CLONACION

En primer lugar se necesita clonar las molculas ya que no se puede hacer un rgano o parte del "clon" si no se cuenta con las molculas que forman a dicho ser, aunque claro para hacer una clonacin necesitamos saber qu es lo que buscamos clonar (ver clonacin molecular). Ser parte de un animal ya desarrollado, porque la clonacin responde a un inters por obtener copias de un determinado animal que nos interesa, y slo cuando es adulto conocemos sus caractersticas. Por otro lado, se trata de crearlo de forma asexual. La reproduccin sexual no nos permite obtener copias idnticas, ya que este tipo de reproduccin por su misma naturaleza genera diversidad.

Clonacin molecular
La clonacin molecular se utiliza en una amplia variedad de experimentos biolgicos y las aplicaciones prcticas que van desde la toma de huellas dactilares a produccin de protenas a gran escala. En la prctica, con el fin de amplificar cualquier secuencia en un organismo vivo, la secuencia a clonar tiene que estar vinculada a un origen de replicacin; que es una secuencia de ADN -Transfeccin: Se introduce la secuencia formada dentro de clulas. -Seleccin: Finalmente se seleccionan las clulas que han sido transfectadas con xito con el nuevo ADN. Inicialmente, el ADN de inters necesita ser aislado de un segmento de ADN de tamao adecuado. Posteriormente, se da el proceso de ligacin cuando el fragmento amplificado se inserta en un vector de clonacin: El vector se linealiza (ya que es circular),usando enzimas de restriccin y a continuacin se incuban en condiciones adecuadas el fragmento de ADN de inters y el vector con la enzima ADN ligasa. Tras la ligacin del vector con el inserto de inters, se produce la transfeccin dentro de las clulas, para ello las clulas transfectadas son cultivadas; este proceso, es el proceso determinante, ya que es la parte en la que vemos si las clulas han sido transfectadas exitosamente o no.

Clonacin celular
Clonar una clula consiste en formar un grupo de ellas a partir de una sola. En el caso de organismos unicelulares como bacterias y levaduras, este proceso es muy sencillo, y slo requiere la inoculacin de los productos adecuados. Sin embargo, en el caso de cultivos de clulas en organismos multicelulares, la clonacin de las clulas es una tarea difcil, ya que estas clulas necesitan unas condiciones del medio muy especficas. Una tcnica til de cultivo de tejidos utilizada para clonar distintos linajes de clulas es el uso de aros de clonacin (cilindros). De acuerdo con esta tcnica, una agrupacin de clulas unicelulares que han sido expuestas a un agente mutagnico o a un medicamento utilizado para propiciar la seleccin se ponen en una alta dilucin para crear colonias aisladas; cada una proviniendo de una sola clula potencialmente y clnicamente diferenciada. En una primera etapa de crecimiento, cuando las colonias tienen slo unas pocas clulas; se sumergen aros estriles de poliestireno en grasa, y se ponen sobre una colonia individual junto con una pequea cantidad de tripsina. Las clulas que se clonan, se recolectan dentro del aro y se llevan a un nuevo contenedor para que contine su crecimiento.

Clonacin terapeutica o andropatrica

Los restos disecados de Dolly son exhibidos en el Museo Real de Escocia. La clonacin teraputica o andropatrica tiene fines teraputicos, y consiste en obtener clulas madre del paciente a tratar, atendiendo al siguiente experimento: Se coge una clula somtica cualquiera del paciente a tratar, se asla el ncleo con los cromosomas dentro y se desecha todo lo dems. Por otro lado, obtenemos un vulo sin fecundar y extraemos su ncleo con sus cromosomas, para as introducir en ste el ncleo aislado anteriormente de la clula somtica. A continuacin se estimula el vulo con el ncleo comenzando as la divisin celular del embrin clonado. Este embrin ser un clon del paciente a tratar. Dejamos que el embrin se desarrolle hasta llegar a la fase clave: el blastocisto. En esta fase extraemos la clula madre de la masa celular obtenida que tiene el mismo ADN que el paciente, y por lo tanto no causar rechazo cuando se inyecte. Un ejemplo de este tipo de clonacin es la clonacin de la oveja Dolly (5 de julio de 1996 - 14 de febrero de 2003).

Clonacin en la investigacin con clulas madre

La transferencia nuclear de clulas somticas puede utilizarse tambin para crear un embrin clonado. El objetivo no es clonar seres humanos, sino (como ya hemos dicho anteriormente) cosechar clulas madre que pueden ser utilizadas para estudiar el desarrollo humano y realizar estudios sobre enfermedades de inters.

Clonacin de organismos de forma natural

La clonacin de un organismo es crear un nuevo organismo con la misma informacin gentica que una clula existente. Es un mtodo de reproduccin asexual, donde la fertilizacin no ocurre. En trminos generales, slo hay un progenitor involucrado. Esta forma de reproduccin es muy comn en organismos como las amebas y otros seres unicelulares, aunque la mayora de las plantas y hongos tambin se reproducen asexualmente. Tambin se incluye la obtencin de gemelos idnticos de manera natural o artificial. La forma natural se considera como una alteracin espontnea durante el desarrollo embrionario, ignorndose su causa, aunque existe una correlacin familiar estadsticamente significativa. El mtodo artificial se realiza por separacin mediante manipulacin de los blastmeros, debilitando las uniones celulares con tripsina y medio pobre en Ca2+, o manualmente partiendo el blastocisto por la mitad (muy corriente en vacas).

Clonacin humana
La clonacin humana es la creacin de una copia genticamente idntica a una copia actual o anterior de un ser humano. Existen tres tipos de clonacin humana: Clonacin andropatrica: Clonacin reproductiva: Clonacin hidroplasmotica: La clonacin andropatrica implica la clonacin de clulas de un individuo adulto para su posterior uso en medicina (como hemos visto en el apartado de clonacin andropatrica). La clonacin reproductiva implicara la completa clonacin de un ser humano. Este tipo de clonacin no se ha realizado an en humanos. La clonacin hidroplasmotica implica la configuracion de la clonacin en los humanos dentro del mecanismo hidroelctrico que este constituye. Un cuarto tipo de clonacin sera la llamada clonacin de sustitucin que sera una combinacin de la clonacin reproductiva y la clonacin teraputica. En este tipo de clonacin se producira la clonacin parcial de un tejido o una parte de un humano necesaria para realizar un trasplante.

En enero de 2008, se anunci que se crearon 5 embriones humanos mediante el ADN de las clulas de la piel de adultos con vistas a proporcionar una fuente viable de clulas madre embrionarias; valindose de la misma tcnica que dio origen a la oveja Dolly, cientficos de la empresa californiana Stemagen Corporation (con sede en La Jolla, California), encabezados por Andrew French, han empleado las clulas de la piel de dos varones adultos as como los vulos de tres mujeres jvenes (entre 20 y 24 aos) que se estaban sometiendo a un tratamiento de fertilidad. Uno de los donantes de piel fue Samuel Wood, director ejecutivo de la compaa y coautor del trabajo. Pero se plante el hecho de que esto fuera tico y legal, de modo que fueron destruidos.[1] El objetivo de la investigacin de la clonacin humana nunca ha sido el de clonar personas o crear bebs de reserva.[2] La investigacin tiene como objetivo obtener clulas madre para curar enfermedades.[3] Claro que se han publicado los resultados de la investigacin sobre clonacin de animales y humana para obtener clulas madre y, al igual que el resto de los descubrimientos cientficos, estas publicaciones estn disponibles a nivel mundial. Estos individuos no trabajan para ninguna universidad, hospital o institucin gubernamental.[cita requerida] Por lo general, la comunidad cientfica a nivel mundial se opuso fuertemente a cualquier hiptesis de clonar a un beb. Segn John Kilner, presidente del Centre for Bioethics and Human Dignity en los Estados Unidos, "La mayora de las investigaciones publicadas demuestra que la muerte o la mutilacin del clon son resultados muy probables en la clonacin de mamferos."[cita requerida] Nadie sabe hasta qu punto avanz la clonacin humana realmente en bebs. En abril de 2002, el cientfico italiano Dr. Severino Antinori hizo un comentario improvisado a un periodista, afirmando que tres mujeres estaban embarazadas de un embrin clonado. A partir de entonces le apartaron de debajo de las luces del escenario y nunca ms tuvo oportunidad de confirmar o negar ese comentario. Aunque no fuese verdad, o el intento hubiera fallado, da la sensacin de que Antinori pretenda intentar clonar un beb humano en un futuro prximo.[cita requerida] Los mdicos evalan los riesgos de la clonacin humana como muy elevados.[cita requerida] "Someterse a la clonacin por parte de los humanos no significa asumir un riesgo desconocido, sino perjudicar a las personas conscientemente", afirma Kilner.[cita requerida] La mayora de los cientficos tienen la misma opinin.[cita requerida] La gran mayora de los intentos de clonacin de un animal dieron como resultado embriones deformados o abortos tras la implantacin.[cita requerida] Defienden que los pocos animales clonados nacidos presentan malformaciones no detectables a travs de anlisis o tests en el tero, por ejemplo, las deformaciones en el revestimiento de los pulmones. En 1996, fue clonada la oveja Dolly. Fue el primer mamfero clonado a partir del ADN derivado de un adulta en vez de ser utilizado el ADN de un embrin. Pero aunque Dolly tenga una apariencia saludable, se cuestiona la posibilidad de que envejeciera antes que una oveja normal.[cita requerida] Adems fueron necesarios 277 embriones para producir este nacimiento.

Genoma Humano Componentes

Cromosomas
El genoma humano (como el de cualquier organismo eucariota) est formado por cromosomas, que son largas secuencias continuas de ADN altamente organizadas espacialmente (con ayuda de protenas histnicas y no histnicas) para adoptar una forma ultracondensada en metafase. Son observables con microscopa ptica convencional o de fluorescencia mediante tcnicas de citogentica y se ordenan formando un cariotipo. El cariotipo humano contiene un total de 24 cromosomas distintos: 22 pares de autosomas ms 2 cromosomas sexuales que determinan el sexo del individuo. Los cromosomas 1-22 fueron numerados en orden decreciente de tamao en base al cariotipo. Sin embargo, posteriormente pudo comprobarse que el cromosoma 22 es en realidad mayor que el 21.

Genes
Un gen es la unidad bsica de la herencia, y porta la informacin gentica necesaria para la sntesis de una protena (genes codificantes) o de un ARN no codificante (genes de ARN). Est formado por una secuencia promotora, que regula su expresin, y una secuencia que se transcribe, compuesta a su vez por: secuencias UTR (regiones flanqueantes no traducidas), necesarias para la traduccin y la estabilidad del ARNm, exones (codificantes) e intrones, que son secuencias de ADN no traducidas situadas entre dos exones que sern eliminadas en el procesamiento del ARNm (ayuste). Este diagrama esquemtico muestra un gen en relacin a su estructura fsica (doble hlice de ADN) y a un cromosoma (derecha). Los intrones son regiones frecuentemente encontradas en los genes de eucariotas, que se transcriben, pero son eliminadas en el procesamiento del ARN (ayuste) para producir un ARNm formado slo por exones, encargados de traducir una protena. Este diagrama es en exceso simplificado ya que muestra un gen compuesto por unos 40 pares de bases cuando en realidad su tamao medio es de 20.000-30.000 pares de bases). Actualmente se estima que el genoma humano contiene entre 20.000 y 25.000 genes codificantes de protenas, estimacin muy inferior a las predicciones iniciales que hablaban de unos 100.000 genes o ms. Esto implica que el genoma humano tiene menos del doble de genes que organismos eucariotas mucho ms simples, como la mosca de la fruta o el nematodo Caenorhabditis elegans. El genoma humano es el genoma (del griego ge-o: generar, que genera, y -ma: accin) del Homo sapiens, es decir, la secuencia de ADN contenida en 23 pares de cromosomas en el ncleo de cada clula humana diploide. De los 23 pares, 22 son cromosomas autosmicos y un par es determinante del sexo (dos cromosomas X en mujeres y uno X y uno Y en hombres). El genoma haploide (es decir, con una sola representacin de cada par) tiene una longitud total aproximada de 3200 millones de pares de bases de ADN (3200 Mb) que contienen unos 20.000-25.000 genes[1] (las estimaciones ms recientes apuntan a unos 20.500). De las 3200 Mb unas 2950 Mb corresponden a eucromatina y unas 250 Mb a heterocromatina. El Proyecto Genoma Humano produjo una secuencia de referencia del genoma humano eucromtico, usado en todo el mundo en las ciencias biomdicas. La secuencia de ADN que conforma el genoma humano contiene codificada la informacin necesaria para la expresin, altamente coordinada y adaptable al ambiente, del proteoma humano, es decir, del conjunto de las protenas del ser humano. Las protenas, y no el ADN, son las principales biomolculas efectoras; poseen funciones estructurales, enzimticas, metablicas, reguladoras, sealizadoras..., organizndose en enormes redes funcionales de interacciones. En definitiva, el proteoma fundamenta la particular morfologa y funcionalidad de cada clula. Asimismo, la organizacin estructural y funcional de las distintas clulas conforma cada tejido y cada rgano, y, finalmente, el organismo vivo en su conjunto. As, el

genoma humano contiene la informacin bsica necesaria para el desarrollo fsico de un ser humano completo. El genoma humano presenta una densidad de genes muy inferior a la que inicialmente se haba predicho, con slo en torno al 1,5%[2] de su longitud compuesta por exones codificantes de protenas. Un 70% est compuesto por ADN extragnico y un 30 % por secuencias relacionadas con genes. Del total de ADN extragnico, aproximadamente un 70% corresponde a repeticiones dispersas, de manera que, ms o menos, la mitad del genoma humano corresponde a secuencias repetitivas de ADN. Por su parte, del total de ADN relacionado con genes se estima que el 95% corresponde a ADN no codificante: pseudogenes, fragmentos de genes, intrones, secuencias UTR...

REPRODUCCION INVITRO
La fecundacin in vitro (FIV o IVF por sus siglas en ingls) es una tcnica por la cual la fecundacin de los ovocitos por los espermatozoides se realiza fuera del cuerpo de la madre. La FIV es el principal tratamiento para la esterilidad cuando otros mtodos de reproduccin asistida no han tenido xito. El proceso implica el control hormonal del proceso ovulatorio, extrayendo los ovocitos de los ovarios maternos, para permitir que sean fecundados por los espermatozoides en un medio lquido. El ovocito fecundado (el cigoto) se transfiere entonces al tero de la hembra con la intencin de iniciar un embarazo. El trmino in vitro es un trmino en latn que significa en cristal. Se utiliza porque en los primeros experimentos biolgicos en los que se realizaban cultivos de tejidos fuera de los organismos vivos de los cuales procedan, se realizaban en contenedores de cristal, tales como tubos de ensayo, probetas o placas de Petri. En la actualidad, el trmino in vitro se refiere a cualquier procedimiento biolgico que se realiza fuera del organismo en el que tendra lugar normalmente, para distinguirlo de un experimento in vivo donde el tejido permanece dentro del organismo vivo en el que normalmente se encuentra. Coloquialmente, a los bebs concebidos a travs de FIV se les denomina bebs probeta, refirindose a contenedores de cristal o plstico denominados probetas, que se utilizan frecuentemente en los laboratorios de qumica y biologa. Sin embargo, normalmente la fecundacin in vitro se realiza en placas planas denominadas placas de Petri; las placas de Petri utilizadas ms a menudo estn producidas en plstico, sin embargo, el nombre FIV sigue conservndose.

Indicaciones
Inicialmente la FIV se desarroll para superar situaciones de infertilidad debidos a problemas en las trompas de Falopio, pero posteriormente se observ que la tcnica tena xito tambin en otros casos de infertilidad. La introduccin de la inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides (ICSI) soluciona en gran medida los problemas de infertilidad masculina. Para que un tratamiento de FIV tenga xito, es necesario disponer de ovocitos sanos, espermatozoides que puedan fecundar y un tero que pueda mantener un embarazo. Aunque en algunos pases los tratamientos de FIV estn cubiertos por los servicios sanitarios sociales, normalmente se recurre a esta tcnica cuando otras opciones han fallado, debido a que la FIV conlleva costes elevados. La FIV puede utilizarse tambin en mujeres menopusicas, utilizando ovocitos procedentes de una donante. Asimismo es una tcnica que puede considerarse en pacientes que han sufrido una prdida total o parcial de fecundidad debido a un tratamiento agresivo frente a una patologa grave (como el cncer).

Estimulacin ovrica
Generalmente la fecundacin in vitro es iniciada en el tercer da de la menstruacin y consiste de un rgimen de medicacin para estimular el desarrollo de folculos mltiples en los ovarios. En la mayora de las pacientes se emplean inyecciones de gonadotropinas (generalmente

anlogos de la FSH), realizando controles frecuentes de los niveles de estradiol, y del crecimiento folicular mediante ultrasonografa ginecolgica. Normalmente se necesitan 10 das de inyecciones. La ovulacin espontnea durante el ciclo se previene por el uso de agonistas GnRH (aGnRH) o antagonistas GnRH (agGnRH), que bloquean el surgimiento natural de la hormona luteinizante (LH). Ambas generan, en otras palabras, lo que se conoce como un hipogonadismo hipogonadotrofo reversible. Sin embargo, los agonistas de la GnRH se diferencian de los antagonistas principalmente porque su efecto no es inmediato, sino que desencadenan en primera instancia un pico de FSH y LH (efecto flare-up), producindose un bloqueo posterior en la liberacin de gonadotropinas por el desacople de los receptores de GnRH de la cascada de activacin. Sin embargo, existen diferentes protocolos de estimulacin que varan en el da de inicio, medicamentos empleados y mtodos para prevenir e inducir el pico de la hormona luteinizante (LH). Bsicamente, si en el laboratorio el equipo se decanta por un tratamiento con aGnRH, se pueden escoger entre un protocolo corto y uno largo: - Protocolo largo: los agonistas de la GnRH se suministran a la paciente varios das antes del nuevo ciclo y durante la administracin de las gonadotropinas exgenas. Entre sus mltiples ventajas destaca que, con l, se asegura la no liberacin prematura de LH, lo que garantiza la invalidacin de toda ovulacin precoz. A su vez, este hecho permite al embrilogo planificar sin margen de error la fecha de la captacin folicular. Por otra parte, se asegura que el desarrollo de los folculos se sincronice. Desgraciadamente, con la aplicacin de este protocolo, la probabilidad de que se produzca un sndrome de hiperestimulacin ovrica (SHO) se multiplica, y se requiere un soporte de fase ltea (administracin de progesterona), as como una mayor cantidad de gonadotropinas. - Protocolo corto: los agonistas de la GnRH comienzan a suministrarse en los primeros das del ciclo, casi al mismo tiempo que las gonadotropinas exgenas. La principal virtud de este procedimiento es que consigue mejores resultados en mujeres con baja respuesta, aunque este hecho an no ha sido completamente demostrado. Por contra, la aplicacin de este protocolo multiplica el riesgo de que se produzcan picos de LH (induciendo entonces una ovulacin precoz) y no posibilita un desarrollo sincrnico de los folculos. En definitiva, se establece control sobre el desarrollo folicular mucho menor. Por otra parte, cuando se emplean antagonistas de la GnRH, slo se establece un protocolo, en el cual se administra la sustancia bloqueante varios das despus del inicio del ciclo, al mismo tiempo que se suministran gonadotropinas recombinantes o purificadas de la orina. Los protocolos de estimulacin ovrica se han convertido en complejos y costosos. Por esto, parece haber una tendencia a nivel mundial dirigida a reducir la cantidad y la dosis de los medicamentos empleados durante la estimulacin con el fin de reducir los riesgos y costos asociados a estos tratamientos [7]. Ejemplo de estos esfuerzos son los tratamientos FIV con Ciclos Naturales, adems de los protocolos FIV con mnima estimulacin desarrollados por los doctores John Zhang en NY

Extraccin de ovocitos
Artculo principal: Extraccin transvaginal de ovocitos Cuando se considera que la maduracin de los folculos es adecuada, se administra a la paciente gonadotropina corinica humana ( -hCG) o algn agonista de la GnRH. La primera acta como un anlogo de la hormona luteinizante (LH); mientras que la segunda induce un disparo de la propia hormona luteinizante (LH). En cualquiera de los casos, el medicamento provocar la ovulacin alrededor de 36 horas despus de la inyeccin, pero el procedimiento de extraccin tiene lugar justo antes de que esto ocurra. La extraccin de los ovocitos se programa unas 36 horas despus de la induccin de la ovulacin y se realiza por va transvaginal, utilizando una aguja guiada por ultrasonido, que

pincha la pared vaginal para alcanzar los ovarios. Un mdico aspira los folculos ayudado por un ecgrafo y recoge el lquido folicular en unos tubos que sern introducidos a un termobloque hasta que pasen al laboratorio. El lquido folicular es un fluido amarillento y seroso que contiene linfocitos y clulas de la granulosa aisladas o formando cmulos con o sin ovocitos. A medida que se punciona el ovario el lquido folicular se vuelve de color rojo (hemtico) debido a la hemorragia provocada por la puncin. La sangre es txica para el ovocito pues contiene muchos anticuerpos, por lo que una vez que se termine la puncin habr que eliminarla. Este paso se realiza en el laboratorio, donde se procesa el lquido de la puncin con el objetivo de recuperar los ovocitos contenidos en el lquido; de esta manera se obtendrn los ovocitos, se har un lavado de los mismos y se clasificarn segn su morfologa. Estos tres pasos se tienen que realizar en el menor tiempo posible para evitar el efecto de la temperatura, a la que los ovocitos son muy sensibles, y el dao producido por el lquido hemtico. Las punciones se programan normalmente cada 30 minutos aunque la bsqueda de los ovocitos no suele durar ms de 15 minutos. En estos procesos se utiliza anestesia local, general o parcial para evitar el dolor producido por la puncin. Existen 3 estadios de maduracin en los cmulos que se extraen por puncin folicular, a saber: - Grado I (Maduracin nuclear MII): El cmulo y la corona del ovocito presentan un aspecto expandido. Es el estado en el cual el ovocito presenta una mayor maduracin y slo los de este tipo son los que se utilizan en tcnicas de reproduccin asistida ms refinadas, como el ICSI. - Grado III (Maduracin nuclear VG): El ovocito destaca por la gran compactacin del cmulo, el cual cuenta con pocas clulas, muy fijadas a la zona pelcida (ZP). - Grado II (Maduracin nuclear MI): El ovocito presenta un aspecto intermedio entre los dos estadios anteriores. ecundacin Una vez en el laboratorio, los ovocitos extrados se limpian, eliminando las clulas que los rodean y preparndolos para la fecundacin. Al mismo tiempo, el semen se prepara para la fecundacin, eliminando las clulas inactivas y el fluido seminal. Si el semen proviene de un donante, probablemente habr sido preparado antes de ser congelado y puesto en cuarentena, y cuando sea descongelado estar listo para usar. El esperma y el ovocito se incuban juntos (en un ratio de aproximadamente 75.000:1) en el medio de cultivo durante unas 18 horas. Para entonces la fecundacin debera haber ocurrido y el ovocito fecundado debera mostrar dos proncleos. Cuando el recuento de espermatozoides es bajo, un nico espermatozoide se inyecta directamente en el ovocito, mediante la inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides (ICSI). El vulo fecundado se pasa a un medio de cultivo especial y se mantiene durante alrededor de 48h hasta que alcanza el estadio de 6-8 clulas.

Cultivo de embriones
Una vez el vulo ha sido fecundado y se ha obtenido un cigoto, ste es cultivado para promover su divisin celular y crecimiento para dar lugar a un embrin. Este cultivo dura entre 2 y 5 das, y es muy importante que se lleve a cabo en las condiciones ptimas para el embrin, ya que de ello depender su calidad y la tasa de implantacin del mismo cuando sea transferido a un tero. Para que el crecimiento del embrin se lleve a cabo en las mejores condiciones posibles se utilizan distintos tipos de medio de cultivo: Medios simples: de composicin sencilla y fciles de preparar. Son ptimos para el crecimiento inicial del embrin (hasta los 3 das de cultivo). Los embriones suelen ser cultivados durante 3 das antes de su implantacin, periodo tras el cual alcanzaran un estadio de 6-8 clulas. Ello permite que el embrilogo pueda monitorizar su tasa de divisin celular y la activacin de genes, para asegurarse de que el embrin sea viable y de que se implantar adecuadamente. Tan slo se adelantar el momento de la implantacin, normalmente a los dos das de cultivo,

cuando la pareja sometida a FIV cuente con pocos embriones disponibles para ser transferidos o cuando los embriones se desarrollen con lentitud. Medios complejos: su composicin es ms compleja, incluye vitaminas, aminocidos, metales, suero,... Son los ms adecuados para el cultivo del embrin desde el da 3 hasta el da 5. Tras cinco das de cultivo el embrin alcanza el estadio de blastocisto, en el que est compuesto por 12-16 clulas y posee una alta tasa de implantacin. Suelen cultivarse hasta este estadio cuando previamente se han dado abortos o fallos de implantacin en la paciente. Medios secuenciales: tienen en cuenta el hecho de que el embrin atraviesa distintos ambientes desde que es fecundado en la trompa de Falopio hasta que alcanza el tero. Los medios secuenciales se componen de tres tipos de medios: un medio para la preparacin de los gametos, otro para el desarrollo hasta el da 3 y un tercero para alcanzar la fase de blastocisto. Aparte de esto, tambin es muy importante controlar las condiciones de temperatura, luz y pH.