Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero

(C) o (S) GA3 S S S S S S C S S S C C C C

Da Extraccin 20-4-11 y 21-4-11 20-4-11 y 21-4-11 20-4-11 y 21-4-11 20-4-11 y 21-4-11 20-4-11 y 21-4-11 20-4-11 y 21-4-11 27-4-11 y 28-4-11 27-4-11 y 28-4-11 27-4-11 y 28-4-11 27-4-11 y 28-4-11 2-5-11 y 35-11 2-5-11 y 35-11 2-5-11 y 35-11 2-5-11 y 3-

A1 260nm

A2 280nm

A1/A2

Observaciones

OD*VC*FD

[RNA]ug/uL

ninguna ninguna ninguna ninguna ninguna ninguna no no no no no no no no no no no no no no no no no no no no no no no no Extracciones malas Extracciones malas Extracciones malas Extracciones malas Extracciones malas Extracciones malas Extracciones malas Extracciones malas

10

Universidad Andrs Bello Facultad de Ciencias Biolgicas Escuela de Ingeniera en Biotecnologa 5-11 2-5-11 y 35-11 2-5-11 y 35-11 4-5-11 y 55-11 4-5-11 y 55-11 4-5-11 y 55-11 4-5-11 y 55-11 4-5-11 y 55-11 4-5-11 y 55-11 9-5-11 y 10-5-11 9-5-11 y 10-5-11 9-5-11 y 10-5-11 9-5-11 y 10-5-11 9-5-11 y 10-5-11 9-5-11 y 10-5-11 11-5-11 y 12-5-11 11-5-11 y 12-5-11 11-5-11 y 12-5-11

Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero

91 (clon 2) 91 (clon 3) 27 (clon 1) 27 (clon 2) 27 (clon 3) 184 (clon 1) 184 (clon 2) 27 (clon 3) 324 (clon 1) 324 (clon 2) 324 (clon 3) 324 (clon 1) 324 (clon 2) 324 (clon 3) 359 (clon 1) 359 (clon 2) 359 (clon 3)

C C C C C C C S C C C S S S C C C

no no 0,045 0,14 0,078 0,065 0,074 0,174 0,149 0,07 0,162 0,076 0,179 0,073 0,04 0,027 0,213

no no 0,024 0,082 0,057 0,048 0,064 0,117 0,091 0,04 0,096 0,046 0,114 0,038 0,027 0,017 0,13

no no 1,8775 1,7126 1,3648 1,3562 1,1483 1,4854 1,6402 1,7809 1,6848 1,6595 1,5806 1,8984 1,4509 1,6397 1,6397

Extracciones malas Extracciones malas Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC 4,5 14 7,8 6,5 7,4 17,4 14,9 7 16,2 7,6 17,9 7,3 4 2,7 21,3 0,18 0,56 0,312 0,26 0,296 0,696 0,596 0,28 0,648 0,304 0,716 0,292 0,16 0,108 0,852

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Universidad Andrs Bello Facultad de Ciencias Biolgicas Escuela de Ingeniera en Biotecnologa Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero 359 (clon 1) 359 (clon 2) 359 (clon 3) 184 (clon 1) 184 (clon 2) 184 (clon 3) 184 (clon 1) 189 (clon 2) 189 (clon 3) 117 (clon 1) 117 (clon 2) 117 (clon 3) 117 (clon 1) 117 (clon 2) 117 (clon 3) 151 (clon 1) 151 (clon 2) 151 (clon 3) S S S S S S C C C S S S C C C S S S 11-5-11 y 12-5-11 11-5-11 y 12-5-11 11-5-11 y 12-5-11 16-5-11 y 17-5-11 16-5-11 y 17-5-11 16-5-11 y 17-5-11 16-5-11 y 17-5-11 16-5-11 y 17-5-11 16-5-11 y 17-5-11 18-5-11 y 19-5-11 18-5-11 y 19-5-11 18-5-11 y 19-5-11 18-5-11 y 19-5-11 18-5-11 y 19-5-11 18-5-11 y 19-5-11 19-5-11 y 20-5-11 19-5-11 y 20-5-11 19-5-11 y 0,006 0,011 0,264 0,018 0,025 0,019 0 0,076 0,018 0,14 0,085 0,098 0,085 0,129 0,045 0,017 0,032 0,102 0,004 0,007 0,161 0,014 0,015 0,011 0,001 0,052 0,013 0,082 0,07 0,069 0,062 0,084 0,019 0,004 0,013 0,059 1,4787 1,3962 1,7134 1,2062 1,4263 1,3708 1,54 2,359 4,0588 2,3853 1,7226 1,75 1,614 1,6414 1,2982 1,6748 1,6383 Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 2,5 + 498,5 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 0,6 1,1 26,4 4,5 6,25 4,75 0 19 4,5 35 21,25 24,5 21,25 32,25 11,25 4,25 8 25,5 0,024 0,044 1,056 0,18 0,25 0,19 0 0,76 0,18 1,4 0,85 0,98 0,85 1,29 0,45 0,17 0,32 1,02

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Universidad Andrs Bello Facultad de Ciencias Biolgicas Escuela de Ingeniera en Biotecnologa 20-5-11 19-5-11 y 20-5-11 19-5-11 y 20-5-11 19-5-11 y 20-5-11 23-5-11 Y 24-5-11 23-5-11 Y 24-5-11 23-5-11 Y 24-5-11 23-5-11 Y 24-5-11 23-5-11 Y 24-5-11 23-5-11 Y 24-5-11 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC Diluciones 1 + 499 H20 DEPC

Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero Envero

151 (clon 1) 151 (clon 2) 151 (clon 3) 176 (clon 1) 176 (clon 2) 176 (clon 3) 176 (clon 1) 176 (clon 2) 176 (clon 3)

C C C S S S C C C

0,085 0,007 0,014 0,034 0,026 0,114 0,057 0,131 0,025

0,047 0,003 0,001 0,015 0,009 0,074 0,035 0,077 0,008

1,8104 2,4 11,2 2,3333 3,0563 1,5411 1,6307 1,6994 3,0588

21,25 1,75 3,5 8,5 6,5 28,5 14,25 32,75 6,25

0,85 0,07 0,14 0,34 0,26 1,14 0,57 1,31 0,25

Tabla 1: Resultados e identificacin de las extracciones. Estadio de desarrollo, Numero de muestra y clon, Tratamiento con o sin GA3, Fecha de extraccin, cuantificacin espectrofotomtrica (260nm) estado de pureza (razn 260/280) y concentracin total medida en ug/uL.

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Fig 1

Fig. 1. Gel de agarosa Mostrando Integridad RNA extrado Correspondiente a Muestras 184 Envero con sus respectivos clones y tratamiento. (S) sin tratamiento GA3 (C) Con tratamiento GA3.

Fig 2

Fig. 2. Gel de agarosa mostrando integridad RNA extrado Correspondientes a muestras 112 y 117 6 -8 milmetros y sus respectivos clones y tratamiento. (S) sin tratamiento GA3 (C) Con tratamiento GA3.

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Se extrajo eficientemente RNA total en distintas muestras de Vid, tanto en estadios de Envero como 6-8 milmetros, obtenindose grandes cantidades de RNA en algunas muestras y teniendo problemas de integridad y concentracin total en algunas muestras, esto debido a posibles altas concentraciones de fenoles, contaminacin es las soluciones o mala manipulacin de la muestra.

En el tiempo transcurrido de mi prctica profesional, completamos un total de 80 muestras de bayas, estas completan todas las muestras del estadio Envero y una porcin 6-8 milmetros. Las muestras se tendrn que analizar y corroborar si sirven para los procesos de RT-PCR, y secuenciacin. Las muestras con poca concentracin o que resultaron defectuosas tendrn que ser extradas nuevamente, como es el caso e la muestra 184 C1 C (Fig. 1) en la cual no se puede observar ninguna de las subunidades del RNA ribosomal, con el cual se analiza la integridad del RNA.

Descripcin de la organizacin interna del equipo de trabajo en el cual se desempe, incluyendo su propio rol dentro del grupo.
El Departamento de Mejoramiento Gentico consta de un selecto grupo de cientficos capacitados y que tienen un profundo conocimiento de cmo funcionan las plantas y los sistemas productivos, liderado por el Dr. Patricio Hinrichsen Ramrez. En particular, mi trabajo se centro en apoyar el desarrollo de la tesis de Doctorado de Gonzalo Ravest, con el desempeaba mi trabajo diario, el cual consisti en preparar y efectuar el protocolo de extraccin de RNA, su posterior cuantificacin y anlisis de integridad en geles de Agarosa.

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Conocimientos aplicados.
Manejo de instrumental y tcnicas de laboratorio. Tcnicas biologa molecular. Manejo en relacin a la bioseguridad requerida en la preparacin de los distintos medios y las tcnicas empleadas en el Laboratorio. Calculo para la preparacin de los distintos medios y soluciones requeridos durante el trabajo. Manejo de datos en planilla Excel.

Indicar los nuevos conocimientos (tericos, tcnicos, administrativos) que adquiri durante el desempeo de sus actividades.
Dentro de los conocimientos adquiridos se encuentran principalmente temas que no estuvieron relacionados estrictamente con la prctica que ejerc diariamente, si no que tienen relacin con el trabajo del laboratorio en general, como la generacin de mapas genticos saturados, AFLPs, y QTLs, tcnicas que se realizan diariamente en el Departamento de Mejoramiento Gentico y Biotecnologa. Con relacin a mi prctica dentro del laboratorio, los conocimientos adquiridos fueron los conceptos esenciales para poder superar problemas durante las extracciones y determinar cual son los puntos determinantes en un protocolo tan delicado como el de la extraccin de RNA total, como es hacer un trabajo metdico, teniendo especial cuidado en la contaminacin de los materiales con RNAas y deteccin de soluciones contaminadas.

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Indicar las principales fortalezas y debilidades que percibi durante su desempeo respecto de conocimientos de su formacin profesional.
Durante la prctica ejercida en el Centro Regional de Investigacin La Platina, INIA, no se presento ningn inconveniente al desarrollar las actividades asignadas por el Dr. Patricio Hinrichsen y por Gonzalo Ravest. Los conocimientos tcnicos otorgados durante los aos de estudio en la universidad me permitieron poder ejercer sin mayores problemas los desafos planteados en la prctica profesional. Por el contrario, una de las mayores debilidades fue encontrarme con todos los problemas logsticos que se presentan dentro de la institucin, como es el caso de la burocracia para el pedido de reactivos y el retraso que estos presentan para ser entregados.

Perspectivas profesionales.
Una institucin como el CRI se enfrenta a una elevada competitividad, la cual un Ingeniero en Biotecnologa es obligado a enfrentarla y relacionar las actividades de investigacin y difusin de tecnologas con menores costos de produccin y lograr una mayor rentabilidad, de fcil acceso la sociedad, manteniendo al mismo tiempo los altos estndares de calidad, generando tecnologas limpias que conserven el medio ambiente, productos aptos para el consumo humano y cumpliendo con las exigencias del mercado internacional.

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Universidad Andrs Bello Facultad de Ciencias Biolgicas Escuela de Ingeniera en Biotecnologa

Referencias.

1.- Instituto de Investigaciones Agropecuarias INIA La Platina. http://www.inia.cl/link.cgi/Platina/QuienesSomos/ 2.- Instituto de Investigaciones Agropecuarias INIA La Platina. Directivos. http://www.inia.cl/link.cgi/Platina/QuienesSomos/814 3.- Instituto de Investigaciones Agropecuarias INIA la Platina Departamentos. http://www.inia.cl/link.cgi/Platina/Investigacion/Departamentos/mb/

4.- Karen E Reid, Niclas Olsson, James Schlosser, Fred Peng and Steven T Lund: An optimized grapevine RNA isolation procedure and statistical determination of reference genes for real-time RT-PCR during berry development. BCM Plant Biology. 2006

5.- Shinjiro Yamaguchi: Gibberellin Metabolism and its Regulation. Annu. Rev. Plant Biol. 2008.59:225-251.

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