UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIAPAS FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS CAMPUS IV

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
PRCTICA No. 11

TINCION ACIDO ALCOHOL RESISTENTE ZIEHL-NEELSEN

EQUIPO No. 1
INTEGRANTES: KORINA ALAMILLA CAMACHO ARELI NOEM GLVEZ CRUZ CARLOS C. GOMEZ MORENO BENJAMN HERNNDEZ FERNNDEZ NALLELI VELAZQUEZ REYES

4to. SEMESTRE

GRUPO: B

CARRERA: QUMICO-FARMACOBILOGO

CATEDRTICO: M.E. JOS LUIS INCHAUSTEGUI ARIAS

TAPACHULA DE CRDOVA Y ORDEZ, CHIAPAS. NOV. 2007

NDICE
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PGINAS INTRODUCCIN............................................................................3 OBJETIVOS.....................................................................................4 MATERIAL......................................................................................5 MTODOS Y TCNICAS..............................................................5 ESQUEMAS......................................................................................6 CUESTIONARIO..............................................................................7 OBSERVACIONES..........................................................................10 BIBLIOGRAFA...............................................................................10

INTRODUCCIN Las bacterias son prcticamente transparentes (hialinas), por ello no es recomendable su estudio mediante la observacin de suspensiones de clulas en agua o tampones. El empleo de colorantes biolgicos permite aumentar el contraste entre la clula bacteriana y el medio ambiente y a travs del empleo de tcnicas especiales, es posible distinguir algunos de los constituyentes celulares ms importantes. Cualquiera sea el procedimiento de tincin, ste produce la muerte de la clula y en cierto modo la alteracin de la estructura fsica de la bacteria. A pesar de los inconvenientes mencionados, las tinciones prestan una gran utilidad en el estudio e identificacin de las especies bacterianas. Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistentes. Se ha desarrollado una coloracin de cido-alcohol resistencia modificada que diferencia las especies de Nocardia (bacterias ramificadas filamentosas cuyas paredes celulares contienen cidos-grasos de unos 50 tomos de carbono), de los actinomiceos (muy semejantes pero no cido-alcohol resistentes). Nocardia spp son decoloradas por la mezcla cido-alcohol estndar pero no por un tratamiento ms suave con cido sulfrico 0,5 a 1%. Estos microorganismos se denominan cido-alcohol resistentes parciales o dbiles. La Tincin de Ziehl-Neelsen. ha sido especialmente diseada para identificar las bacterias cido-alcohol resistentes, entre las que podemos sealar Mycobacterium tuberculosis y M. marinum y los paracitos coccdeos como Cryptosporidium.. Cuando se examina muestras de esputo u otras lesiones en donde estas bacterias se encuentran, al microscopio, previa coloracin de los extendidos, su caracterstica principal es su cido-alcohol resistencia (AAR) ya que son

difciles de teir con fucsina pero una vez teidos resisten a la decoloracin con alcohol-cido. En la mayor parte del mundo, el examen microscpico directo para la deteccin de bacilos cido-resistentes (baciloscopa de BAAR) es la herramienta primaria para el diagnstico y el control de tuberculosis (TBC). La baciloscopa directa de muestras pulmonares, realizada mediante la tcnica de Ziehl Neelsen, es efectiva para detectar los casos de TBC, evaluar la respuesta al tratamiento y para monitorear las tasas de curacin. Como un componente crucial del control de TBC, el examen microscpico directo de BAAR debe ser realizado utilizando mtodos estandariazados para determinar y reportar con precisin si un paciente es baciloscopa positiva o negativa. Para que esta prueba diagnstica sea accesible, debe ser realizada en muchos laboratorios perifricos urbanos y rurales.

OBJETIVOS Se aprender a manejar el material de muestra para teir por el mtodo de z-n. El alumno cojera destreza en el manejo de los colorantes y procedimientos de la tcnica. El alumno diferenciara y observara microorganismos acido-alcohol resistente. El alumno observara las caractersticas morfolgicas y tintoriales de los microorganismos acido- alcohol resistentes.

MATERIAL MUESTRA DE EXPECTORACIN MUESTRAS PROPORCIONADAS POR EL PROFESOR ASAS MICROBIOLOGICAS APLICADORES DE MADERA PORTAOBJETOS LIMPIOS MECHEROS DE BUNSEN SOLUCION SALINA ISOTNICA JUEGO DE COLORANTES DE ZIEHL-NEELSEN. CRONOMETRO MICROSCOPIO ACEITE DE INMERSIN PREPARACIN PERMANENTES PROPORCIONADAS POR EL PROFESOR O VINCULACION FRASCO AMBAR XILOL O FENOL PINZAS

METODOS Y TECNICAS

1. OBSERVARA LAS MORFOLOGAS TINTORIALES DE LOS BAAR, Y EL MANEJO DEL MATERIAL QUE EL PROFESOR EXPLIQUE.

ESQUEMAS Y DIAGRAMAS

Fijacin

Fuschina

alcohol-cido

Azul de metileno

frotis teido

CUESTIONARIO 1. POR QU ES IMPORTANTE LA TINCION Z-N? Porque es un mtodo muy til en el diagnostico medico ya que establece la distincin entre los bacilos acidorresistentes y los no acidorresistentes 2. EXPLIQUE EL FUNDAMENTO DE LA TINCION DE Z-N.? Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistente. 3. QUIN FUE ROBERTO KOCH? Roberto Koch: Descubri que el genero Mycobacterum son bacilos que en algn momento de su ciclo biolgico tienen la propiedad de ser acidoalcohol resistentes (AAR). Esta propiedad es debido a la presencia en la superficie de la membrana en unos compuestos lipdicos nicos denominados micolicus.(usualmente se encuentran en el genero mycobacterium). 4. ESCRIBA LAS ESTRUCTURAS QUMICAS DE LOS COLORANTES QUE SE UTILIZAN EN LA TINCION DE Z-N.?
CH3 N H3C N S
+

CH3 N CH3

5. QU ES LA EXPECTORACIN? Es la Expulsin de moco, esputo o lquido desde la trquea o los pulmones por la tos o el carraspeo.

6. ESCRIBA LA FORMULA DEL ACIDO MICLICO?

R1 HO R2 O
-

H H O

R1 y R2 son cidos grasos de cadena larga 7. EXPLIQUE Y ESQUEMATICE LA ESTRUCTURA DE LOS

MICROORGANISMOS ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES? Bacterias cido alcohol resistentes y bacterias relacionadas

(mycobacteria, nocardia y corynebacteria). Las envolturas celulares de estos organismos son considerablemente ms complejos que otras bacterias. Los cidos miclicos (cidos grasos largos y ramificados) estn covalentemente unidos al peptidoglicano, va un polisacrido. Otros compuestos conteniendo cido miclico y ms lpidos complejos forman una capa laminada, membranosa y cerosa por fuera de la capa de peptidoglicano. Sntesis de las macromolculas de la envoltura celular. El peptidoglicano (Figuras 4 y 5): La subunidad precursora (el muramil pentapeptido unido a uridina difosfato, UDP) se sintetiza en el citoplasma y atraviesa la membrana celular. La subunidad es enzimticamente movilizada desde el nucletido hasta el lpido acarreador (undecaprenol/bactoprenol) y ensamblado en una subunidad completa (pentapptido disacrido unido a un puente peptdico). Las subunidades completas entonces son exportadas hacia la pared celular. Despus de haberse liberado el monmero de undecaprenol, este es recirculado a la membrana celular y puede ser usado de nuevo. Los esqueletos de glicano de la pared celular existente, se rompen enzimaticamente (por autolisinas) para permitir la insercin de subunidades 8

sintetizadas de novo. Si estas enzimas estn sobre-activadas, la pared celular resulta degradada y la presin osmtica alta de la clula revienta a la membrana citoplsmica, produciendo la muerte de la clula (autolisis). Las uniones por entrecruzamiento de las cadenas peptdicas laterales de la subunidad de peptidoglicano insertada a la cadena existente se llevan a cabo enzimaticamente (intervienen protenas de unin a penicilina). Las subunidades completas de los cidos teicicos y teicurnicos tambin se sintetizan en la membrana celular (en acarreadores lipdicos) antes de su transporte e insercin a la pared celular pre-existente.

8. QU PADECIMIENTOS PROVOCAN LAS MICOBACTERIAS? Tuberculosis, lepra estas dentro de las mas dainas y patgenas. 9. EN QUE OTRO TIPO DE TINCION DE Z-N.? Esputo, lavados bronquiales, drenaje purulento de tractos subcutneos, aspiracin transtraqueal, heridas cutneas. MUESTRAS PODEMOS APLICAR LA

10. QU IMPORTANCIA ACTUAL TIENE EL CONOCIMIENTO DE LA TINCION DE Z-N.? Nos ayuda a identificar el microorganismo causante de la tuberculosis y otros microorganismos alcohol resistentes

OBSERVACIONES: Se realiz un simulacro con la tcnica de esta tincin debido a que los microorganismos de Mycobacterium son muy patgenos, esto como medida de seguridad debido a que no contamos con la experiencia necesaria para trabajar con ellos y corramos el riesgo de contraer alguna enfermedad. BIBLIOGRAFA: Microbiologia. Adrian n.c.delaat. Editorial.interamericana. Segunda edicin Mxico, d,f. 1983.

Http://agronomia.uchile.cl/webcursos/microbiologiagral/pagina %20microbiologia1/word/guia_lab_07_(1).doc Madigan michael t. Martinko john m. Parker joek. Biologa de los microorganismos. Pearson prentice hall. Madrid espaa.2004 10 edicin.

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