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COLUNAS PARA HPLC – Fase Reversa e Fase Normal Instruções de uso e cuidados

  • 1. ATIVAÇÃO DE COLUNAS NOVAS OU ARMAZENADAS POR LONGOS PERÍODOS:

  • - Fase Reversa (RP) apresentando grupos funcionais C 18 , C 8 , CN-RP, NH 2 RP, Fenil C 6 H 5 , C 4 , C 2 :

Solvente de estocagem recomendado: 90% ACN : 10% H 2 O . (ACN = Acetronitrila)

Ativação: 100% de ACN ou MeOH . (MeOH = Metanol)

Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos, vazão de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos, vazão de 1ml/min.

  • - Fase Normal (NP) apresentando grupos funcionais SiOH, OH, NH 2 , NO 2, OH e N(CH 3 ) 2 :

Solvente de estocagem recomendado: 100% n-Heptano.

Ativação: 100% de n-Heptano.

Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos, vazão de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos, vazão de 1ml/min.

OBS.:

Antes de introduzir a fase móvel de trabalho, verifique a miscibilidade com o solvente de ativação.

  • - Colunas RP: Passe água antes de entrar com eluentes altamente concenrtados em tampão.

  • - Colunas NP: Passese etanol ou n-Propanol antes de entrar com solventes aquosos.

  • 2. PROCEDIMENTO DE LIMPEZA APÓS UMA LONGA SEQUÊNCIA DE ANÁLISE:

  • - Colunas RP: Fase móvel -> *H 2 O ->

ACN:H 2 O (10:90) -> ACN:H 2 O (90:10)

 
 
COLUNAS PARA HPLC – Fase Reversa e Fase Normal Instruções de uso e cuidados 1.

mudança c/ gradiente linear (10min.)

* somente se a fase móvel for um tamponado concentrado.

  • - Colunas NP: Fase móvel -> n-Propanol -> n-Heptano

Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos para cada estágio, vazão de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos para cada estágio, vazão de 1ml/min.

  • 3. PROCEDIMENTO DE REGENERAÇÃO QUÍMICA:

Colunas RP: Água -> Metanol -> Clorofôrmio -> Metanol -> Água ou 0,05M H 2 SO 4

Colunas NP: Heptano -> Clorofôrmio -> Acetato de Etila -> Acetona -> Etanol -> Água

Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos para cada estágio, vazão de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos para cada estágio, vazão de 1ml/min.

OBS.:

Caso a pressão de trabalho esteja elevada, pode-se inverter o sentido da coluna durante todo o processo de regeneração. Dependendo da gravidade do problema, este recurso de regeneração poderá não recuperar a capacidade de separação da coluna.

  • 4. CUIDADOS BÁSICOS:

  • - Não exceder a faixa de pH de 2 a 7.5 para colunas de sílica convencional tipo Nucleosil ® ; pH 1.5 a 9 para fases tipo Nucleodur ® e pH 1 a 11 para fases tipo Nucleodur ® Gravity.

  • - Não submeta a coluna a pH’s extremos se não for estritamente necessário.

  • - Evite utilizar eluentes de trabalho puramente aquosos (>95% de água) em colunas RP base sílica convencional. Na necessidade da utilização de eluentes de trabalho puramente aquosos em RP, utilize somente as colunas

especiais tipo Nucleosil ® Nautilus C18 ou Nucleodur ® Pyramid C18.

  • - Mantenha a concentração do tampão dentro dos valores mínimos necessários (ex.: 10mM ao invés de 100mM)

    • - Exemplos de Tampões menos agressivos: amonia (acetato, formiato) e aminas (trietilamina, pirolidina).

    • - Exemplos de Tampões mais agressivos: Fosfato e Borato.

  • - Nunca armazene ou estoque a coluna em soluções tamponadas.

  • - Evite mudanças drásticas de fluxo e composição da fase móvel.

  • - Utilize pré-colunas na entrada da coluna.

  • - Utilize somente solventes graus HPLC e químicos de alta pureza.

  • - Filtre a fase móvel em membranas de 0,45µm sob vácuo e daegaseique por 15 minutos no banho ultra-som.

  • - Utilize cartuchos de extração em fase sólida CHROMABOND ® para limpeza das amostras em matrizes complexas tais como: cremes, pomadas, fluídos biológicos, alimentos, meio ambiente, etc).

  • - Filtre todas as amostras em filtros CHROMAFIL ® de 0,45µm antes da injeção.

    • 4. ESQUEMA DE MONTAGEM PARA COLUNAS EM CARTUCHO (CHROMCART ® ) E PRONTAS (EC):

  • 4. CUIDADOS BÁSICOS: - Não exceder a faixa de pH de 2 a 7.5 para
    4. CUIDADOS BÁSICOS: - Não exceder a faixa de pH de 2 a 7.5 para
    4. CUIDADOS BÁSICOS: - Não exceder a faixa de pH de 2 a 7.5 para
    • a) Coluna em cartucho ChromCART ® sem a instalação da

    pré-coluna. Obs.: Para utilizar o acoplador MN nas colunas LiChroCART, deve-se utilizar o extensor art. 721695

    • b) Coluna em cartucho ChromCART ® com a instalação da

    pré-coluna.

    • c) Coluna pronta EC com instalação da pré-coluna via

    adaptador direto EC art. 721359.

    • d) Coluna pronta EC com instalação da pré-coluna via

    suporte externo e conector capilar.

    Nucleosil ® , Nucleosil ® Nautilus, Nucleodur ® , Nucleodur ® Pyramid, Nucleodur ® Gravity, Chromafil ® , Chromabond ® e ChromCART ® são marcas registradas da empresa Macherey-Nagel (MN).