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CONTAGEM DE CLULAS SOMTICAS EM AMOSTRAS DE LEITE CRU NA REGIO DE CATALO-GO

JULIANA CASSIANO SILVA1 EDMUNDO BENEDETTI2

RESUMO: O presente trabalho teve como objetivo, identificar a contagem celular somtica (CCS) nas amostras obtidas de propriedades rurais com diferentes tipos de ordenha do municpio de Catalo-GO. A pesquisa desenvolveu-se em 15 fazendas, sendo cinco com ordenha manual, cinco com ordenha mecnica em circuito fechado e cinco com ordenha mecnica com balde ao p. As vacas estavam no meio da lactao e todas foram escolhidas aleatoriamente. O nmero de amostras em cada fazenda foi em torno de 30, sendo uma amostra por vaca, totalizando 150 amostras por tipo de ordenha. O leite foi colhido com o auxlio de um copo coletor e posteriormente identificado e enviado para anlise. O diagnstico da qualidade do leite foi realizado atravs da contagem eletrnica de clulas somticas (CCS), pelo aparelho Fossomatic 5000 Basic e os teores dos componentes foram analisados utilizando-se o Milkscan 4000. Entre as variveis tipo de ordenha e mastite subclnica, houve relao significativa (P = 0,07). A ordenha manual obteve 21% (32) das amostras com CCS acima de 300.000 clulas/mL, enquanto a ordenha mecnica circuito fechado apresentou 23% (34) das amostras e a ordenha mecnica balde ao p obteve 32% (48) das amostras com CCS > 300.000 clulas/mL. Entre as variveis tipo de ordenha e CCS preconizada pelo PNMQL, no houve relao significativa (P > 0,05). De acordo com a anlise estatstica, no existiu correlao entre os componentes do leite (gordura, protena, lactose e EST) e a CCS. Pode-se concluir que a introduo de novas tecnologias no assegura uma melhoria na qualidade do leite. Palavras- Chave: qualidade do leite, contagem de clulas somticas, mastite subclnica.

Faculdade de Medicina Veterinria, Universidade Federal de Uberlndia, Av. Brasil, 4465 Apto 402 bloco C Umuarama, Uberlndia, MG, CEP 38405-320, e-mail: jullivet@yahoo.com.br 2 Faculdade de Medicina Veterinria, Universidade Federal de Uberlndia, Rua Cear s/n Bloco 2D, Campus Umuarama, Uberlndia MG, CEP 38405-240, e-mail: edmundobenedetti@ufu.br.

2 ABSTRACT: The present work had as objective, to identify the somatic cells count (CCS) in the obtained samples of rural properties with different types of it milks of the municipal district of Catalo-GO. The research grew in 15 farms, being five with it milks manual, five with it milks mechanics in closed circuit and five with it milks mechanics with bucket to the foot. The cows were in the middle of the nursing and all were chosen aleatoriamente. The number of samples in each farm was around 30, being a sample for cow, totaling 150 samples for type of it milks. The milk was picked with the aid of a glass collector and later identified and correspondent for analysis. The diagnosis of the quality of the milk was accomplished through the electronic count of somatic cells (CCS), for the apparel Fossomatic 5000 Basic and the tenors of the components were analyzed being used Milkscan 4000. Among the variables type of it milks and mastite subclnica, there was significant relationship (P = 0,07). The milks manual obtained 21% (32) of the samples with CCS above 300.000 clulas/mL, while it milks mechanics in closed circuit it presented 23% (34) of the samples and it milks mechanics with bucket to the foot obtained 32% (48) of the samples with CCS> 300.000 clulas/mL. Among the variables type of it milks and CCS extolled by PNMQL, there was not significant relationship (P> 0,05). In agreement with the statistical analysis, correlation didn't exist among the components of the milk (fat, protein, lactose and EST) and CCS. It can be concluded that the introduction of new technologies doesn't assure an improvement in the quality of the milk. Keywords: quality of the milk, count of somatic cells, subclnica mastite.

INTRODUO A produo leiteira no Brasil vem enfrentando mudanas rpidas e significativas nos ltimos anos, sendo assim, a qualidade do leite tem sido foco de diversas pesquisas nos vrios segmentos da cadeia produtiva.

Uma clula somtica qualquer clula do corpo do animal, seja da pele, dos ossos, dos msculos ou do sangue. As clulas somticas predominantes no leite pertencem a dois grupos: as epiteliais (secretoras de leite, especficas da glndula mamria) e as clulas brancas do sangue (leuccitos), relacionadas defesa do organismo animal

3 (Brito, 2002). Este mesmo autor ressalta que as clulas epitelias so mais ativas e numerosas no incio e no meio da lactao, quando a produo de leite maior. Ao longo da lactao elas envelhecem e gradualmente vo sendo eliminadas no leite. Com a queda da produo, diminuem discretamente em nmero e tornam-se menos produtivas. A habilidade da vaca em eliminar uma infeco antes que ocorra extenso dano ao tecido, depender da migrao de neutrfilos, macrfagos e linfcitos para o foco da inflamao, a fim de fagocitar e destruir o organismo invasor (Sanderson & Rangel, 1998). A contagem de clulas somticas (CCS) conforme Brito (2002), um padro usado para definir a qualidade do leite cru. parte do conjunto de atributos essenciais de qualidade, que incluem a composio (gordura, protena, slidos totais), fatores estticos (sabor, odor e aparncia), nmero de bactrias e presena ou ausncia de drogas e resduos qumicos. O autor ressalta que o uso da CCS recente e surgiu a partir da observao de que os programas de melhoramento mastite. animal ocasionam um pequeno aumento da suscetibilidade Segundo animais Smith et ou al. (2000), a

contagem eletrnica de clulas somticas de individuais de tanque de expanso tem sido utilizada em pases desenvolvidos h mais de 25 anos, desde o surgimento de equipamentos eletrnicos que tornou esta prtica acessvel aos produtores. Atualmente, a CCS do rebanho e do tanque uma ferramenta extremamente valiosa na avaliao do nvel de mastite subclnica, que no pode ser diagnosticada visualmente, na estimativa das perdas de produo de leite e como indicativo da qualidade do leite produzido na fazenda. O mtodo eletrnico de CCS apresenta uma srie de vantagens em relao aos outros mtodos como o CMT (California Mastitis ser Test). Primeiramente, possibilitando o maior procedimento eletrnico para a CCS pode automatizado, rapidez e preciso dos resultados. Outra vantagem seria a possibilidade de conservar as amostras em temperatura ambiente e envi-la via correio para um laboratrio, e, por ltimo, os resultados da CCS, nesse caso, no sofreriam influncia da interpretao de quem faz o teste como o CMT, e, desta forma, os resultados de vrios rebanhos poderiam ser comparados entre si (Kitchen, 1981). Observaes de Santos & Vilela (1983)

4 revelaram que os fatores que influenciam a contagem de clulas somticas (CCS) do leite so: o nvel de infeco, a idade da vaca, o estgio da lactao, o estresse, os intervalos entre ordenhas, o manejo, o nmero de lactao e as estaes do ano. Segundo estes autores, a presena de infeco na glndula mamria pode ser o fator que mais altera a contagem celular no leite, sendo que, os efeitos dos demais fatores so menores se a glndula mamria no apresentar infeco. Com relao s estaes do ano, Brito et al. (1997), observaram diferenas marcantes na CCS, com a ocorrncia de um pico entre julho e agosto e uma queda em maro. O aumento inicia-se quando as vacas vo para as pastagens e atinge seu pico quando estas estbulo. A mastite considerada uma doena que causa graves prejuzos ao rebanho leiteiro. As perdas econmicas so provenientes de inmeros fatores, dentre estes: descarte do leite, eliminao precoce dos animais, aumento dos gastos com medicamentos e assistncia veterinria e reduo da quantidade e qualidade do leite. Observa-se, durante o quadro de mastite, diminuio no nvel de lactose, gordura, slidos no gordurosos e casena no leite, alm do aumento do nmero de clulas somticas (Costa et al.,1995). retornam para o A mastite uma reao inflamatria desencadeada em resposta a agresses sofridas traumatismos ao e fsicos tecido suas (corte, mamrio, toxinas, pisadura, microrganismos

leses) e irritantes qumicos. A passagem das clulas de defesa do sangue para o leite uma de suas principais conseqncias (Cunha, 1988). Segundo Laranja (1996), uma baixa incidncia de mastite condio bsica para um leite de boa qualidade. Essa convico levou vrios pases a definirem limites para a presena de clulas somticas no leite (indicativo do nvel de ocorrncia da doena no rebanho). A infeco desregula o funcionamento da glndula mamria e altera a composio do leite. O componente mais afetado que torna o leite um alimento essencial para as crianas e idosos, podendo ser reduzido em at 70%, o clcio. Alm deste, h quedas nos teores de gordura, potssio e de casena. Para a indstria de laticnios, a reduo de vrios desses componentes representa uma matria-prima inferior com menor rendimento industrial. Na fabricao de queijo, por exemplo, as presenas de casena e do clcio so essenciais para garantir uma boa massa. A infeco da glndula ainda aumenta a porcentagem de protenas do soro, de sdio e de cloro no leite, sendo que estes

5 componentes no contribuem em termos de qualidade nutritiva (Laranja, 1996). As clulas somticas liberam enzimas, que agem no leite a partir do momento em que ele retirado e reduzem, ainda mais, os componentes nutritivos. As proteases, uma dessas enzimas, agem na destruio de protenas, e a lipase reduz os lipdios e conseqentemente a gordura do leite, sendo que nesse processo ocorre maior formao de cidos graxos de cadeia curta (Santos, 2002). Segundo Fonseca & Santos (2000), os padres de qualidade do leite e derivados utilizados para o comrcio internacional so estabelecidos uma pelo comisso Codex de alimentarius, Objetivos Especficos Correlacionar o tipo de ordenha com a contagem de clulas somticas; Verificar a condio higinica do leite por meio da CCS; Diagnosticar por meio da contagem celular somtica, a prevalncia da mastite subclnica nos rebanhos leiteiros da regio; Observar a influncia da CCS na composio do leite. Justificativa A indstria de laticnios do Brasil, semelhana do que ocorre em outros pases, tem adotado sistemas de remunerao pelo leite com qualidade considerando, entre outros parmetros, a contagem de clulas somticas do leite Objetivos Objetivo Geral Identificar a contagem de clulas somticas (CCS) em amostras obtidas de propriedades rurais com diferentes tipos de ordenha, no municpio de Catalo e cidades vizinhas no estado de Gois. humana, existe uma tendncia mundial a adotar a CCS como critrio geral para avaliar as condies higinicas da produo de leite na fazenda.

especialistas da FAO/OMS. O objetivo do Codex, em termos gerais, desenvolver e estabelecer padres mnimos de qualidade e normas sanitrias que venham assegurar o comrcio de produtos lcteos apropriados para o consumo humano. Os principais critrios de segurana alimentar para produtos lcteos so: baixa contaminao por bactrias; ausncia ou nveis mnimos de contaminao por patgenos potenciais ao ser humano; ausncia de resduos de medicamentos utilizados micotoxinas. somticas nos animais que no e as leite mnima clulas no contaminao por resduos qumicos ou Ainda presentes

representem um fator de risco para a sade

6 recebido. Para melhorar a qualidade do leite preciso que o produtor tenha incentivo para investir em cuidados, que resultem em melhor qualidade do produto (Santos, 2002). Faz-se necessria busca de Em termos econmicos, a elevada CCS, que indicativo da presena de mastite, traz grandes prejuzos econmicos tanto ao produtor de leite quanto indstria de laticnios. Com relao ao produtor, as maiores perdas esto relacionadas queda na produo por parte dos animais infectados. Alm da queda na produo de leite, outros custos adicionais esto associados com a incidncia de mastite, e sendo assim, admiti-se que as perdas econmicas causadas pela doena se apresentem na seguinte ordem: valor da produo de leite perdida (70% do total); descarte prematuro (14% do total); valor do leite descartado (7% do total) e despesas com veterinrio e tratamento (8% do total) (Smith et al., 2000). As novas normas do Programa Nacional de Melhoria da Qualidade do Leite (PNMQL) devero entrar em vigor em julho de 2005 nos Estados do Sul, Sudeste e Centro-Oeste. Nos demais Estados, o cumprimento das normas ser exigido a partir de julho de 2007, ento o conhecimento da qualidade do leite na regio de Catalo de extrema importncia para que esta cidade se enquadre no PNMQL. Estas normas estabelecem ndices mais rgidos de contagem de clulas somticas, contagem bacteriana e deteco de resduos de antimicrobianos (antibiticos e sulfonamidas) no leite.

informaes e meios suficientes para que todos os envolvidos na cadeia de produo conheam as variveis do problema e saibam como proceder para garantir as caractersticas de um leite com alto padro nutricional. A contribuio oferecida por esse estudo ser o conhecimento da qualidade atual do leite na regio de Catalo-GO. A contagem celular somtica no leite do rebanho e do tanque de expanso (resfriador) visa avaliar a ocorrncia de mastite subclnica, estimar as perdas na composio e na produo de leite e, alm disso, indica a qualidade do leite produzido na fazenda. O verdadeiro controle de qualidade do leite inicia-se no processo de produo na fazenda, com aquisio de animais saudveis e um manejo higinico e sanitrio adequado. Nas etapas seguintes de industrializao, distribuio e comercializao, numerosos cuidados

devem ser tomados, devendo fazer um esforo integrado para garantir a qualidade do produto final.

7 Sanderson & Rangel (1998)

REVISO DE LITERATURA Segundo Harmon (1998), as clulas somticas do leite so representadas, principalmente, por leuccitos polimorfonucleares e clulas epiteliais do tecido secretor da glndula mamria. A inflamao glandular e o final da lactao constituem-se nos principais fatores, que determinam a elevao do nmero de clulas somticas no leite de um rebanho ou de uma vaca leiteira. As clulas somticas, presentes no leite, so, principalmente, clulas de defesa do organismo que, devido presena de patgenos na glndula mamria, migram para o interior desta para combat-los. Schultz (1984) apud Mundim (1998) cita que as clulas epiteliais esto presentes no leite normal como resultado da descamao e reposio normal do tecido glandular, uma vez que, as clulas do epitlio alveolar tm elevada atividade secretora, normalmente, submetidas a contnuas e elevadas modificaes. A utilizao da microscopia eletrnica permite distinguir quatro tipos de clulas somticas no leite: os linfcitos, representando 10 a 27%; os macrfagos e clulas epiteliais, 40 a 85%; e os polimorfonucleares, 0 a 11% das clulas totais no leite normal (Santos & Vilela, 1983).

observaram que as clulas epiteliais so incomuns, sendo encontradas na faixa de 0 a 7% da populao total. Quando a glndula mamria atingida por uma infeco, segundo estes, os neutrfilos tornam-se numerosos chegando entre 40 e 50%; os macrfagos carregados de gordura podem acumular-se na camada de gordura durante a centrifugao do material para confeco do esfregao, causando reduo destes. As clulas brancas do sangue representam 98 a 99% do total das clulas somticas do leite. Os macrfagos so as clulas fagocitrias predominantes no leite normal primeiras e, a conseqentemente, destrurem a so as bactria

(Edmondson,1996). Mundim (1998) observou que o principal tipo de clula presente no leite, procedente de glndulas no infectadas, o macrfago, com o granulcito predominando nas amostras procedentes de quartos infectados e o linfcito apresentouse menos freqente em ambos os grupos. Em animais sadios, 65% a 70% do total de clulas somticas so clulas de origem epitelial, enquanto esse nmero cai para 50% em animais com mastite crnica, e alcana valores ainda mais baixos (10% a 45%) em casos mais severos. O aumento da CCS do leite nos casos de mastite d-se

8 pela maior passagem de leuccitos do sangue para a glndula mamria, aliada a maior descamao do epitlio lesado. (Harmon, 1998). A colonizao da glndula mamria bovina por bactrias patognicas resulta em uma srie de eventos, que conduzem a alteraes bactrias na composio do leite. pelo Inicialmente ocorrem elevados nveis de patognicas, seguidos aumento marcante no nmero de clulas somticas. Associada a esta resposta imunolgica do animal tem-se um nmero muito grande de efeitos. Por exemplo, a produo total de leite cai, como resultado do tecido secretor ter sido prejudicado e tambm, ocorrem mudanas marcantes nos nveis de macro e microconstituintes do leite. Essas mudanas so reflexos do grau de prejuzo causado s clulas secretoras e ao complexo de capilares sangneos da glndula. A mudana na composio do leite causada pela alterao da permeabilidade dos capilares sangneos e pela reduo de sntese das clulas secretoras (Pereira et al., 1997). O leite, da maioria das glndulas mamrias das vacas, deste no estril se e normalmente isolam inflamatria de defesa, a mastite. Ela geralmente bacteriana, causada embora por muitos infeco outros

microrganismos, incluindo fungos, algas e vrus, possam causar a doena (Costa et al., 1995). Rentero (1996), analisando o leite normal, verificou que as clulas epiteliais esto presentes como resultado da descamao e reposio normal do tecido, tendo aumento no final da lactao, quando a glndula mamria, ento, prepara-se para ser afuncional ou como conseqncia de danos causados pela mastite. Segundo Vasconcelos et al., (1997), os aumentos na CCS do incio ao final da lactao esto relacionados com a queda do volume do leite no final da lactao e com o nmero de infeces no decorrer da lactao. De acordo com os autores, com a diminuio do volume do leite ocorre a degenerao da glndula mamria, levando ao aumento da permeabilidade do endotlio alveolar e maior presena de polimorfonucleares no leite. Segundo Barbosa et al., (2002), as diferenas existentes entre manejos e tipos de ordenha so refletidas na contagem de clulas somticas e no CMT (california mastitis test). Rebanhos com boa tcnica de ordenha, desinfeco de tetas pr e ps ordenha, secagem adequada de vacas, tratamento com antibiticos para mastite

organismos, parasitas ou comensais. No entanto, como acontece com outros tecidos animais, materiais estranhos podem ser introduzidos com freqncia na glndula mamria, induzindo uma resposta

9 clnica, alm de preocupao com higiene e suplementao mineral adequada demonstram baixos ndices de mastite e, proporcionalmente, baixa CCS e reaes negativas ou baixas no CMT. De acordo com Rentero (1996), a mdia atual da CCS no leite dos tanques de expanso de rebanhos leiteiros brasileiros de 641.000 clulas/ml e seu desvio padro 767.000 clulas/ml. A adoo de limites mximos para a CCS deve ser encarada como uma tendncia de busca de maior qualidade, uma vez que diversos pases que adotaram esta medida tm apresentado ao longo da ltima dcada significativa reduo na mdia da CCS dos rebanhos leiteiros. medida que se observa diminuies na CCS dos rebanhos, so implementados novos limites para a CCS. O valor da CCS em diversos pases encontra-se na tabela 1. (SMITH et al., 2000). Segundo Smith et al., (2000), o progresso no controle de mastite no ocorre rapidamente, uma vez que, todos estes pases apresentam programas de monitoramento da CCS h vrios anos, sendo ainda necessrio um intenso trabalho de informao e principalmente de incentivos para produo de leite com baixa CCS. A experincia internacional Tabela pases. 1Mdia anual de clulas mostra que possvel produzir leite com baixa CCS, mesmo em condies de clima adverso, como por exemplo, em Israel e alguns estados dos EUA. A CCS do leite normal originado de animais sadios normalmente menor que 300.000 clulas/mL de leite. Entretanto, quando h invaso do bere por bactrias, ocorre uma resposta inflamatria que causa somticas no leite produzido por diversos PASES Sua Noruega Reino Unido Alemanha Sucia Blgica Inglaterra Japo Irlanda Estados Unidos Israel Itlia Fonte: Smith et al. (2000). CCS (x 1000 clulas/mL) 112 125 160 195 200 265 277 300 300 350 382 426

10 grande aumento das clulas somticas presentes no leite. Nveis acima de 300.000 clulas/mL indicam uma condio anormal do bere. Devemos ressaltar que a principal causa do aumento da CCS a presena de uma inflamao na glndula mamria, que geralmente est associada presena de patgenos, ainda que outros fatores como idade do animal, estgio de lactao, estaes do ano possam ter efeito indireto na CCS (Harmon, 1998). O leite com altas CCS apresenta um decrscimo de casena, gordura e lactose, como pode ser verificado na tabela 2. Com isso, ocorre uma reduo do rendimento do produto na sua industrializao, bem como do tempo de estocagem do mesmo e seus derivados, razo pela qual os laticnios esto preferindo o leite com baixa CCS. (Edmondson, 1996). A qualidade do leite est diretamente ligada sade do rebanho e alimentao balanceada da vaca leiteira (Brito, 1999). Para melhorar a qualidade do leite no Brasil, conforme este autor, o produtor rural precisa investir em cuidados, como a adoo de prticas de manejo e higiene da ordenha. Ainda, alm dos teores de gordura e protena, tem sido enfatizada a qualidade microbiolgica, a CCS do leite, ou seja, leuccitos, basfilos, macrfagos e Tabela 2- Alteraes na qualidade no leite de animais com alta contagem de clulas somticas quando comparado com o leite dos quartos sadios dos mesmos animais. a presena de antibiticos. Alguns estudos relatam menores concentraes de gordura no leite de vacas com mastite, demonstrando que vacas com CCS acima de 300.000 clulas/mL apresentaram menores concentraes de gordura no leite, quando comparadas com vacas sadias (Auldist et al., 1995). Em animais com mastite ocorre ao enzimtica de lipases de origem leucocitria, assim como, da prpria lipase lipoprotica presente no epitlio secretor
Gordura Lactose Protena Casena Potssio Clcio 3,5 4,9 3,61 2,8 0,173 0,12 3,2 4,4 3,56 2,3 0,157 0,04

COMPONENTES

NORMAL

ALTA CCS

%DE NORMAIS*

91 90 99 82 91 33

Fonte: Edmondson (1996); * = % de reduo em relao ao leite de animais normais.

11 da glndula mamria. Ambas enzimas atuam sobre a membrana dos glbulos de gordura, expondo os triglicrides ao de outras lipases, acarretando elevao da concentrao de cidos graxos livres e aparecimento da rancidez do leite (Ducan et al., 1991). Auldist et al. (1995), relataram que h diminuio na concentrao de lactose no leite de quartos ou vacas com altas CCS. As mudanas na concentrao de lactose durante a mastite devem ocorrer devido passagem de lactose do leite para o sangue, o que pode ser comprovado pelas concentraes elevadas de lactose no sangue e na urina de vacas com mastite. Adicionalmente, de sntese de a leso pelo tecidual epitlio ocasionada pela mastite reduz a capacidade lactose glandular, o que afeta significativamente a quantidade de leite produzido, devido ao papel central da lactose como agente regulador osmtico do volume do leite. A ocorrncia de mastite subclnica (e conseqentemente de altas de CCS) causa diminuio da sntese de protenas importantes para a fabricao de queijo (casena) e aumento das protenas do soro, que so indesejveis para os laticnios. O leite com altas CCS causam reduo na produo e rendimento industrial de queijos, aumento do contedo da gua, do tempo de coagulao e do contedo de slidos no soro e, como resultado, o alta produto final apresenta sabor inferior. (Harmon, 1998). Segundo Edmondson (1996), para a manteiga, leite em p e outros derivados, a CCS causa principalmente a diminuio da vida de prateleira desses produtos, pois as clulas somticas contm enzimas resistentes pasteurizao que causam a deteriorao da gordura, produzindo o sabor ranoso e alterando os valores nutricionais da protena do leite e derivados, alm de reduzir o tempo para incio da gelatinizao do leite UHT (ultra high temperature). O leite de vacas com altas CCS apresenta tambm reduo do nvel de lactose e clcio, que so constituintes nobres do leite, enquanto h aumento da concentrao de sdio e cloro, o que causa o sabor salgado do leite com mastite (Costa et al., 1995). Segundo Brito (1998), os principais fatores, que contribuem para a perda da qualidade do leite so: a presena de doenas durante a (brucelose, ordenha, tuberculose, equipamentos e leptospirose, mastite), falta de higiene utenslios de ordenha sujos, m qualidade da gua e o acondicionamento e transporte do leite em condies inapropriadas e temperatura Celsius. Para melhorar a qualidade do leite no Brasil preciso que o produtor tenha acima dos quatro graus

12 incentivo para investir em cuidados, que resultem em melhor qualidade do produto (Santos, 2002). Segundo Benedetti (2002), as indstrias de laticnios esto ampliando o sistema de coleta a granel de leite refrigerado, o que trouxe redues de custo de transporte e ganhos na qualidade da matria prima. Visando um aumento da rigidez em relao qualidade, sanidade e padronizao do leite, o poder pblico lanou o Programa Nacional de Melhoria da Qualidade do Leite (PNMQL), inserido na Resoluo Normativa n51 do MAPADF. O PNMQL um conjunto de medidas e procedimentos que, em escala gradativa e plurianual, visa a melhoria da qualidade do leite produzido no Brasil, objetivando: produzir leite e produtos lcteos com padro de qualidade internacional; atender as crescentes exigncias do mercado consumidor; colocar o leite brasileiro em condies de competir, no futuro, com pases especializados em pecuria leiteira; possibilitar nacional o aumento para da produo ao (primeiro atender Abastecimento (MAPA), substitui a

legislao de 1952 (RIISPOA). As novas normas devero entrar em vigor em julho de 2005 nos Estados do Sul, Sudeste e Centro-Oeste. Para os demais Estados, o cumprimento das normas ser exigido a partir de julho de 2007. A Normativa 51 estabelece ndices mais rgidos de CCS, contagem bacteriana e deteco de resduos de antimicrobianos (antibiticos e sulfonamidas) no leite, como pode ser verificado no Quadro 1. Traa tambm, regras para resfriamento do produto e coleta a granel, que atualmente j esto vigorando, formalizando finalmente as discusses geradas a partir da Portaria 56. Quadro 1 -Requisitos microbiolgicos e de resduos de qumicos para o leite nacional.
REQUISIT OS/ANLIS E/ PERIODICI DADE De 01.7.2005 At 01.7.2008 Regies: S/SE/CO A partir 01.7.2008 01.7.2011 Regies: S/SE/CO A partir de de At 01.7.2011 Regies: S/SE/CO

Contagem de clulas Mximo de Mximo de somticas/m 1.000.000 750.000 l por produtores individuais.

Mximo de 400.000

consumo interno e, depois exportao); melhorar as condies de pagamento ao produtor (recebimento segundo a qualidade e contedo da matria-prima) (Coelho, 2000). A Instruo Normativa 51/2002, do Ministrio da Agricultura Pecuria e

Obs: Para as anlises, se propem tambm os mtodos de referncia. Fonte: MAPA MATERIAL E MTODOS A pesquisa desenvolveu-se em 15

fazendas produtoras de leite no municpio de Catalo e cidades vizinhas, no Estado

13 de Gois. As fazendas possuem diferentes tipos de ordenha, sendo cinco com ordenha manual, cinco com ordenha mecnica em circuito fechado e cinco com ordenha mecnica com balde ao p. As fazendas possuem produo sistema de semi-intensivo com de leite, manejo um questionrio relacionado ao sistema de extrao de leite adotado. Cada frasco de colheita continha o conservante Bronopol, que uma substncia composta por 8 mg Mycide Pharma BP e 0,30 mg de Natamicina, cujo objetivo As inibir o crescimento de bactrias, leveduras e mofo. amostras foram identificadas, acondicionadas em caixas de papelo adequadas e posteriormente enviadas via correio para anlise no Laboratrio de Qualidade do Leite da UFG-Universidade Federal de Gois. O diagnstico da qualidade do leite foi realizado atravs da contagem de clulas somticas (CCS), eletronicamente, pelo aparelho Fossomatic 5000 Basic, com capacidade de anlise de 300 amostras/hora, cujo princpio analtico baseia-se na citomeria de fluxo. Aps ser automaticamente pipetada para dentro do equipamento, uma alquota da amostra foi misturada com os reagentes. As membranas das clulas somticas foram rompidas, permitindo a colorao do DNA pelo brometo de etdio. O equipamento possui uma lmpada halgena, que emite raios de luz azul no DNA corado, provocando a emisso de pulsos de luz vermelha. Estes pulsos foram ampliados, contados por um foto-multiplicador, multiplicados por um fator de correo, e o

zoosanitrio semelhantes. O trabalho de campo foi realizado em janeiro e fevereiro de 2005. As vacas utilizadas para a pesquisa estavam no meio da lactao e todas foram escolhidas aleatoriamente. O nmero de amostras em cada fazenda foi em torno de 30, sendo uma amostra por vaca, totalizando 150 amostras por tipo de ordenha. As colheitas das amostras foram realizadas durante a ordenha da manh. Nas fazendas com ordenha manual e ordenha mecnica com balde ao p ou lato ao p foram realizadas aps o trmino da ordenha do animal, sendo o leite transferido de um balde para o outro, garantindo uma boa homogeneizao. Logo aps, o leite foi colhido com o auxlio de um copo coletor e transferido para um frasco com volume de 40 mL . Para ordenha mecnica em circuito fechado, aps o trmino da ordenha de cada animal, realizou-se a homogeneizao permitindo a entrada de ar no medidor por no mnimo 15 segundos e posterior colheita e acondicionamento em frascos de 40 mL. Em cada propriedade foi aplicado

14 resultado expresso no monitor como nmero de clulas somticas por mL. Os teores dos componentes foram analisados utilizando-se o Milkscan 4000, cujo princpio baseia-se na absoro diferencial de ondas infravermelhas pelos diferentes componentes do leite. Aps ser automaticamente pipetada para dentro do equipamento, uma alquota da amostra foi exposta primeiramente a uma radiao a infravermelha, concentrao de que cada determinou detectados e passados a uma placa do equipamento, que converteu a concentrao do componente especfico para percentuais por meio do software gerenciador. Este calculou o resultado final, comparando as medidas de referncia com as medidas da amostra. Para verificar a dependncia entre o tipo de ordenha e a mastite subclnica, considerando o limite mximo de CCS (Contagem de Clulas Somticas) de 300.000 clulas/mL, realizou-se o teste estatstico qui-quadrado ( 2). A avaliao das amostras, levando em considerao o tipo de ordenha e a CCS preconizada pelo PNMQL, tambm foi realizada pelo teste qui-quadrado ( 2). Para verificar a presena de correlao entre a composio do leite (gordura, protena, lactose e EST) e a CCS, foi realizado o clculo do coeficiente de correlao (r). RESULTADOS Anlise das Amostras Para verificar a dependncia entre o tipo de ordenha e condio anormal do bere que pode ser provavelmente devido mastite subclnica, obteve-se as freqncias observadas e esperadas as quais esto representadas na tabela 3.

componente fsico-qumico. A alquota colhida pelo instrumento passou por um sistema ptico, que mediu a energia absorvida em um comprimento de onda especfico no meio Molculas da de regio gordura, a luz infravermelha. microminerais

protena, lactose, slidos totais e os absorveram infravermelha diferentemente; a estrutura molecular vibrou em comprimento de ondas caractersticas e absorveram a radiao infra vermelha. O processo para quantificar o componente requereu a medida e o uso de dois comprimentos de onda: comprimento de referncia e comprimento de leitura. Para cada componente, as amostras foram irradiadas no comprimento de onda de referncia e no comprimento de onda de leitura. O equipamento emitiu um feixe de luz sensitiva de radiao infravermelha, colhida por um detector. Os sinais foram

15 Tabela 3 Tipo de ordenha x mastite subclnica.

MASTITE SUBCLNICA Ordenha Manual Freqncia Observada Esperada Balde ao p Circuito Fechado Observada Esperada Observada Esperada < 300.000 118 112 102 112 116 112 > 300.000 32 38 48 38 34 38

contingncia confirmando variveis.

(C) a

0,11, de

sendo zero, as

significativamente

diferente correlao

entre

Das 150 amostras analisadas com ordenha manual, 79 % (118) apresentaram CCS < 300.000 clulas/mL e apenas 21 % (32) CCS > 300.000 clulas/mL. Analisando a ordenha mecnica com balde ao p, de 150 amostras, 68 % (102) tiveram CCS < 300.000 clulas/mL e 32 % (48) CCS > 300.000 clulas/mL. Para a ordenha de circuito fechado, 77 % (116) das amostras tiveram CCS < 300.000 clulas/mL e 23 % (34) CCS > 300.000 clulas/mL Estes dados esto representados na figura 1.

Estudos efetuados por Harmon (1998) indicam que CCS > 300.000 clulas/mL, significa uma condio anormal do bere sendo que a principal causa do aumento desta CCS seria uma inflamao da glndula mamria. A ordenha manual foi a que

100
Porcentagem das amostras

apresentou menor freqncia observada (32) para quadros com CCS > 300.000 clulas/mL, j na ordenha mecnica balde ao p constatou-se a maior freqncia observada (48) para CCS > 300.000. O valor do qui-quadrado ( 2) calculado foi de 5,35, com um nvel de significncia de 7%, comprovando a existncia de uma correlao significativa entre o tipo de ordenha e prevalncia de mastite subclnica. Para verificar a associao entre as variveis, foi calculado o coeficiente de

80 60 40 20 0

79

68

77

21

32

23

< 300.000

> 300.000

CCS
Ordenha Manual Ordenha Balde ao p Ordenha Circuito fechado

Figura 1: Prevalncia de mastite subclnica nos diferentes tipos de ordenha.

16 De acordo com o Programa Nacional de Melhoria da Qualidade do Leite (PNMQL), a partir de 01/07/2008 nas regies Sul, Sudeste e Centro-Oeste, o mximo permitido para a CCS ser de 750.000 clulas/mL. Para verificar a dependncia entre o tipo de ordenha e a CCS preconizada futuramente pelo PNMQL, obteve-se as freqncias observadas e esperadas as quais esto representadas no tabela 4. Tabela 4 Tipo de ordenha x qualidade do leite.
Qualidade do Leite Ordenha Manual Freqncia Observada Esperada Balde ao p Circuito Fechado Observada Esperada Observada Esperada < 750.000 137 138,3 137 138,3 141 138,3 > 750.000 13 11,7 100 13
Porcentagem das amostras

nvel de significncia de 63%, concluindo que no existe correlao significativa entre o tipo de ordenha e a qualidade do leite. O coeficiente de contingncia (C) foi de 0,047, comprovando que no existe associao entre as variveis. Analisando os resultados da ordenha manual e mecnica balde ao p, de 150 amostras testadas ocorreram 91 % (137) dos resultados com CCS < 750.000 clulas/mL, sendo 9 % (13) com CCS > 750.000 clulas/mL. Das 150 amostras da ordenha com circuito fechado, 94 % (141) apresentaram CCS < 750.000 clulas/mL e 6 % (9) com CCS > 750.000 clulas/mL (figura 2).

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

91 91 94

11,7 9 11,7

Em relao qualidade do leite, no houve diferena entre as freqncias observadas das ordenhas manual e mecnica balde ao p. A ordenha circuito fechado apresentou a menor freqncia observada (9) para CCS > 750.000. Nas anlises estatsticas, o valor do qui-quadrado calculado foi de 0,991, com

< 750.000

> 750.000

CCS

Ordenha Manual Ordenha circuito fechado

Ordenha Balde ao p

Figura 2- Contagem de clulas somticas (CCS) x qualidade do leite.

17 A composio do leite [gordura, protena, lactose e extrato seco total (EST)], foi avaliada nos diferentes tipos de ordenha. Os resultados esto apresentados nas tabelas 5,6 e 7. Tabela 5 Composio do leite na ordenha manual.
Valor mnimo Valor mximo Mdia Valor mnimo Valor mximo Mdia

Gordura Protena Lactose EST

2,19 2,63 3,84 10,33

5,03 3,57 5,19 13,96

3,30 3,11 4,73 11,98

Analisando as mdias das tabelas apresentadas acima, verificou-se que o leite da ordenha manual obteve maior teor de gordura, protena, e EST. Os valores 3,72 3,31 4,69 12,53 mnimos de gordura, lactose e EST foram observados na ordenha mecnica balde ao p. A ordenha mecnica circuito fechado apresentou o menor teor de protena e maior de lactose. Os valores mnimos de gordura,

Gordura Protena Lactose EST

2,0 2,52 3,78 10,64

6,04 4,85 5,28 16

Tabela 6 Composio do leite na ordenha mecnica balde ao p.

Valor mnimo Valor mximo Mdia

protena e extrato seco total para os leites cru tipo B e C exigidos pela Instruo Normativa N 51 so respectivamente, 3,0; 2,9 e 11,4. Considerando as mdias de cada tipo de ordenha, todas obtiveram valores que se enquadraram nas normas. A relao entre duas variveis tanto mais estreita, quanto mais o coeficiente de correlao (r) se aproxima de 1 e 1, e o nvel de significncia (P) deve tender a zero. As variveis gordura e CCS, apresentaram o coeficiente de correlao (r) = 0,06, com um nvel de significncia de P=0,20. Para as variveis protena e CCS, tem-se r=0,07 e P=0,09. J a lactose e CCS apresentaram r =0,21 e P=0. As variveis EST e CCS obtiveram

Gordura Protena Lactose EST

1,91 3,04 4,16 10,91

4,4 3,93 5,06 13,68

3,10 3,24 4,67 11,82

Tabela 7 Composio do leite na ordenha mecnica circuito fechado.

18 r=0,01 e P=0,72. Desta forma, os sala de ordenha Tandem (fosso), as demais apresentavam as construes do tipo estbulo. O manejo de cria ao p era adotado por duas propriedades. A higienizao dos tetos com gua era Anlise Descritiva As manual propriedades com ordenha trs empregavam em mdia realizada em quatro propriedades e apenas uma enxugava os tetos utilizando jornal. Nenhuma fazenda adotava a realizao do pr-DIP e apenas duas faziam o ps-DIP com soluo iodada. Duas propriedades realizavam o teste da caneca telada. Em duas propriedades, o arraoamento dava-se durante a ordenha e nas outras este era realizado antes. Aps o trmino da ordenha, em quatro propriedades o leite era armazenado no tanque de expanso e uma fazenda o armazenava no lato. Nas fazendas de ordenha mecnica com circuito fechado, a mdia de funcionrios em atividade foi de dois. A alimentao era feita com pastagem e sal, sendo que duas fazendas faziam silagem. As instalaes apresentavam-se em boas condies, em todas as propriedades as construes eram do tipo sala de ordenha Tandem (fosso). O manejo de cria ao p era adotado por trs fazendas. A lavagem dos tetos com gua era realizada em uma propriedade, que ao seu trmino os enxugava com papel toalha. Nenhuma fazenda adotava o pr-DIP e o ps-DIP. Uma propriedade realizava o teste da caneca telada. O arraoamento era realizado em quatro propriedades durante a

resultados estatsticos comprovam que no existe relao entre os componentes do leite e a CCS nas amostras analisadas.

funcionrios. A alimentao era a base de pastagem e sal, sendo que apenas uma propriedade alimentava os animais no perodo da seca com silagem. As condies das instalaes variaram de regulares a boas, tendo em visto que trs propriedades ordenhavam em local coberto e duas em lugares descobertos, estes continham p. muito esterco. Todas realizava uma as a propriedades adotavam o manejo de cria ao Nenhuma dos fazenda tetos, higienizao tcnica

simples que consiste na lavagem dos tetos com gua, pr-DIP e ps-DIP. Em quatro fazendas, aps o trmino da ordenha de cada animal, o leite era armazenado no lato, sendo que apenas uma fazenda o armazenava em tanque de expanso. Nas fazendas de ordenha mecnica com balde ao p, a mdia de funcionrios caiu de trs para dois. A base da alimentao era a pastagem e sal, mas duas propriedades no perodo da seca tratavam os animais com silagem. As instalaes encontravam-se em boas condies, trs propriedades tinham suas construes tipo

19 ordenha e uma o fazia ao trmino da mesma. expanso. DISCUSSO Entre as 450 amostras, 25% (114) apresentaram CCS acima de 300.000 clulas/mL, indicando que na regio de Catalo-GO a produo de leite apresenta elevados ndices de anormalidades no bere, que podem ser devido a inflamao da glndula mamria caracterizando um quadro de mastite subclnica (figura 3). Todas as no propriedades tanque de armazenavam o leite A utilizao um inadequada aumento de de

ordenhadeiras promoveu uma maior CCS e conseqentemente anormalidade no bere que pode ser devido mastite subclnica, provando que a tecnologia mal empregada ao invs de trazer melhorias ao produtor provoca perdas na produo leiteira. A relao entre tipo de ordenha e mastite subclnica, pode ser comprovada pelos estudos efetuados por Dehart et al. (1976 apud Benedetti & Pedroso, 1996), os quais ressaltaram que a adoo de novas ordenhadeiras, modernos estbulos e/ou salas de ordenha, alimentao diversificada e mecanismos biolgicos inerentes ao animal podem ter alterado os quadros de mamites, provocando o seu aumento em ordenhas mecnicas. A obteno higinica do leite preservando a sade do bere ainda constitui um srio problema na maioria das granjas leiteiras (Benedetti & Pedroso, 1996). Analisando os questionrios, observou-se que a maioria das fazendas no realizava a lavagem dos tetos com gua, pr-DIP e ps-DIP. Logo, faz se necessrio um treinamento da mo de obra enfatizando a importncia da higienizao no processo de ordenha. Das dez propriedades com ordenha mecnica, apenas duas apresentavam construes do tipo estbulo, evidenciando

25%
< 300.000 > 300.000

75%

Figura 3: Contagem de clulas somticas das 450 amostras, segundo a presena de mastite subclnica. Como foi observado nos resultados, houve uma relao significativa (P= 0,07) entre o tipo de ordenha e condio anormal do bere que pode ser conseqncia da mastite subclnica, idade do animal, estgio de lactao e estaes do ano.

20 que o fator construo do tipo sala de ordenha Tandem (fosso), no foi relevante para obteno de menores quadros de mastite. Segundo Benedetti & Pedroso (1996), na construo do tipo estbulo, houve um acrscimo no tempo total da ordenha o que resultou no aumento do grau de mamite. O tipo de construo ideal seria sala de ordenha com poucos equipos (4 a 6) onde diminuiria o tempo total da ordenha. A menor incidncia de uma provvel mastite subclnica na ordenha manual, pode ser explicada pelo fato de todas as fazendas apresentarem cria ao p. J as com ordenha mecnica circuito fechado apresentavam trs propriedades com este manejo e as com ordenha mecnica balde ao p apresentavam duas. Corroborando as pesquisas realizadas por Mayer et al.(1984), onde vacas estimuladas manualmente durante um minuto, responderam com significativo aumento de produo, melhor descida do leite e menor tempo de ordenha. A pr-estimulao tem importncia vital para a sade da glndula mamria e eficincia da ordenha. Este fato pode ser explicado, pois houve uma menor presena de amostras com alta CCS na ordenha manual. Estudos feitos por Philips (1968 apud Benedetti & Pedroso, 1996), provaram que enquanto a atividade de descida do leite efetiva, a presso na Entre as variveis tipo de ordenha e CCS preconizada pelo PNMQL, no houve relao significativa (P> 0,05). J nas observaes efetuadas por Tetzner (2003), houve correlao entre CCS e o tipo de ordenha, sendo que o tipo de ordenha balde ao p apresentou 23,8% das amostras com CCS acima de 750.000 clulas/mL; o tipo de ordenha circuito fechado apresentou Figura 4: Contagem de clulas somticas das 450 amostras, segundo a qualidade do leite.
92% 8%
< 750.000 > 750.000

cisterna

da

glndula

mamria

relativamente mantida. Se a atividade reduzida ou interrompida, o leite existente na cisterna da glndula (leite residual) s ser retirado aps novo estmulo, provocando o aumento da mastite. No total de 450 amostras, somente 8 % (35) apresentaram CCS acima de 750.000 clulas/mL, indicando que a regio de Catalo-GO apresenta bons resultados perante as normas do PNMQL (figura 4).

21 19% CCS acima de 750.000 clulas/mL e o tipo de ordenha manual no obteve nenhuma amostra com CCS acima de 750.000 clulas/mL. Houve uma reduo do nmero de funcionrios trabalhando na ordenha a medida que aumentava a tecnificao, comprovando que as novas tecnologias requerem um um menor nmero adequado de e trabalhadores, mas treinamento que estes devem ter seria a introduo de um programa integral de controle de mastite. A introduo de novas tecnologias no assegura uma melhoria na qualidade do leite. Por isso, com a adoo do sistema de ordenhadeiras mecnicas, a mo de obra dever receber um treinamento enfatizando a questo higinico-sanitria e a importncia da utilizao adequada desta modernizao. O Programa Nacional de Melhoria da Qualidade do Leite (PNMQL), deve ser acompanhado por um amplo programa de treinamento e formao de produtores e tcnicos, tendo em vista um leite de melhor qualidade e sabor para o consumidor, aumento reduo do de rendimento perdas industrial na e indstria,

conscientizao higinico-sanitria. De acordo com os resultados obtidos nesta pesquisa, no existiu correlao entre os componentes do leite (gordura, protena, lactose e EST) e a CCS. J em estudos efetuados por Costa et al. (1995), Edmondson (1996), Santos (2002), Laranja (1996) e Auldist et al. (1995), observaram que vacas com CCS acima de 300.000 clulas/mL apresentaram uma diminuio nos nveis de lactose, gordura, slidos no gordurosos e casena no leite. CONCLUSES Pode-se concluir que a CCS est diretamente relacionada com a sade da glndula mamria e, portanto, um possvel indicador do status da mastite subclnica no rebanho. Desta forma, a estratgia para reduzir a CCS no rebanho

profissionalizao dos produtores e um sistema de pagamento mais estvel e baseado na qualidade do leite. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS AULDIST, M. J. et al. Changes in the composition of milk from normal mastitic dairy cows during the lactation cycle. Australian Journal of 1995. BARBOSA, C. P. et al. Relao entre contagem de clulas somticas (CCS) e os resultados do Califrnia mastitis test Experimental Agriculture, Australian, v. 35, p. 427-436,

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