PROTEO DE ALGODO CONTRA Colletotrichum gossypii E Colletotrichum gossypii var.

cephalosporioides POR EXTRATOS AQUOSOS DE PLANTAS MEDICINAIS E DE ESPCIES FLORESTAIS Berenice Teodosio dos Santos 1, Solange Maria Bonaldo2,Cerezo Cavalcante Bulhes1. Graduandos em Agronomia da Universidade Federal de Mato Grosso UFMT/Campus Sinop. 2 Professora Doutora da Universidade Federal de Mato Grosso UFMT/Campus Sinop. Instituto de Cincias Agrrias e Ambientais ICAA. Avenida Alexandre Ferronato, 1.200, Reserva 35, Distrito Industrial, Cep: 78.557-267, Sinop, MT Brasil. (sbonaldo@ufmt.br).
Data de recebimento: 07/10/2011 - Data de aprovao: 14/11/2011

RESUMO O presente trabalho teve por objetivo avaliar o efeito protetor de extratos brutos aquosos das plantas medicinais arruda (Ruta graveolens), carqueja (Baccharis trimera), manjerona (Origanum majorana) e, das espcies florestais, eucalipto (Corymbia citriodora) e angelim (Parkia pendula) na proteo de algodo contra Colletotrichum gossypii e no controle curativo de ramulose (C. gossypii var. cephalosporioides) em campo. Para verificar o efeito protetor dos extratos brutos aquosos contra C. gossypii, folhas destacadas de algodo das cultivares LDCV03 e LDCV 22 foram tratadas com os extratos na concentrao de 25%. gua destilada esterilizada foi utilizada como controle. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado, com cinco repeties. Aps 24 horas do tratamento indutor as folhas foram inoculadas com uma suspenso de C. gossypii (2,0x105 condios.mL-1) e mantidas em cmara mida por 24 horas/fotoperodo. A doena foi avaliada pela contagem das leses nas folhas, sendo realizadas sete avaliaes. Na avaliao do efeito protetor em campo, plantas das cultivares LDCV03 e LDCV22 foram tratadas com os extratos brutos aquosos a 25% aps o surgimento dos primeiros sintomas de ramulose. As avaliaes iniciaram-se logo aps o tratamento curativo. Foram realizadas seis avaliaes da doena para obteno da rea Abaixo da Curva de Progresso da Doena (AACPD). No controle de antracnose em folhas destacadas, o extrato aquoso de arruda no foi efetivo no controle da doena nas cultivares avaliadas. Enquanto que os demais extratos reduziram a doena. No controle da ramulose a campo, nas cultivares LDCV03 e LDCV22, todos os extratos testados no apresentaram diferena significativa em relao testemunha, PALAVRAS-CHAVE: Antracnose, controle alternativo, extratos aquosos. PROTECTION OF COTTON AGAINST Colletotrichum gossypii AND Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides BY AQUEOUS EXTRACTS OF MEDICINAL PLANTS AND FOREST SPECIES

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ABSTRACT This study aimed to evaluate the protective effect of aqueous extracts of medicinal plants rue (Ruta graveolens), broom (Baccharis trimera), marjoram (Origanum majorana), and forest species, eucalyptus (Corymbia citriodora) and angelim (Parkia pendula) to protect cotton against Colletotrichum gossypii and control C. gossypii var. cephalosporioides in the field. To verify the protective effect of aqueous extracts from C. gossypii, detached leaves of cotton cultivars LDCV03 and LDCV22 were treated with the extracts at a concentration of 25%. Sterile distilled water was used as control. The design was completely randomized, with five repetitions. After 24 hours of treatment induces the leaves were inoculated with a suspension of C. gossypii (2.0 x105 condios.mL-1) and kept in a moist chamber for 24 hours/photoperiod. The disease was assessed by counting the lesions on the leaves, seven assessments being carried out. In evaluating the protective effect on the field and plantlets of LDCV03 and LDCV22 were treated with aqueous extracts of 25% after the onset of symptoms of ramulosis. The assessments began after curative treatment. Six evaluations were conducted of the disease to obtain the Area Under Disease Progress Curve (AUDPC). In the control of anthracnose in detached leaves, the aqueous extract of rue was not effective in controlling the disease in cultivars. While the others extracts reduced the disease. In the control of ramulosis in field, with LDCV22 and LDCV03 cultivars, all the extracts tested showed no significant difference compared to control. KEYWORDS: Anthracnose, alternative control. INTRODUO Entres as perdas ocasionadas pelos danos de pragas, plantas daninhas e doenas que acatam a cultura do algodoeiro, as doenas so consideradas uma das causas de grandes perdas na cultura do algodo em todas as regies produtoras, principalmente na regio do Cerrado, isso ocorre devido s condies ambientais que so amplamente favorveis ao desenvolvimento dos principais patgenos que afetam a cultura. Ultimamente, observa-se alta incidncia de doenas, inclusive daquelas consideradas, at ento, de pouca importncia nas regies tradicionalmente produtoras (SIQUERI, 2001). De acordo com CIA e SALGADO (2005) so relatados pelo menos 250 patgenos na cultura do algodoeiro, dos quais 90% so fungos, alm de 16 estirpes de vrus, dois micoplasmas, 10 nematides e uma bactria. O algodoeiro atacado durante todo seu ciclo por vrias doenas fngicas, que podem causar prejuzos tanto nos aspectos quantitativos como qualitativos da fibra e da semente. A maioria das doenas de importncia econmica que ocorrem na cultura do algodo causada por patgenos que so transmitidos via semente, resultando na introduo de doenas em reas novas ou mesmo na sua reintroduo em reas j cultivadas. Dentre as doenas fngicas que atacam a cultura do algodo, a antracnose e a ramulose so consideradas as principais, podendo reduzir o estande de plantas e a produtividade da lavoura de algodo (GOULART, 2001). A antracnose causada pelo fungo por Colletotrichum gossypii, que tem como principal meio de disseminao as sementes de algodo contaminadas ou infectadas pelo fungo (GOULART, 2001). Outros modos de disseminao tambm so importantes, tais como a chuva, o orvalho, a neblina, nevoeiro e o molhamento foliar (VALE e ZAMBOLIM, 1997).
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Os sintomas, nas folhas, so manchas pardas muito limitadas e, no centro dessas manchas, sob condies de alta umidade, desenvolve-se uma colorao rsea constituda por uma massa de esporos do fungo, aglutinados por uma substncia gelatinosa. No caule, as leses so deprimidas, pardoavermelhadas a pardo-escuras. As razes atacadas apresentam leses deprimidas, pardo-avermelhadas a pardo-escuras (VALE e ZAMBOLIM, 1997). A ramulose causada pelo fungo, Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides podendo afetar plantas em qualquer estgio de desenvolvimento. A transmisso ocorre pelas sementes de algodo contaminadas, que so consideradas veculos de maior eficincia na disseminao do mesmo. O fungo afeta vrias espcies do gnero Gossypium, o que garante a sobrevivncia na ausncia da planta, sobrevive em restos culturais depositados no solo. Sua disseminao no campo de cultivo ocorre por meio de respingos de chuva, que liberam os esporos do fungo de uma substncia mucilaginosa que os mantm agregados. Condies climticas de alta precipitao pluviomtrica e alta umidade relativa do ar favorecem a ocorrncia desta doena (ARAJO, 2003). Os sintomas das plantas doentes se caracterizam pelo surgimento de leses necrticas de formato circular, quando situado no limbo foliar entre as nervuras, nas folhas mais novas tanto na haste principal como na haste laterais. O tecido necrtico tende a cair formando perfuraes. Essas leses nas folhas mais novas so denominadas de mancha estrela. As leses das nervuras promovem um enrugamento da superfcie do limpo foliar, devido as mesmas apresentarem desenvolvimento desigual dos tecidos foliares. O fungo afeta o meristema apical da planta, provocando sua morte, o que estimula a brotao de ramos laterais e culmina com a formao de um aglomerado de ramos conferindo a planta um aspecto de superbrotamento (CIA e SALGADO, 2005). De acordo com RODRIGUES et al. (2006), a utilizao de extratos vegetais no controle de fungos fitopatognicos apresenta grande eficincia, levando-se a considerar esta prtica promissora dentre os mtodos de controle alternativo utilizados. Trabalhos de pesquisas desenvolvidos com extratos brutos obtidos a partir de plantas medicinais e florestais, tm indicado o potencial das mesmas no controle de fitopatgenos por sua ao fungitxica direta, inibindo o crescimento micelial e a germinao de esporos e tambm, por sua ao indireta pela induo de fitoalexinas, indicando a presena de composto(s) com caracterstica de elicitor(es) (SCHWAN-ESTRADA et al., 2000). O mtodo mais adotado pelos cotonicultores para controle dessas doenas o controle qumico, onde so realizadas vrias aplicaes de fungicidas para controle das mesmas. Levando conseqentemente, a grande impacto ambiental, como: contaminao de rios, solo, fauna, flora e principalmente acarretando prejuzos a sade do homem. Assim, o presente trabalho avaliou o potencial de extratos brutos aquosos de plantas medicinais e de espcies florestais na proteo de plantas de algodo contra Colletotrichum gossypii, in vitro e contra Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides, em campo.

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MATRIAIS E MTODOS Proteo de algodo contra Colletotrichum gossypii, agente causal da antracnose, em laboratrio O experimento foi realizado no laboratrio de Microbiologia/Fitopatologia da Universidade Federal de Mato Grosso/Campus Sinop. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado (DIC) com cinco extratos diferentes na concentrao de 25% e cinco repeties de cada tratamento. Aps a obteno dos dados de avaliao de incidncia da doena os mesmos foram submetidos analise de varincia e quando significativos, a Teste de Tukey 5%. O programa estatstico utilizado foi o ESTAT (Verso 2.0). Para o desenvolvimento do trabalho foram utilizadas as plantas medicinais arruda (Ruta graveolens L), manjerona (Origanum majorana) e carqueja (Baccharis trimera) e as espcies florestais: angelim (Hyemenolobium petraeum) e eucalipto (Corymbia citriodora). O extrato bruto a 25% de material vegetal foi obtido conforme BONALDO et al. (2004). Para tanto, folhas foram coletadas, lavadas em gua destilada e trituradas em liquidificador com gua destilada esterilizada. Este extrato bruto foi ento filtrado em gaze e em papel de filtro Whatman n. 41 e utilizado no bioensaios. Foram coletadas no campo 60 folhas do ponteiro de algodo das cultivares LDCV 03 e LDCV 22, que foram previamente tratadas com os extratos brutos aquosos das plantas medicinais e florestais a 25%. Os extratos foram aplicados nas folhas com auxlio de um borrifado at o ponto de escorrimento. gua destilada esterilizada foi utilizada como controle. Aps 24 horas do tratamento indutor, as folhas foram inoculadas com uma suspenso de Colletotrichum gossypii (2,0x105 condios mL-1) e mantidas em cmara mida por 24 horas/fotoperodo. Cada tratamento foi constitudo de cinco repeties com uma folha cada. Aps a inoculao, as folhas foram mantidas em placas de Petri contendo um papel de filtro, umedecido diariamente com gua destilada estril A avaliao dos sintomas da doena iniciou-se 3 dias aps a inoculao do patgeno, sendo a incidncia da doena determinada visualmente. No total,foram realizadas 7 avaliaes. Aps o trmino da coleta dos dados foi construda a rea abaixo da curva de progresso da doena (AACPD), conforme frmula a seguir: n-1 AACPD= [(Yi + Yi+1)/2] (ti+1 ti) i Onde, n o nmero de avaliaes, Yi e Y(i+1) so os valores de incidncia observados em duas avaliaes consecutivas e t(i+1)-ti o intervalo entre duas avaliaes consecutivas (CAMPBELL; MADDEN, 1990) apud (BRANDO et al., 2003). Os dados obtidos foram submetidos anlise de varincia (ANOVA), aplicando-se o teste F, no nvel de 5% de probabilidade, e como as mdias no foram significativas no foi possvel realizar a comparao das mesmas. Assim, optou-se pela anlise descritiva dos dados obtidos. Controle da ramulose (Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides), em campo, por extratos brutos aquosos
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O experimento foi conduzido na Chcara Itapiranga localizada na Rodovia MT- 140, Estrada Roslia, Km 2, Sinop, Mato Grosso, Brasil. O delineamento utilizado foi inteiramente casualizado (DIC) com cincos extratos na concentrao 25%. Utilizou-se 5 repeties por tratamento, sendo que cada repetio foi composta por uma planta. As plantas medicinais utilizadas foram: arruda (R. graveolens L), manjerona (O. majorana) e carqueja (B. trimera) e as espcies florestais: angelim (H. petraeum) e eucalipto (C. citriodora).O extrato bruto aquoso a 25% de material vegetal foi obtido conforme BONALDO et al. (2004) e, conforme j descrito anteriormente. Neste experimento, foram utilizadas duas variedades de algodo LDCV 03 e LDCV 22, plantadas em faixas com espaamento de 0,50m entre fileiras, em parcelas com 2,0x 2,5m e com 10 plantas por metro linear. Utilizou-se 5 repeties por tratamento, sendo que cada repetio foi composta por uma planta. No plantio, foi realizado adubao com 00-00-36 na dosagem de 185 Kg ha-1, sendo a aplicao fosfatada realizada 30 dias antes (200 kg ha-1). Os tratos culturais nesta etapa foram realizados de acordo com o manejo do produtor rural. Aps 20 dias da emergncia das plantas realizou-se a adubao foliar com uria na dosagem 150 kg ha-1 e Cloreto de potssio 200 kg ha-1 e uma aplicao de inseticida Tamaron (Metamidofs) na dosagem de 0,35 L ha1 para controle de pulgo (Aphis gossypii). Devido ocorrncia de grande incidncia de plantas daninhas no incio da cultura foi necessria a realizao de trs capinas manuais. Quando a cultura encontrava-se com quarenta dias aps a emergncia e j apresentava sintomas de ramulose (C. gossypii var. cephalosporioides), realizou-se a primeira aplicao dos extratos brutos aquosos. A segunda aplicao dos extratos brutos aquosos foi realizada trinta dias aps a primeira aplicao em todas as plantas. Os extratos brutos aquosos foram pulverizados nas folhas at o ponto de escorrimento. gua destilada foi utilizada como controle (testemunha). A primeira avaliao de ramulose foi realizada antes da aplicao dos extratos brutos aquosos, onde foram observadas todas as folhas e em seguida, atribuda uma nota de acordo com a escala de COSTA (1941) (Quadro 1). Quadro 1. Escala de notas para avaliao da severidade de ramulose em plantas de algodo (COSTA, 1941). Nota Descrio dos sintomas 1 Ausncia de sintomas. 2 Poucas leses necrticas nas folhas. 3 Muitas leses necrticas nas folhas. 4 Plantas com interndios superiores curtos. Plantas com interndios superiores curtos, associados a 5 superbrotamento. 6 Plantas com interndios curtos com superbrotamento. 7 Plantas com interndios curtos com superbrotamento sem possibilidade de produzir frutos (abaixo de trs frutos/planta). 8 Superbrotamento acentuado comporte reduzido. Superbrotamento excessivo com porte reduzido e ausncia total de 9 frutos.

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RESULTADOS E DISCUSSES Bioensaio de proteo de algodo contra Colletotrichum gossypii in vivo O extrato de arruda no foi eficiente na proteo de folhas destacadas de algodo, cultivar LDCV 03 (AACPD: 145,0), contra C. gossypii, pois houve aumento na severidade da doena (Figura 1), quando comparado com os demais tratamentos. SOUZA (2010) observou que extratos de arruda na concentrao de 10, 15, 20, 25% apresentou inibio do crescimento micelial de C. gossypii var. cephalosporioides in vitro. Apesar do trabalho de SALVARTORI et al. (2003) relatar o efeito fungitxico de extrato de folhas de arruda na inibio do crescimento micelial de C. gloeosporioides, quando adicionado a 25% em meio BDA, o mesmo comportamento no foi observado no presente trabalho in vivo, usando a mesma concentrao do extrato de arruda no controle de C. gossypii em folhas destacadas de algodo.

FIGURA 1. rea abaixo da curva de progresso da incidncia de antracnose (Colletotrichum gossypii) (AACPD), em folhas destacadas de algodo cultivar LDCV 03, tratadas com extratos brutos aquosos de plantas medicinais e espcies florestais. Mdias seguidas da mesma letra, no apresentam diferena estatstica; Tukey (P < 0, 05 %). Estatisticamente, os demais extratos brutos aquosos, carqueja, manjerona, angelim e eucalipto, no apresentaram diferena significativa quando comparados com o tratamento controle (gua) (Figura 1). Resultados semelhantes foram obtidos por ALMEIDA et al. (2009) quando testaram o efeito de extratos vegetais no controle de patgenos de ps-colheita em frutos de morangueiro. Os mesmos observaram que os extratos de nim, arruda e vinca no foram eficientes no controle de Botrytis sp., Penicillium sp. e Rhizopus sp., apresentando alta incidncia dos patgenos. Na cultivar LDCV 03, apesar de no apresentar diferena estatisticamente significativa, houve reduo da AACPD quando as plantas
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foram tratadas com extrato bruto aquoso de carqueja (AACPD: 60,5), apresentando 26% de inibio da doena (Figura 1). Os extratos de manjerona (AACPD: 62,4), angelim (AACPD: 69,2) e eucalipto (AACPD: 68,5) apresentaram 23,7%, 15,4% e 16,3% de inibio da doena, respectivamente, indicando, portanto, que estes extratos, podem apresentar substncias com potencial de induzir mecanismos de defesa na planta e, proporcionar o controle da antracnose em algodo. Para a cultivar LDCV 22 no houve diferena significativa (Figura 2) entre os extratos brutos aquosos e a gua. Porm, o extrato de angelim (AACPD: 37.90) proporcionou 52,2% de reduo da doena, enquanto que os demais extratos reduziram a doena em 17%, 18,9% e 19,8%, respectivamente. O extrato bruto aquoso de arruda apresentou o mesmo comportamento observado na cultivar LDCV 03, induzindo a AACPD da doena.

FIGURA 2. rea abaixo da curva de progresso da incidncia de antracnose (Colletotrichum gossypii) (AACPD), em folhas destacadas de algodo cultivar LDCV 22, tratadas com extratos brutos aquosos de plantas medicinais e espcies florestais. Mdias seguidas da mesma letra, no apresentam diferena estatstica; Tukey (P < 0, 05 %). Quando comparado o efeito dos extratos brutos aquosos nas duas cultivares, observou-se que, na cultivar LDCV 03 (Figura 1), o extrato de carqueja apresentou maior eficincia, inibindo a doena em 26% em relao a testemunha. Na cultivar LDCV 22 (Figura 2) o extrato de angelim foi o mais eficiente na reduo da doena. Isto indica que h variao entre os gentipos das cultivares e a resposta destes ao tratamento com diferentes extratos. De acordo com PASCHOLATI (1998), as plantas possuem diferentes mecanismos estruturais e bioqumicos que podem contribuir para a resistncia das mesmas contra fitopatgenos. Porm, esses mecanismos de resistncias so determinados geneticamente e a sua eficincia dependente da expresso dos mesmos em local e momentos adequados, e seqncia lgica que deve ocorrer aps o contato do patgeno com o hospedeiro.
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Controle da ramulose (Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides), em campo, por extratos brutos aquosos Os dados obtidos foram submetidos anlise de varincia (ANOVA), aplicando-se o teste F, 5% de probabilidade, e como as mdias no foram significativas, no foi possvel realizar a comparao das mesmas. Portanto, de acordo com os clculos da AACPD observa-se que na cultivar LDCV 03 nenhum extrato bruto aquoso proporcionou reduo da doena (Figura 3), indicando que os extratos no apresentaram efeito curativo da doena. SILVA et al. (2007) estudou o efeito fungitxico in vivo dos extratos de cravo-da-ndia, canela, alho, manjerico, gengibre e arruda, no controle alternativo do mal-do-Panam (Fusarium oxysporim f.sp. cubense) em muda de banana ma (Musa spp.) e observou que os extratos de manjerona, cravo-dandia e arruda proporcionaram menores ndices de doena: 12,5; 25; 41 e 46%, respectivamente, nas mudas de banana ma. PEDROSO et al. (2009), observaram que o extrato de manjerona na concentrao de 20% apresentou maior potencial de inibio micelial do fungo Alternaria solani in vitro. O Extrato bruto e o leo essencial de manjerona, tm sido utilizados para estudos in vitro de inibio de crescimento micelial e esporulao de diversos fungos fitopatognicos (SCHWAN-ESTRADA et al., 2003). SOUZA (2010), relatou que o extrato bruto aquoso de manjerona nas concentraes 5, 10, 20, 25%, proporcionou inibio no crescimento micelial de C. var. cephalosporioides, porm, quando aplicados em campo, no demonstraram potencial fungicida sobre o patgeno deste estudo.

FIGURA 3. rea abaixo da curva de progresso de ramulose (Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides) (AACPD), em plantas de algodo cultivar LDCV 03, tratadas com extratos brutos aquosos de plantas medicinais e de espcies florestais. Na variedade LDCV 22, os extratos brutos aquosos que proporcionaram maior controle da doena em campo foram arruda e carqueja, quando
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comparados com o tratamento controle, que inibiram em 13% a doena no campo. Os extratos aquosos de angelim, manjerona e eucalipto no proporcionaram o controle da doena (Figura 4).

FIGURA 4. rea abaixo da curva de progresso de ramulose (Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides) (AACPD), em plantas de algodo cultivar LDCV 22, tratadas com extratos brutos aquosos de plantas medicinais e espcies florestais. O extrato bruto aquoso de eucalipto no foi eficiente no controle da ramulose em campo, discordando do estudo feito por BONALDO et al. (2004) que, observaram que o extrato de eucalipto na concentrao de 20% apresentou potencial para o controle da antracnose (C. lagenarium) em pepino, tanto por sua atividade antifngica direta quanto pela capacidade de induo local de resistncia. Segundo o trabalho de MENEZES et al. (2009), os extratos de carqueja, capim-limo e alecrim no diferiram entre si e foram os menos eficientes no controle da pinta preta (Alternaria solani) do tomateiro em teste in vivo, quando comparados com os extratos de alho e gengibre que proporcionaram melhor controle da doena. Na maioria dos extratos de plantas medicinais estudados em outros trabalhos so encontradas propriedades antifngicas. Porm, essas propriedades podem ser afetadas por alguns fatores inerentes s plantas, como rgo utilizado, idade, estgio vegetativo e poca de colheita. Fatores do ambiente, como o pH do solo, bem como, a estao do ano e a temperatura. A eficincia do produto tambm depende da espcie envolvida, do tipo de patgeno a ser controlado e dos processos, obteno e manipulao do extrato (HERNNDEZ, 1996). Existem, poucos trabalhos na literatura relatando o efeito antifngico dos extratos de plantas em teste in vivo. MILANESI et al. (2009) observaram os mesmos resultados quando estudaram a ao fungitxica de extratos vegetais
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sobre o crescimento micelial de Colletotrichum gloeosporioides, onde houve inibio parcial no crescimento do patgeno, sendo os extratos de carqueja e cinamomo, na concentrao de 20%, os mais eficientes no controle do fungo. Como no presente estudo o tratamento realizado foi curativo, no controlando a doena, no se pode descartar o potencial destes extratos no controle da ramulose. possvel que os extratos brutos aquosos avaliados possam apresentar potencial na reduo da doena, se aplicados antes da chegada do patgeno, uma vez que j induzem fitoalexinas em soja como demonstrado por MATIELLO (2010). Este autor observou que o extrato bruto aquoso de eucalipto proporcionou maior sntese de fitoalexinas em cotildones de soja nas concentraes de 20%, 25% e 50%. CONCLUSES Conclui-se que os extratos brutos aquosos estudados no foram eficientes no controle da antracnose em folhas destacadas de algodo, sendo que o extrato bruto aquoso de arruda induziu a doena. Na cultivar LDCV 03, os extratos de arruda, angelim e manjerona apresentaram potencial curativo de ramulose, a campo e, na cultivar LDCV22, os extratos de arruda e carqueja apresentaram potencial no controle da doena em campo. AGRADECIMENTOS A FAPEMAT pelo auxlio financeiro Processo nmero 578323/2008. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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