ESPECTROFOTOMETRA La espectrofotometra se refiere a mtodos cuantitativos de anlisis qumico que utilizan la luz para medir la concentracin de las sustancias

qumicas. Se conocen como espectrofotometra de adsorcin visible (colorimetra), ultravioleta, infrarroja. La espectrofotometra se basa en principios colorimtricos y comnmente se usa para medir la concentracin de dixido de azufre. En este proceso, los colorantes y productos qumicos se combinan con una solucin que contienen dixido de azufre. El color de la solucin da lugar a diferentes cantidades de luz absorbida . La cantidad de luz absorbida, medida con un espectrofotmetro, indica la cantidad de dixido de azufre. LEY DE BOURGUER-LAMBERT-BEER Bourguer, Lambert y Beer establecieron relaciones de la variacin de la intensidad de luz transmitida por una muestra con el espesor o con la concentracin de ella, para materiales translcidos. Estas relaciones se conocen como la ley de Bourguer-Lambert-Beer. O la ley general de la espectrofotometra que permite hallar la concentracin de una especie qumica a partir de la medida de la intensidad de luz adsorbida por la muestra. Esta ley se puede expresar en trminos de potencia de luz o de intensidad de luz, asumiendo luz monocromtica, como It/Io= 10 -abc . It es la intensidad de la luz transmitida, Io es la intensidad de luz que proviene de la fuente, a el coeficiente de absortividad molar , b la longitud de trayectoria del haz a travs de la muestra. La relacin It/Io se conoce como transmitancia T , y es la medida primaria que se realiza en los instrumentos para medir la absorcin de luz por parte de una muestra. Normalmente se expresa en forma porcentual y se llama porcentaje de transmitancia. La luz adsorbida sera la diferencia entre la intensidad de luz incidente y la intensidad transmitida despus de pasar a travs de la muestra. Cuando se toma el logaritmo decimal negativo de la relacin It/Io , entonces: -log It/Io = - log T relacin que representa la cantidad de luz adsorbida por la muestra . Esta relacin recibe el nombre de absorbancia y se designa por A. Obsrvese que a diferencia de la transmitancia, la absorbancia aumenta a medida que aumenta la atenuacin del haz.

La ley de Bouguer-Lambert-Beer se puede escribir de las siguientes formas:

It/Io== 10 -abC -log T = -abC -log T = A= abC Donde C es la concentracin del soluto , a el coeficiente de absortividad molar y b la absorbancia es adimensional. El coeficiente de absortividad molar es funcin de la longitud de onda, el ndice de refraccin de la solucin y es caracterstico de cada sistema solutosolvente ,e s una propiedad intensiva, no depende de la concentracin y representa la absorcin de luz por mol de soluto para una longitud de onda. Al no conocer el peso molecular de la sustancia de ley de Beer se puede expresar como: A=abC Donde a el coeficiente de absortividad molar y sus unidades depende de las unidades de concentracin utilizadas , que pueden estar en g/L o g/lOOmL. A continuacin est la representacin de la ley de Beer:

El registro de la variacin del coeficiente de absortividad molar, o de absorbancia , o de transmitancia, en funcin de la longitud de onda da origen al espectro o curva espectral que indica las caractersticas de adsorcin de la sustancia con relacin a la longitud de onda. En ocasiones el espectro de absorcin ,o en funcin de la transmitancia, llamndose el espectro de transmisin . Se igual forma cuando se registra la emisin de radiacin los espectros se denominan espectros de emisin o espectros de fluorescencia FUNDAMENTOS DE ESPECTROFOTOMETRA La radiacin Electromagntica y su Interaccin con la Materia: Los modelos explicativos de la estructura de la materia que tienen como fundamento las caractersticas ondulatorias de las partculas que la constituyen proporcionan un marco de referencia para describir las interacciones entre la radiacin electromagntica y la materia. Estas interacciones son el fundamento de las aplicaciones espectroscpicas. En algn medio material la interaccin entre los campos elctricos y magnticos que existen en la materia y los correspondientes de la radiacin pueden llegar a reducir esa velocidad de propagacin, por ello slo en el vaco se observa la velocidad mxima. Si asignamos una longitud de onda caracterstica a cada tipo de radiacin, la propagacin de esa onda se har con una frecuencia tal que al multiplicarla por su longitud debe darnos la velocidad de propagacin. Esto es c = Pv, donde P es la longitud de onda y v es la frecuencia de esa onda. c O 2y99792458E8 m*s-l es la velocidad de luz en el vaco. La energa asociada con cada onda, se obtienen mediante la ecuacin de Plank: E = hv

Absorcin y Emisin de radiacin por Parte de la Materia: Una descripcin simple de la estructura de la materia permita explicar los enlaces entre los tomos para formar molculas en trminos de la localizacin de ciertas partculas subatmicas. Estas partculas evidencian sus caractersticas ondulatorias ya que interactan con la radiacin electromagntica. La molcula en forma estable bajo las condiciones ambientales corrientes se encuentra en un determinado nivel energtico. Si la se logra hacer incidir sobre la molcula un fotn de radiacin electromagntica con energa apropiada, la molcula aumenta su contenido energtico absorbiendo el fotn. Entonces la molcula pasa a un estado excitado. La molcula energizada se encuentra en un estado que no es estable en condiciones ambientales corrientes y regresa a la condicin estable y para lograrlo emite un fotn con la energa que logr excitarla antes.

MEDIDA DE LA TRANSMITANCIA Y LA ABSORTIVIDAD Las medidas se realizan por medio de distintos tipos de instrumentos de espectroscopia ptica como: La espectroscopia de emisin, espectroscopia de absorcin y la espectroscopia de fluorescencia y dispersin. En muchos instrumentos, el dispositivo de lectura consiste en una escala lineal calibrada en unidades de O a 100% T . Con este tipo de instrumentos una medida de transmitancia se hace 3 pasos, Primero mientras est interrumpida la incidencia del haz luminoso sobre el transductor por medio de un obturador, se realiza un ajuste elctrico hasta que la aguja del dispositivo de lectura marque 0; este paso se denomina ajuste de la corriente obscura o T 0% . A continuacin se hace un ajuste a T 100% , con el obturador abierto y la celda con el disolvente colocada en la trayectoria del haz. Por ltimo, se sustituye la celda con el disolvente por la celda que contiene la muestra. Tambin se puede construir una escala de absorbancia. EQUIPOS Y MTODOS UTILIZADOS PARA EL ESTUDIO DE LA E8PECTROFOTOMETRA

Los instrumentos espectrofotmetros se dividen dos tipos; simples y de doble haz. .Los espectrofotmetros de un solo haz requieren el intercambio de la muestra y de las soluciones de referencia para cada longitud de onda, por que estn mejor capacitados par ala operacin manual que para la automtica. Un instrumento muy usado principalmente para el rango del visible (de 340 a 625 nm, pudiendo extenderse por el cambio del fororubo a 950nm) es el Spectronic-20 de la Bausch & Lomb . Espectrofotmetros de Ultravioleta: Generalmente los espectrofotmetros para el ultravioleta y el visible tienen como lmite inferior el rango que va de los 165 a los 210nm. El lmite superior nunca es menor de 650 nm, pudiendo extenderse hasta los 1000 nm o ms .Hasta 1963 haba muy pocos instrumentos que llegaran a 210 nm, lmite impuesto principalmente por la absorcin del cuarzo natural. El uso de la slice vtrea de calidad ptima ha abierto grandes posibilidades en la observacin de compuestos que contiene dobles ligaduras y de algunos otros grupos que absorben en esta regin . El primer espectrofotmetro del ultravioleta con deteccin fotoelctrica que apareci en el mercado norteamericano fue el modelo DU de Beackman. Espectrofotmetro de Doble Haz: Una posible fuente de error en cualquier tipo de absorcimetro es le provocada por las fluctuaciones que aparecen en la intensidad de la fuente de radiacin . Las variaciones a corto plazo generalmente resultan de la falta de regulacin en la potencia de la lnea. A largo plazo las variaciones adicionales pueden deberse al deterioro de la lmpara o de otros componentes . Por supuesto cualquier cambio en la intensidad durante la comparacin entre el problema y el tipo, causar un error. La manera ms efectiva de eliminar los efectos derivados de las variaciones de la fuente es el empleo de un diseo de doble haz . La ventaja de este espectrofotmetro es que ofrece cortar la radiacin en una sucesin de pulsos . Por una parte, facilita el diseo de un sistema electrnico que escoja las seales pertenecientes a los dos canales. Por la otra, permite una importante discriminacin de las seales indeseables (ruido) y de la radiacin extraviada no cortada, gracias a que el amplificador puede sintonizarse para que corresponda solamente a las seales moduladas de la frecuencia interrumpida. Espectrofotmetros de Longitud de Onda Dual Es posible disear un instrumento en donde dos haces de radiacin de diferente longitud de onda pasen simultneamente a travs de una sola celda . Este principio se emplea en diferentes formas: 1) Puede utilizarse sin ajuste para medir dos componentes , registrando su variacin con el tiempo para estudios cinticos o para procesos de control .2 ) una longitud de onda puede fijarse en un punto de absorbancia despreciable mientras que la otra sea variada . 3) Puede operarse con la misma configuracin que 2) para dar espectros de absorcin correctos en presencia de una turbidez alta; en este caso la trayectoria de la longitud de onda efectiva es inherentemente incierta debido al efecto de la materia en suspensin, lo que garantiza que la trayectoria de ambos rayos sea la misma. 4) Finalmente , las dos longitudes de onda pueden ser revisadas al mismo tiempo , aunque con un desajuste de unos cuantos dcimos de nanmetro , de modo que el espectrograma resultante muestra la diferencia AA entre las dos absorbancias a las dos longitudes de onda contra la longitud de onda promedio, obtenindose as una curva de derivada.

MTODOS: En la siguiente tabla estn las seales ms comunes que se utilizan con fines analticos. Las primeras 6 corresponden a la emisin de radiacin o a la interaccin de stas con la materia. Las 3 siguientes son elctricas; las 5 finales son de naturaleza variada. Los mtodos gravimtricos y volumtricos se conocen como mtodos clsicos de anlisis y los dems se llaman mtodos instrumentales.

Seal Emisin de radiacin

Mtodos analticos basados en la medicin de la seal. Espectroscopia de emisin (rayos X, ultravioleta, visible), fotometra de llama, fluorescencia, mtodos radioqumicos.

Absorcin de la radiacin Dispersin de radiacin Refraccin de radiacin Difraccin de radiacin Rotacin de radiacin Potencial elctrico Comente elctrica Resistencia elctrica Razn masa a carga Velocidad de reaccin Propiedades trmicas Volumen Masa

Espectrofotometra (rayos X, ultravioleta, radiacin visible, infrarrojo); colorimetra; adsorcin atmica. Turbidimetra, nefelometra, espectroscopia Raman. Refractometra, interferometra. Rayos X, mtodos de difraccin elctrica. Polarimetra, dispersin ptica rotatoria y dicrosmo circular. Potenciometra, cronopotenciometra. Polarografa, amperometra culombimetra Conductimetra. Espectrometra de masa Mtodos cinticos Conductividad trmica y mtodos de entalpia Anlisis volumtrico Anlisis gravimtrico

APLICACIONES FOTMETROS PARA INFRARROJO PARA LA DETERMINACIN RUTINARIA DE CONTAMINANTES ATMOSFRICOS La figura es un diagrama de un fotmetro porttil para infrarrojo que ha sido diseado para la determinacin cuantitativa de rutina de contaminantes orgnicos en la atmsfera. La fuente es una varilla de cermica unida a un alambre de nicromo, y el transductor es un detector piroelctrico. Hay a la disposicin una variedad de filtros de interferencia que transmiten en la regin de 3000 a 75 cm -1 o 3.3 a 13 )^m, cada uno diseado para la determinacin de un compuesto especfico. Los filtros son fcilmente intercambiables. Las muestras gaseosas se introducen a la celda por medio de una bomba operada por batera. La longitud de la trayectoria de la celda como la que se muestra es de 0.5 m; una serie de espejos reflejantes (no se muestran) permiten incrementos en la longitud de la celda a 20.5 m en incrementos de 0.5 m. Esta caracterstica refuerza grandemente el intervalo de concentracin del instrumento. Se tienen pruebas de que el fotmetro es sensible a pocos dcimos de una parte por milln de sustancias como acrilonitrilo, hidrocarburos clorados, monxidos de carbono, fosgeno y cianuro de hidrgeno.

AGRICULTURA: Cuantificacin de macro y micro elementos presentes en suelo, agua y foliar.

ACUACULTURA: Determinacin y cuantificacin de metales traza en agua, sedimentos marinos y dietas. ECOLOGAS: Caracterizacin de metales pesados en diferentes zonas, para determinar o prevenir contaminaciones antropognicas en desarrollos tursticos, industriales y costeros. MINERA: Determinacin de metales, ferroso y no ferrosos as como metales preciosos.

ESPECTROFOTOMETRIA La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo. La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.

MTODOS FOTOMTRICOS DE ANLISIS

1.

NATURALEZA DE LA RADIACIN ELECTROMAGNTICA

La Radiacin Electromagntica es una forma de Energa radiante que se propaga en forma de ondas. En este fenmeno ondulatorio se define: a) b) c) Longitud de onda (P): es la distancia entre dos mximos de un ciclo completo del movimiento ondulatorio. Se expresa, segn el S.I. en nanmetros (nm) y sus equivalencias son: 1nm = 1mQ =10 A0 = 10-9 m. Frecuencia (R): es el nmero de ciclos por segundo. Es inversa a la longitud de onda. Su frmula es: R = c/P, y se mide en ciclos por segundo o hertzios. Fotones: la luz est formada por fotones, y estos son paquetes discontinuos de E. La E de un fotn depende de la frecuencia y de la longitud de onda, segn la siguiente expresin: E = h x R = h x c/R (h = Cte. de Planck = 6,62.10-27erg/seg.). La Energa Electromagntica se mide el Ergios. La relacin entre la longitud de onda y la Energa es inversa, por lo tanto a menor longitud de onda mayor Energa y viceversa. Espectro Electromagntico: cubre un amplio intervalo de E radiante, desde los rayos K de longitud de onda corta hasta las ondas de radio, de longitud de onda larga. Se divide en varias regiones, las ms interesantes para nosotros son: Regin Ultravioleta: P = 10-380 nm Regin Visible: P = 380-780 nm Regin Infrarroja: P = 780-30.000 nm En la Regin Visible, la luz se descompone en colores. La luz blanca contiene todo el espectro de longitudes de onda. Si interacciona con una molcula puede ser dispersada o absorbida.

d)

y y y

2. A.

FENMENOS DE INTERACCIN ENTRE LUZ Y MATERIA FENMENO DE ABSORCIN

Cuando una partcula que se encuentra en estado de reposo o estado fundamental interacciona con un haz de luz, absorbe E y se transforma en una partcula en estado excitado. La molcula absorbe la E de la onda y aumenta su energa, y ese aumento de energa es igual a la E de la Radiacin Electromagntica absorbida (E = h.R). La partcula en estado excitado tiende a volver de forma espontnea a su estado de reposo desprendiendo la E absorbida en forma de calor. Espectro de Absorcin. Cada especie absorbente, que recibe el nombre de cromgeno, tiene un determinado espectro de absorcin. El espectro de absorcin es un grfico donde se representa en ordenadas la Absorbancia y en abcisas la longitud de onda. La medida de la cantidad de luz absorbida por una solucin es el fundamento de la espectrofotometra de absorcin. Por eso es importante trabajar a la longitud de onda a la que la sustancia estudiada absorbe la mayor cantidad de luz (a mayor cantidad de luz, mayor cantidad de sustancia). FENMENO DE EMISIN Algunos compuestos, tras ser excitados por la luz, vuelven al estado fundamental produciendo la emisin de energa radiante. En este caso, lo que se mide es la energa emitida y, en este fenmeno se basa la fotometra de llama o la fluorescencia. Cuando un haz de luz pasa a 3. LEYES DE ABSORCIN travs de un medio, se registra una cierta prdida de intensidad, debido a la absorcin por parte de la sustancia. Se llama TRANSMITANCIA (T) a la relacin entre la luz incidente y la luz transmitida: T = Is / I0 ; %T = (Is / I0 ) x 100. Se puede perder intensidad por la interaccin con la cubeta o el solvente. Para evitar este error se hace una primera medida con una solucin de referencia o BLANCO, que contiene todos los posibles compuestos que intervienen en la lectura menos el que vamos a medir. Todas las medidas que se hagan con posterioridad sern referidas a esta medida inicial y se harn en la misma cubeta que se utiliz en la medida del blanco. La Transmitancia se usa poco, se emplea ms la Absorbancia (A) porque la relacin entre A y la concentracin de una solucin es directamente proporcional y la de la T es inversamente proporcional. La relacin entre la absorbancia y la transmitancia es la siguiente: Si el %T = 100 Si el %T = 0 A = 2-log T = 2-log 100 = 0 A = 2-log 0 = g

En los aparatos que se usan actualmente se presentan absorbancias, pero el aparato lo que mide realmente es %T que luego transforma a absorbancia. 3.1. LEY DE BEER La absorbancia de una solucin es directamente proporcional ala concentracin y a la longitud del paso de la luz. A = I . b. c Siendo: A: absorbancia. No tiene unidades. I: el coeficiente de extincin molar, tambin llamado coeficiente de absorcin. Es constante para un compuesto dado siempre que se fijen condiciones de longitud de onda, de pH, de temperatura, de solventes, etc. Sus unidades son 1/ (mol/cm).

b: es la longitud de paso de la luz, en cm. c: es la concentracin del absorbente. Se mide en mol/L.

La aplicacin prctica de la Ley de Beer es, que conociendo la absorbancia de una sustancia podemos averiguar su concentracin y esto lo podemos hacer de dos formas: 1. 2. Por comparacin con una solucin conocida: si tenemos 2 soluciones, una problema (P) y una estndar (S), podemos establecer la siguiente relacin matemtica entre ellas: A travs de una curva de calibracin: la curva de calibracin es la representacin grfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas) frente a la Concentracin (eje de abcisas). Se ensayan varias soluciones de concentracin conocida y se determinan sus A, construyndose la curva de calibrado, que es una recta. Una vez ensayadas las soluciones problemas, su concentracin se averigua por interpolacin de las A de las soluciones problema en la curva de calibracin. Hay que tener en cuenta la LINEALIDAD, que es el intervalo de concentraciones del cromgeno entre las cuales existe una relacin lineal entre Absorbancia y Concentracin. Cuando la concentracin del cromgeno sobrepasa los lmites de linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer, convirtindose la recta en una curva. La lectura de la Absorbancia fuera de los lmites de linealidad se traduce en una concentracin falsamente baja de cromgeno. En esta situacin, hay que diluir la muestra para que su concentracin entre en los lmites de la linealidad. y Empleo de los Factores de Calibracin: Para reactivos estables y sistemas fotomtricos estables, este factor se puede mantener constante, siendo slo necesario ensayar las muestras problema multiplicando la A resultante por el factor F. 4. ESPECTROFOTMETRO Se distinguen dos tipos de aparatos: y Fotmetro o Colormetro: se caracterizan porque utilizan filtros que solo permiten el paso de una determinada longitud de onda. y Espectrofotmetros: utilizan cromadores. Con ellos se obtiene un haz de luz monocromtico cuya longitud de onda se vara a voluntad. Los monocromadores pueden ser de dos tipos: prismas y redes de difraccin. Monocromador de Prisma

2.2.

COMPONENTES DEL ESPECTROFOTMETRO 1. Fuente de luz: proporciona energa radiante en forma de luz visible o no visible.

y -

Tipos de lmparas: Lmparas de filamento de tungsteno: se utilizan para longitudes de onda del espectro visible y el ultravioleta prximo. Son fuentes de un espectro continuo de energa radiante entre 360-950 nm. Lmparas de filamentos de haluros de tungsteno: son de mayor duracin y emiten energa radiante de mayor intensidad. Lmparas de Hidrgeno y Deuterio: producen un espectro continuo en la regin ultravioleta entre 220-360 nm. Lmparas de vapores de Mercurio: Emiten un espectro discontinuo o espectro de lneas que se utilizan para calibracin de longitudes de onda, se emplean solo para espectrofotmetros y cromatografa HPLC. y Precauciones: - Las subidas y bajadas bruscas de tensin producen sufrimiento de la lmpara y cambios en las lecturas de la Absorbancia. - La lmpara tiene una vitalidad limitada y se debe vigilar para que funcione bien el aparato. (03/10/01)

2. Rendija de entrada: tiene como funcin reducir al mximo la luz difusa y evitar que la luz dispersa entre en el sistema de seleccin de longitud de onda. 3. Monocromadores. Pueden ser: Prismas: son fragmentos con forma de cua de un material que permite el paso de la luz. Ej. De vidrio para trabajar en el espectro visible o cuarzo para trabajar en el ultravioleta lejano. Redes de difraccin: son un gran nmero de lneas paralelas situadas a distancias iguales entre s y son hendiduras sobre un vidrio o una superficie metlica. Cada una de estas hendiduras se comporta como un pequeo prisma. 4. Rendija de salida: tiene como funcin impedir que la luz difusa atraviese la cubeta de la muestra, que provocara desviaciones a la Ley de Beer. (04/10/01) 5. Cubeta: es el recipiente donde se coloca la muestra para la medicin. Pueden ser de distintos tipos y tamaos (cuadradas, rectangulares, redondas). Se obtienen mejores resultados usando cubetas de bordes paralelos. Si se utilizan cubetas redondas se deben marcar e introducir en el aparato siempre en la misma posicin. Suelen estar fabricadas en vidrio o en plstico. 6. Detector. Puede ser de dos tipos: y Fotoclulas o clulas fotovoltaicas: Es una lmina de Cobre sobre la que se extiende una capa de Selenio o de xido de Cobre. A sto se le conoce como semiconductor. Sobre el semiconductor hay una capa de metal transparente que sirve de electrodo. La luz incide sobre el Selenio y ste desprende electrones, que pasan a la placa de Cobre originando una diferencia de potencial por existir carga negativa sobre el Cobre y positiva sobre el Selenio. El conjunto se conecta a un ampermetro que seala el paso de corriente. Caractersticas: son resistentes; econmicas; sensibles desde el ultravioleta hasta los 1.000 nm. de longitud de onda; no se requiere batera externa, ni vaco,...; la corriente producida es directamente proporcional a la Energa que llega y tienen efecto fatiga, es decir, que presentan una subida inicial de corriente, que luego decrece progresivamente hasta el equilibrio. Por eso hay que esperar entre 30-60 segundos entre una lectura y otra. y Fototubos multiplicadores: Un fototubo multiplicador es un tubo que contiene un ctodo que emite electrones de forma proporcional a la Energa que incide sobre l. Tiene un nodo que recoge los electrones y la corriente se multiplica varias veces al chocar los electrones sobre sucesivos nodos que van teniendo un voltaje superior al precedente. La seal se amplifica en cientos o miles de veces. Caractersticas: el tiempo de respuesta es muy rpido, no tienen efecto fatiga tan altos como la anterior y son muy sensibles. 7. Medidor: son sistemas de lectura de la Energa elctrica que recoge el detector y que puede ser lectura directa (se utiliza una clula fotovoltaica) o puede ser amplificadores de seal como en el caso del fototubo multiplicador. Los actuales aparatos incorporan lectura digital y clculos automticos de concentraciones con relacin a las curvas de calibracin. 4.2 TIPOS DE APARATOS  ESPECTROFOTMETRO DE HAZ SIMPLE: es igual que la descripcin dada para el espectrofotmetro en general. Consta de los mismos elementos (Ej. Bilirrubinmetro: para determinar bilirrubina directa en capilar). ESPECTROFOTMETRO DE DOBLE HAZ EN EL ESPACIO: todos los componentes estn duplicados, menos la lmpara y el medidor. Dos haces de luz pasan al mismo tiempo por los distintos componentes separados en el espacio. Esto compensa las variaciones de intensidad de luz y de absorbancia.

ESPECTROFOTMETRO DE HAZ DOBLE EN EL TIEMPO: utilizan los mismos componentes que el espectrofotmetro de haz simple. Dos haces de luz pasan por los mismos componentes pero no al mismo tiempo. Emplean un Chopper consistente en un interruptor rotativo del haz luminoso colocado a continuacin de la rendija de salida. Un sistema de espejos dirige la porcin de luz reflejada por el chopper a travs de una cubeta de referencia

y de ah al detector comn. El detector lee alternativamente el haz procedente de la muestra y el de la cubeta de referencia. Esto compensa la variacin de energa radiante