DISCUSIN ANLISIS DL50.

Presentado Por. Lennix Adriana Martnez. Mnica Porras Carolina Torres Moreno Dan Javier Sarasty Z.

Presentado a. Bio.Esp. Ricardo Restrepo

ESPECIALIZACIN QUIMICA AMBIENTAL UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER. BUCARAMANGA 2011

Los bioensayos de toxicidad se emplean como una herramienta para examinar la calidad de los residuos lquidos respecto al riesgo que implica para la biota que se encuentra en los cuerpos receptores de los efluentes, esta tcnica permite evaluar de manera conjunta la ecotoxicidad de sustancias y observar las interacciones que presentan. Los biensayos son de gran importancia debido a que los anlisis fisicoqumicos no resultan suficientes para la valoracin de los efectos que llegan a generar diversas sustancias en los ecosistemas, en este sentido un bioensayo es una herramienta que posibilita la evaluacin a una agente que tiene la capacidad de producir efectos txicos sobre organismos vivos estudiando especies de prueba. En el laboratorio y bajo la asesora del docente Bilogo-Especialista Ricardo Restrepo, se expuso a un grupo de organismo (mosquitos y semillas de rabano y lechuga) a una escala de de diluciones de muestra de jabn durante un periodo de 18 horas, con el fin de cuantificar el dao que la muestra llega a generar en los organismo expuestos a ella. En nuestro caso se manejo un periodo de 18 horas debido a las condiciones de la asignatura, pero por lo general el periodo oscila entre 24, 48 y 72 horas dependiendo de las condiciones del estudio. La Universidad de Concepcin en Chile, indica que en evaluaciones de toxicidad aguda, el efecto medible es la mortalidad y en evaluaciones de toxicidad crnica, los efectos son subletales y por lo general se expresan en la reduccin del crecimiento o vara el nmero de descendientes. Por otra parte los diversos microorganismos de la naturaleza varan en sus metabolismos y compuestos qumicos de los cuales depende la vida. Entonces una sustancia puede ser toxica para unos microorganismo y para otros no, dependiendo de los elementos con los cuales las clulas interactan, por lo anterior la literatura indica que son tres (3) el mnimo de especies con las cuales se debe analizar la toxicidad de una muestra. Y por lo general se debe evaluar la toxicidad crnica y aguda, por lo cual se define lo siguiente. Definicin. La dosis letal es una manera de interpretar el grado de toxicidad de una sustancia y se interpreta como la dosis tal a la que una poblacin de muestra dada, un porcentaje, muere. A nivel toxicologico se maneja la dosis semiletal o DL50 que indica los miligramos de una sustancia necesarios por kilogramo de peso de un animal para matar la 50% de la poblacin. Los mosquitos forman un grupo de insectos de gran importancia, ya que muchas de sus especies causan diversa molestias y son vectores de agentes causales de enfermedades humanas como la malaria o el dengue. Para el caso del Culex la bibliografa indica que es un gnero de mosquitos hematfagos de la familia Culicidae, varias especies se comportan como vectores de importantes enfermedades como encefalitis virales y la malaria aviar. Existe una gran variedad de especies de Culex , solamente en panam se describen 88 especies. En el Culex Quinquefasciatus que fue la especie que se trabajo la clasificacin cientfica es la siguiente. Reino: Animalia.

Filo: Arthropoda. Clase: Insecta. Orden: Diptera. Familia: Culicidae. Gnero: Culex. Especie: C. quinquefasciatus. Esta especie se reproduce en los depsitos de aguas estancadas, pozos negros y en toda acumulacin de agua contaminada, con temperaturas adecuadas y la humedad necesaria. El ciclo de vida se lleva a cabo en siete das pasando por; huevo, larva, pupa y adulto.

Esta especie es el vector de la filariasis causada por el nematodo Wuchereria bancrofti en las regiones del trpico y subtropical. En las plantas se trabajo con semillas de lechuga y Rabano, la literatura indica que el Rabano es una planta de la familia Brassicaceae que se cultiva por sus races comestibles. La lechuga es una planta propia de las regiones semi-templada e igualmente se cultiva con fines alimenticios. La sustancia toxica que fue analizada es jabn de manos a diversas concentraciones, los reactivos de este jabn son: Un espesante, que por lo general se utiliza carbometil celulosa. Genapol, que acta como agente aninico. Coperland kd. Es un agente graso de superficie organico espesante y no ionico. Cloruro de sodio. Agente espesante. Benzoato de sodio. Agente preservante Fragancia y color La literatura seala que biolgicamente, teniendo en cuenta su capacidad para desarrollar resistencia a los insecticidas, la evolucin y propagacin de los genes de resistencia. La bacteria

Bacillus thuringiensis subsp. israelensis se descubierto en la dcada de 1970 en Israel (Goldberg y Margalit, 1977), y ha demostrado ser altamente eficaz en el control de las larvas de muchas especies de mosquitos. Esta alta eficacia llev rpidamente al desarrollo de la BTI como el ingrediente activo con fines comerciales larvicidas bacterianos (Mulla 1990). Estos larvicidas ahora se utilizan habitualmente en los programas de control de vectores en todo el mundo. A pesar de su uso intensivo en los programas de control de muchos, no hay informes de resistencia a la BTI (Wirth Walton y Federici, 1999). Larvicidas bacterianos sobre la base de formulaciones comerciales de B. sphaericus 2362 se utilizan en varios pases y la resistencia en las poblaciones de Culex. quinquefasciatus ha sido reportado en Francia, Brasil e India (Singre et al . 1994, Silva-Filha et al . 1995, Rao et al . 1995, Wirth en Walton y Federici, 1999). Wirth Walton y Federici (1999) encontraron que la adicin de Cyt1A (a partir de Bacillus thuringiensis subsp. israelensis ) en una proporcin tan bajo como de 1:10 a B. sphaericus larvicidas restaur la mayora de la toxicidad contra las poblaciones, incluso de alta resistencia de la Cx. quinquefasciatus . Por lo tanto, Cyt1A proporciona una herramienta prctica para la gestin de B. sphaericus resistencia. La observacin de que Cyt1Aa de BTI puede reducir la resistencia a B. sphaericus (as como la capacidad de Cyt1A para suprimir la resistencia a otros mosquitocida B. thuringiensis cepas) indica que otras toxinas citolticas mosquitocida tambin puede ser til en el manejo de la resistencia. Protenas Cyt varan en su toxicidad para los mosquitos y pueden encontrar diferentes roles en la gestin de la resistencia a la B. thuringiensis y B. sphaericus en las poblaciones de mosquitos. Este bioensayo corresponde a un test de 18 horas para lo cual en el laboratorio se realiza un montaje para determinar la DL50 en Culex y en semillas de Rabano y lechuga. El montaje se realizo de la siguiente manera: Se realizaron soluciones de jabn de manos con concentraciones de 1%, 0,1%, 0,01%, 0,001% y control, posteriormente se tomaron 10 vasos pequeos desechables y se adicionaron gotas de cada solucin, se introducen 5 larvas de Culex quinquefasciatus. Por otra parte se toma 5 cajas de petry y se agregan 10 semillas de cada especie a cada caja y se adiciona 1 ml de cada solucin, se tapan y se embalan con binipel y papel aluminio dejndose en la oscuridad las cajas. Pasadas dieciocho (18) horas de montar la muestra se observa cuantas larvas continan con movimiento y cuantas no presenta ningn movimiento visual. Se hace una estadstica de los datos. Para el caso de las semillas de rabano y lechuga se mide la raz y el hipocotleo de cada semilla, tabulando los datos. (Ver formato Excel). Los datos y mortalidad de de crecimiento fueron analizados estadsticamente mediante la herramienta de Excel, obtenindose el DL50- 18 h (concentracin en la cual muere el 50% de los individuos expuestos). El criterio de aceptabilidad de la prueba es del 0% de mortalidad en los controles.

Condiciones de ensayo y criterios de aceptabilidad de los bioensayos realizados en Culex quinquefasciatus Tipo de biensayo Tiempo de exposicin Volumen solucin /envase Nmero de replicas N organismo envase Edad organismos ensayo Nmero de tratamientos y su concentracin, segn toxicidad de la muestra Toxico Estadstico. Sin recambio de agua. 18 horas 2 5 Larva Control, 1%, 0,1%, 0,01%, 0,001% Jabn

Para el caso de las semillas la literatura seala:

Lactuca sativa, la lechuga, es una planta anual propia de las regiones semi-templadas, que se cultiva con fines alimentarios. Debido a las muchas variedades que existen, y a su cultivo cada vez mayor en invernaderos, se puede consumir durante todo el ao. Normalmente se toma cruda, como ingrediente de ensaladas y otros platos, pero ciertas variedades, sobre todo las de origen chino, poseen una textura ms robusta y por ello se emplean cocidas. El nombre genrico Lactuca procede del latn lac, -tis (leche). Tal etimologa refiere al lquido lechoso (o sea, de apariencia "lctea") que es la savia que exudan los tallos de esta planta al ser cortados. El adjetivo especfico sativa hace referencia a su carcter de especie cultivada. Rabano El rbano (Raphanus sativus) es una planta de la familia Brassicaceae que se cultiva por sus races comestibles. Cada una de sus subespecies recibe nombres vulgares diferentes, por ejemplo, R. sativus var. sativus es llamado rbano o rabanito y R. sativus var. longipinnatus se conoce, entre otros nombres, como rbano blanco, rbano japons o daikon.

Condiciones de ensayo y criterios de aceptabilidad de los bioensayos realizados en semillas de lechuga y rabano Tipo de biensayo Tiempo de exposicin Volumen solucin /envase Nmero de replicas N organismo envase Edad organismos ensayo Nmero de tratamientos y su concentracin, segn toxicidad de la muestra Toxico Estadstico. Sin recambio de agua. 18 horas ml 2 10 semilla Control, 1%, 0,1%, 0,01%, 0,001% Jabn

Los ensayos realizados con Culex quinquefasciatus para las muestras aplicadas con el toxico de jabn en diversa concentracin se observa que se presenta una toxicad grave a las 18 horas de exposicin en la concentracin del 1% arrojando un DL 50= 2,154 (ver formato Excel). Con base en la discriminacin de los promedios de mortalidad de las diversas concentraciones se puede concluir que con una concentracin del 1% de jabn de manos sera posible eliminar cerca de la mitad de una poblacin de larvas de Culex quinquefasciatus. Lo que indica, aunque no es el objetivo de la prctica, que el jabn de manos de uso comercial puede ser usado como alternativa de control del Culex quinquefasciatus, con ventajas en cuanto a la ausencia de residuos txicos, tambin se observa que le jabn tiene principios activos contra la larva del mosquito. Lo anterior era para el caso real, en nuestro ejercicio se aplico el mismo principio pero con datos hipotticos (Ver formato Excel), en este se observa una DL50 de 0,044 encontrndose una actividad del jabn contra el mosquito entre el 0,01% y el 1%, lo que indicara hipotticamente que el jabn acta en bajas concentraciones, e igualmente seria una alternativa de control contra la larva. En discusin de lo anterior tambin se observara que en el momento que el jabn entre en contacto con algn recurso hdrico puede llegar a general algunos efectos en la biota de este, por lo tanto observemos que sucede cuando el jabn interactu con la semillas. En el caso de le lechuga se observa un porcentaje de germinacin del orden del 41%, es decir le jabn presenta un efecto inhibidor en el crecimiento de la semilla presentndose un DL 50= 2,154, muy parecido al del Culex quinquefasciatus, para el caso de las semillas de rabano se observa una estimulacin en el crecimiento llegando a ser cerca del 60%, esto puede ser debido a que la semilla presenta un comportamiento defensivo y estimula su crecimiento, por otra parte el jabn tiene es hidrofbico e hidroflico llegando a generar hipotticamente que la semilla trabaje conla parte hidrifilica como proteccin. Tambin hay que mencionar que los componentes de los detergentes tiene ciertas propiedades que pueden servir como nutriente a la planta, como los detergentes biodegradables, que contiene fosfatos, por otra parte el jabn en la industria agrcola se emplea como humectante (adems de otras cosas).

En general los efectos del jabn en las aguas se deben al exceso de uso de este, el jabn se precipita en forma de sales clcicas de los cidos grasos llevando consigo la suciedad no soluble y formando emulsiones. Para nuestro caso en modelo del rio en condiciones ambientales se tiene DL50 de DL 50= 2,154, con un caudal de 20000 (rio estiaje) y 80000 (rio lluvia), para esto valores y los clculos ver la tabla en Excel. Como resultado de aplicar el modelo, cuyos datos son para rio de oro se observa que el vertimiento es muy toxico, generando esto alteracin en el ecosistema en el caso de las larvas del mosquito Culex quinquefasciatus, el cual es un vector para este tipo de estudios, al igual que las semillas de rabano y lechuga. El ILCAG presenta un valor, en nuestro caso, de 0,45 lo que indica una capacidad media de ser un cuerpo receptor, por otra parte la relacin de AF(Qr+Qv)>Qv*100/DL50, lo que nos lleva a concluir que se tiene poca capacidad de asimilacin, a su vez, como se menciono anteriormente, que los jabones forman sales clcicas originando emulsiones relacionndose con la poca capacidad de asimilacin del rio. En conclusin el bioensayo realizado, utilizando como vectores a la larva del mosquito Culex quinquefasciatus y las semillas del rabano y la lechuga, nos ayudo a determinar los efectos txicos del jabn sobre fuentes hdricas (para el ejemplo rio de oro) aplicando un modelo estadstico y realizando una modelacin en Excel.

Bibliografa. Insua Daniel Alfonso, Prez Garca Caridad, Evaluacin ecotoxicolgica de detergentes comerciales y naturales, como criterio de contaminacin ambiental Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad Centra Marta Abreu de Las Villas. Cuba. Rodrguez Hernndez Cesreo, Perez Pacheco Rafael. Toxicidad de aceites, esencias y extractos vegetales en larvas de mosquito Culex quinquefasciatus. Revista zoolgica Mexicana 2004 vol 20 N 001pag. 141 -152. Nieto Hernndez Ramon, Palacio Mendoza Celina. Efectividad biolgica de productos biodegradables para el control de la cochinilla silvestre Dactylopius Opuntiae . Revista zoolgica Mexicana 2004 vol 20 N 003 pag. 99 -106. www.wikipedia.com