Ministrio da Educao MEC

Secretaria de Educao Profissional e Tecnolgica

Instituto Federal do Rio de Janeiro IFRJ

CURSO TCNICO EM FARMCIA

ATIVIDADE EXPERIMENTAL N 3

Atividade Experimental de Farmacognosia

Parte 1. Pesquisa de antraquinonas

Parte 2. Pesquisa de alcalides
Data de realizao da prtica: 23/12/2011
Data de entrega do relatrio: 03/01/2012

Professores: Srgio, Lcia e Cosme

Alunos integrantes:
Arthur Moreira
Danila Sousa
Francielle Capella
Paula Pimentel
Rafael Santhiago

Turma: FM 171-2011.2

Parte 1. Pesquisa de antraquinonas

1. Introduo envolvendo o objetivo da prtica:
As quinonas so compostos orgnicos que podem ser considerados produtos da oxidao
de fenis, cuja principal caracterstica a presena de dois grupos carbonlicos que formam um
sistema conjugado com pelo menos duas ligaes duplas C - C.
Em funo do tipo de composto fenlico que os deriva e cetonas conjugadas a qual esto
inseridos, tm-se os trs grupos principais de quinonas: benzo-, nafto- e antraquinonas.
O foco da atividade prtica est voltado para as antraquinonas devido ao seu maior nmero
na natureza e pela sua importncia farmacutica, com ao farmacolgica mais verificada.
Utilizando-se a nomenclatura geral, dentre os derivados antracnicos, as antraquinonas
propriamente ditas, que correspondem forma oxidada, so mais estveis que as antronas
(presentes em plantas mais jovens) e so geralmente formadas a partir das antronas livres por
auto-oxidao ou pela ao de enzimas prprias das plantas. Os derivados contidos nas drogas
vegetais secas, como a utilizada na prtica, apresentam-se geralmente num estado mais oxidado
do que as substncias desse grupo presentes originalmente na planta fresca.
O teste de Borntrger frequentemente usado para deteco de antraquinonas livres, onde
colorao rsea, vermelha ou violeta desenvolvida em meio bsico. Tal reao indica a
presena de antraquinona na planta, uma vez que a extrao por solvente orgnico capaz de
retirar a substncia presente no material vegetal e concentr-la atravs do extrato. O teste
coopera com o objetivo de pesquisa da atividade experimental, ajudando na verificao de
presena ou ausncia de antraquinonas na droga vegetal, sendo, portanto, um objetivo
qualitativo.
So empregadas terapeuticamente como laxantes e catrticos, por agirem irritando o
intestino grosso, aumentando a motilidade intestinal e, consequentemente, diminuindo a
reabsoro de gua. As hidroxilas nas posies C1 e C8 so essenciais para a ao laxante.
Dentre alguns mecanismos conhecidos para atividade laxante dos antranides, tem-se: que
a ao do laxante est associada a inibio de reabsoro de gua, atravs do bloqueio da enzima
ATPase dependente de Na+/K+ (efeito antirreabsortivo). Ao mesmo tempo promove, em
diferentes condies, a passagem de eletrlitos e gua na luz intestinal (efeito hidragogo).
O material vegetal seco utilizado para a pesquisa foi o sene (Cassia angustifolia), que
embora usado medicinalmente pelos rabes j no sculo IX, o uso como laxante s passou a ter
maior destaque na poca do Renascimento e o responsvel pelo seu emprego teraputico atual.
De forma geral, a composio de derivados antracnicos semelhante nos fololos e nos frutos,
mas o teor total de glicosdeos antranides maior cerca de 2% nos frutos, embora nos fololos o
teor de derivados de aloe-emodina (com maior atividade) seja mais alto. Assim, na mesma dose,
fololos apresentam efeito laxante mais intenso que os frutos. Durante a secagem da planta,
atravs de uma combinao de reaes redox e processos enzimticos, formam-se a partir de
glicosdeos conjugados com grupos sulfato e oxalato, as correspondentes diantronas e
antraquinonas.

2. Metodologia:
Adicionou-se 5 mL de ter etlico cerca de 1 g do frmaco pulverizado e agitou-se. O
solvente foi decantado, com cuidado, para um tubo de ensaio. Repetiu-se o procedimento e
juntou-se ao material anteriormente colhido. soluo etrea foi adicionado aproximadamente 1
mL de soluo de hidrxido de sdio a 10% e fez-se leve agitao, precedida de observao
(Primeira identificao).
Como continuidade da prtica dever-se-ia juntar 3 mL de HCl 10% a o resduo, e aquecer
fervura. Esfriar e filtrar por papel de filtro para funil de separao e extrair a soluo aquosa
com 4 pores de 3 mL cada de ter etlico. Reservar a camada aquosa, e agitar uma alquota da
camada etrea com hidrxido de sdio 10%, seguida de observao. soluo aquosa cida
reservada, adicionar cerca de 3 mL de cloreto frrico 25% e ferver suavemente por 15 minutos,
adicionando gua, caso necessrio, para manuteno do volume. Esfriar e transferir a soluo
para um funil de separao, agitando com 5 mL de clorofrmio. Separar a fase orgnica para um
tubo de ensaio e adicionar 2 mL da soluo de hidrxido de sdio 10% e observar.

3. Resultados observados e interpretao conclusiva:

Na pesquisa, concluiu-se a presena de substncias dessas caractersticas, atravs da
mudana de colorao (colorao vermelha) na fase aquosa aps a adio do hidrxido de sdio,
que ao formar o sal de amnio, torna se hidrossolvel. Logo aps a adio da base, a fase
orgnica perde a cor que tinha inicialmente uma vez que as antraquinonas se deslocam para a
fase aquosa formando inicialmente um anel rosceo, na intercesso entre as fases.
Caso no houvesse a mudana de colorao da fase aquosa, concluir-se-ia a no formao
do sal e conseqentemente a falta de substncias de caractersticas antraquinnicas.
Vale ressaltar que o procedimento sugerido para a pesquisa foi o mtodo na pesquisa de
antraquinona livre, sendo esta, portanto, identificada com tal denominao.
Para uma primeira identificao (Reao de Borntrger), teve-se como base a solubilidade
dos derivados 1,8-dihidroxiantraquinnicos livres nos solventes orgnicos imiscveis com a gua
(solventes apolares) e na solubilidade adquirida pelas antraquinonas, que tem carter cido, ao
ser adicionado hidrxido, formando assim um sal derivado de fenol, denominado fenolato, que
passa a ser hidrossolvel.
Estes derivados quando em soluo nos hidrxidos alcalinos, coram-se de vermelho ou
rosa (depende da concentrao dos compostos antraquinnicos na amostra analisada).
Logo, caso tenha-se o interesse em identificar a presena de molculas de antraquinona em
uma determinada planta, como caso, faz-se uma reao desse tipo, que no garante, mas indica,
que realmente a molcula est presente no material vegetal, atravs da observao de colorao
na camada aquosa do tubo.

4. Justificativas terico/praticas para as atividades desenvolvidas a partir da

primeira identificao (item 4).
5) Ao resduo formado por 5 ml da soluo etrea e aproximadamente 1 ml da soluo 10% de
hidrxido de sdio adicionado 3 ml de soluo 10% de HCl e posteriormente levado a
aquecimento. A soluo final fria filtrada e extrada com 4 pores de 3ml de ter etlico.
A colorao avermelhada que aparece na interface das duas solues prediz a presena de
fenolatos hidrossolveis derivados das antraquinonas livres em funo de sua solubilidade em
meios apolares, estavam presentes na soluo etrea.
As quinonas livres presentes podem se comportar como cidos fracos frente a bases fortes
como o NaOH formando fenolatos, no entanto em meio cido as antraquinonas livres voltam a se
apresentar sob a forma protonada e se mostram mais hidrofbicas.
No caso acima a adio da soluo de HCl 10% teria a funo de converter os fenolatos do
meio novamente em antraquinonas livres. A soluo ento aquecida, o que ocasiona a
volatilizao da soluo etrea em conseqncia do baixo ponto de ebulio do ter etlico
(aproximadamente 35C). A posterior extrao com 4 pores de 3ml de ter etlico atuaria no
sentido de retirar as antraquinonas presentes na soluo cida, as quais naturalmente passariam
para a fase etrea em funo da menor polaridade deste solvente em relao a gua.
6) Reservar a camada aquosa e agitar uma alquota da camada etrea com hidrxido de sdio
10%.
Este procedimento atuaria com o objetivo de verificar a presena de fenolatos,
provenientes das antraquinonas livres presentes na frao etrea extrada no procedimento
anterior.
7) Adio de soluo de cloreto frrico 10% a soluo cida reservada e posterior fervura por
15 minutos.
O cloreto frrico pode atuar como agente oxidante, e desta forma sua atuao nesta etapa
estaria envolvida com a oxidao de compostos fenlicos que no foram extrados na etapa
anterior, que seriam capazes de gerar fenolatos, os quais seriam mais facilmente oxidados que as
hidroxilas presentes nas antraquinonas, desta forma seriam eliminados os falsos resultados
positivos atravs da formao de fenolatos.
8 - 9) Transferncia da soluo j fria para um funil de separao, agitnado com 5 ml de
clorofrmio, seguindo-se da separao da fase orgnica e adio a seta de 2 ml de soluo de
hidrxido de sdio 10%
O clorofrmio ou tricloromentano um solvente mais polar que o ter etlico, desta forma
pode-se afirmar que quando posto em contato com a soluo anterior existir a tendncia da
passagem das antraquinonas livres (onde a presena de um hidrognio cido confere maior
polaridade a molcula) para este solvente, e provavelmente tambm de possveis quinonas em
estados de oxidao mais elevados.
Ento no momento em que se realiza a adio de hidrxido de sdio somente as
antraquinonas livres so capazes de reagir gerando fenolato, desta forma, pode-se ento afirmar
que este processo assegura uma determinao mais segura da presena de tais compostos.

5. Bibliografia:

SIMES et al. Farmacognosia da Planta ao Medicamento, 3.ed. ver. Porto

Alegre/Florianpolis : Editora Universidade/ UFRGS/ Editora da UFSC, 2001.

Sociedade
Brasileira
de
Farmacognosia.
Disponvel
em:
<http://sbfgnosia.org.br/Ensino/antraquinonas.html> Acessado em: 28 de dezembro de
2011.

Parte 2. Pesquisa de alcalides

1. Introduo envolvendo o objetivo da prtica e consideraes sobre o
frmaco:
Os alcalides so substncias orgnicas cclicas contendo um nitrognio em um estado de
oxidao negativo (Pelletier 1983), farmacologicamente ativas, que so encontradas
predominantemente nas angiospermas.
Em relao s suas funes no vegetal de origem, tem sido observado que muitas plantas
que produzem alcalides so evitadas por animais ou insetos em sua dieta, isto certamente
devido sua toxicidade ou ao fato de a maioria dos alcalides terem gosto amargo, porm nos e
pode afirmar que a produo dessas substncia esteja restrita um mecanismo de proteo. Outra
possvel funo, seria a proteo contra radiao UV, devido ao fato de, em sua maior parte,
serem compostos com ncleos aromticos altamente absorventes dessa radiao.
De uma forma geral, os alcalides so formados a partir de aminocidos (alcalides
verdadeiros ou protoalcalides), mas outros precursores tais como terpenos ou esterides podem
ser incorporados na construo do esqueleto final dos alcalides (pseudoalcalides). Assim, a
origem biogentica dos alcalides no pode ser acomodada em apenas uma rota metablica,
frequentemente resultando da combinao de produtos derivados de uma ou mais rotas
metablicas distintas.
A determinao qualitativa de alcalides do extrato realizada com a utilizao de reativos
considerados gerais para alcalides. A maioria dos alcalides precipita de solues neutras ou
levemente cidas pelos reagentes de Mayer (soluo de iodeto de potssio e cloreto de mercrio),
reagente de Bouchardat (soluo de iodo e iodeto de potssio) e reagente de Dragendorff
(soluo de iodeto de potssio e subnitrato de bismuto), sendo os trs, utilizados na prtica. Os
precipitados formados podem ser amorfos ou cristalinos, possuir cores diferentes variando do
branco ao marrom-alaranjado, podendo ser solubilizados em meio alcalino ou em excesso de
reagente. Deve-se ressaltar que esses precipitados tambm podem ser causados por protenas,
purinas, betanas, alfa-pironas, algumas cumarinas, hidrofenis e lignanas. Assim, resultados
negativos com estes reagentes so indicativos de ausncia de alcalides, enquanto a formao de
precipitados pode ser considerada apenas como provvel presena de alcalides.
O pau-pereira (Geissospermum vellosii), que foi a planta utilizada para a pesquisa,
apresenta em sua casca, o alcalide pereirina. A substncia, usada durante muito tempo como
medicamento contra febres, foi isolada pela primeira vez em 1838, no Rio de Janeiro, por um
farmacutico brasileiro. O isolamento deste alcalide, reivindicado tambm por pesquisadores de
outros pases, mostra que na primeira metade do sculo 19 j se faziam estudos qumicos de
produtos naturais no pas.

2. Metodologia:
Aps ser pulverizada, a massa equivalente a 0,2 g do frmaco foi fervida juntamente com
30 mL de cido sulfrico a 1%, por cerca de dois minutos. O extrato obtido foi filtrado atravs
de filtro de algodo e resfriado a temperatura ambiente.
Transferiuse cerca de 3 mL do filtrado para trs tubos de ensaio, reservando o restante.
Foram adicionadas, ento, gotas dos reagentes gerais de alcalides, sendo o resultado observado
em comparao com o ensaio em branco.
A poro restante foi acondicionada em um funil de separao pequeno, onde foi
adicionada amnia at pH 9-10. Foram acrescentados, em seguida, 7 mL de ter. O sistema foi
levado a agitao com cuidado e, aps decantao da camada etrea para uma cpsula de
porcelana, o resduo sobressalente foi evaporado em banho-maria at secura. O extrato partido
foi ento dissolvido com 5 mL de cido sulfrico a 1% e submetido novamente aos ensaios com
os reagentes gerais.

3. Resultados observados e interpretao conclusiva:

Com base nos resultados observados na pesquisa de alcalides, concluiu-se que o frmaco
analisado apresenta caractersticas alcalodicas uma vez que houve formao de precipitado e
turvao (resultado positivo) nos trs tubos aps a reao do frmaco com os trs diferentes
reativos gerais em meio cido - meio este favorvel a reao para identificao de alcalides.
O resultado observado na pesquisa direta foi considerado satisfatrio, pois, embora no
sendo realizados os procedimentos de purificao do frmaco, o resultado positivo pde ser
visualizado nos tubos de ensaio com os diferentes reativos.

4. Justificativas terico/praticas para as atividades desenvolvidas a partir da

primeira identificao (item 4).
5) Transferncia da poro restante do filtrado para um funil de separao pequeno
adicionando amnia diluda at a obteno de pH 9-10.
Em funo do estado de oxidao negativo, a poro nitrogenada da molcula de um
alcalide apresenta carter alcalino (par de eltrons livres no nitrognio), e em meios com grande
concentrao de ons H+ passvel de ser protonada. O alcalide protonado relativamente
solvel em meio aquoso em funo do carter cido do hidrognio ligado ao nitrognio que faz 4
ligaes, enquanto que a forma no-protonada geralmente no se solubiliza em meio aquoso e
interage mais facilmente solventes de menos polares que a gua.
Desta forma a adio de amnia diluda teve como funo o aumento do pH do meio para
que conseqentemente os alcalides presentes se apresentassem sob a forma no-protonada e
interagissem mais facilmente com um solvente menos polar do que a gua.

6 - 7) adicionado ento uma poro de 7 ml de ter com conseqente agitao.

Solventes formados por teres de poucos carbonos como o ter metlico, etlico e proplico
possuem constante dieltrica menor do que a gua, e desta forma conseguem interagir com os
alcalides presentes em soluo aquosa. Da pode-se inferir que os alcalides passariam
naturalmente para a fase etrea da soluo em funo da melhor interao com este solvente.
8 - 9) A fase etrea ento decantada em uma cpsula de porcelana, e posteriormente
evaporada em banho-maria at a secura
A decantao da camada etrea para uma cpsula de porcelana implica tambm na
transferncia dos alcalides que estavam solveis nesta fase para a cpsula de porcelana.
Aquecendo-se ento a banho-maria possvel realizar a evaporao do solvente e de
produtos volteis sem a retirada do soluto, em funo do baixo ponto de ebulio que os teres
de poucos carbonos normalmente possuem, quando comparados aos pontos de ebulio dos
alcalides de um modo geral, normalmente bem acima dos 100 C.
Pode-se dizer ento que o resduo restante aps a evaporao dever conter em grande
parte os alcalides que estavam antes solveis no solvente evaporado.
10 - 11) O resduo dissolvido em 5ml de cido sulfrico a 1%, e posteriormente separado em 3
tubos de ensaio que seriam posteriormente submetidos aos ensaios com os reagentes gerais de
alcalides.
A adio de um cido no resduo contendo forte presena de alcalides implicar na
atuao destes como bases capazes de receber os prtons presentes no meio, e como
conseqncia se tornaro solveis.
Os procedimentos realizados garantiro ento que qualquer outro metablito capaz de
causar um resultado positivo, reagindo com os reagentes utilizados para a identificao de
alcalides, ser retirado ou ter sua concentrao extremamente reduzida no momento da
realizao final dos ensaios.

5. Bibliografia

SIMES et al. Farmacognosia da Planta ao Medicamento, 3.ed. ver. Porto

Alegre/Florianpolis : Editora Universidade/ UFRGS/ Editora da UFSC, 2001.

LMBV - Laboratrio de Morfognese e Bioqumica Vegetal UFSC. O primeiro alcalide

isolado no Brasil. Disponvel em: <http://www.lmbv.ufsc.br/o-primeiro-alcaloide-isoladono-brasil/> Acessado em: 29 de dezembro de 2011.