abc

PARA SU USO Para la determinacin cuantitativa in vitro de Proteinas Totales en orina y LCR (lquido cefalorraqudeo). Este producto es adecuado para su utilizacin en Manual. No. Cat. UP 1570 3 x 100 ml UP 1571 6 x 100 ml 1. Reactivo colorante Patrn [1 g/l] 1. Reactivo colorante Patrn [1 g/l]
(1)

PROTEINAS TOTALES
(ORINA) MANUAL PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Los patrones contienen azida sdica. Evitar su ingestin o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el rea afectada con agua abundante. En caso de ingestin o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un mdico. La azida sdica reacciona con el cobre y plomo de las tuberas, lo que podra producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formacin de estas azidas. Las superficies metlicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sdica deben ser lavadas con hidrxido sdico al 10%. Atencin: Patrn El material del que se deriva este producto es de origen humano y ha sido analizado a nivel de donante para anticuerpo del Virus de Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), Antgeno de Superficie Hepatitis B (HBsAg), y anticuerpo del Virus Hepatitis C (HCV) y ha resultado NOREACTIVO. Se han utilizado mtodos aprobados por el FDA para llevar a cabo estos anlisis. Sin embargo, dando que ningn mtodo puede ofrecer una seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este material y todas las muestras de pacientes debern manejarse como posibles transmisores de enfermedades infecciosas y eliminarse apropiadamente. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad estn disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propsitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIN DE LOS REACTIVOS Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25C. MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo de Protena Urinaria Patrn de Protena Urinaria 1 g/l MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS 1. Material de pipetaje adecuado para suministrar 20 l, 50 l, 1 ml y 3 mls. 2. Cronmetro y bloque de calentamiento o bao de agua para mantener +25C +37C. 3. Un espectrofotmetro con una capacidad de longitud de onda de 600 nm. 4. NaCl al 0,9% para la dilucin de la muestra (si es necesario). 5. Muestras de Control de Calidad (normal y anormal).

3 x 100 ml 1 x 5 ml 6 x 100 ml 1 x 5 ml

SIGNIFICADO CLINICO El anlisis de la Protena Total en la orina y el lquido cefalorraqudeo es de gran valor en el diagnstico de enfermedades renales y del sistema nervioso central. Las elevaciones en la protena urinaria son muy comunes en las siguientes condiciones: ejercicio enrgico, fiebre e hipotermia, nefrosis y nefropata diabtica e infecciones de las vias urinarias. El anlisis de la protena total en el lquido cefalorraqudeo ayuda en el diagnstico de condiciones tales como meningitis, tumores CNS y hemorragia cerebral. PRINCIPIO El rojo de pirogalol forma un compuesto con protenas en un medio cido que contiene iones molibdato. El compuesto azul resultante presenta una absorcin mxima a 600nm. La densidad ptica a 600 nm es directamente proporcional a la concentracin de protenas totales de las muestras. EXTRACCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA(3,4) Orina : extraccin de 24 horas, las muestras de orina se pueden conservar entre +2 y +8C hasta 24 horas o congeladas hasta 3 meses hasta que se analizen. LCR (Lquido cefalorraqudeo): Se debern de analizar durante la hora siguiente a su extraccin Aditivos: No es necesario el uso de conservantes. COMPOSICIN DEL REACTIVO Componentes Concentracin inicial de la Solucin
(2)

1. Reactivo colorante [Sensible -proteger de la luz] Rojo de pirogalol 60 mol/l Molibdato disdico 40 mol/l Acido succnico 150 mmol/l Oxalato sdico 1 mmol/l Benzoato sdico 3 mmol/l Patrn Protena (Albmina de Suero Humano) 1 g/l

MANUAL - PROTEINAS TOTALES (ORINA) - UP 1570 PROCEDIMIENTO Longitud de onda: Temperatura: Medicin: Pipetear en tubos de ensayo: Mtodo Macro Blanco de Reactivo Agua destilada Patrn Orina o LCR Reactivo Mtodo Semi-micro Blanco de Reactivo Agua destilada Patrn Orina o LCR Reactivo 20 l 1000 l Patrn 20 l 1000 l Muestra 20 l 1000 l 50 l 3000 l Patrn 50 l 3000 l Muestra 50 l 3000 l 600 nm 25/37oC Frente al blanco de reactivo

PAGINA 2 DE 2 CONTROL DE CALIDAD Para el Control de Calidad se recomiendan controles disponibles en el comercio con niveles normales y anormales. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al da. Los valores obtenidos debern encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repeticin excluye error, se debern seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programacin del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material est limpio. 3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reaccin 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. INTERFERENCIA(9) En todos los mtodos basados en un colorante, la subestimacin de la protena puede ocurrir en muestras de orina que contengan cadenas ligeras de inmunoglobulina (por ej. Protena de Bence Jones). Cuando se sospeche la existencia de estas muestras, se debern de analizar de nuevo por electrofresis. VALORES NORMALES Normalmente se recomienda que, siempre que sea posible, cada laboratorio establezca su propio rango de valores esperados, o intervalo de referencia para anlisis que se lleven a cabo normalmente. Dado que tales valores pueden variar con la edad, sexo, dieta, localidad geogrfica o instrumento. Orina LCR 0.028 - 0.141 g/24h (2) 0.01 - 0.14 g/l (6) 0.15 - 0.45 g/l (6)

Mezclar, incubar durante exactamente 10 minutos a 25C 5 minutos a 37C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrn (Apatrn) frente al blanco de reactivo. CALCULO Amuestra Concentracin de la Protena (g/l) = Apatrn x Patrn conc.

Para determinar la Protena Urinaria de 24 horas, medir el volumen de la orina de 24 horas en ml y analizar el contenido de protena en la orina (g/l) segn el procedimiento. Calcular la Protena Urinaria de 24h utilizando la siguiente frmula: Protena (g/24h) = Protena Urinaria (g/l) x TV/1000 donde TV = volumen de orina de 24h en ml 1000 = Convierte ml/da en l/da

LINEARIDAD El mtodo es lineal hasta 1,5 g/l. Las muestras con valores ms elevados se debern diluir 1+4 con solucin NaCl al 0,9% (w/v) y repetir la prueba multiplicando el resultado por 5. SENSIBILIDAD Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de sensibilidad ya que sta se ve limitada por la sensibilidad del espectrofotmetro que se utilize. Sin embargo en condiciones manuales, con una longitud de paso de 1 cm, un cambio de 0,02 unidades de absorbancia a 600 nm es equivalente a 0,1 g/l. La precisin a 0,07 g/l se ha determinado como CV = 11% en un anlisis manual. CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Las siguientes carctersticas de funcionamiento se obtuvieron utilizando un analizador Cobas Fara Roche. Los usuarios debern establecer sus propias carctersticas de funcionamiento para otros instrumentos. Los siguientes datos de precisin se determinaron utilizando controles de orina a 2 niveles de protena. Cada nivel se analiz 20 veces dentro de una prueba y cada da, durante 20 das, se llev a cabo una prueba.

CALIBRACION Se recomienda el patrn de Protena Urinaria Randox (1 g/l) suministrado con este kit para la calibracin cuando se analizen muestras de orina o LCR. No es necesario diluir el patrn antes de su uso. El patrn se prepara gravimtricamente utilizando un grado de reactivo de albmina de suero humano. Se recomienda la recalibracin para cada serie de muestras analizadas.

RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912 Email: applications@randox.com Website: www.randox.com

ABC

MANUAL - PROTEINAS TOTALES (ORINA) - UP 1570 Precisin Dentro del Anlisis Normal media (g/l) DE CV n 0,162 0,0059 3,66% 20

PAGINA 3 DE 3

Anormal 0,646 0,013 2,1% 20

Precisin Entre Anlisis Normal media (g/l) DE CV n 0,182 0,0065 3,6% 20

Anormal 0,639 0,014 2,15% 20

CORRELACIN (L.C.R.) Se compar este mtodo (Y) con otro mtodo comercial disponible y se obtuvo la siguiente ecuacin de regresin lineal: Y = 1,059 x - 0,016 con un coeficiente de correlacin de r = 0,994 Se analizaron 12 muestras de pacientes abarcando un rango de 0,121 a 1,147 g/l. REFERENCIAS 1. Pesce, A.J., Kaplan, L.A.: Methods in Clinical Chemistry (1987). 2. Watanabe, N., Kamei, S., Ohkubo, A., Yamanaka, M., Ohsawa, S., Makino, K., and Tokuda, K., Clin. Chem., 1986; 32/8: 1551. 3. Laboratory Test Handbook, Jacobs et al. ed 2. 4. Orsonneau, J., Dowet, P., Massoubre, C., Lustenberger, P., and Bernard, S., Clin. Chem., 1989; 35/11: 2233. 5. Henry R.J., Cannon, D.C., Winkelman, J.W., "Clinical Chemistry, Principles & Techniques," Harper & Row, 2nd Ed. 1974. 6. Teitz, N.W., "Fundamentals of Clinical Chemistry", W.B. Saunders Company, 1970 Philadelphia. 7. Young, D.S., et al. Clin. Chem., 21: 5. ID, 1975. 8. Friedman, R.B., et al. Clin. Chem., 26: 4. ID, 1980. nd 9. Tietz N.W., Textbook of Clinical Chemistry. 2 ed. W.B. Saunders Co., 717-723, 1994

Revisado 23/02/04 wpt

RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912 Email: applications@randox.com Website: www.randox.com

ABC