Coordenadoria de Biotecnologia Curso de Bioquímica

Prática: Consumo de glicose por células de levedura Alunos: Gabriel Moura, Ivanilson, Jeremias Soares e Victor Baetas Turma: QM161 Professores: Ana Paula e Cristiano Riger Data da realização da prática: 06/06/2011 Data da entrega do relatório: 13/06/2011 Avaliação:

Critério: Apresentação Introdução Objetivos Métodos Resultados Discussão Bibliografia Total:

Nota:

...........................7 Discussão........................................................................11 ..............................................................................................4 Métodos.................................................................................................................................................................................................................................6 Resultados..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................8 Conclusão.................................................................... equipamentos e reagentes....................Índice: Introdução.....................................................................4 Materiais......10 Anexo....................................................................................................9 Bibliografia.............................................................3 Objetivos.................

sendo assim. ela apresenta seis átomos de carbono e um grupo aldeído. na beta-glicose. . Dentre os principais carboidratos destaca-se a glicose. responsável justamente pelo controle da taxa de glicose no sangue) e é um sintoma da doença chamada diabetes. apresenta cadeia aberta. à morte. a glicose é armazenada no sangue (e a concentração de glicose no mesmo é controlada pelo fígado). gás carbônico e água. A elevação (descontrole) da taxa de glicose no sangue (hiperglicemia) resulta da falha na secreção e/ou ação da insulina (hormônio produzido no pâncreas.I – Introdução: Os carboidratos são as biomoléculas mais abundantes na natureza e desempenham uma grande variedade de funções. No organismo humano. A Glicose é encontrada nas uvas e em vários frutos. pois as células a usam como fonte de energia e intermediário metabólico. servindo também de matéria-prima para a biossíntese de outras biomoléculas. de fonte e reserva de energia. como função estrutural. Ela provoca uma série de complicações no organismo que podem levar. assim. por sua vez. inclusive. Em determinadas condições. A sua degradação química durante o processo de respiração celular dá origem a energia química (armazenada em moléculas de ATP . A glicose é o carboidrato mais importante da biologia. é intitulada como uma aldohexose (Fórmula Molecular: C6H12O6) Fórmula estrutural: Alfa Beta Cadeia Aberta A principal diferença entre a alfa e beta glicose é a posição da hidroxila do Carbono 2 em relação à hidroxila do Carbono 1 e. é uma das principais fontes de energia e fornece em torno de 4 calorias de energia por grama. a distribuição das cargas na molécula. O nome glicose tem origem no grego e significa doce. A alfaglicose apresenta a hidroxila “abaixo” do plano do anel e o polissacarídeo formado pela associação de moléculas de alfa-glicose é amido. a hidroxila fica “acima” do plano do anel e o polissacarídeo formado pela associação de moléculas de betaglicose é a celulose. Industrialmente é obtida a partir do amido. sabor adocicado (o que seria uma característica geral dos carboidratos).aproximadamente 30 moléculas de ATP por moléculas de glicose). no metabolismo.

4mol/L): Solução de Glicose 0.5% (27.II – Objetivos: Quantificar glicose através do método do DNS. Tartarato duplo Na/K 30%p/v em NaOH 0. III – Materiais e reagentes: Dosagem de glicose pelo método do DNS: Soluções: Solução padrão de glicose 10 mM Solução de DNS (DNS 1%p/v. 1 pipeta de 5mL e 1 pipeta de 10mL (3) Beckers 50mL (3) Pró-pipetes (10) cubetas (1) agitador de bandeja (1) pipeta automática Ponteiras amarelas (1)bastão de vidro (1) Erlenmeyer de 250 mL (1) bexiga de aniversário verde (1) estante de tubos Fermento biológico seco Pedaços de Parafilm Equipamentos: Banho-Maria (100°C): De Leo & Cia Ltda. ® .8M) Material: (15) tubos de ensaio grandes (4) Pipetas de 1mL.

9 0.9 0.1 0. DNS 1 2 3 4 5 6 T0 T15 T30 T45 1. Colocou-se o erlenmeyer sobre agitação com a bexiga tapando a boca do mesmo. e retirou-se 5mL em tempos sucessivos de 15.3 0. agitou-se vigorosamente até formação de suspensão homogênea.1mL do sobrenadante.0 1. Aguardou-se que os tubos esfriassem . retirou-se alíquotas de 0. .4 0.6 0.0 1.0 Tabela 1: Alíquotas das soluções reagentes. Tubo no Água destilada sol. padrão de glicose 10 mM Sol glicose [?] desconhecida sol.1 0.1 1.0 1.0 1. Esperou-se 5minutos após o último tubo.0 1.9 0.0 1. transferiu-se para um tubo de ensaio e colocou-se em banho de gelo como o tempo 0. em seguida acrescentou-se 8 mL de água em cada tubo. DNS e glicose 10mM conforme a tabela abaixo.9 0. obtendo-se um volume final de 10 mL em todos os tubos.1 0.5 0.1 0. para interromper o consumo glicolítico.0 1.Espectrofotômetro: Spectronic (rº) Genesys(tm) 5 Centrífuga Excelsa Baby: Modelo: 206-R Marca: FANEM IV – Métodos: Dosagem de glicose pelo método do DNS: Colocou-se 1g de fermento em um erlenmeyer de 250 mL e adicionou-se 70 mL de glicose 0.9 0. Pipetou-se água destilada.2 0.5 - 0. homogeneizou-se os tubos.0 0. colocando-os em banho de gelo. 30 e 45 minutos.8 0. Centrifugou-se as amostras por 10 minutos. em outros tubos.0 1. Em seguida. com pipeta automática. Aqueceu-os em banho-maria à 100°C por 5 min.0 1.5%.7 0. Pipetou-se 5mL da suspensão.

oxidando o grupo aldeído do açúcar a grupo carboxílico.192 .133 0.Tampou-se os tubos com Parafilm e homogeneizou-se os tubos. pois este foi ultrapassado em 2 minutos. VI – Discussão Dosagem da glicose pelo método do DNS: Mediante a interação com DNS (ácido 3. pode-se dosar a concentração de glicose desconhecida a partir das amostras de concentração 10mM deste açúcar redutor.515 0.220 0.000 0. Na absorbância.450 0. Então. utilizando o tubo 1 “branco” como referência de calibração para o aparelho ® V – Resultados Dosagem da glicose pelo método do DNS: Tubos (n°) 1 2 3 4 5 6 T0 T15 T30 T45 Tabela 3: Absorbâncias das soluções padrões diluídas de glicose.331 0. O que é feito mediante ao Fator de Calibração Média (FCM). o que foi devido ao tempo de espera que os tubos foram deixados em banho-maria. ainda com este equívoco.295 0. e é este composto gerado a partir da ação do açúcar redutor que absorve luz a 540nm. Porém. fez-se a leitura espectrofotométrica da absorbância (a 540 nm) de cada um dos tubos. dois dos resultados saíram com valores inesperados. [ ] Solução padrão de glicose (mmol/L) Absorbância (540 nm) 0. O método constitui em reduzir o DNS (composto de coloração amarelo forte) a ácido 3-amino-5nitrosalicílico (composto de coloração laranja amarronzado). pode-se calcular a concentração aproximada da solução de glicose desconhecida.260 0.316 0.5-dinitrosalicílico). Os cálculos para tais estão em anexo.

1996.feq. Lubert.pdf> acessado em 08/06/2011 às 19:20h.unicamp. Editora Guanabara Koogan. Referências bibliográficas:  LEHNINGER. a concentração desconhecida de uma solução com o mesmo soluto e solvente das analisadas pelo aparelho (no caso. Princípios de Bioquímica. São Paulo.pdf> acessado em 08/06/2011 às 19:30h.  <http://www2.  STRYER. Editora Sarvier. mediante às absorbâncias apresentadas por intermédio da análise espectrofotométrica. Bioquímica.iq. R. Simões.br/~cobeqic/tBT04. A.usp. Lodi & A. solução de glicose). Albert Lester. 4ª Ed. 2002.VII – Conclusão Pode-se calcular. Rio de Janeiro. 3ª Ed. .br/docente/srmarana/exerciciosquim. Traduzido por W. VIII – Bibliografia Referências digitais:  <http://www.

Cf 6 = 2 . Vf 10. Vi = Cf . 0. Vf 10 .2 = 2 . Cf 4 = 2 . Vf 10 . Cf Cf = 3 mmol/L 4) Tubo 4: Ci . Cf Cf = 4 mmol/L . Cf 8 = 2 . 0. Vf 10 . 0.4 = 2 . Cf Cf = 2 mmol /L 3) Tubo 3: Ci .8= 2 . Vi = Cf .IX – Anexo Dosagem de glicose: a) Cálculo da concentração de glicose nos tubos: 1) Tubo 1: Ci . Cf 2 = 2 . 0. Vi = Cf . Cf Cf = 1 mmol/L 2) Tubo 2 Ci . Vi = Cf .6= 2 .

5) Tubo 5: Ci .12628866 mmol/L [?] glicose ~ 2.0= 2 . Vf 10 . Vi = Cf .220 [?] glicose = [?] glicose = = 2.1 mmol/L . Cf 10 = 2 . 1. Cf Cf = 5 mmol/L b) Cálculo da concentração desconhecida de glicose: FCM = FCM = FCM = 0.103466667 (mmol/L)-1 Abs [?] glicose = 0.

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