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UNIDADE XIII DORMNCIA E GERMINAO

DORMNCIA E GERMINAO

1. INTRODUO No final da maturao da semente, o embrio entra numa fase quiescente em resposta dessecao. A GERMINAO pode ser definida como o retorno do crescimento do embrio da semente madura. Ela depende das mesmas condies ambientais que so requeridas para o crescimento vegetativo. gua e oxignio devem estar disponveis e a temperatura e demais condies climticas devem ser adequadas. No entanto, em muitos casos, uma semente vivel poder no germinar mesmo que todas as condies ambientais necessrias para o crescimento sejam adequadas. Este fenmeno denominado de DORMNCIA DE SEMENTES. A dormncia da semente introduz um retardo temporal no processo de germinao que garante o tempo requerido para a disperso da semente por uma maior distncia geogrfica. Ela tambm maximiza a possibilidade de sobrevivncia da plntula, evitando a germinao sob condies desfavorveis. interessante destacar que a dormncia pode ocorrer tambm em gemas na parte area e em rgos subterrneos, sendo importante para sincronizar tanto o desenvolvimento como a florao dos indivduos de uma mesma espcie.

2. ESTRUTURA DE SEMENTES, DE PLNTULAS E DE RGOS DORMENTES a) Sementes e plntulas As sementes de angiospermas so estruturas simples, que se desenvolvem a partir do vulo fecundado. Elas so, entretanto, fisiologicamente extraordinrias, pois o embrio pode sobreviver por longos perodos com um contedo de gua de 10% (na base de peso total) ou menos, enquanto que os tecidos normais em crescimento precisam de um contedo de gua em torno de 70%, para manter as suas funes metablicas. As sementes possuem um embrio (eixo embrionrio mais um ou dois cotildones) derivado da fuso dos gametas masculino e feminino, e podem conter ou no um endosperma. O endosperma, quando presente, consiste de um tecido triplide derivado da fuso de dois ncleos polares femininos do vulo com o segundo ncleo generativo do tubo polnico. As estruturas internas so protegidas por um tegumento originado pelo tecido materno, normalmente dos integumentos do vulo. Esse tegumento geralmente constitudo de duas camadas, a testa mais externa e a tegma mais interna. O tegumento (principalmente a testa) mostra grande variao, podendo ser mole, gelatinoso ou piloso, mas o mais comum ser duro como em Castanha do Par. O embrio formado pelo eixo embrionrio e por um ou dois cotildones (Figura 1). Em sementes de dicotiledneas se observa o eixo embrionrio (formado pela radcula, hipoctilo e plmula) e dois cotildones. Em monocotiledneas, particularmente em gramneas, identificar estas partes bem mais difcil. Nestas plantas, um nico e pequeno cotildone modificado e constitui o escutelo (Figura 1). A parte basal do cotildone alongada para formar o coleptilo (pelcula formada de folhas modificadas que cobrem as primeiras folhas) e, em algumas espcies (como o milho), o hipoctilo forma o mesoctilo.

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As sementes possuem ainda reservas armazenadas, as quais so utilizadas pelo embrio durante o processo de germinao ou so utilizadas no consumo animal. Estas reservas podem ser encontradas no endosperma ou nos cotildones (Figura 1). O endosperma pode ocupar grande parte da semente, como nos cereais (arroz, milho, trigo, cevada, sorgo), ser relativamente pequeno (Cruciferae), ou pode no existir (sementes no endosprmicas Orchidaceae). Ocorre tambm na forma de tecido acelular cenoctico, como o endosperma lquido de Cocus nucifera. Em sementes de cereais, o endosperma (tecido morto) circundado por uma camada de clulas vivas, a camada de aleurona. Durante a germinao, a camada de aleurona fornece as enzimas hidrolticas que digerem as reservas presentes no endosperma (rever giberelinas). O escutelo atua absorvendo os materiais degradados no endosperma, os quais podem ser parcialmente metabolizado e depois translocados para o eixo embrionrio.

Figura 1 Esquemas ilustrando a localizao dos tecidos em sementes de monocotiledneas, dicotiledneas e gimnospermas (Bewley & Black, 1994) OBS: Nas sementes de Gimnospermas no ocorre fuso de um ncleo generativo com os ncleos polares, a qual produz o endosperma triplide em Angiospermas. Nas gimnospermas o tecido de armazenamento de reservas haplide, sendo um megagametfito modificado (Figura 1). No entanto, este tecido de reserva funcionalmente similar ao endosperma. Em muitas espcies, como em algumas leguminosas (feijo, ervilha, lentilha, soja, etc.), as reservas so armazenadas nos cotildones, o qual, diferente do endosperma, um tecido vivo que faz parte do embrio. A germinao pode ser epgea (Figura 2A), em que os cotildones ou o endosperma ficam acima do solo e podem se tornar verdes e fotossintetizantes (feijo, mamona, cebola, etc.), ou hipgea (Figura 2B), em que os cotildones ou o gro permanecem sob o solo e no se tornam fotossintetizantes (milho, sorgo, seringueira, etc.).

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Hipoctilo

Razes laterais

Raiz Principal

Epictilo

Hipoctilo

Figura 2 Germinao e estabelecimento da plntula. (A) Estdios na germinao de feijo (Phaseolus vulgaris), um exemplo de germinao epgea; (B) Germinao hipgea de ervilha (Pisum sativum). Note as diversas partes da plntula (Hopkins, 2000).

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Note na figura 2 que as plntulas de feijo e ervilha (dicotiledneas) apresentam as seguintes partes, de baixo para cima: razes (principal e laterais), hipoctilo, cotildones, epictilo e folhas. A estrutura acima (Figuras 2A e 2B) diferente daquela observada em plntulas de milho (monocotilednea), por exemplo, (Figura 3). Nesta espcie podemos encontrar as seguintes partes, de baixo para cima: razes, gro, mesoctilo, razes adventcias, coleptilo e folhas.

gro

Figura 3 Caractersticas morfolgicas de plntulas de milho. Note que o gro fica abaixo do mesoctilo (Salisbury & Ross, 1992)

b) Gemas O crescimento das plantas restrito s frgeis regies meristemticas, localizadas, na maioria das vezes, nos pices de ramos (principal e laterais) e de razes. Os meristemas dos ramos originam os rgos da parte area, como folhas e flores, e a morfognese inicial destes rgos ocorre, freqentemente, enquanto eles esto compactados ao redor do meristema, em estruturas denominadas de GEMAS. As gemas mostram ciclos de atividade e de dormncia, particularmente onde baixas temperaturas ou perodos secos podem danificar os tecidos vulnerveis. Estas mudanas na atividade das gemas tm a funo de evitar condies ambientais desfavorveis e tambm sincronizam tanto o crescimento como a florao entre os membros da populao. Nas espcies do Hemisfrio Norte as gemas dormentes de inverno podem apresentar, uma estrutura caracterizada pela produo de escamas curtas, que permanecem fortemente compactadas (Figura 4). Anatomicamente, estas escamas podem derivar de estpulas ou de folhas modificadas. Aps a produo do nmero necessrio de escamas, ocorre a produo dos primrdios de folhas e ou de flores, os quais permanecem como rgos em miniatura no interior da gema. Estes primrdios emergiro quando as condies forem adequadas para o crescimento. Algumas espcies do cerrado no produzem escamas, sendo as gemas protegidas por folhas jovens compactadas ao redor do pice. 336

Figura 4 Uma gema axilar da espcie Laurus noblis. Note a proeminncia das escamas que protegem os primrdios (Hopkins, 2000) c) Rizomas, tubrculos bulbos e outros rgos subterrneos rgos subterrneos gemferos so usualmente produzidos pelas plantas cujas partes areas morrem a cada ano, com a aproximao do inverno ou da estao seca e servem como local de armazenamento de reservas. Um rizoma um tipo de caule subterrneo que apresenta gemas e escamas foliares. Os fotoassimilados so translocados das folhas senescentes para o rizoma, no final da estao de crescimento. Quando as condies se tornam desfavorveis o rizoma entra no perodo de dormncia. As reservas acumuladas sero utilizadas para o rpido rebrotamento no final do perodo de dormncia. Os rizomas so encontrados em importantes espcies, como a bananeira, gengibre, bambu, etc. Algumas estruturas geminferas como bulbos, bulbos slidos e xilapdios, so encontradas em espcies do cerrado e so tpicas de comunidades de gramneas. Nestes locais, a seca severa e o fogo podem ser fatores que controlam a vegetao. Enquanto as estruturas jovens acima do solo podem ser facilmente destrudas pela seca e pelo fogo, essas estruturas geminferas contendo reservas armazenadas, se mantm em estado de dormncia, e podem rapidamente recolonizar a regio quando as condies tornam-se favorveis. 337

Em algumas espcies, razes modificadas podem tambm servir como rgos dormentes e fonte de alimentao, como em mandioca, batata-doce e os vrios inhames das zonas tropicais.

3. TIPOS DE DORMNCIA EM SEMENTES Existem dois tipos de dormncia de sementes: A dormncia imposta pela casca ou outros tecidos que circundam o embrio; A dormncia inerente ao embrio (fisiolgica).

a) Dormncia imposta pelos tegumentos ou por outros tecidos Esse o tipo de dormncia imposta sobre o embrio pelo tegumento da semente ou por outros tecidos que o circunda, tais como endosperma, pericarpo ou rgos extraflorais. Essa dormncia tambm referida como dormncia fsica ou tegumentar. O embrio de tais sementes germina prontamente na presena de gua e oxignio, desde que o tegumento ou outros tecidos que o circundam sejam removidos ou, de alguma forma, danificados (escarificao qumica com cidos ou fsica com lixas). A dormncia imposta pela casca (tegumento) ou por outros tecidos, pode ocorrer por alguns mecanismos: Impedimento da absoro de gua e a causa mais comum de dormncia em famlias de plantas encontradas em regies ridas e semi-ridas (por exemplo, Leguminosas). A presena de cutculas cerosas, camadas suberizadas e escleredeos lignificados so fatores que combinam para restringir a penetrao de gua na semente. Dureza mecnica O primeiro sinal visvel da germinao , geralmente, a emergncia da radcula atravs do tegumento da semente. Em alguns casos, no entanto, o tegumento da semente pode ser to rgido que no permite a passagem da radcula. Cascas slidas e lignificadas so fatores responsveis pela dureza mecnica. Tais tecidos devem ser quebrados por foras biticas ou ambientais para que a semente possa germinar. Muitos tecidos no lignificados tais como os de endosperma de sementes de alface, podem suprimir a expanso do embrio. Nesse caso, para que ocorra a germinao, as paredes celulares do endosperma devem ser quebradas por enzimas degradantes da parede celular. Interferncia nas trocas gasosas O tegumento de algumas sementes so consideravelmente menos permevel para o oxignio do que uma equivalente espessura de gua. Essa baixa permeabilidade para o O2 sugere que o tegumento da semente pode inibir a germinao limitando o suprimento desse gs para a respirao no embrio (isso parece ocorrer em Xanthium pensylvanicum).

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Reteno de inibidores O tegumento da semente pode evitar a sada de inibidores do interior da semente. Por exemplo, quando embries de Xanthium so isolados, os inibidores de crescimento difundemse no meio e ocorre a germinao. Em sementes intactas, os inibidores permanecem no embrio e a semente no germina. Produo de inibidores O tegumento da semente e os pericarpos de frutos podem conter altas concentraes de inibidores de crescimento que podem suprimir a germinao do embrio. O ABA um inibidor de germinao que pode ser encontrado nesses tecidos maternos. Em certos casos, a repetida lavagem da semente promove a lixiviao de compostos inibidores e retira a semente do estado de dormncia. No caso de sementes que possuem arilo (pelcula que fica em torno da semente, a qual contm inibidores de crescimento), como mamo e tomate, a retirada do arilo ou a lavagem podem eliminar os inibidores e promover a germinao. b) Dormncia do embrio (dormncia fisiolgica ou endgena) O segundo tipo de dormncia de sementes a dormncia do embrio, ou seja, ela inerente ao embrio e no devida a alguma influncia do tegumento ou de outro tecido da semente. Este tipo de dormncia devido, provavelmente, presena de inibidores, especialmente o ABA, bem como da ausncia de promotores, tal como as giberelinas. A perda da dormncia freqentemente associada a uma ntida queda na relao ABA/GAs. O ABA parece inibir a sntese de enzimas hidrolticas dependentes de GAs, como por exemplo, a enzima -amilase. OBS 1: Sementes com os dois tipos de dormncia A espcie Stylosanthes humilis uma leguminosa forrageira anual de ocorrncia natural no Mxico, em vrios pases da Amrica Central, na Venezuela, frica do Sul e Nordeste e Regio central do Brasil. Suas sementes apresentam dormncia tegumentar e fisiolgica (embrio), o que parece ser uma caracterstica evolutiva e ecolgica muito importante para a adaptao das espcies do gnero Stylosanthes a certas condies ambientais. Observa-se ampla variabilidade no grau de dormncia nessas espcies. Sementes recm-colhidas de S. humilis apresentam impedimento mecnico e dormncia fisiolgica (dormncia do embrio). Esta ltima reduzida gradualmente com o avano da idade ps-colheita, permanecendo apenas a dormncia fsica nas sementes velhas. A reduo da dormncia fisiolgica com o tempo pode ser decorrente do aumento da disponibilidade de substncias promotoras do crescimento (Etileno e citocininas parecem estar envolvidos nesse caso) e do aumento da sensibilidade dos tecidos a esses fitorreguladores, ou da reduo do nvel de inibidores no embrio. OBS 2: Dormncia Primria e Secundria A dormncia pode ser classificada, tambm, como PRIMRIA E SECUNDRIA. As sementes que so liberadas da planta no estado dormente exibem dormncia primria. Em contraste, outras sementes so no dormentes quando inicialmente dispersas da planta me, mas elas podem ser induzidas dormncia se as condies para a germinao forem desfavorveis. Tais sementes exibem a dormncia induzida ou secundria. 339

4. FISIOLOGIA DA DORMNCIA EM SEMENTES E EM GEMAS a) Dormncia de sementes Os estudos relacionados dormncia tm sido focalizados sobre trs principais questes: Quais os sinais ambientais que estimulam o incio da dormncia e como eles so percebidos? Quais mudanas metablicas so responsveis pela reduo na atividade? Quais os sinais que promovem a sada da dormncia em um determinado momento? Como vimos anteriormente, a dormncia pode se originar da rigidez ou da impermeabilidade do tegumento da semente ou da inibio do desenvolvimento do embrio. Estes tipos de dormncia podem estar associados a adaptaes s condies ambientais adversas (seca, frio, etc.). No caso da dormncia do embrio (dormncia fisiolgica), acreditase que os hormnios possam agir na manuteno ou extino da dormncia. Estudos com mutantes tm sido extremamente teis na demonstrao do papel de hormnios na dormncia de sementes. Sementes de Arabidopsis, por exemplo, exibem um variado grau de dormncia, dependendo do ecotipo. Mutantes de Arabidopsis deficientes em ABA (que no produzem o cido abscsico) mostram-se no dormentes na maturidade. Quando cruzamentos recprocos entre o mutante aba (deficiente em ABA) e o tipo selvagem (no mutante) foram feitos, a semente exibiu dormncia somente quando o embrio produziu ABA. Por outro lado, a dormncia grandemente reduzida em sementes de mutantes de Arabidopsis insensveis ao ABA (mutantes abi1 e abi3 que no so afetados pelo ABA), embora estas sementes contenham maior concentrao de ABA do que as do tipo selvagem durante o desenvolvimento. Similares concluses a cerca do papel do ABA na regulao da dormncia tm sido obtidos em trabalhos com mutantes de tomate, indicando que o fenmeno , provavelmente, de carter geral. Embora o papel do ABA na iniciao e na manuteno da dormncia de sementes parea estar bem esclarecido, outros hormnios contribuem para o efeito geral. Por exemplo, em muitas plantas, o pico de produo de ABA na semente coincide com o declnio nos nveis de auxinas (AIA) e de giberelinas (GA). Do ponto de vista metablico, o ABA parece reprimir a sntese de enzimas hidrolticas que so essenciais para a quebra das reservas da semente durante a germinao. As giberelinas tm efeito contrrio. Assim, a relao ABA/GA pode estar envolvida na dormncia ou germinao de sementes, o que tem sido confirmado em estudos com mutantes. Por exemplo, mutantes de Arabidopsis deficientes em GA (no sintetizam ou sintetizam muito pouco GA) no poderiam germinar, a menos que fosse feita aplicao de GA exgeno. Em outros mutantes em que a relao ABA/GA foi restaurada, ocorria germinao. Em Stylosanthes, a quebra da dormncia fisiolgica parece estar associada com etileno e citocininas. Por exemplo, aplicao de etrel (fonte de etileno) e de benziladenina (citocinina sinttica), combinados ou separadamente, induzem a quebra da dormncia em sementes escarificadas de Stylosanthes humilis. Nesse experimento, a aplicao de etrel e de benziladenina (BA), em meio com pH 6,0, provocou, de forma marcante, a quebra da dormncia fisiolgica das sementes (Figura 5). A percentagem final de germinao foi superior a 80% nos tratamento com esses reguladores de crescimento, isolados ou conjuntamente, enquanto que no controle (pH 6,0 sem reguladores) esse valor ficou em torno 340

de 10%. Esses resultados confirmam a importncia desses fitohormnios no processo de quebra de dormncia fisiolgica de sementes de Stylosanthes, o que tem sido demonstrado por outros autores.
100 90 80

10-1 10
-1

10-2

10-1

% de Germinao

70 60 50 40 30 20 10 0

pH = 6,0

Controle

Etrel

BA

Etrel + BA

Etrel + BA

Tratamentos
Figura 5 Quebra da dormncia fisiolgica de sementes escarificadas de Stylosanthes humilis, pela aplicao de etrel e benziladenina. Alm da influncia dos hormnios clssicos (auxinas, giberelinas, citocininas, etileno e cido abscsico) na manuteno e extino da dormncia de sementes, um grande nmero de outros compostos tm sido identificados em sementes e em frutos, muitos deles atuando como inibidores: compostos fenlicos (cido ferlico, cumarina, etc.), compostos cianognicos (liberam cianeto), etc.

b) Dormncia de gemas O incio da dormncia de gemas coincidente com a queda de folhas, decrscimo na atividade cambial (meristema lateral) e aumento na severidade das condies ambientais (frio ou seca). Em plantas de clima temperado, a dormncia de gemas parece ser uma tpica resposta de dias curtos iniciada pelos dias curtos do outono (frio). Estas respostas, portanto, requerem um mecanismo sensorial que detecta a mudana ambiental. Nestes casos, o fitocromo est envolvido e a folha o rgo que percebe o estmulo fotoperidico. Mudanas nos nveis de hormnios, coincidentes com a dormncia de gemas, tm sido observadas. No entanto, nem sempre claro se estas mudanas causam a dormncia ou se 341

simplesmente resultam da reduo no crescimento. Em algumas espcies, declnio nos nveis de auxinas e de giberelinas pode ser detectado antes da cessao do crescimento da gema e no incio da fase de dormncia. Tambm, boa correlao entre o nvel de citocininas e o crescimento de gemas laterais tem sido verificada. De modo contrrio, muitas outras observaes indicam que o ABA causa a dormncia de gemas, visto que ele se acumula nas gemas dormentes e diminui aps a sada da dormncia (o contrrio do que se observa para citocininas, GAs e AIA). Acredita-se que, em muitos casos, as interaes entre o ABA e outros hormnios, resultem em um processo, no qual a dormncia e o crescimento da gema so regulados pelo balano entre inibidores do crescimento da gema, como o ABA, e substncias promotoras do crescimento, como citocininas, giberelinas e auxinas.

5. FATORES QUE AFETAM A GERMINAO a) Longevidade das sementes As sementes perdem a viabilidade com o tempo, entretanto a longevidade entre as espcies bastante varivel. Em laboratrio, os fatores mais importantes na proteo de sementes estocadas parecem ser: baixas temperaturas, baixo contedo de gua na semente e, em muitos casos, baixas concentraes de O2 e altas concentraes de CO2. De modo geral, a umidade da semente parece ser o fator mais importante. Por exemplo, aumentando-se o contedo de gua da semente de 5 para 10%, reduz-se a viabilidade muito mais do que aumentando-se a temperatura de 20 para 40oC. OBS: Deve-se salientar que a tcnica de estocar sementes a seco artificial e, na natureza, excluindo-se circunstncias especiais (mecanismos de dormncia), a semente embebida germina dentro de pouco tempo. b) gua A entrada de gua na semente controlada pela permeabilidade do tegumento, pela disponibilidade de gua e pela composio qumica das reservas da semente. Sob condies timas de suprimento de gua, a absoro de gua pela semente apresenta trs fases distintas (Figura 6):

Figura 6 Padro trifsico de absoro de gua em sementes germinando (Bewley & Black, 1994). 342

A primeira fase (fase I) da germinao de sementes quiescentes a absoro de gua, denominada de EMBEBIO. Durante a embebio, molculas de gua entram na semente, ocupando os espaos livres do tecido e os espaos intermicelares dos colides, causando aumento de volume. O potencial hdrico de sementes maduras secas, devido s foras mtricas (rever potencial mtrico), muito menor que o do substrato mido e o gradiente pode chegar a 100 MPa ou maior. A fase I, ou embebio, , portanto, um processo fsico que ocorre em conseqncia das foras mtricas (foras coloidais). A absoro de gua nessa fase pode ocorrer tanto em sementes viveis como em sementes mortas (no viveis). Os tipos de macromolculas coloidais encontradas em sementes so geralmente hidroflicas, possuindo grande nmero de grupos inicos, como as protenas. Outros componentes tambm aumentam de volume, como a celulose, hemicelulose e as pectinas. J o amido, comum nos cereais contribui pouco para a embebio, exceto em condies de alta temperatura e baixo pH (em valores que no ocorrem normalmente na natureza). Assim, espera-se que sementes com maior contedo de protenas (exemplo, feijo) apresentem um maior aumento de volume do que sementes ricas em amido (exemplo, o milho), aps a embebio. Embora sementes dormentes (dormncia do embrio) ou sementes no viveis possam chegar fase II (uma etapa onde praticamente no se observa absoro de gua), somente as sementes que germinam entram na fase III, a qual coincide com o alongamento e emergncia da radcula. Nessa fase III, ocorre grande incremento na absoro de gua, influenciado pelo decrscimo no potencial osmtico, resultante da produo de substncias osmoticamente ativas de baixa massa molecular (como glicose, sacarose, frutose, aminocidos, cidos orgnicos, etc.), a partir da hidrlise das macromolculas (amido, protenas, etc.).

c) Gases A germinao (emergncia da radcula) e o estabelecimento da plntula so processos que requerem energia e, ao contrrio da embebio, ocorrem somente em sementes viveis. A energia fornecida pela respirao das reservas estocadas, um processo que depende da presena de oxignio. A maioria das sementes germina numa atmosfera normal contendo 21% de O2 e 0,03% de CO2. Os resultados de alguns experimentos de laboratrio indicam que a germinao de sementes de Xanthium estimulada pelo aumento na concentrao de O2 (isso parece estar associado baixa taxa de difuso desse gs atravs dos tegumentos da semente). Para a maioria das espcies, a diminuio da concentrao de O2 pode causar inibio da germinao (as concentraes que inibem a germinao dependem da espcie). d) Temperatura Diferentes espcies apresentam diferentes temperaturas timas para germinao. Estas diferenas podem estar associadas, em grande parte, com a prpria evoluo da espcie (clima da regio de origem, etc.). Essa temperatura tima para a germinao definida como a temperatura em que a maior percentagem de germinao (100%) ocorre em um menor tempo. Acima ou abaixo deste timo, as sementes podem atingir 100% de germinao, mas o tempo gasto ser maior. Em geral, temperaturas muito baixas ou muito altas, inibem a germinao. Por outro lado, muitas sementes embebidas requerem um pr-tratamento com baixas temperaturas (0 a 10oC) para germinar, no havendo relao entre esta baixa temperatura e a temperatura tima para germinao. Este tratamento com baixa temperatura denominado 343

ESTRATIFICAO. Esse tratamento de frio comum em climas temperados, sob condies naturais. Nesse caso, as sementes so submetidas ao frio do inverno e germinam na primavera. e) Luz As sementes podem ser classificadas em trs categorias, dependendo de suas respostas luz: as sementes em que a luz estimula o processo de germinao so conhecidas como fotoblsticas positivas. Aquelas cuja germinao inibida pela luz so fotoblsticas negativas. Muitas outras, incluindo a maioria das espcies cultivadas, no so afetadas pela luz, ou seja, elas germinam na luz ou no escuro. Essas categorias no so absolutas, podendo ocorrer mudanas com o tempo ou quando as sementes entram em dormncia secundria. OBS: Em geral, sementes secas no apresentam sensibilidade luz, sugerindo que mudanas bioqumicas podem estar envolvidas na resposta. Em geral, as plantas cultivadas so fotoblsticas neutras. As respostas luz so geralmente encontradas em espcies no cultivadas, as quais possuem sementes pequenas que podem ser facilmente sombreadas ou enterradas. Sementes, como aquelas de algumas variedades de alface (fotoblstica positiva), podem requerer somente breve exposio luz, medida em segundos ou minutos, enquanto outras podem requerer algumas horas ou mesmo dias de constante ou intermitente irradincia. Por exemplo, a supresso da germinao em sementes fotoblsticas negativas, tal como em aveia, requer geralmente longo tempo de exposio a luz de alta fluncia. Neste caso, a luz vermelha distante e azul so mais efetivas. Em todos os casos, o pigmento responsvel parece ser o fitocromo. No caso da alface, sabe-se que a luz vermelha converte a forma inativa da fitocromo (Fv) para a forma ativa (FVD), a qual promove a germinao. Aplicao de luz vermelha extremo provoca inibio da germinao, pois ela converte a forma ativa (FVD) para a forma inativa (Fv) do fitocromo (rever fotomorfognese).

6. METABOLISMO DA SEMENTE DURANTE A GERMINAO a) Respirao A germinao um processo anfiblico, envolvendo tanto reaes catablicas como anablicas. A germinao envolve a reativao de organelas e macromolculas preexistentes na semente, formadas durante a maturao, e a quebra de reservas, gerando ATP como fonte de energia e esqueletos de carbono para o crescimento da plntula (formao de novas protenas, organelas, etc.). Antes da plntula se tornar autotrfica, o desenvolvimento do eixo embrionrio completamente dependente das reservas contidas no endosperma ou nos cotildones, as quais precisam ser degradadas. Nesse aspecto, a respirao nas sementes em processo de germinao constitui um caso de particular interesse.

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A respirao de sementes maduras, secas, extremamente baixa comparada quela de sementes germinando. Quando as sementes secas so colocadas em meio aquoso, se observa uma imediata liberao de gases, a qual no se deve respirao e sim liberao de gases presos nos espaos entre as macromolculas coloidais. O consumo de O2 ligado respirao segue um padro bsico que envolve trs fases, quando se avalia o embrio, ou quatro fases, quando se avalia o tecido de reserva (Figura 7). Fase I Nesta fase se observa inicialmente um ntido aumento no consumo de O2, o qual pode ser atribudo, em parte, hidratao e ativao de enzimas mitocondriais envolvidas no ciclo de Krebs e na cadeia de transporte de eltrons (CTE). Estas observaes indicam que a fosforilao oxidativa mitocondrial a principal fonte de ATP desde o incio da embebio (absoro de gua pela semente). A respirao durante esta fase aumenta linearmente com o aumento na hidratao dos tecidos. Fase II Esta fase caracterizada por uma estabilizao na respirao com o consumo de O2 aumentando somente lentamente. Presumivelmente, existe pouco aumento nas enzimas envolvidas na respirao ou no nmero de mitocndrias, durante esta fase. Entre as fases II e III, a germinao completada com a emergncia da radcula. Fase III - Nesta fase se observa um segundo aumento na taxa de respirao. No embrio, este aumento atribudo s novas mitocndrias sintetizadas nas clulas do eixo embrionrio em crescimento. Nos tecidos de reserva, h tambm aumento no nmero de mitocndrias, freqentemente em associao com a degradao e mobilizao de reservas. Fase IV Esta fase mostra uma queda na taxa de respirao e ocorrem somente nos tecidos de reserva, coincidindo com sua senescncia pela exausto das reservas estocadas.

Figura 7 Padro de consumo de oxignio pelo embrio (A) e pelos tecidos de reserva (B) de sementes durante o processo de germinao (Bewley & Black, 1994)

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b) Degradao e mobilizao de reservas Durante a germinao, os rgos de reserva (endosperma ou cotildones) perdem massa rapidamente (ver o caso do feijo na Figura 2A), enquanto o material proveniente da degradao das reservas translocado para o eixo embrionrio e dividido entre as diversas partes da nova planta (raiz e parte area). Estas reservas consistem, principalmente, de carboidratos, protenas e lipdios (Tabela 1). Nas gramneas o endosperma um bloco de tecido morto, cercado por uma camada de clulas vivas, a camada de aleurona, a qual sintetiza as enzimas necessrias para a degradao das reservas. O escutelo (cotildone modificado) tambm participa da degradao e transporte de reservas para o embrio. A principal reserva nestas sementes (milho, cevada, trigo, arroz, sorgo, etc.) o amido (acima de 70%), com menores percentagens de protenas (em torno de 10%) e de outros constituintes (Tabela 1). O amido encontrado na forma de grnulos, os amiloplastos. Tabela 1 A composio das reservas (em percentagem) de sementes de algumas espcies (Bewley & Black, 1994). Espcies Protenas Lipdios Carboidratos2 Principal Tecido de Reserva CEREIAS Cevada 12 31 76 Endosperma Milho 10 5 80 Endosperma Aveia 13 8 66 Endosperma Centeio 12 2 76 Endosperma Trigo 12 2 75 Endosperma LEGUMES Feijo (broad 23 1 56 Cotildones bean) Soja 37 17 26 Cotildones Ervilha 25 6 52 Cotildones Amendoim 31 48 12 Cotildones OUTRAS Mamona 18 64 desprezvel Endosperma Pinheiro 35 48 6 Megagametfito
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Em cereais, os lipdios se acumulam no escutelum, um tecido do embrio; Principalmente amido

Em certas espcies, como ervilha e feijo, os rgos de reserva so os cotildones, os quais possuem entre 25 e 40% de protenas, sendo encontradas tambm altas percentagens de carboidratos, principalmente de amido (Tabela 1). Em sementes de oleaginosas (soja, algodo, mamona, amendoim, girassol, etc.) so encontradas elevadas percentagens de protenas e, principalmente de lipdios (na forma de triacilglicerol). As protenas so armazenadas nos corpos proticos e os lipdios nos oleossomos. Abaixo veremos como ocorre a degradao das principais reservas da semente e a mobilizao dos produtos para o eixo embrionrio de sementes germinando. 346

DEGRADAO DE AMIDO O amido consiste de uma mistura de dois polissacardeos, amilose e amilopectina, sendo depositado geralmente nos plastdios (cloroplastos ou amiloplastos). A amilose consiste de uma longa cadeia linear formada de unidades de glicose unidas por ligao ,14. A amilopectina, por outro lado, uma molcula altamente ramificada, na qual cadeias relativamente curtas de glicose (unidas por ligao ,14) so conectadas por ligaes ,16. A degradao do amido pode ocorrer atravs de duas vias: uma hidroltica e outra fosforoltica (Figura 8).

Figura 8 Degradao do amido e mobilizao dos produtos dos plastdios para o citossol (Hopkins, 2000)

Degradao Hidroltica Esta via de degradao de amido envolve a ao de quatro enzimas: -amilase, -amilase, Enzima desramificadora e -glicosidase. A enzima -amilase cliva, ao acaso, as ligaes ,14 da amilose e da amilopectina. A -amilase, no entanto, no atua sobre a ligao ,14 terminal e, no caso da amilopectina, ela no cliva as ligaes ,16 (pontos de ramificao) nem as ligaes ,14 prximas dos pontos de ramificao. Consequentemente, cerca de 90% do acar liberado pela hidrlise do amido catalisada pela -amilase, consiste de maltose (dissacardeo formado por duas molculas de glucose unidas por ligao ,14). O restante encontrado na forma de pequenas dextrinas limite (pontos de ramificao consistindo de 4 a 10 resduos de glucose). A -amilase degrada a molcula de amilose atacando especificamente a segunda ligao, comeando do final no redutor da cadeia, produzindo exclusivamente maltose. A amilase poder degradar a amilopectina. No entanto, diferente da -amilase, ela no atua dentro da molcula. Assim, podem restar grandes cadeias ramificadas entre os pontos de ramificao (grandes dextrinas limite). 347

A enzima desramificadora, tambm chamada de dextrinase limite, atua clivando as ligaes ,16 nos pontos de ramificao, permitindo que as amilases (-amilase e amilase) continuem degradando o amido at maltose. A -glicosidase realiza a etapa final da hidrlise do amido, convertendo a maltose em duas molculas de glicose. Degradao Fosforoltica Esta via est associada atividade da enzima fosforilase do amido, a qual catalisa a seguinte reao: Amido + nPi (glucose-1-fosfato)n As atividades relativas das duas amilases e da fosforilase variam entre as espcies: a amilase tende a ser mais ativa em sementes de arroz do que nos outros cereais, nos quais predomina a -amilase. Embora a fosforilase tenha atividade desprezvel em cereais, ela parece ter importante atuao em algumas leguminosas. Em cereais, os produtos de digesto do amido (principalmente glicose e maltose) so absorvidos pelo escutelo e, ento, convertidos para sacarose. A sacarose transportada para o eixo embrionrio, onde utilizada para o crescimento da raiz e da parte area.

DEGRADAO DE PROTENAS Protenas de sementes so divididas em quatro classes: albuminas, globulinas, prolaminas e glutelinas. As prolaminas representam o grupo caracterstico de gros de cereais, tendo nomes especficos de acordo com a espcie (exemplo, zena de milho). J na maioria das leguminosas, como feijo, lentilha, etc., a maior reserva protica se encontra na forma de globulinas. A hidrlise de protenas produzindo aminocidos e peptdeos requerem uma classe de enzimas conhecidas como proteinases. Algumas dessas proteinases hidrolisam totalmente a protena, liberando os aminocidos, enquanto outras produzem pequenos peptdeos, os quais devem ser degradados pelas peptidases. Os aminocidos liberados podem ser reutilizados para sntese de novas protenas ou podem ser desaminados (retirada do grupo amino) para fornecer esqueletos de carbono para a sntese de novos compostos utilizados no crescimento do eixo embrionrio. No caso de sementes de cereais, os principais locais de atividade proteoltica (degradao de protenas) so: a camada de aleurona, o endosperma amilceo e o escutelo. Nas dicotiledneas, as proteinases atuam diretamente sobre os corpos proticos encontrados nos cotildones.

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DEGRADAO DE LIPDIOS Os lipdios so, tambm, importantes formas de estoque de carbono reduzido em muitas sementes, incluindo algumas de importncia agrcola como soja, girassol, amendoim e algodo. Estes compostos representam uma forma mais reduzida de carbono do que os carboidratos. Assim, a completa oxidao de 1,0 grama de lipdio (gera em torno de 40,0 kJ de energia) pode produzir consideravelmente mais ATP do que a oxidao de 1,0 grama de amido (gera em torno de 15,9 kJ de energia). Os lipdios que se acumulam nas sementes so principalmente os triacilgliceris, muitos dos quais so lquidos temperatura ambiente. Quimicamente, os triacilgliceris so steres de glicerol com trs molculas de cidos graxos (ver estrutura abaixo; R1, R2 e R3 representam as cadeias laterais dos cidos graxos).

A composio de cidos graxos nos lipdios de sementes varia de espcie para a espcie (Tabela 2). Note que as diferenas esto associadas ao grau de insaturao (nmero de duplas ligaes). O cido palmtico um cido graxo saturado, composto de 16 tomos de carbono e nenhuma dupla ligao (16:0). O cido linolico insaturado, com 18 tomos de carbono e 2 duplas ligaes (18:2). Tabela 2 Composio percentual de cidos graxos de leos obtidos de vrias espcies (Bewley & Black, 1994). Espcie Palmtico Esterico Olico Linolico Linolnico (16:0) (18:0) (18:1) (18:2) (18:3) Girassol 6 4 26 64 0 Milho 12 2 24 61 <1 Soja 11 3 22 54 8 Canola 5 2 55 25 12 Algodo 27 3 17 52 0 Amendoim 12 2 50 31 0 Gordura 29 13 43 10 0 Animal

As plantas no so capazes de transportar lipdios. Por exemplo, durante o processo de germinao de sementes oleaginosas, o lipdio contido no endosperma ou nos cotildones precisa ser convertido para uma forma mvel de carbono no floema, a qual geralmente a sacarose. Essa converso de lipdio em sacarose ocorre atravs de algumas etapas que so localizadas em diferentes compartimentos celulares (Figura 9): Hidrlise do Triacilglicerol A etapa inicial na converso de lipdio em carboidrato a quebra do triacilglicerol estocado nos oleossomos, pela enzima lipase. A lipase 349

hidrolisa o triacilglicerol liberando as trs molculas de cidos graxos e o glicerol. Esta enzima pode estar localizada na meia membrana do oleossomo, como ocorre em semente de mamona e de milho, ou na superfcie do glioxissomo, como ocorre em semente de soja e de amendoim. importante destacar que durante a degradao de lipdios os oleossomos e os glioxissomos esto geralmente prximos uns dos outros.

Figura 9 Converso de lipdios em acares durante a germinao em sementes oleaginosas. O processo inicia no oleossomo e termina no citosol (Taiz & Zeiger, 1998). 350

-Oxidao dos cidos Graxos Aps a hidrlise do triacilglicerol, os cidos graxos so seqencialmente quebrados formando molculas de dois tomos de carbono associadas coenzima-A, o acetil-CoA, mediante uma srie de reaes conhecida como Oxidao. Em tecidos animais, as enzimas associadas -Oxidao esto presentes na mitocndria; Nas sementes, particularmente nos tecidos de armazenamento, elas esto localizadas exclusivamente nos glioxissomos; Nas folhas a -Oxidao ocorre nos peroxissomos. O Ciclo do Glioxilato O acetil-CoA produzido pela -oxidao posteriormente metabolizado ainda no glioxissomo, atravs do ciclo do glioxilato. As duas primeiras reaes do ciclo do glioxilato so semelhantes s duas primeiras reaes do ciclo de Krebs (respirao mitocondrial). As enzimas citrato sintase e aconitase catalisam a formao do citrato (oxaloacetato + acetil-CoA citrato) e do isocitrato (citrato isocitrato), respectivamente. As duas prximas etapas so exclusivas do ciclo do glioxilato. A clivagem do isocitrato [isocitrato (6C) succinato (4C) + glioxilato (2C)] catalisada pela enzima isocitrato liase. Uma outra enzima, a malato sintase, combina uma segunda molcula acetilCoA com glioxilato para formar malato. O malato convertido para oxalacetato, o qual permite a continuao do ciclo do glioxilato. Em resumo, para cada duas molculas de acetil-CoA (2 x 2C) que entram no ciclo, uma molcula de succinato (4C) produzida no glioxissomo. Gluconeognese O succinato, produzido no glioxissomo, transportado para a mitocndria, onde convertido para malato. O malato move-se para o citosol, onde oxidado para oxaloacetato, pela malato desidrogenase. O oxaloacetato ento convertido para fosfoenolpiruvato (PEP) e CO2, pela enzima PEP carboxiquinase, com gasto de um ATP. O PEP , ento, convertido para glicose (GLUCONEOGNESE). Translocao - Finalmente, as hexoses (glucose e frutose) so convertidas para SACAROSE, que translocada para o eixo embrionrio em crescimento. RESERVAS MINERAIS Em adio s reservas orgnicas descritas acima, o embrio em crescimento requer nutrientes minerais como K+, Ca2+, Mg2+ e P, necessrios para a sntese de ATP, Co-enzimas e cidos nuclicos (dentre muitas outras funes). O problema que a semente no incio da germinao no possui raiz para retirar tais nutrientes do solo. Sementes de muitas espcies (aveia, cevada, milho, trigo, algodo, alface, etc.) acumulam cido ftico, o qual a principal reserva de P. Este cido acumula-se formando uma mistura de sais, conhecida como FITINA, a qual tambm a principal fonte de macronutrientes catinicos (K+, Ca2+, Mg2+) em sementes (Tabela 3). Tabela 3 O contedo de nutrientes minerais na fitina de algumas sementes de plantas, expresso como percentagem do peso seco (Bewley & Black, 1994) Espcie Mg Ca K P Fe Mn Cu Aveia 0,40 0,19 1,10 0,96 0,035 0,008 0,005 Soja 0,22 0,13 2,18 0,71 Algodo 0,40 0,13 2,18 0,79 0,059 0,003 0,005 Cevada 0,16 0,03 0,56 0,043 Girassol 0,40 0,20 1,00 1,01 351

A enzima fitase aumenta em atividade durante a germinao, liberando estes minerais (Figura 10). Esta enzima parece ser pr-existente na semente, numa forma inativa, concentrada, principalmente, na camada de aleurona (no caso dos cereais).

Figura 10 (A) Mudanas nos nveis de fitina (tringulos vazios) e na atividade da fitase (tringulos cheios) durante a germinao de sementes de alface. (B) estrutura do cido ftico (Ferri, 1985)

OBSERVAO FINAL: Quando a parte area fica verde e fotossintetizante e as razes esto absorvendo normalmente os nutrientes do solo, a planta jovem entra na fase autotrfica e se torna independente das reservas da semente.

BIBLIOGRAFIA BEWLEY, J. D., BLACK, M. SEEDS: Physiology of Development and Germination. 2nd ed. New York, Plenum Press, 1994, 445p. FERRI, M. G. (Coord.) Fisiologia Vegetal, v. 1. 2nd ed. So Paulo: EPU, 1985, 361p. HOPKINS, W. G. Introduction to Plant Physiology. 2nd ed. New York: John Wiley & Sons, Inc., 2000, 512p. SALISBURY, F. B., ROSS, C. W. Plant Physiology. 4th ed. California: Wadsworth Publishing Company, Inc., 1991, 682p. TAIZ, L., ZEIGER, E. Plant Physiology. 2nd ed. Massachusetts: Sinauer Associates, 1998, 792p. 352

ESTUDO DIRIGIDO No 14 ASSUNTO: DORMNCIA E GERMINAO 1 Defina dormncia e cite as partes do vegetal em que ela se manifesta. 2 Descreva de forma sucinta como as gemas vegetativas entram em dormncia. 3 Explique como, no cerrado, as gramneas resistem seca severa e ao fogo. 4 Descreva e esquematize a estrutura de uma semente de monocotilednea e de dicotilednea. 5 Descreva os dois tipos de dormncia de sementes. 6 Defina dormncia primria e dormncia secundria. 7 Defina germinao e faa a distino entre uma semente quiescente e uma semente dormente. Diga por que a maioria das plantas cultivadas no esto aptas a sobreviver na natureza? 8 Conceitue e d exemplos de germinao epgea e hipgea. Esquematize a estrutura de uma plntula de milho e uma de feijo. 9 Qual a influncia da temperatura, do oxignio e da luz sobre a germinao de sementes? 10 Construa uma curva de absoro de gua em sementes germinando. 11 Porque a germinao de sementes considerada um processo anfiblico? 12 Qual a principal reserva encontrada em sementes de soja, milho, amendoim e mamona? 13 Quais as enzimas que participam da degradao do amido durante o processo de germinao? 14 Qual a importncia da oxidao de lipdios em sementes oleaginosas, durante o processo de germinao? 15 Quais as etapas na converso de lipdios para acares, durante a germinao de sementes oleaginosas? 16 Qual a principal fonte de reserva mineral encontrada em muitas sementes?

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