ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL LITORAL PROGRAMA DE LICENCIATURA EN NUTRICIN INTEC-PROTAL

Microbiologa de los Alimentos I

Tema Conferencia: Medios de Cultivo. Clasificacin Esterilizacin ( Control de Calidad)

Docente: Msc. Abel Rosado Ruiz-Apodaca

CURSO 2010-2011

SELECCIN Y

PREPARACIN DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLGICO

EVOLUCION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO En 1876, Robert Koch quien inicio la creacin de los Medios

de Cultivo artificiales por primera vez cultiv y propago

Bacillus anthracis.

Emple la gelatina y otras protenas para el cultivo de

microorganismos en condiciones artificiales.

El empleo del agar como agente solidificante revolucion la prctica de la preparacin de los Medios slidos.

EVOLUCION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

En 1880 Naegeli describi los requerimientos por los

microorganismos de un compuesto proteico que denomin Peptona.

En la actualidad se han creado ms de 10000 Medios de Cultivo artificial.

BASES NUTRITIVAS DESHIDRATADAS

PEPTONA BACTERIOLGICA Digerido enzimtico de tejido animal empleado en una amplia gama de Medios de Cultivo.

EXTRACTO DE CARNE Extracto nutritivo de tejido animal rico en compuestos nitrogenados. Se recomienda su empleo conjuntamente con otras bases nutritivas.

EXTRACTO DE CEREBRO Y CORAZN Compuesto nutritivo se lo emplea en cultivo de microorganismos exigentes.

EXTRACTO DE LEVADURA Rico en sustancias nitrogenadas y vitaminas especialmente del grupo B puede utilizarse como componente de los Medios para produccin de vacuna y productos biolgicos.

BASES NUTRITIVAS DESHIDRATADAS

HIDROLIZADO ACIDO DE CASEINA Base nutritiva fundamentalmente de los Medios de caldo y agar Mueller Hinton.

LECHE PEPTONIZADA Es un digerido pancretico descremada.

de

leche

en

polvo

PEPTONA GELATINA Se caracteriza por la ausencia de carbohidratos en su composicin y su bajo contenido cistina y triptofano.

BASES NUTRITIVAS DESHIDRATADAS

PEPTONA MICOLGICA Se la utiliza para cultivo de hongos patgenos y saprofitos. PEPTONA DE SOYA Se la obtiene mediante hidrlisis de la harina de soya tiene alto

contenido de carbohidratos y vitaminas, por lo que permite el

crecimiento abundante de bacterias exigentes y de los hongos.

Todas estas bases nutritivas tienen un rango de pH 5-7

.

COMPOSICIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Agua Bases Nutritivas. Carbohidratos
Peptonas, Hidrolizados y digeridos,extractos,infusiones. Azcares agar y derivados almidones. Otros. Microelementos (fsforo,azufre.sodio,hierro,etc Rojo de fenol, prpura de bromo cresol, etc. Vitaminas, protenas, otros. Antibiticos, lpidos. Fosfato, acetato, etc.

Sales Minerales Orgnicas e Inorgnicas

Colorantes e indicadores de PH Factores de Crecimiento Otros Agentes Tampn

NUTRICION, CULTIVO Y METABOLISMO MICROBIANO

Una de las caractersticas importantes de las clulas es su capacidad para llevar a cabo reacciones qumicas y organizar sus molculas para formar estructuras especificas. Esta organizacin es el crecimiento Antes de que una clula se divida deben ocurrir muchas reacciones qumicas denominadas metabolismo. Las reacciones metablicas o bien liberan energa llamadas reacciones catablicas o bien consumen energa llamadas anablicas.

COMPOSICION DE LA CLULA

Las clulas estas compuestas de :

Macromolculas Agua Micromolculas ( se componen de unidades ms pequeas denominadas monmeros)

MACRONUTRIENTES
Los macronutrientes mas importantes son:

Carbono: Se ha demostrado que las bacterias pueden asimilar varios compuestos orgnicos para hacer nuevo material celular y contiene el 50% de carbono.

Nitrgeno: Despus del carbono el elemento mas abundante es el nitrgeno contiene alrededor del 12% de su peso seco, se lo encuentra en la naturaleza en forma orgnica e inorgnica.

OTROS MACRONUTRIENTES
Fsforo (P): Se necesita para la sntesis de cidos nucleicos y fosfolticos Azufre (S): Es un componente estructural de los aminocidos sistena y metionina, este procede de fuentes inorgnicas , sulfatos o sulfuros. Potasio (K): Es necesario para la actividad de varias enzimas incluyendo algunas que participan en la sntesis de protenas. Magnesio (MG): Funciona como estabilizador de las membranas celulares y de muchas encimas. Calcio (CA): Ayuda a estabilizar la pared celular bacteriana. Sodio (NA): Es requerido por muchos microorganismos.

Hierro (FE): Es fundamental en la respiracin celular en condiciones anaerbicas y aerbicas.

MICRONUTRIENTES (ELEMENTOS TRAZA)

Un medio de cultivo requiere de metales traza cuando el medio contiene compuestos muy puros disueltos en agua destilada de elevada pureza.

FACTORES DE CRECIMIENTO

Vitaminas Aminocidos Pirimidinas

Son compuestos orgnicos que se necesitan en pequeas cantidades. Como los Gneros Estreptococos y Lactobacillus que son de requerimiento ms amplios que los humanos.

Que es un medio de cultivo?

Es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos.

Requerimientos
Los ms importantes son: carbono, oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono, hidrgeno. Muchas bacterias necesitan del aporte extra de factores de crecimiento especficos en forma de suero, sangre y extracto de levadura.

Clasificacin de los Medios de Cultivo

Segn su Origen Segn su Consistencia Segn su Composicin

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su Origen
Naturales (complejos): Preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal (extractos de tejidos o infusiones). La composicin qumica no se conoce exactamente. Sintticos: Composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. Semisintticos: Sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento (extracto orgnico complejo: Ej. extracto de levadura.

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su Consistencia
Lquidos (caldos): Contienen los nutrientes en solucin acuosa. Slidos: Se preparan aadiendo un agar a un medio lquido a razn de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacrida que se extrae de las algas. Puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias. Semislidos: Contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la motilidad de las especies en estudio.

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su composicin
Amplio Espectro o Universales Enriquecidos Selectivos Diferenciales De transporte

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su composicin
Amplio Espectro o universales:

Permite el crecimiento de la mayor parte de MO. Es el medio ms utilizado para mantener colonias microbianas. Ej.: Standar Method y Agar nutritivo. Enriquecidos: Compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le agregan nutrientes como suplementos. Ej.: sangre, suero, lquido asctico, etc. Selectivos: La selectividad se consigue alterando las condiciones fsicas del medio o aadiendo/suprimiendo componentes qumicos especficos. Slo permite el crecimiento de un grupo de MO. Se utiliza para seleccionar y aislar. Ej.: Agar salado-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos).

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su composicin
Diferenciales:

Nos permiten distinguir entre varios gneros y especies de MO.

Ej.: Si al medio se le aade un carbohidrato y un indicador, el MO que crece es capaz de fermentar dicho carbohidrato produciendo acidificacin del medio con el consiguiente viraje de color del indicador por el cambio de pH. A menudo la separacin se basa en la diferencia de color de las colonias. En el agar con azul de metileno-eosina permite diferenciar E. coli (colonias oscuras y de brillo metlico) de Enterobacter aerogenes (colonias rosadas de centro azul sin brillo). Estos dos microorganismos en agar nutritivo producen colonias de color gris blancuzco.

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su composicin
De transporte: Utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicacin significativa de los microorganismos desde el momento de su extraccin hasta su posterior estudio. Se utilizan generalmente cuando las muestras deben ser enviadas de un laboratorio a otro. Medios de transporte ms utilizados son: Stuart, Amies Carey - Blair.

APLICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Sus principales aplicaciones son: Diagnstico Clnico Medicina Humana y Veterinaria. Industria Farmacuticas Tecnolgica. Control de Calidad. Industria Alimenticia. Otras Industrias y Sectores Productivos.

Investigaciones

Microorganismos

Medios de Cultivo
Agar extracto de malta Agar saboraud Agar selectivo Agar most Agar YGC Agar patata dextrosa

Mohos y Levaduras

Escherichia y coliformes

Caldo Brila Lauril sulfato Fluorocult Caldo Brila Fluorocult- C. Laurinsulfato Agar Mc Conkey Caldo Mc Conkey

Microorganismos
Bacterias en General

Medios de Cultivo
Caldo Soya M.de C. Tioglicolato Purpura de bromocresol Agar KF para estreptococo Agar F para Pseudomona Agar P para Pseudomona Agar Cetrimide Caldo tetrationato ASS Agar Baird Parker Manito salado

Enterococos Pseudomonas

Salmonella

Estafilococos

Microorganismos Clostridium

Medios de Cultivo Caldo carne cocida Caldo higado Agar jugo de naranja Agar MRS Agar Rogosa

Bacterias cido Lcticas Lactobacillus

Identificacin de Microorganismos

Agar Citrato de simmons Kliger Iron Agar Agar Lisina y Hierro Agar de Mc Conkey Triple Sugar Iron Agar Agua Triptona Agar Uria Caldo MRVP Caldo Manitol

Ver Tabla

ELEMENTOS ESENCIALES EN LA PRODUCCIN DE MEDIOS DE CULTIVOS

Personal calificado y capacitado Infraestructura y espacios apropiados Mantenimiento de Laboratorio y Equipos Materiales, envases y etiquetas correctas Almacenamientos de los productos elaborados Controles durante el procesado

Mantener registros de toda la produccin

Higiene y saneamiento Validacin Medidas correctivas

CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Adquisicin de los Medios de Cultivo(marcas conocidas o desconocidas)

Constatar el nombre del producto y la frmula del mismo est de

acuerdo a lo solicitado.

Fecha de caducidad del producto.

Temperatura de almacenamiento del producto, existen productos que necesitan ser almacenados a temperaturas bajas y es necesario guardarlos en refrigeracin.

CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Comprobar que el Medio de Cultivo este deshidratado invirtiendo el frasco. Observar las propiedades fsicas y organolpticas. Los recipientes abiertos o sustancias en polvo deshidratados se afectan por la humedad.

Precauciones - Medios de Cultivo deshidratado

Productos peligrosos Hay algunos productos que contienen sustancias txicas y deben manejarse con cuidado. Medios que contienen sales de talio Medios que contienen azida sdica Medios que contienen Selenito,sodio.

PREPARACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

UTILIZANDO NORMAS ESTABLECIDAS.
La balanza debe estar calibrada y situada en un lugar seco y libre de corrientes de aire y el medio de Cultivo se debe pesar inmediatamente para su preparacin Evitar la formacin de grumos en el momento de calentarlo. Mantener al Medio de Cultivo en ebullicin durante un minuto si es un Medio slido. Ajustar el pH del Medio con NaOH 1N o con HCL 1N antes de esterilizar. Los Medios que van hacer suplementados con antimicrobianos o de enriquecimiento deben estar a 50C en bao de mara por una hora despus de su esterilizacin Esterilizar en autoclave a una temperatura de 121C por 15 minutos para la mayora de los Medios.. La esterilizacin es un punto critico en la calidad de los Medios de Cultivo.

ESTERILIZACIN
La esterilizacin consiste en la muerte de todos los organismos. La aplicacin del calor es el mtodo de esterilizacin ms utilizado.

La temperatura para la esterilizacin por calor se selecciona con el fin de eliminar la mayora de los organismos resistentes al calor en el material, habitualmente endosporas bacterianas.

El nico criterio vlido de muerte de microorganismos es la prdida irreversible de la capacidad de reproducirse.

Son mtodos estndar que se emplean para destruir o eliminar microorganismos no deseables. Estos mtodos se usan de forma rutinaria para controlar el crecimiento microbiano indeseado. - Hmedo - Seco

Para todos los microorganismos existe una temperatura mxima de crecimiento por encima de la cual mueren. Cuando una poblacin microbiana pura se expone a un agente letal como calor, la cintica es casi siempre exponencial: El nmero de supervivientes disminuye en progresin geomtrica con el tiempo.

Tasa de mortalidad

Son las estructuras ms resistentes al calor que se conocen. Son capaces de sobrevivir a temperaturas que rpidamente matan a las clulas vegetativas de la misma especie. El contenido en agua del protoplasma con la concentracin de SASPs determina la resistencia de calor de la espora.

El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Se deben principalmente a dos razones: 1) El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua. 2) El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. La utilizacin del calor y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la temperatura.

-Rpido calentamiento y penetracin -Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo -Hay un bajo deterioro del material expuesto -Econmico

-No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua -Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos

 Es la aplicacin del calor mediante la ebullicin del agua a presin atmosfrica (100 oC). Mediante este mtodo se esterilizan inyectadoras, agujas e instrumentos de ciruga menor. No es confiable en su totalidad este mtodo por cuanto quedan las esporas.

Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua a una temperatura de 100 oC en varias sesiones. Se efecta por medio del autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de escape, o sea funcionando a la presin normal. Puede tambin realizarse a temperaturas ms bajas, 56 u 80 ocupara evitar la descomposicin de las sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas.

 Es la aplicacin de una temperatura inferior a 110 C durante 30 minutos. La aplicacin del calor va seguida de un rpido enfriamiento. Se usa para prevenir las infecciones de origen lcteo y retasar la descomposicin de la leche, ya que las bacterias de la leche no forman esporas (bacilo tuberculoso, salmonella, estreptococo y brcela)

Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 15 a 20 minutos. El vapor a presin proporciona temperaturas altas con penetracin y humedad en abundancia que facilitan la coagulacin de las protenas.

 El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txico por niveles elevados de electrolitos, fusin de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja.

-No es corrosivo para metales e instrumentos. -Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

 Consiste en la exposicin directa del instrumento a una flama en forma directa por poco tiempo con el mechero de Bunsen.

Consiste en someter el material contaminado a altas temperaturas en hornos especiales para reducirlo prcticamente a cenizas. Su fin es evitar el vertido de material de alto riesgo en la basura.

Por medio de las estufas de doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para el instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores durante unos 90 minutos. Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal, que al dilatarse por el calor, cortan el circuito elctrico.

Una forma eficaz para esterilizar o reducir la carga microbiana de casi cualquier sustancia se realiza mediante la utilizacin de radiacin electromagntica.

-Radiacin

Ionizante - Rayos Gamma -Rayos X - Rayos Ultravioletas

- Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos, dando lugar a mutaciones en los microorganismos que los incapacitan metablicamente para producir una enzima esencial y sobreviniendo la muerte bacteriana. - Las radiaciones tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos.

- Su empleo est basado en los conocimientos sobre la energa atmica. - Este tipo de esterilizacin se aplica a productos o materiales termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar antibiticos, vacunas, alimentos, etc.

Penetran bien, pero requieren mucha energa, son pocos operativos para su empleo masivo, su uso es muy costoso, por lo tanto son muy poco usados con fines de esterilizacin

-Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. -El ADN absorbe una longitud de onda de 2600 y libera energa ocasionado re-arreglo de enlaces qumicos son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos.

- La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. - Su usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas. - Este mtodo es til para identificar microorganismos en muestras de agua potable y otras sustancias.

- Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. - En este tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz.

-Tienen

una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao de la partcula. - Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriz del filtro debido a efectos electrostticos.

-Son

pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. - Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro.

-Es

un mtodo por el cual los microorganismos son eliminados de depsitos hdricos. -Se fundamenta en el hecho de que la densidad de muchas bacterias es algo mayor de 1.0; en consecuencia, se depositan en el fondo del recipiente que las contiene quedando el lquido sobrenadamente no estril del todo, pero su poblacin microbiana disminuye notablemente. -En el laboratorio la sedimentacin se acelera por centrifugacin. Es utilizado este mtodo para identificar microorganismos en muestras de agua potable y otras sustancias.

Un agente antimicrobiano es un compuesto qumico, natural o sinttico, que mata o inhibe el crecimiento de los microorganismos. -Los agentes que matan microorganismos se denominan: Bactericidas, Fungicidas y Virucidas - Los agentes que no matan pero inhiben el crecimiento se denominan: Bacteriostticos, Fungistticos y Virustticos Los agentes antimicrobianos varan con respecto a su toxicidad selectiva.
-

Concentracin mnima inhibidora Difusin en agar

-Es

un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos,etc. -Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. -Destruye todos los microorganismos incluso virus; es un agente microbiano de amplio espectro, destruye la bacteria en estado vegetativo, incluyendo al bacilo de la tuberculosis, las esporas y los virus.

-Son

agentes alquilantes que actan sobre las protenas, provocando una modificacin irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas.

Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos. - Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico, goma, vidrio, metal, etc.
-

-Se

utilizan las pastillas de para formaldehido, las cuales pueden disponerse en el fondo de una caja envueltas en gasa o algodn, que despus pueden ser expuesta al calor para una rpida esterilizacin (accin del gas formaldehido). -Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, que son cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc. - Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.

-Es

proceso de esterilizacin a baja temperatura la cual consta en la transmisin de perxido de hidrgeno en fase plasma (estado entre lquido y gas), que ejerce la accin biocida.

No deja ningn residuo txico. Se convierte en agua y oxgeno al final del proceso. El material no precisa aireacin. El ciclo de esterilizacin dura entre 54 y 75 minutos.

No se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa, algodn, lquidos, humedad, madera o instrumental con lmenes largos y estrechos. Es el mtodo de esterilizacin ms caro de entre los descritos.

-Los

agentes qumicos esterilizantes que destruyen patgenos suelen denominarse desinfectantes, los cuales en su gran mayora son txicos para el ser humano; sin embargo, son tiles para destruir microorganismos en el medio humano o animal. Los agentes desinfectantes que pueden aplicarse tpicamente en la superficie corporal se les designa con el nombre de antisptico.

Alcoholes Iodo Agente catinicos, aninicos y anfteros rganos Mercuriales Desinfectantes y/o Esterilizantes

Cloro y compuestos clorados Aldehdos Oxido de Etileno Compuestos Fenlicos cidos y lcalis

Antispticos

Colorantes

-Es

el proceso de destruccin de los agentes infecciosos. No es una esterilizacin. Un desinfectante es la leja, por ejemplo, que mata las formas vegetativas de los microorganismos, pero no necesariamente sus formas de resistencia o esporas. Puede distinguirse de desinfeccin de alto nivel, que supone la destruccin de todas las formas vegetativas (pero no necesariamente las esporas) y la de nivel medio, que alcanza a Mycobacterium tuberculosis, pero no a algunos virus y hongos, ni tampoco a las esporas. - Por debajo de este criterio se habla de desinfeccin de bajo nivel.

-Procede

de sepsis, que significa putrefaccin por desnaturalizacin de protenas. En una herida infectada crecen microorganismos y en ese momento comienza la sepsis. Cuando se extiende por todo el cuerpo, es grave, y la persona muere. Se llama septicemia. La persona se pudre. - Un antisptico es un compuesto que evita la sepsis. Es un agente antimicrobiano con toxicidad baja que puede utilizarse sobre los tejidos o tpicamente, como el betadine.

FENOL Y SUS DERIVAROS

CRESOLES

HEXACLOROFENO

Es un producto tambin llamado cido carblico, es completamente toxico para los tejidos, es corrosivo y de olor desagradable.

Se obtienen de la destilacin del carbn. Se pueden mezclar con jabones sin perder su efectividad germicida

Es eficaz contra estafilococos y estreptococos, se puede mezclar con jabones, no es irritante para la piel y deja una pelcula protectora en la piel despus de su aplicacin.

-El

mtodo oficial para evaluar un desinfectante es el mtodo de coeficiente de fenol. Este mtodo compara la eficacia de los desinfectantes a probar contra la del fenol para cepas bacterianas de Salmonella Typhi, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa.

-Todas las soluciones deben ser preparadas por personal especializado y en un ambiente adecuado. -Las soluciones de desinfectantes deben ser estriles y manipularse aspticamente. -Los frascos deben ser de vidrio con tapn antirreflujo, debidamente esterilizado antes de introducir la solucin. -Los tapones de corcho no deben utilizarse, pues son permeables a los grmenes. -Todos los frascos debern ser debidamente identificados en su superficie.