Mecanismos de generacin de la diversidad gentica

Mecanismos de generacin de la diversidad gentica

Mutaciones y mutantes
Carcter pre-adaptativo de la mutacin Cuantificacin de mutaciones Sistemas de deteccin Sistemas de seleccin Mutaciones espontneas
Tautomerismo, desaminacin, despurinizacin, errores asociados a la replicacin

Mutaciones inducidas
Mutgenos por radiacin, qumicos y biolgicos Importancia de la mutagnesis en la investigacin biolgica

Mutaciones gnicas
Tipos fundamentales Mecanismos de reparacin del DNA

Mutaciones genmicas
Cambios en la estructura cromosmica Cambios en el nmero de cromosomas

Mutaciones y Mutantes

Gentica = estudio de la transmisin de los genes (transmisin de los diferentes alelos)

Cmo se originan esas diferencias? Mutacin: generacin de nuevas variantes allicas

Recombinacin: combinacin de variantes allicas preexistentes originando una nueva Otros: secuencias mviles, retrovirus, mecanismos endgenos, etc

Carcter de la Mutacin
A principios del siglo XX una pregunta candente era: Las mutaciones producen variaciones azarosas que son luego sustrato de seleccin (Darwinismo) o la presin externa -el medio ambiente- induce la generacin de adaptaciones heredables (Lamarckismo)? Luria y Delbrck (1943): Test de fluctuacin.
a. Una poblacin de E. coli iniciada a partir de una nica clula (clonal) mostrar diferentes patrones de acumulacin de mutaciones (resistencia a T1) dependiendo de qu modelo sea el correcto. i. La teora adaptativa dice que las bacterias son inducidas a generar resistencia a T1 slo cuando el fago esta presente. Entonces, la proporcin de resistentes deber ser la misma para todos los cultivos con el mismo background gentico. ii. La teora mutacional dice que eventos azarosos confieren resistencia al fago T1, independientemente de si ste est presente o no. Entonces, los cultivos mostrarn diferencias en el nmero de resistentes, dependiendo de cundo ocurri la mutacin (o mutaciones) responsables de la resistencia. b. Luria and Delbrck observaron nmeros fluctuantes de resistentes, lo cual indica que el modelo mutacional es el correcto.

Test de fluctuacin (Luria y Delbruck)

Mutaciones adaptativas

Mutaciones pre-adaptativas No. de resistentes obtenidos: 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 1, 1, 3, 5, 5, 6, 35, 64, 107

Replica plating (Lederberg, 1952)

El test de fluctuacin de Luria y Delbruck sugiere que las clulas resistentes son seleccionadas por el ambiente (fago T1) en vez de producidas por l. Pero puede demostrarse directamente la existencia de mutantes previo a la seleccin?

Medio no selectivo

Medio selectivo

Idem patrn

MUTACIONES
Cambio azaroso y heredable a nivel de secuencia de DNA de un organismo Puede involucrar desde una sola base hasta alteraciones cromosmicas Ocurren en cualquier clula en organismos multicelulares mutaciones somticas vs germinales Ocurren a frecuencias constantes, dependiendo del sistema tipo celular, background gentico (genes mutadores) mutgenos, inductores de stress Se cuantifican de distintas maneras Se seleccionan de distintas maneras medios selectivos (antibiticos, T, etc.) reversin de auxotrofas Test genticos en eucariotes multicelulares Importancia clave en el entendimiento de las bases de los procesos biolgicos, en los mapeos fsicos de genomas y en el mejoramiento de especies.

Cuantificacin de Mutaciones
La tasa de mutacin es la probabilidad de ocurrencia de una mutacin particular en funcin del tiempo (e.g., nmero de mutaciones por gen por generacin). La frecuencia de mutacin es el nmero de veces que ocurre una mutacin particular en proporcin al nmero total de clulas o al nmero total de individuos en la poblacin (e.g., nmero de mutaciones por 100,000 organismos). Estos valores pueden variar por causas ambientales y/o genticas (activacin de trasposones, genes de reparacin, etc.)

Clculo de Mutaciones (bacterias)

En medio lquido

a=
En medio slido

m d

m = N2 N1

a= tasa de mutacin m= nmero de mutaciones surgidas en el cultivo en el tiempo t d= nmero de divisiones ocurridas en ese tiempo t N= nmero de clulas

Cada bacteria da lugar a una colonia m2-m1 A = _________ N M/N

Pendiente= a t1 t2

Placas con igual nmero de bacterias sembradas

Se agrega fago Se agrega fago Incubar

Eventos de mutacin n de mutantes Si se hace en cultivo lquido hay que hacer correcciones

Contar nmero de mutantes (y en rplicas que no fueron sometidas al fago, contar el nmero de clulas totales) La tasa de mutacin se saca experimentalmente y depende del tamao, secuencia del gen, secuencia de aa y estructura tridimensional del producto del gen que se est mutando. Tasa de mutacin espontnea para cada gen: 10-6-10-8

tiempo

Deteccin de Mutaciones
Mtodos simples Observacin de fenotipo (Ploida dificulta el anlisis) color de ojos o forma de alas en Drosophila pigmentacin de colonia en hongos o bacterias morfologa de playas de lisis en bacteriofagos, etc. Auxotrofas pueden detectarse por replica plating Mutantes condicionales (T) se rastrean por replica plating Fenotipos extremos (vida muerte) permiten rastrear resistencia a drogas o mutgenos.

Mtodos de enriquecimientos de mutantes. Agentes selectivos (seleccin positiva o negativa) Tcnica de enriquecimiento por penicilina (bacterias) Tcnicas genticas de deteccin de mutantes letales (Drosophila) Mutantes condicionales

MUTACIONES
Por alteracin espontnea de ciertos nucletidos que lleva a un apareamiento equivocado (Tautomerismo, desaminacin, depurinacin, etc.)

Espontneas

Errores en la replicacin: ocurre con alta frecuencia pero existen mecanismos de correccin Trasposones

Mutgenos qumicos y fsicos

Inducidas

Mutgenos biolgicos: trasposones, virus

Mutagnesis dirigida

Mutaciones espontneas
1. 2. 3. 4. 5. Baja tasa de ocurrencia Frecuencia depende del gen en estudio, de la constitucin gentica del organismo y del ambiente En general son corregidos por maquinarias celulares Los errores ocurridos durante la replicacin del DNA pueden ser puntuales o involucrar pequeas inserciones y/o deleciones Los errores puntuales son debidos a wobbling por formas extraas de nucletidos

Tipos de mutaciones espontneas

Cadena vieja
Tautomerizacin Desaminacin Despurinizacin
Fenmeno relativamente frecuente por el que se remueve la purina (A o G) del DNA por rotura del enlace entre la purina y la deoxyribosa. Si no se repara antes del prximo round de replicacin, resulta en la insercin de una base cualquiera .

Cadena nueva
Mecanismos de sntesis Mecanismos de reparacin de baja fidelidad

1) Tautomerismo: Normal and wobble base pairing in DNA

T- - - A

C- - - G

T- - - G

C- - - A

A- - - G

T- - - C

Production of a mutation as a result of a mismatch caused by wobble base pairing

2) Deamination of cytosine to uracil (a); deamination of 5-methylcytosine to thymine

5% de las citosinas estn metiladas

C---G MeC - - -G reparacin C U C - - -G A - - -T

MeC

T- - -A

MeCG

TA

Hot Spots

CpG Cytosine phosphate Guanine islands o DMR

CpG frequency CpG islands in Rb gene (180kb) low frequency 70-80% methylated

Regiones de 500-1000 bp ricas en CG (no Alu) Subrepresentadas en el genoma total Presentes en regiones promotoras, 5 UTR y alrededor del primer exn de ciertos genes (~60% promotores RNA Pol IIdependientes en mamferos) Metilacin correlaciona con silenciamiento (en mamferos, ocurre la inversa en Caenorhabditis) La 5-metilcitosina puede deaminarse espontneamente y formar una timina! (CGTG)

3) Spontaneous generation of addition and deletion mutants by DNA looping-out errors during replication

Generalmente en poliX

Generalmente dan cambios de fase de traduccin

Distribucin de mutaciones
exones 5`UTR 3`UTR

intrones

Sesgo? Por frecuencia de ocurrencia o por seleccin?

Distribucin de mutaciones

Mucinas de trypomastigotes (sanguineo)

Mucinas de epimastigotes (vinchuca)

Presin (seleccin) del sistema inmune

MUTACIONES INDUCIDAS
Mutgenos qumicos y fsicos Mutgenos biolgicos: trasposones, virus Mutagnesis dirigida

Mutgenos son muy usados en investigacin gentica para incrementar la variabilidad: SE REQUIERE DE UN BUEN METODO DE RASTREO (SCREENING) DE MUTANTES

Screening de mutantes

Tipos de Mutgenos
Radiaciones
Ionizantes (x ej, rayos X)
Penetrantes Rompen uniones covalentes en DNA Causa principal de aberraciones cromosmicas Efecto acumulativo

No ionizantes (x ej, UV)

Penetrancia limitada Inducen cambios fotoqumicos en DNA (T^T), que afectan replicacin

Mutgenos qumicos
Naturales o sintticos. Se clasifican de acuerdo a su mecanismo de accin: 1) Anlogos de base: dependen de la replicacin para insertarse. Semejan bases nitrogenadas y son reconocidas por DNA polimerasas. Ej: 5 bromouracilo (5BU) Se asemeja a T y aparea con A En estado alterado, aparea con G y resulta en una transicin TA-a-CG. Si se incorpora en su estado alterado y luego cambia de conformacin, produce la mutacin inversa No todos los anlogos de base son mutgenos (AZT es un anlogo estable). 2) Agentes modificadores de bases: pueden inducir mutaciones en cualquier fase del ciclo celular Agentes deaminantes: x ej, HNO2 Agentes hidroxilantes: x ej, hidroxilamina (NH2OH) Agentes alquilantes: x ej, metilmetanosulfnico (MMS) 3) Agentes intercalatantes: molculas pequeas hidrofbicas, durante la replicacin causan la insercin de una base extra (al azar) en la cadena nueva o una delecin puntual si se incorporan durante la replicacin en vez de una base normal 4) Otros: Especies reactivas de hidrgeno, Sales metlicas, steres de cido fosfrico

Mutagenic effects of the base analog 5-bromouracil (5BU)

Agentes modificadores de bases

Agentes modificadores de bases

Intercalating mutations (naranja de acridina, proflavina)

The Ames test for assaying the potential mutagenicity of chemicals

Enzimas hepticas

Auxtrofo para his

Test simple, barato y cuantitativo para screenear potenciales carcingenos. Mide la frecuencia de reversin de cepas mutantes de Salmonella typhimurium

Fig. 19.15 Site-specific mutagenesis using PCR

Mutaciones gnicas

Tipos de mutaciones puntuales

Las mutaciones en regiones codificantes se definen de acuerdo a su efecto sobre el producto final. Los efectos pueden variar desde nulos a severos (non-sense, sitios de splicing, etc.)

A nonsense mutation and its effect on translation

Types of base-pair substitution mutations

Alelos mutantes

Alelo nulo: aquel que lleva a la ausencia del producto gnico normal (ej m6) o a la desaparicin fenotpica de la funcin normal (ej m2 y m3). Los alelos nuevos formados por mutacin pueden resultar en la prdida total o parcial de la funcin, o de la ganancia de ms funcin o incluso adquisicin de una nueva funcin a nivel proteico.

Reversiones
Una revertante es una cepa en la que se restaur el fenotipo silvestre que se haba perdido.

Secuencia que al traducir da el mismo fenotipo

Revertante de un mismo sitio

Se vuelve a la secuencia original: revertante verdadera

Mutacin en el mismo gen: corrigen el marco de lectura.

Revertantes
Tambin pueden ocurrir naturalmente o ser provocadas

Mutacin en otro gen que restaura el fenotipo silvestre produciendo la misma protena. Ej. : mutacin en genes de tRNA. Supresora informacional

Revertantes de segundo sitio o mutaciones supresoras

Supresoras por sobrexpresin Supresoras por interaccin

Mutacin que produce una va metablica alternativa que permite el mismo fenotipo. Supresora por bypass

Revertantes
1. Mutaciones reversoras ocurren en el mismo sitio que la mutacin original: Cambian el genotipo desde un tipo mutante a uno wild type o muy parecido al wild type i. Una reversin al aa wt es una reversin real. ii. Una reversin a algn otro aa relacionado es una reversin parcial si restaura funcionalidad proteica 2. Mutaciones supresoras ocurren en sitios diferentes que la mutacin original mutation. a. Supresoras intragnicas: i. Un nucletido distinto es alterado, recuperando la funcin proteica. b. Supresoras intergnicas: i. En general funcionan afectando la traduccin del mRNA. ii. En general se da en tRNAs, de forma tal que en vez de producir terminacin traduccional insertan un residuo. iv. Debido a que los tRNAs son redundantes, la actividad del tRNA original no se pierde. v. La reversin de la funcionalidad proteica puede ser total o parcial. vi. Mutacin supresora acta sobre muchos genes, pero esto no es tan dramatico porque muchos genes tienen mltiples codones STOP en tandem de naturaleza distinta (e.g., UAGUGA).

Mechanism of action of an intergenic nonsense suppressor mutation that results from mutation of a tRNA gene

Mecanismos de reparacin de mutaciones gnicas

Mecanismos de reparacin de DNA

Procariotes y eucariotes tienen mecanismos de prevencin de mutaciones y de reparacin de DNA basados en enzimas. Los mecanismos de reparacin se agrupan por su forma de accin: correccin directa (sitio-especfica) o ruptura de la zona daada y posterior rellenado del gap.

lesiones espontneas errores replicacin mutgenos

1) Mecanismos preventivos
Detoxificacin por superxido dismutasa
Convierte radicales superxido en agua oxigenada que luego es captada por la enzima catalasa y transformada en agua.

Detoxificacin por gen mutT Oxidacin de dGTP da formacin de 8-oxo G triP que aparea con A en lugar de C. Gen mutT desfosforila el 8-oxo dG triP inhibiendo su incorporacin al DNA.

2) Mecanismos de reversin directa

Fotoliasa bacteriana sobre TT Transferasas de grupos alquilo Transfieren esos grupos del DNA a la propia enzima (gen ada)

3) Mecanismos reparativos
Por escisin
Roturas de enlace fosfodister a ambos lados de la lesin (5-30 bp). Sntesis reparativa usando de molde la hebra complementaria y ligacin.
Reparacin de TT no dependiente de luz (NER) 1) En E. coli, un complejo de 2 UvrA y 1 UvrB se unen al DNA y lo escanean buscando dimeros de pirimidina y otros agentes de distorsin de DNA. Al encontrarlo, UvrA se disocia y es reemplazada por UvrC, que corta a 48 nucleotidos 3 y 5 de la lesin. 3) UvrB se disocia y UvrD une extremos 5 libres. Por ser una helicasa, UvrD promueve la liberacin del pequeo ssDNA mientras la DNA polimerasa I y la DNA ligasa rellenan y resellan el gap

2)

3) Mecanismos reparativos
Por escisin especfica: lesiones sutiles que no generan distorsin Vas mediadas por glucosidasas (rompen enlaces base-azcar y generan sitio AP)
Uracilo, hipoxantina, bases alquiladas

Vas mediadas por nucleasas AP (rompen enlace fosfodister en sitios AP generados por glucosidasas o espontaneamente)
Requiere de exonucleasa, DNA pol I y DNA ligasa para reparar el dao.

4) Mecanismos reparativos post-replicacin

En E. coli, genes mutS, mutL y mutH. 1) MutS une el mismatch y determina cual es la hebra nueva (incorrecta) por su falta de metilacin (gen dam es el responsible). 2) MutL y MutH unen secuencias GATC (sitio de metilacion en E. coli) y lo colocan cerca de MutS. 3) MutH corta GATC, el ssDNA se escinde y el gap se rellena por DNA pol III y ligasa. Eucariotes tienen un sistema parecido, pero no se sabe como se distingue hebra nueva de vieja. En humanos involucra 4 genes: hMSH2 (mutS), hMLH1, hPMS1 y hPMS2 (todos homlogos a mutL). Todos estos (mut, dam, etc) son genes mutadores, involucrados en la predisposicin a cancer de colon no polipsico (HNPCC).

4) Mecanismos reparativos post-replicacin

Actividad correctora de la ADN polimerasa III durante la replicacin (MutD)

Actividad correctora por recombinacin: involucra single strand exchange y genes rec

5) Mecanismos reparativos mutagnicos

Sistema SOS en bacterias Dao tal que no hay posibilidad de usar un templado para repararlo. Permite a la clula sobrevivir a costa de inducir mutaciones. Controlado por 2 genes: lexA and recA. Mutantes en cualquiera de estos genes tienen SOS prendido de manera constitutiva En ausencia de dao, LexA reprime la transcripcin de unos 17 genes involucrados en distintas etapas de la reparacin del DNA (reguln SOS). Pasado cierto umbral de dao (por mutgenos o por stress ambiental) se activa RecA (?), que estimula el autoclivaje de LexA. Cuando el dao es muy grande ocurre la reparacin mutagnica. Se dejan de reprimir los genes umuD y umuC (se requieren niveles mayores de RecA que tambien activa la autoproteolisis de UmuD). La presencia de los productos de estos genes permite que la ADN polimerasa replique sobre el ADN daado (bypass replicativo) pero metiendo errores. Despus de reparado el dao, RecA se inactiva y se sintetiza nuevo LexA.

Algunos ejemplos de reparacin frente a mutgenos

Dao por Deaminacin: Actan DNA glicosilasas especficas que reconocen hipoxantina, xantina, uracilo, etc.
Rompen entre el azcar y la base alterada. Luego actan las AP endonucleasas que cortan en el esqueleto azcar-fosfato y finalmente acta la ADN polimerasa I rellenando.

C MeC

Uracil-glicosilasa

T- - -A

MeCG

TA (sobre las T en mismatch con G en el contexto

de determinada secuencia acta otro sistema de reparacin llamado VSP (very short patch)

No se saca con una glicosilasa El sistema de reparacin por mismatch no puede distinguir cual es la base equivocada Hot spot

Dao por alquilacin: glicosilasas especficas, AP endonucleasas, exonucleasa y ADN pol I y ligasa
metiltransferasas especficas

Dao por especies reactivas de oxgeno: Formacin de 8-oxo G. Aparea con A en lugar de C. Genes mut.
mutM codifica para una glicosilasa especfica para 8-oxo G. mutY codifica para una glicosilasa especfica para A. mutT inhibe la formacin de 8-oxo G. Tambin en dao al ADN por especies reactivas de oxgeno acta el sistema de reparacin por escisin

Dao por Radiacin UV (formacin de dmeros de timina) - fotoreactivacin:

En presencia de la luz acta una Fotoliasa que separa las bases unidas. Tambin hay N-glicosilasas especficas para dmeros de timina

Mutaciones genmicas

Mutaciones cromosmicas

Los organismos tienen tienden a sufrir cambios desde un estado hereditario a otro mutacin Mutaciones gnicas: cambios que ocurren dentro de un gen, obtenindose distintas formas allicas para un mismo gen. Las mutaciones gnicas nunca son observadas microscpicamente. Mutaciones o aberraciones cromosmicas: cualquier cambio en la estructura o el nmero de cromosomas, siendo cambios que generalmente afectan a varios genes. Las aberraciones cromosmicas pueden ser detectadas por examinacin microscpica o anlisis gentico.
- Cambios numricos: estn relacionados con cambios en el nmero de molculas de DNA de la clula, siendo el cambio en el nmero la base de sus efectos genticos. No ocurren cambios estructurales en ninguna molcula de DNA. - Cambios en la estructura cromsmica: resultan en un re-arreglo de secuencias dentro de una o ms molculas de DNA.

Cambios estructurales

En general ocurren por recombinaciones meiticas desiguales o por trasposones

Existen dos tipos de rearreglos cromosmicos: Rearreglos no-balanceados: hay cambios en el dosage gnico del segmento cromosmico. Ocurre cuando hay deleciones o duplicaciones.

Delecin

Duplicacin

Rearreglos balanceados: hay cambios en el orden de los genes en los cromosomas sin remocin ni duplicacin del material gentico. Ocurre en las inversiones y translocaciones recprocas.

Inversiones

Translocaciones

Delecin: rearreglo en el cual existe la prdida de brazo de cromosoma y la yuxtaposicin de los dos segmentos flanqueantes.

Imp! En general, debido a que las regiones homlogas tienen gran tendencia a aparearse durante la meiosis, los diploides con una serie cromosmica normal y otra portadora de un reorganizacin producen estructuras de apareamientos particulares.
Configuracin de loop en una delecin heterocigtica

La configuracin de loop en el apareo meitico de una delecin permite identificar la regin comprendida en la misma.

Cariotipo
La constitucin cromosmica de una clula est descripta por el cariotipo, que establece el nmero total de cromosomas y la constitucin de los cromosomas sexuales. Estudios citogenticos permiten identificar mutaciones cromosmicas a partir de la comparacin con la topografa normal de los cromosomas. Rasgos cromosmicos caractersticos:
-Nmero de cromosomas: es altamente variable entre las distintas especies. -Tamao del cromosoma: dentro del genoma puede existir una gran variacin en el tamao de los cromosomas. En humanos hay una rango de variacin de entre 3 y 4 veces entre el cromosoma ms grande (cr. 1) y el mas pequeo (cr. 21). -Posicin del centrmero: zona estrecha conocida como constriccin primaria. La posicin determina la relacin entre las longitudes de los dos brazos cromosmicos. En base a la posicin del centrmero los cromosomas se clasifican en: telocntricos (en un extremo), acrocntricos (fuera del centro), y metacntricos (en el centro).

Rasgos cromosmicos caractersticos (cont):

- Posicin de los organizadores nucleolares: son constricciones secundarias de los cromosomas que contienen los genes que codifican al ARN ribosmico. Generalmente los nuclelos se localizan cerca de ellos. -Distribucin de la heterocromatina: las regiones que se tien ms intensamente se conocen como heterocromatina y las que se tien ms dbilmente se denominan eucromatina. Esta diferencia tiene que ver con el grado de compactacin (y actividad transcripcional) del DNA en el cromosoma. Heterocromatina constitutiva: es un rasgo permanente de una posicin concreta del cromosoma, y es hereditario. Es siempre inactiva y condensada. Heterocromatina facultativa: puede existir en forma genticamente activa (descondensada) o inactiva y condensada (caso del Cr X en mamferos). Puede estar presente o ausente en una posicin determinada del cromosoma. -Distribucin de bandas: existen diversos mtodos de tincin para identificar con ms detalle las distintas zonas del cromosoma. Las posiciones y tamaos de las bandas son constantes y especficos de cada cromosoma.

Bandeo G de cromosomas de una mujer (44A XX). Los cromosomas estn ubicados en orden de decreciente de tamao, comenzando por el cr 1.

Denominacin por convencin del brazo corto (p) y largo (q) de un cromosoma. El centrmero es designado cen y el telmero tel.

Tipos de tinciones:
-Bandeo G: los cromosomas son sujetos a una digestin controlada con tripsina y luego son teidos con Giemsa, un colorante que une DNA. Tie zonas de cromatina ms compactada.

- Bandeo Q: los cromosomas son teidos con un colorante fluorescente que une preferentemente regiones ricas en AT y luego visto a UV. Ej Quinacrina, DAPI o Hoechst 33258. Tie los mismos segmentos cromosmicos que Giemsa. - Bandeo R: esencialmente es la reversa del patrn de Giemsa. Los cromosomas son desnaturalizados por calor previo a su tincin con Giemsa. El calor desnaturaliza regiones ricas en AT. El mismo patrn puede ser obtenido con colorantes que unan regiones ricas en GC (cromomicina A3, mitracina). - Bandeo T: indentifica un subset de bandas R que estn especialmente concentradas en los telmeros. Las bandas T son las bandas R ms intensamente teidas. - Bandeo C: se utiliza para demostrar la localizacin de la heterocromatina constitutiva, principalmente en los centrmeros.

Tincin de Giemsa

FISH

Pseudodominancia: expresin de un gen recesivo cuando est presente en una sola dosis (ej, debido a una delecin en el cr. homlogo). Se utiliz como criterio adicional para los mapas genticos originales en Drosophila.

Las deleciones pueden ser reconocidas por los loops de delecin, la pseudodominancia y la falta de reversibilidad. La letalidad de las deleciones heterocigotas pueden explicarse por desbalance gnico y expresin de alelos recesivos letales. La homocigosis para una delecin suele ser letal. Mejor criterio: los cromosomas con una delecin nunca revierten al fenotipo anterior, a diferencia de las mutantes gnicas.

Duplicacin: rearreglo en el cual se presenta una repeticin de un segmento de un brazo de cromosoma.

Las duplicaciones y las deleciones pueden ser productos recprocos de un mismo suceso si es que estas ocurren entre cromosomas homlogos.
Delecin e f a a b b c c d e f e f a b b c a c d e f

a a b c b c

de f

d f

e Duplicacin

Los segmentos duplicados adyacentes pueden estar: En tndem: a bc bc d Invertidos: a bc cb d En cada caso, la configuracin que se produce durante el apareamiento es distinto.

Las duplicaciones son alteraciones cromosmicas muy importantes porque aportan material gentico adicional potencialmente capaz de evolucionar hacia nuevas funciones.

Inversiones: rearreglos en los cuales un segmento interno de un cromosoma ha sido fracturado dos veces, girado 180 y vuelto a unir.

Trasposones o zonas repetitivas favorecen la generacin de deleciones o inversiones por recombinacin meitica desigual.

Las inversiones pueden ser paracntricas o pericntricas, segn incluyan o no el centrmero

Entrecruzamiento simple en una inversin paracntrica

Entrecruzamiento simple en una inversin pericntrica

Las inversiones pericntricas tambin pueden ser detectadas microscpicamente

Las inversiones heterocigticas son fcilmente identificables por la formacin de los loops de inversin, baja FR, y fertilidad reducida debido a los productos meiticos desbalanceados o deletreos. Individuos con inversiones generalmente son normales, salvo que las fracturas se originen dentro de los genes (produciendo fusiones). En tal caso, la mutacin puede verse reflejada fenotpicamente.

Translocaciones recprocas: rearreglo en el cual dos cromosomas no homlogos son fracturados una vez, creando fragmentos acntricos, que luego intercambian sus lugares.

La translocacin recproca tambin da productos meiticos inviables, produciendo semiesterilidad en el 50% de los casos.

Consecuencias de las mutaciones genmicas

Comunmente irreversibles Cambios en el cariotipo Es muy difcil o imposible mantenerlas en homocigosis Las deleciones suelen resultar deletreas debido a desequilibrios gnicos y a manifestacin de alelos recesivos Las duplicaciones generan desequilibrios gnicos pero son tambin propulsoras de la evolucin de genomas Se afecta la tasa de recombinacin homloga durante la meiosis debido a la creacin de zonas no homlogas. Esto tambin se manifiesta en estructuras meiticas extraas Se puede afectar la fertilidad, debido a que dan productos meiticos desequilibrados que pueden no ser viables. Se producen nuevas esquemas de ligamiento de genes Se puede alterar la expresin de genes en su nuevo entorno

Cambios numricos
N monoploide (x): nmero de cromosomas que constituye una dotacin cromosmica bsica. Euploides: organismos que contienen mltiplos del nmero monoploide. Poliploides: euploides con set de cromosomas mayor a 2. Ej triploides (3x), tetraploides (4x), etc Monoploide 1x Euploides 2x , diploide (Poliploides) 3x, triploide 4x, tetraploide N haploide (n): nmero de cromosomas que hay en las gametas. En la mayora de los animales y algunas plantas el nmero haploide y el monoploide coincide. Ej, humano 2x = 46, x = 23. En las gametas n = 23. x = n = 23 El trigo es hexaploide: 6x = 42, x = 7. En las gametas existen 21 cromosomas: n = 21; 2n = 42.

Nombre Monoploide Euploides Diploide Triploide Tetraploide Aneuploides Monosmico

Designacin n

Constitucin ABC

Nmero de cromosomas 3

2n 3n 4n

AABBCC AAABBBCCC AAAABBBBCCCC

6 9 12

2n - 1

ABBCC AABCC AABBC

5 5 5 7 7 7

Trismico

2n +1

AAABBCC AABBBCC AABBCCC

Constitucin cromosmica de un organismo normalmente diploide con tres cromosomas (denominados A, B, y C) en el set bsico. n = x

Euploidas anormales

Cariotipo triploide

El apareamiento de tres cromosomas homlogos de un triploide durante la meiosis puede formar un trivalente o un bivalente ms un univalente. Generalmente estos organismos son estriles porque producen gametas aneuploides

2n

4n

El apareamiento de 4 cr. homlogos durante la meiosis de un tetraploide puede resultar en 3 tipos de estructuras: dos bivalentes o un cuadrivalente (generando gametas funcionales) o un trivalente + un univalente (generando gametas no-funcionales).

Los organismos con series cromosmicas mltiples (poliploides) suelen ser ms grandes de lo normal, pero anomalas en el apareamiento meitico de los cromosomas en estos organismos suele causar esterilidad (ej triploides). El nmero par de dotaciones cromosmicas es ms probable que resulte frtil.

Aneuploidias

Un aneuploide es un organismo cuyo nmero cromosmico difiere del wild type en parte del set cromosmico. Generalmente, las variantes que han ganado o perdido un cromosoma se originan por no-disyuncin (segregacin cromosmica anormal en la meiosis).

Los organismos aneuploides son casi siempre estriles y manifiestan anormalidades atribuibles al desequilibrio gnico, el cual interfiere con el funcionamiento normal del genoma.

2n + 1 trismico 2n 1 monosmico 2n -1 -1 nulismico (prdida de ambos cromosomas homlogos)

Esquema del origen de la aneuploida

No disyuncin

Cariotipo de mujer con trisoma 21

Incidencia de la trisoma en funcin de la edad de la madre

Varn afectado de Sndrome de Klinefelter

Cariotipo de mujer con sndrome de Turner

SKY (spectral karyotiping)

SKY (spectral karyotiping)

Preparado de cromosomas en metafase luego de hibridizacin por SKY. La imagen muestra el set completo de cromosomas de una lnea celular de leucemia con anormalidades citogenticas. Algunas traslocaciones entre varios cromosomas estn indicadas con flechas.

Cromosoma philadelphia

Destino de un milln de cigotos implantados