DESVENDANDO AS CLULAS-TRONCO: DOS SONHOS REALIDADE

16 a 20 de julho de 2007

Centro de Estudos do Genoma Humano Depto. de Gentica e Biologia Evolutiva Instituto de Biocincias Universidade de So Paulo

Docentes responsveis: Profa. Dra. Eliana Maria Beluzzo Dessen Profa. Dra. Regina Clia Mingroni-Netto

INDICE
Cronograma Apresentao do curso Portiflio como recurso de avaliao Textos de apoio As clulas eucariticas e sua capacidade de diferenciao Diferenciao celular e o controle do gene eucaritico Sinalizao celular O bsico sobre clulas-tronco Clonagem Reprogamao celular Clulas-tronco: progressos cientficos e o futuro das pesquisas Terapia celular o uso de clulas-tronco no tratamento de doenas etapas e questes geradas A polmica das clulas-tronco.embrionrias Desvendando as razes do cncer Clulas-tronco: mocinha e bandida Clula-tronco por encomenda Reproduo assistida Medula ssea e as clulas-tronco hematopoiticas Transplante de medula ssea uma terapia celular bem conhecida Colcha de retalho de leis O artigo 5 o. Da lei No. 11.105, de 2005, no inconstitucional Quando comea a vida? Que vida, biolgica ou moral? Glossrio Atividades: Atividade de acolhimento e contrato pedaggico Levantamento de conceitos Estudo dirigido 1 Identificao de conceitos relativos a clulas-tronco Atividade 1 Diferenciao da hemcia Atividade 2 um caso muito interessante de diferenciao celular Diferenciao no protozorio Naegleria grubei Diferenciao celular em tecido sseo Atividade 3 Diferenciao celular em tecido sseo Atividade 4 Diferenciao de clulas embrionrias: a formao do trofoblasto As primeiras mudanas morfolgicas no embrio Atividade 5 Desenvolvimento muscular Estudo dirigido 2 Clonagem reprodutiva versus clonagem teraputica Atividade 6 Jogo das clulas-tronco Atividade 7 Hematopoiese: seguindo uma via de diferenciao Atividade 8 Regras para o debate Atividade 9 Palavras cruzadas Anexos: Respostas do estudo dirigido 2 Clonagem Gabarito da atividade 2 Diferenciao no protozorio N. gruberi Soluo das palavras cruzadas Bibliografia sobre cncer e clulas-tronco 03 04 06 08 10 18 24 31 36 39 42 43 48 57 58 59 61 63 67 72 77 79 81 85 87 88 90 92 94 96 98 99 101 104 107 108 118 123 124 126 126 128 129

CRONOGRAMA

Data

Manh

Tarde

16/07

Acolhimento inicial.Apresentao do Diferenciao celular. Oficinas. curso. O gene eucaritico e sua regulao. Levantamento de conceitos. Estruturao do debate sobre tica. Estudo dirigido sobre clulas-tronco.

17/07

Sinalizao celular. Oficinas.

Diferenas entre clulas-tronco embrionrias e de adulto.

Clulas-tronco: definio, tipos e Jogo sobre clulas-tronco. caractersticas. Clonagem reprodutiva clonagem teraputica. Desdiferenciao celular. versus Palavras cruzadas. Preparao do debate

18/07

Cncer e clulas-tronco Reproduo assistida Preparao do debate.

As doenas do sangue e transplantes de medula ssea. Oficina. Preparao do debate

19/07

Perspectivas da aplicao de Debate: A polmica sobre a clulas-tronco em doenas utilizao de clulas-tronco musculares. embrionrias em terapia humana: aspectos legais e ticos. Filme Globo News. Discusso. Discusso de situaes problema.

20/07

Oficina de criao: Como abordar o Apresentao dos grupos. tema clulas-tronco numa feira de Avaliao do curso. cincias? Incio da apresentao dos grupos.

APRESENTAO DO CURSO Desvendando as clulas-tronco: dos sonhos realidade

Objetivos Ampliar o universo conceitual significativo dos professores de ensino mdio no que se refere a clulas-tronco e suas aplicaes. Capacitar o professor de ensino mdio para acompanhar de maneira crtica a literatura de divulgao cientfica sobre o tema. Utilizar o tema "clulas-tronco como eixo para a integrao de conceitos clssicos da Biologia Celular e Molecular, bem como ponto de referncia para a anlise e discusses no campo da biotica. Considerar o papel do professor em sala de aula como "Agente disseminador de temas que permeiam a discusso de valores ticos e sociais e que exigem um posicionamento crtico acerca de situaes relacionadas rea de Cincias da Natureza e suas tecnologias. Contedo e Metodologia de desenvolvimento Noes de diferenciao e sinalizao celular. Relao gentipo-fentipo. Clulas-tronco: definio, potencialidade e plasticidade. Reprogramao celular. Clulas-tronco embrionrias versus clulas-tronco de adultos. Potencialidades de uso e aplicaes experimentais. Terapia celular. Aplicaes atuais. Clonagem teraputica versus clonagem reprodutiva. Cncer e clulas-tronco. Problemas legais e ticos decorrentes do uso de clulas-tronco. Estratgias e recursos tecnolgicos A metodologia utilizada para desenvolver o contedo acima relacionado variada, com nfase em mtodos no expositivos. Alm de curtas apresentaes orais dialogadas e de palestras de especialistas, diversas atividades didticas/pedaggicas sero utilizadas como facilitadores da aprendizagem: (1) estudos dirigidos; (2) atividades presenciais como jogos didticos ou oficinas (3) Debate, (4) animaes demonstrativas de fenmenos biolgicos, (5) discusso de artigos publicados pela mdia leiga, etc. Formas de acompanhamento e de avaliao dos participantes Avaliao A avaliao ser constituda por duas ferramentas: Avaliao formativa: elaborao de portiflio dirio. O aluno dever registrar as atividades desenvolvidas durante o dia e o seu envolvimento nas mesmas respondendo diariamente as seguintes questes: (1) O que aprendi hoje? O que as atividades me acrescentaram? (2) O que no foi adequado? Considerar nas respostas: o contedo da aula, as atividades e estratgias utilizadas, o relacionamento com o grupo e a prpria participao. As respostas sero por escrito e entregues no final do dia. Um portfolio pode ser definido como um conjunto de diferentes tipos de documentos (anotaes pessoais, experincias de aula, trabalhos pontuais, controles de aprendizagem, conexes com outros temas, fora da escola, representaes visuais, etc.) que proporciona evidncias de conhecimentos que foram sendo construdas durante o aprendizado, as estratgias utilizadas para aprender e a disposio de quem o elabora para continuar aprendendo. Devido brevidade do curso o portifolio a ser elaborado diariamente no final de cada dia ser mais sucinto e registrar o desenvolvimento

do programa de ensino e as reflexes dirias do processo de aprendizagem de modo a que o estudante sinta a aprendizagem como algo prprio e no alienada de seus processos pessoais e coletivos. O portfolio nesse caso entendido tambm como uma reconstruo de conhecimento. Ele no se caracteriza como algo descritivo, mas reflexivo. Todos os portiflios so lidos diariamente pelos docentes do curso que podem desse modo realizar um acompanhamento mais personalizado da aprendizagem de cada um dos alunos. Avaliao final: Cada participante dever fazer uma breve apresentao individual com relao a: (a) Quais os contedos/atividades desenvolvidas durante o curso que poderiam ser levadas para a escola? Por qu? (b) De que maneira isso poderia ser feito?

Relao Nominal dos professores Prof. Dra. Eliana Maria Beluzzo Dessen (professora responsvel) Monitoria (mestrandos e doutorandos do Instituto de Biocincias) Adriana Ribeiro de Oliveira Marques, Ana Carolina Susuki Dias Cintra, Fernando Nodari, Lcia Teiceira Machado Paula Cristina Gorgueira Onofre Renato Chimaso dos Santos Yoshikawa, Silvio Ganika Higa, Vivian Lavander Mendona

PORTFLIO COMO RECURSO DE AVALIAO

(adaptado de Hernandez, Fernando. Cultura visual, mudana educativa e projeto de trabalho. Porto Alegre, Artmed, 2000)

A avaliao um processo inerente ao processo de construo de conhecimento. Mais do que memorizar ou recordar informaes ou aplicar frmulas para resolver problemas, o objetivo do processo educativo se prope a aprender a formular problemas e desenvolver a capacidade de buscar, organizar e interpretar a informao dando-lhe sentido e transformando-a em conhecimento. A avaliao compreende trs formas de recolhimento de informaes: avaliao inicial, para perceber o conhecimento prvio de estudantes ao iniciarem o curso; a avaliao formativa, que est na base do processo avaliador e no tem a finalidade de controlar ou qualificar, mas ajudar estudantes a progredir no caminho do conhecimento, e a avaliao somativa, que o processo de sntese, que permite reconhecer se [as] os estudantes alcanaram os resultados esperados (...) e serve como passagem para dar credibilidade oficial aos conhecimentos adquiridos. O portflio representa uma possibilidade alternativa de avaliao, e pode ser, para algumas disciplinas, substituto das avaliaes pontuais em forma de provas e exames. Na educao ele serve como possibilidade de indicar a trajetria de aprendizagem e de novas formas de avaliar o desenvolvimento do conhecimento. Uma das vantagens da realizao do portflio a de perceber o desenvolvimento do programa de ensino e a participao mais ativa de estudantes, o que permite que sintam a aprendizagem como algo prprio e no alienada de seus processos pessoais e coletivos. O portflio uma forma de avaliao dinmica realizada pelo prprio estudante e que reflete seu desenvolvimento e suas mudanas atravs do tempo . Nele inclui-se a avaliao do processo, a maneira de encarar e de interpretar as experincias e os processos de aprendizagem. Definio de um portflio: Podemos definir um portflio como um conjunto de diferentes tipos de documentos (anotaes pessoais, experincias de aula, trabalhos pontuais, controles de aprendizagem, conexes com outros temas, fora da escola, representaes visuais, etc.) que proporciona evidncias de conhecimentos que foram sendo construdas, as estratgias utilizadas para aprender e a disposio de quem o elabora para continuar aprendendo. (...) Um portfoio no significa apenas selecionar, ordenar evidncias de aprendizagem e organiza-las num formato para serem apresentadas. (...) O que caracteriza definitivamente o portflio como modalidade de avaliao no tanto o seu formato fsico (pasta, caixa, CD-ROM, etc.), mas sim a concepo de ensino e aprendizagem que veicula. O portflio no a mera recopilao de apontamentos; mas pode ser entendido como uma reconstruo de conhecimento. Ele no se caracteriza como algo descritivo, mas reflexivo. Assim, um dirio reflexivo uma ferramenta importante para a sua realizao Estabelecer as finalidades de aprendizagem por parte de cada estudante Cada qual explicita o que pretende chegar a aprender. Professora explicita os objetivos. Uma possibilidade: extrair uma frase de cada apontamento de aula (ou leitura) e fazer um comentrio reflexivo, representativo do que foi significativo. Incluir experincias da sala de aula e de fora dela.

Pensar no grupo: o processo de aprendizagem mais significativo se for proveitoso para todo o grupo. Fazer um acordo pblico por escrito conveniente e, se possvel, presente na sala de aula como forma permanente de compromisso compartilhado. Nomear as fontes relacionadas com o processo (no apenas fontes bibliogrficas): as evidncias de aprendizagem Encontrar um fio condutor que organize a seleo das evidncias que faro parte do portflio Ter presente as perguntas: o que aprendi? De que maneira aprendi?

O portflio propriedade do estudante O trabalho realizado no portflio memria de aprendizagem. Cada portflio criao nica, pois cada qual determina que evidncias e que experincias devem ser includas e faz uma auto-avaliao do seu processo de formao. Ele parte do processo de aprendizagem de cada aluna e cada aluno. Ele pode tornar-se pblico para compartilhar com o grupo e ajudar no processo coletivo de aprendizagem estudantes e docentes podem ir construindo um conhecimento compartilhado mais equilibrado (p.170). Os componentes do portflio a) O propsito Dirio reflexivo: falar sobre os temas, comentando-os, no de forma descritiva, mas de forma reflexiva - tambm com perguntas, questionamentos, dvidas. No mera recopilao dos apontamentos. Estudantes explicitam como imaginam construir o seu portflio. Cada exemplo selecionado para dar evidncia de seu progresso deve ser recolhido, criado e organizado de uma determinada forma para demonstrar sua avaliao. Ter presente o fio condutor mais a explicitao do porqu de ter selecionado cada evidncia.

AS CLULAS EUCARITICAS E SUA CAPACIDADE DE DIFERENCIAO

Regina Clila Mingroni Netto e Eliana Maria Beluzzo Dessen

Nosso corpo formado por diversos tipos de clulas O nosso corpo constitudo de trilhes de clulas, organizadas em diversos tipos de tecidos. Todas essas clulas originam-se de uma nica, denominada clula-ovo ou zigoto, que, por sua vez, o resultado da unio de duas outras: o espermatozide e o vulo. medida que o embrio cresce, grupos de clulas vo se tornando diferentes em estrutura e funo, em decorrncia de um processo chamado de diferenciao celular (Figura 1).

vulo sendo fertilizado

Fases iniciais do desenvolvimento embrionrio, a partir do zigoto

Clula nervosa Clulas adiposas

Clulas musculares

Clulas do sangue

Figura 1. O zigoto d origem aos trilhes de clulas diferenciadas de nosso organismo.

Em ltima anlise, esse processo controlado pelo DNA, que o material gentico. Mas, se o DNA contm a informao gentica e essa informao a mesma em todas as clulas do nosso corpo, voc consegue entender como possvel que as clulas possam ser to diferentes? O que se tem concludo das pesquisas cientficas que as clulas dos tecidos se diferenciam por terem diferentes trechos da molcula de DNA, ou seja, diferentes genes em funcionamento. Assim, as modificaes celulares no processo de diferenciao resultam da ativao de certos genes e da inativao de outros: cada tipo de clula possui um conjunto caracterstico de genes ativos. Em conseqncia dessa atividade diferencial, o conjunto de protenas codificadas pelos genes varia dependendo do tipo de clula. Por exemplo, nas clulas do tecido nervoso, esto ativos genes que codificam protenas que tornam as clulas ramificadas e capazes de fazer sinapses. Por outro lado, nas clulas das glndulas salivares, devem estar ativos genes que codificam enzimas secretadas na saliva. claro que os genes que determinam a produo das enzimas da saliva no devem estar ativos em nenhum outro tecido do corpo. A atividade

diferencial dos genes comea a ser determinada no decorrer do desenvolvimento embrionrio e persiste nos tecidos adultos. Todas as clulas tm duas caractersticas importantes: o grau de diferenciao e a potencialidade. O grau de diferenciao reflete o quanto uma clula especializada. A potencialidade a capacidade que ela tem de originar outros tipos celulares. Quanto maior a potencialidade da clula, geralmente ser menor o seu grau de diferenciao. O zigoto a clula com a mxima potencialidade, pois ele d origem a todos os tipos de clulas. Assim, ele no especializado ou diferenciado. No outro extremo, h clulas com potencialidade nula, como o caso dos glbulos vermelhos. Durante o processo de diferenciao dessas clulas, elas perdem o ncleo. Perderam, conseqentemente, a capacidade de originar clulas iguais a elas. Logo, no tm potencialidade. A compreenso das diferenas de potencialidade celular importante para o entendimento de uma srie de tpicos tratados nesse volume.

Clulas-tronco totipotentes podem originar um organismo inteiro. Ex. Zigoto e primeiras clulas que resultam da diviso do zigoto

Clulas-tronco pluripotentes podem originar quase todos os tipos de tecidos. Ex. Massa interna do blastocisto

CT hematopoitica

outras CT

Clula-tronco multipotente podem originar diversos tipos de tecidos. Ex. Clulas-tronco do adulto

plaquetas

Glbulos brancos

Glbul

hemcias

Figura 2. Classificao das clulas de acordo com sua potencialidade.

DIFERENCIAO CELULAR E O CONTROLE DO GENE EUCARITICO

Eliana Maria Beluzzo Dessen (adaptado de Fundamentos de Biologia Celular Alberts e col.)

A diferenciao produz uma variedade de clulas especializadas em eucariotos Durante as repetidas divises celulares que ocorrem no zigoto unicelular transformando-o em um organismo multicelular, as clulas individuais sofrem diferenciao celular, isto , tornam-se especializadas em estrutura e funo. a regulao de genes que leva a essa especializao. Genes ativos em clulas de uma asa de mosca em desenvolvimento, por exemplo, so expressos como protenas que tornam as clulas chatas e lisas, formando uma superfcie de vo forte e fina, semelhante a plstico transparente. Noutro exemplo, as clulas dos olhos em desenvolvimento, outros genes esto se expressando e sintetizam as protenas que formam lentes capazes de focalizar luz. Clulas especializadas podem reter todo o seu potencial gentico O zigoto possui um conjunto completo de genes que dar origem a todos os tipos de clulas especializadas do organismo. O que ocorre a esses genes medida que as clulas se diferenciam? Uma hemcia, por exemplo, perde seu ncleo e todo seu DNA. Porm, a maioria das clulas diferenciadas retm o ncleo e um conjunto completo de cromossomos. Quando todos os genes ainda esto presentes as clulas diferenciadas retm seu potencial de expressa-los? Uma maneira de responder a essas questes a experimentao, ou seja, substituir o ncleo de um ovo ou zigoto pelo ncleo de uma clula diferenciada. Se genes forem perdidos ou irreversivelmente inativados durante a diferenciao, o ncleo transplantado no permitir o desenvolvimento de um embrio normal. Experimentos pioneiros de transplantes de ncleos foram realizados pelos embriologistas Robert Briggs e Thomas King na dcada de 1950. Esses pesquisadores destruram os ncleos de vulos de sapo com luz ultravioleta (UV) e, em seguida, transplantaram no vulo anucleado um ncleo de clula intestinal de girino. Muitos dos ovos contendo os ncleos transplantados comearam a se desenvolver, porm, poucos originaram girinos normais. Desse modo os pesquisadores foram capazes de clonar sapos produzir cpias geneticamente idnticas usando ncleos de clulas diferenciadas. Tais estudos mostraram que ncleos de clulas diferenciadas podem reter todo o seu potencial gentico. Evidencias adicionais apareceram em 1997 com a clonagem do primeiro mamfero usando ncleos diferenciados. Nesse caso, os pesquisadores usaram choques eltricos para fundir uma clula de glndula mamria de ovelha com um vulo do qual o ncleo havia sido retirado. O ovo comeou a se dividir, foi implantado no tero de outra ovelha, e desenvolveu-se na celebrada Dolly. Como previsto Dolly parecia-se com sua parental feminina, a clula de mama doadora do ncleo, e no com o vulo doador ou a me de aluguel. Outra indicao que a diferenciao no interfere no potencial gentico o processo natural de regenerao, ou seja, a reposio de partes perdidas do corpo. Quando uma salamandra perde uma perna, por exemplo, certas clulas do toco do membro se diferenciam, e ento se rediferenciam para dar origem a uma nova perna. Em plantas, a habilidade de uma clula diferenciada desenvolver-se em um novo organismo comum. A figura 1C mostra de modo esquematizado uma nica clula, removida da raiz de cenoura e colocada em meio de cultura, pode comear a se dividir e originar uma planta adulta. Essa tcnica pode ser usada para clonar plantas, reproduzindo centenas de milhares de organismos geneticamente idnticos a partir de clulas somticas de um nico indivduo. Desse modo, possvel propagar grande nmero de plantas que tem caractersticas desejveis tais como alta produtividade de frutos ou resistncia a doenas. O fato de uma planta madura poder se desdiferenciar e originar

10

todos os tipos de clulas especializadas de uma nova planta uma evidncia que a diferenciao no necessariamente envolve mudanas irreversveis no DNA. Cada tipo de clula diferenciada tem um padro de expresso gnica Se todas as clulas diferenciadas de um organismo contm os mesmos genes, e todos os genes tm o potencial de ser expressar, como as clulas tornam-se especializadas? Como j foi dito, as grandes diferenas entre as clulas em um organismo resultam da expresso seletiva de genes. medida que um embrio em desenvolvimento sofre sucessivas divises, genes especficos so ativados em diferentes clulas durante diferentes perodos de tempo. Grupos de clulas seguem vias de desenvolvimento diversas, e cada grupo desenvolve um tipo particular de tecido. Finalmente, no organismo maduro, cada tipo de clula nervosa ou pancretica, por exemplo, - tem um padro diferente de genes que so expressos. A Tabela abixo ilustra padres de expresso gnica para alguns genes em clulas de trs diferentes tecidos especializados de um mamfero. Os genes para as enzimas da via metablica da glicolise esto ativos em todas as clulas metabolicamente ativas, incluindo clulas do pncreas, do cristalino e nervosas, como exemplificado. Entretanto, os genes que codificam protenas especializadas so expressos apenas por clulas especficas.
Clula pancretica Genes das enzimas da via glicoltica Gene do cristalino Gene da insulina Gene da hemoglobina Funcionais Clula do cristalino (embrio) Funcionais neurnio Funcionais

Inativo

Funcional

Inativo

Funcional Inativo

Inativo Inativo

Inativo inativo

As protenas especializadas que foram usadas como exemplo so as protenas transparentes do cristalino, que formam a lente do olho; o hormnio insulina; e a protena transportadora de oxignio, hemoglobina. Note que os genes para hemoglobina no esto ativos em nenhum dos tipos celulares mostrados na figura. Eles se expressam apenas nas clulas que iro se desenvolver em hemcias. Os genes para insulina so ativados apenas nas clulas do pncreas que produzem hormnio. As clulas nervosas expressam genes para outras protenas especializadas no mostradas. Clulas maduras do cristalino, e as hemcias, por exemplo, atingem um grau mximo de diferenciao, pois elas, aps acumularem produtos proticos, perdem seus ncleos e, assim, todos os seus genes. Vimos ento que as clulas eucariticas tornam-se especializadas porque expressam apenas certos genes. Desse modo, a diferenciao celular em organismos multicelulares resulta da expresso gnica seletiva, assim como a habilidade de bactrias produzirem diferentes enzimas quando necessrias. A seguir ser examinado com mais detalhe o controle da expresso gnica nos eucariotos. A transcrio controlada por protenas que se ligam a seqncias reguladoras de DNA Quando comparados com os procariotos, os eucariotos enfrentam as mesmas tarefas bsicas de coordenao da expresso gnica, porm de um modo muito mais complexo. Alguns genes tm que responder a mudanas nas condies fisiolgicas. Muitos outros so parte de circuitos genticos de desenvolvimento que organizam as clulas em tecidos e tecidos em um organismo inteiro (exceto para os eucariotos

11

unicelulares). Nesses casos, os sinais que controlam a expresso gnica so produtos de genes que regulam o desenvolvimento e no sinais do meio externo. Algumas das seqncias de DNA reguladoras so curtas, cerca de 10 pares de nucleotdeos, e atuam como um interruptor gnico, ligando ou desligando o gene, em resposta a um nico sinal. Esse tipo simples de interruptor gnico predomina nas bactrias. Nos eucariotos existem longas seqncias reguladoras de DNA (algumas vezes mais do que 10.000 pares de bases) que atuam como um microprocessador molecular, respondendo a uma variedade de sinais que so por elas integrados e que determinam a taxa de incio da transcrio. As seqncias de DNA reguladoras no funcionam por si s. Para que haja qualquer efeito essas seqncias devem ser reconhecidas por protenas denominadas protenas reguladoras que tm a capacidade de se ligarem ao DNA. a combinao de uma seqncia de DNA e suas molculas de protenas associadas que atuam como interruptor no controle da transcrio. Centenas de seqncias reguladoras de DNA foram identificadas, e cada uma delas reconhecida por uma ou mais protenas reguladoras. As protenas que reconhecem seqncias especificas de DNA o fazem porque a superfcie da protena ajusta-se perfeitamente na dupla hlice de DNA de maneira seqncia-especfica, e assim, diferentes protenas iro reconhecer diferentes seqncias de nucleotdeos. Na maioria dos casos, a protena insere-se no sulco maior da dupla hlice e realiza uma srie de contatos moleculares com os pares de bases. A protena forma pontes de hidrognio, ligaes inicas, e interaes hidrofbicas com as extremidades das bases, usualmente sem romper as pontes de hidrognio que une os pares de bases. Embora cada contato individual seja fraco, os cerca de 20 contatos que so geralmente formados na interface DNA-protena atuam juntos para assegurar que a interao seja altamente especifica e muito forte; de fato as interaes DNA-protenas esto entre as mais firmes e especficas interaes moleculares conhecidas em biologia. Embora cada exemplo de reconhecimento protena-DNA seja nico em seus detalhes, muitas das protenas responsveis pela regulao gnica contm um dos vrios padres estveis de dobramento que formam os chamados motivos estruturais. Essas regies da protena que se apresentam dobradas em motivos estruturais se ajustam ao sulco maior da dupla hlice do DNA e formam associaes estreitas com um curto trecho de pares de bases. A iniciao da transcrio gnica em eucariotos um processo complexo Os interruptores dos genes presentes em bactrias so exemplos vivos da economia e simplicidade freqentemente observada em biologia. Em eucariotos, entretanto, um gene tpico responde a muitos sinais diferentes, e sua regulao , conseqentemente, mais complexa. A polimerase do RNA de eucariotos necessita de fatores gerais de transcrio Nos eucariotos, so vrias as funes atribudas aos fatores gerais de transcrio no processo de incio da transcrio pela polimerase II do RNA: posicionar corretamente a polimerase no promotor, ajudar a separar as duas fitas da molcula de DNA para permitir que a transcrio se inicie e liberar a polimerase do RNA do promotor uma vez iniciada a transcrio. O termo geral refere-se ao fato desses fatores associam-se a todos os promotores transcritos pela polimerase II do RNA. Nesse aspecto, os fatores gerais de transcrio diferem dos repressores e ativadores (descritos em bactrias no texto VI) que atuam em genes ou operons especficos, e das protenas reguladoras dos genes eucariticos (discutidas a seguir), que tambm atuam apenas em genes especficos. A Figura 1 mostra um modelo de como os fatores gerais de transcrio associamse aos promotores utilizados pela polimerase II do RNA. O processo de montagem do complexo de iniciao comea com a ligao do fator de transcrio TFIID a uma curta seqncia de DNA dupla hlice composta por nucleotdeos T e A, conhecida como

12

seqncia TATA ou TATA box. Ao ligar-se ao DNA, o fator TFIID causa uma dramtica distoro local na molcula de DNA. Tal distoro funciona como um sinal para a subseqente montagem de outras protenas no promotor. A seqncia TATA um componente presente em praticamente todos os promotores utilizados pela polimerase II do RNA e localiza-se cerca de 25 nucleotdeos a montante (upstream) do stio de incio da transcrio. Aps a ligao do primeiro fator geral de transcrio ao DNA, outros fatores tambm se ligam, juntamente com a polimerase II do RNA, para formar o complexo de iniciao da transcrio. Protenas reguladoras controlam a distncia a expresso de genes eucariticos As bactrias utilizam protenas reguladoras (ativadoras e repressoras) para regular a expresso de seus genes. As clulas dos eucariotos utilizam a mesma estratgia bsica. Embora seja necessria a presena conjunta dos fatores gerais de transcrio e da polimerase do RNA para o incio da transcrio in vitro (veja figura 1), dentro das clulas essas protenas sozinhas no conseguem iniciar a transcrio de modo eficiente. Praticamente todos os promotores eucariticos necessitam tambm de protenas ativadoras que auxiliam a associao dos fatores gerais de transcrio e da polimerase do RNA. Os stios do DNA aos quais se ligam as protenas ativadoras dos genes eucariticos foram denominados enhancers, desde que sua presena aumenta dramaticamente a taxa de transcrio. Foi muito surpreendente para os bilogos quando, em 1979, foi descoberto que essas protenas ativadoras podiam se ligar a segmentos muito distantes do promotor, a milhares de pares de bases. Alm disso, esses ativadores eucariticos podem influenciar a transcrio quando se ligam a montante (upstream) ou a jusante (dowstream) do gene. Como as seqncias enhancers e as protenas ligadas a elas funcionam a distncias to grandes? Como elas se comunicam com o promotor? Vrios modelos de ao distncia foram propostos, mas o mais simples deles parece se aplicar para a maioria dos casos. O segmento de DNA compreendido entre o enhancer e o promotor dobra-se permitindo que as protenas ligadas ao enhancer fiquem em contato ou com a polimerase do RNA ou com um dos fatores gerais de transcrio ligados ao promotor (Figura 2). Desse modo, o segmento de DNA compreendido entre o enhancer e o promotor DNA atuaria como uma estrutura de ligao que aproximaria a protena ligada ao enhancer, localizado a milhares de pares de bases, permitindo sua interao com o complexo de protenas ligadas ao promotor. Em eucariotos, as protenas reguladoras ligadas a seqncias reguladoras distantes do promotor podem aumentar ou ento diminuir a atividade da polimerase do RNA ligada ao promotor. Uma das maneiras de ao de tais protenas influenciar a montagem do complexo de iniciao. Protenas ativadoras iro facilitar a montagem do complexo enquanto repressoras impedem a montagem correta. O empacotamento do DNA em nucleossomos no promotor pode afetar a iniciao da transcrio As protenas da cromatina e o DNA so parceiros no controle das atividades do material gentico dentro da clula. O cromossomo um complexo nucleoprotico intrincadamente enovelado e com muitos domnios (Figura 3), nos quais a estrutura da cromatina local est estreitamente relacionada manuteno de genes na configurao ativa ou silenciada, e a outras atividades da clula tais como a replicao do DNA, o emparelhamento e segregao dos cromossomos, e a manuteno da integridade do telmero e centrmero. Algumas regies do genoma (heterocromatina, telmero e centrmero) esto empacotadas com caractersticas estruturais especificas. Esse empacotamento diferencial definido por histonas modificadas, ou pela associao de protenas adicionais no histnicas, ou ento por molculas de RNA reguladoras, que surpreendentemente tambm esto implicadas na organizao da cromatina. Por exemplo, o X inativo dos

13

mamferos est enriquecido por variantes de histonas como a macro H2A, quase trs vezes maior que a H2A. No centrmero dos vertebrados, uma das histonas do octmero, a H3, substituda pela variante CENP-A. Esta por sua vez, forma um complexo com outras protenas do centrmero, influenciando assim o empacotamento da cromatina centromrica. Uma vez que os nucleossomos esto localizados ao longo do DNA em intervalos regulares e com pouca especificidade, provvel que eles ocorram sobre regies promotoras. Tais nucleossomos podem ser deslocados quando a transcrio do gene ativada, embora ainda no seja completamente entendido como ocorre esse deslocamento. Sabe-se, porm que a clula possui protenas especializadas cuja funo deslocar nucleossomos dos promotores e liberar o caminho para a montagem dos fatores gerais de transcrio. Outra possibilidade que, como um preldio para a iniciao, as histonas nas vizinhanas do promotor sejam quimicamente modificadas, um passo que desestabiliza os nucleossomos afetados. Nucleossomos formados em seqncias reguladoras de DNA podem tambm interferir com a expresso gnica bloqueando a ligao de protenas. Entretanto, nem sempre isso ocorre. Enquanto h evidencias de que algumas seqncias reguladoras so mantidas expostas em regies livres de nucleossomos, certas protenas reguladoras parecem capazes de ligarem-se s seqncias do DNA mesmo quando essas se encontram incorporadas em nucleossomos, possivelmente desestabilizando e desmontando parcialmente o nucleossomo nesse processo. A clula tem vrias estratgias para assegurar que o inicio da transcrio ocorra num DNA empacotado em nucleossomos. Entretanto, tambm claro que quanto mais compacta for a forma da cromatina (aquela encontrada em cromossomos mitticos, cromossomos X inativos, e outras regies da cromatina interfsica) mais resistente ela ser ao inicio da transcrio. Presumivelmente, isso ocorre porque as protenas reguladoras, os fatores gerais de transcrio, e a polimerase do RNA no podem ter acesso ao DNA quando ele est to densamente empacotado. Genes eucariticos so regulados por uma combinao de protenas Nos eucariotos, as seqncias que controlam a expresso de um gene podem se espalhar por longos segmentos de DNA. Em animais e plantas no raro encontrar seqncias reguladoras localizadas a 50.000 pares de nucleotdeos, embora a maioria desse DNA sirva apenas como espaador e no seja reconhecido por protenas reguladoras do gene. As protenas reguladoras de genes no funcionam individualmente para ligar ou desligar um gene. Enquanto essa idia cabe para muitos ativadores e repressores de bactrias, a maioria das protenas que regulam os genes dos eucariotos funcionam como parte de um comit de protenas reguladoras, todas necessrias para fazer com que o gene se expresse na clula certa, em resposta s condies corretas, no tempo certo, e com nvel de expresso adequado. O termo controle combinatorial refere-se ao modo como grupos de protenas trabalham juntas para determinar a expresso de um nico gene. Como mostrado na figura 4, muitas protenas diferentes ligam-se a seqncias reguladoras para influenciar o inicio da transcrio nos eucariotos. A maioria dos genes eucariticos possui regies reguladoras contendo numerosos stios para ambos os tipos de protenas: com ao ativadora e repressora. Padres estveis de expresso gnica podem ser transmitidos para as clulas filhas Embora todas as clulas procariticas e eucariticas sejam capazes de ligar e desligar genes, organismos multicelulares necessitam de mecanismos especiais de controle para gerar e manter seus diferentes tipos de clulas. Uma vez que uma clula de um organismo multicelular tenha se diferenciado em um tipo especfico, ela geralmente ir

14

permanecer diferenciada, e se for capaz de dividir-se, toda a sua prognie ser do mesmo tipo celular. Algumas clulas altamente especializadas nunca se dividem aps a diferenciao, como por exemplo, clulas da musculatura esqueltica e neurnios. Mas h vrios outros tipos de clulas diferenciadas, tais como fibroblastos, clulas da musculatura lisa, e clulas do fgado (hepatcitos), que iro se dividir muitas vezes durante a vida do organismo. Todos esses tipos celulares originam, quando se dividem, apenas clulas como elas mesmas: clulas de musculatura lisa no originam clulas do fgado. Isso significa que as mudanas na expresso gnica do origem as clulas diferenciadas devem ser lembradas e transmitidas para suas clulas filhas em todas as divises subseqentes, ao contrrio das mudanas temporrias na expresso gnica que ocorrem nas clulas de procariotos e eucariotos. Por exemplo, nas clulas ilustradas na figura 13, a produo de cada protena reguladora, uma vez iniciada, deve ser perpetuada nas clulas filhas em cada diviso celular. Como isso deve ocorrer? H vrias maneiras de assegurar que as clulas filhas lembrem que tipos de clulas espera-se que elas sejam. Uma das mais simples delas por meio de uma ala de feedback positivo, onde uma protena reguladora chave ativa a transcrio do gene que a codifica alm de ligar genes especficos de outros tipos celulares (figura 5). Por exemplo, a protena reguladora MyoC funciona com esse tipo de feedback. Outra maneira de manuteno do tipo celular atravs da propagao fiel da estrutura da cromatina da clula parental para a clula filha mesmo com um evento de replicao entre elas. Um exemplo disto o fenmeno da inativao do cromossomo X nos mamferos. O evento de inativao de um dos cromossomos X, o de origem paterna ou o de origem materna, ocorre no incio do desenvolvimento embrionrio e, a partir da, o mesmo cromossomo X inativado por muitas geraes seguidas. O mecanismo molecular por meio do qual o estado da cromatina transmitido no ainda totalmente conhecido em detalhes
incio da transcrio

RNA polimerase

Figura 1.Incio da transcrio de um gene eucaritico pela polimerase II do RNA. Para que a transcrio possa se iniciar so necessrios vrios fatores gerais de transcrio denominados, TFIIA, TFIIB e assim por diante. (A) o promotor contm uma seqncia de DNA denominada TATA Box, localizada a cerca de 25 nucleotdeos do stio de incio de transcrio. (B) O fator TFIID reconhece a seqncia TATA, se liga a ela, e permite a ligao do fator TFIIB. (C a E) os demais fatores de transcrio e a polimerase ligam-se ao promotor como em uma linha de montagem.

transcrio

15

Protena ativadora

Incio da transcrio Ligao de fatores gerais de Transcrio, polimerase do RNA, mediadores, etc.

Incio da transcrio
Figura 2. Modelo de ativao gnica distncia. Nesse exemplo, os fatores gerais de transcrio, os fatores de transcrio e a polimerase do RNA por si s no se associam eficientemente ao promotor e uma protena reguladora ligada ao enhancer necessria para estimular o processo de montagem do complexo de iniciao.O dobramento do DNA permite o contato entre a protena reguladora ligada ao enhancer e o complexo de iniciao ligado ao promotor. No desenho, a linha interrompida indica a grande distancia que geralmente existe entre o enhancer e o promotor.

DNA

Colar de contas

Fibra cromatnica de 30nm A fibra se organiza em alas

Figura 3. Esquema de alguns dos nveis de empacotamento da cromatina do cromossomo mittico altamente condensado. O nvel deorganizao melhor compreendido aquele em que o DNA nu associa-se s histonas formando os nucelossomos. As estruturas que correspondem aos nveis seguintes de organizao so mais especulativas.

Segmento condensado

Cromossomo mittico Cada molcula de DNA foi empacotada em cromossomos mitticos que 10.000 vezes mais curto que o DNA entendido.

16

Seqncias reguladoras do gene

DNA espaador

Fatores gerais de transcrio

Protenas Reguladoras do gene

RNA polimerase

Incio da transcrio

Figura 4. Seqncias reguladoras de um gene eucaritico tpico. O promotor a seqncia de DNA onde a polimerase do RNA e os fatores gerais de transcrio se ligam. As seqncias reguladoras do gene so usadas como stios de ligao de protenas reguladoras cuja presena no DNA afetam a taxa de incio de transcrio. As seqncias reguladoras podem estar localizadas adjacentes ao promotor, muito longe dele na direo 5 (montante) ou, a 3do gene (jusante).

III

II I

Figura 5. Esquema do modo como uma ala de feedback positivo pode criar a memria celular. A protena A uma protena reguladora que ativa sua clula progenitora que experimentou um sinal transitrio que deu incio produo da protena. (I) A protena A no normalmente produzida, pois ela necessria para sua prpria transcrio. (II) sinal transiente liga o gene A, (III) O efeito do sinal transiente lembrado em todas as clulas descendentes.

17

SINALIZAO CELULAR Adriana Ribeiro de Oliveira-Marques adaptado de Alberts e col. 2004. Os organismos multicelulares possuem um elaborado sistema de comunicao celular. Tal sistema depende de: 1. molculas-sinal extracelulares, produzidas por clulas para sinalizar clulas vizinhas ou mais distantes 2. um elaborado sistema de protenas que cada clula contem e que a habilita a responder a um conjunto particular de sinais de modo clula-especfico. Essas protenas incluem: a. protenas receptoras de superfcie celular que se ligam a molcula sinal b. uma variedade de protenas sinalizadoras intracelulares que distribuem o sinal para partes apropriadas da clula. Entre essas protenas esto: quinases, fosfatases, protenas que se ligam a GTP e protenas que interagem com as anteriormente citadas. c. no final de uma via de sinalizao intracelular esto protenas alvo, que so alteradas quando a via est ativa e mudam o comportamento da clula. Dependendo do efeito do sinal, essas protenas alvo podem ser reguladoras, canal de ons, componentes da via metablica, partes do citoesqueleto, etc Princpios gerais da comunicao celular Para facilitar a compreenso de como ocorre a sinalizao celular vamos fazer uma analogia com a transmisso de uma mensagem por telefone. Uma pessoa fala ao telefone e sua voz convertida num sinal eltrico. O sinal amplicado e a mensagem carregada na forma de impulsos eltricos pelo fio do telefone. Na extremidade oposta o sinal eltrico convertido em onda sonora que captada pelo ouvido e finalmente expressada na forma de impulsos no encfalo de quem a recebeu. Em passos sucessivos ao longo dessa via de comunicao, formas diferentes de sinais so usadas para representar a mesma informao: o ponto crtico na transmisso ocorre quando a informao convertida de uma forma em outra. Esse processo de converso chamado transduo de sinal. Os sinais que passam entre as clulas so mais simples que as mensagens humanas: um tipo particular de molcula produzido por uma clula a clula sinalizadora e detectada por outra a clula alvo por meio de protenas receptoras, que reconhecem e respondem de modo especifico molcula sinal. A protena receptora realiza o primeiro passo numa srie de processos de transduo na extremidade final da via de sinalizao, na clula alvo, aonde o sinal extracelular que chega convertido num sinal intracelular que direciona o comportamento da clula. Os dois pontos chave dizem respeito recepo e a transduo do sinal. Quando os bilogos referem-se a sinalizao celular, so esses dois aspectos que eles geralmente tem em mente. A seguir sero brevemente descritos os diferentes tipos de sinais que as clulas enviam umas para as outras. Sinais podem atuar em curta ou longa distncia As clulas num organismo multicelular usam centenas de tipos de molculas extracelulares para enviar sinais uma para as outras protenas, peptdeos, aminocidos, esterides, derivados de cidos graxos e at gases dissolvidos mas h apenas uma dezena de modos bsicos de comunicao. A maneira mais pblica de se comunicar transmitir o sinal pelo corpo todo secretando na corrente sangunea do organismo (Figura 1D). Molculas sinais usadas dessa maneira so chamadas hormnios, e em animais, as clulas que produzem hormnios so chamadas clulas endcrinas.

18

Menos publico o processo conhecido como sinalizao parcrina. Nesse caso, as molculas sinal difundem localmente pelo meio extracelular, relembrando as clulas nas vizinhanas da clula secretora: elas atuam como mediadores locais (Figura 1B). Muitas das molculas-sinal que mediam a inflamao nos locais de infeco ou proliferao celular em cicatrizao funcionam dessa maneira. Um terceiro modo de comunicao a sinalizao neuronal. Assim como na sinalizao hormonal, mensagens so freqentemente entregues em longas distancias; na sinalizao neuronal, entretanto, mensagens so liberadas em linhas privadas para clulas individuais de modo muito rpido (Figura 1C). O axnio de um neurnio termina em junes especializadas (sinapses) nas clulas alvo distantes do corpo celular neuronal. Quando ativada por sinais do meio ou por outros nervos, o neurnio manda impulsos eltricos ao longo do axnio com velocidade superior a 100 metros por segundo. Chegando ao axnio terminal, os sinais eltricos intracelulares so convertidos em uma forma qumica extracelular: cada impulso eltrico estimula o terminal a secretar um pulso de um sinal qumico chamado neurotransmissor. Neurotransmissores difundem atravs do estreito gap (<100nm) entre a membrana do axnio terminal e a membrana da clula alvo em menos que um mili-segundo. Um quarto modo de comunicao o clula a clula o mais intimo e a curta distancia de todos no requer a liberao da molcula secretada. Ao contrrio, as clulas fazem contato direto por meio de molculas sinalizadoras em suas membranas plasmticas. A mensagem liberada pela ligao de uma molcula sinal ancorada na membrana plasmtica da clula sinalizadora para uma molcula receptora embebida na membrana plasmtica da clula alvo (Figura 1A) Enquanto um sinal neuronal como uma chamada telefnica, essa sinalizao dependente de contato como uma conversa frente a frente.

Figura 1: Diferentes tipos de Sinalizao. (A) dependente de contato, (B) parcrina, (C) sinptica, (D) endcrina, (E) autcrina e (F) juno do tipo Gap (modificada de Alberts e col., 2004).

No desenvolvimento embrionrio, por exemplo, a sinalizao dependente de contato tem um papel importante nos tecidos nos quais as clulas adjacentes, que so inicialmente semelhantes, tm que se tornar especializadas de modos diferentes. Assim, na linha de clulas que originam o tecido nervoso, clulas individuais tm que ser indicadas para diferenciar-se como neurnios enquanto suas vizinhas permanecem no

19

neuronais. Os sinais que controlam esse processo so transmitidos via contato clulacelula: cada futuro neurnio inibe seu vizinho imediato de diferenciar-se tambm como neurnio. Cada clula responde a um nmero limitado de sinais. Uma clula tpica de um organismo multicelular esta exposta a centenas de sinais diferentes de seu meio. Eles podem estar livres no fluido extracelular, ou ancorados na matriz extracelular, ou ligado s superfcies de clulas vizinhas. A clula deve responder de modo seletivo a esta mistura de sinais, desprezando alguns e reagindo a outros, de acordo com a sua funo especializada. Se a clula vai reagir a uma molcula sinal depende, antes de qualquer coisa, dela possuir um receptor para esse sinal. Sem um receptor, a clula ser surda ao sinal e no pode responder a ele. Produzindo apenas um numero limitado de receptores entre as centenas possveis, a clula restringe a gama de sinais que podem afeta-la. Mas esta gama reduzida de sinais pode ainda ser usada para controlar o comportamento da clula por meio de modo complexo. A complexidade pode ser de dois tipos. Primeiro, um sinal, ligando a um tipo de protena receptora, pode causar uma multiplicidade de efeitos na clula alvo: forma, movimento, metabolismo, expresso gnica tudo pode ser alterado conjuntamente. O sinal de um receptor-de-superfcie-daclula geralmente retransmitido para o interior da clula por um conjunto de outros componentes intracelulares que produz efeitos amplos. Esse sistema de retransmisso e os alvos intracelulares nos quais ele atua variam de um tipo de clula especializada para outro, de modo que clulas diferentes respondem de modo diferente a um mesmo sinal. Assim, quando uma clula do msculo cardaco exposta ao neurotransmissor acetilcolina, ela diminui a freqncia de contraes, mas quando uma glndula salivar exposta ao mesmo sinal, ela secreta componentes da saliva (Figura 2).

Figura 2: Diferentes respostas induzidas pelo neurotransmissoraAcetilcolina. (A) clula muscular cardaca, (B) clula musculoesqueltica e (C) clula de glndula salivar (modificada de Alberts e col., 2004).

O segundo tipo de complexidade existe porque numa clula tpica uma coleo completa de receptores diferentes algumas dzias deles. Esse nmero suficiente para tornar a clula simultaneamente sensvel a muitos sinais extracelulares. Esses sinais, atuando juntos, podem evocar respostas que so mais do que a soma dos efeitos que cada sinal poderia causar separadamente. Os sistemas de retransmisso intracelulares dos diferentes sinais interagem, de modo que a presena de um sinal modifica a resposta de outro. Assim uma combinao de sinais pode simplesmente fazer com a clula sobreviva; outra combinao pode dirigir a clula a uma via de especializao; outra pode leva-la a dividir-se; e na ausncia de qualquer sinal a clula pode ser programada para morrer. Desse modo, um nmero relativamente pequeno de sinais pode ser usado em diferentes combinaes para fornecer controles sutis e complexos sobre o comportamento da clula.

20

Receptores retransmitem sinais por meio de vias de sinalizao intracelular Antes de traar com detalhes como uma molcula sinal particular controla o comportamento da clula, importante saber alguns princpios gerais. A recepo de sinais comea no ponto onde um sinal originado fora da clula encontra a molcula alvo pertencente prpria clula. Em quase todos os casos a molcula alvo uma protena receptora, e ela usualmente ativada por apenas um tipo de sinal. A protena receptora desempenha o passo primrio de retransmisso: ela recebe o sinal externo, e gera em resposta um novo sinal intracelular (Figura 3). Como regra, esse apenas o primeiro evento em uma cascata subseqente de sinais intracelulares nos processos de transduo do sinal. Neles, a mensagem passada de um conjunto de molculas sinalizadoras intracelulares para outro, cada um deles produzindo por sua vez o prximo sinal at que, por exemplo, uma enzima de uma via metablica seja ativada, a expresso de um gene ativada, ou o citoesqueleto entre em funcionamento. Esse efeito final a resposta da clula. Essas cadeias de retransmisso, ou cascatas de sinalizao, de molculas sinalizadoras intracelulares tm vrias funes cruciais (Figura 3): 1. Elas transferem fisicamente o sinal de um ponto no qual ele foi recebido para a maquinaria celular que ir responder, a qual est freqentemente localizada em alguma outra parte da clula. 2. Elas transformam o sinal numa forma molecular que capaz de estimular uma resposta 3. Na maioria dos casos, cascatas de sinais tambm amplificam o sinal recebido, tornando-o mais forte, de modo que poucas molculas sinais extracelulares so suficientes para evocar uma grande resposta. 4. as cascatas de sinalizao podem distribuir o sinal de modo a que ele influencie vrios processos em paralelo: em qualquer passo da via, o sinal pode divergir (separar) e ser retransmitido para um nmero de diferentes alvos intracelulares, criando ramos no fluxo de informao e evocando uma resposta complexa. 5. Por ultimo, cada passo nessa cascata de sinalizao est aberto interferncia de outros fatores, de modo que a transmisso do sinal pode ser modulada de acordo com as condies que prevalecerem dentro ou fora da clula. Vamos inicialmente considerar algumas das vias de sinalizao mais simples antes de considerar as cascatas mais longas que retransmitem sinais dos receptores na membrana da clula nas clulas animais. Algumas molculas sinal podem cruzar a membrana plasmtica Molculas sinal extracelulares em geral so de duas classes, correspondendo a dois tipos fundamentalmente diferentes de tipos de receptores. A primeira e maior classe de sinais consiste de molculas que so muito grande ou muito hidroflicas para atravessarem a membrana plasmtica da clula alvo. As protenas receptoras dessas molculas sinais devem estar localizadas nas membranas das clulas alvo e retransmitir a mensagem atravs da membrana (Figura 4A) A segunda, e menor classe de sinais consiste de molculas que so suficientemente pequenas e hidrofbicas para difundir pela membrana plasmtica. Para essas molculas sinal, os receptores encontram-se no interior das clulas alvo e so geralmente ou protenas reguladoras de genes (discutidas no cap 8) ou enzimas. Elas so ativadas quando a molcula sinal liga-se a elas (Figura 4B) As molculas sinal, hidrofbicas, mais bem conhecidas so os hormnios esterides (inclusive cortisol, estradiol e testosterona) e o hormnio da tireide (tiroxina). Todas elas passam atravs da membrana plasmtica da clula alvo e ligase a protenas receptoras localizadas ou no citosol, ou no ncleo. Os receptores para esses hormnios so protenas reguladoras de genes que esto presentes na forma inativa na clula no estimulada. Quando seu hormnio correspondente se liga, a protena receptora sofre uma grande mudana conformacional que possibilita que ela

21

se ligue a seqncias reguladoras correspondentes no DNA; ela pode ento promover ou a inibio ou a ativao da transcrio de um conjunto de genes. H protenas receptoras diferentes para cada tipo de hormnio; cada receptor atua num conjunto diferente de stios reguladores e assim regula um conjunto diferente de genes. O papel essencial dos receptores dos hormnios esterides evidenciado pela dramtica conseqncia de uma mutao, a que causa a falta de receptores de testosterona em humanos. O hormnio masculino testosterona atua no feto e na puberdade como um sinal para o desenvolvimento de sinais para o desenvolvimento das caractersticas sexuais secundrias. Alguns raros indivduos so geneticamente machos (XY), mas no possuem o receptor de testosterona como resultado de uma mutao no gene correspondente: eles produzem hormnio, mas suas clulas no respondem a ele. A conseqncia quem eles desenvolvem a aparncia de mulheres. Essa demonstrao do papel chave dos receptores de hormnio da testosterona mostra tambm que o receptor necessrio no em apenas um tipo de clula para mediar um efeito, mas em muitos tipos de clulas produzindo uma gama completa de caractersticas que distinguem os dois sexos. Texto modificado de:
Alberts, B.; Johnson, A.; Lewis, J; Raff, M.; Roberts, K.; Walter, P. - traduo: Ana Beatriz Gorini da Veiga e col. Biologia Molecular da Clula - Captulo 15: Comunicao Celular - 4 edio Porto Alegre Artmed, 2004

Figura 3: Diferentes tipos de protenas de sinalizao intracelular ao longo de uma rota de sinalizao, desde o receptor de superfcie celular at o ncleo. Nesse exemplo, uma srie de protenas sinalizadoras intracelulares conduz o sinal da molcula sinalizadora para dentro da clula, causando uma mudana na expresso gnica (no DNA). O sinal amplificado, convertido (transduzido) e distribudo ao longo da via

22

de sinalizao. No final, essa transmisso de sinais ativa ou inativa protenas-alvo que alteram o comportamento celular, neste caso, a protena-alvo uma protena reguladora de um gene.

Figura 4. A) Uma clula sinalizadora hidroflica incapaz de atravessar a membrana plasmtica, por isso ela se liga a receptores de superfcie celular, os quais geram um ou mais sinais dentro da clula-alvo. B) Algumas molculas sinalizadoras so suficientemente pequenas e hidrofbicas e conseguem atravessar a membrana celular e se ligar a um receptor citoplasmtico (presente do citoplasma) ou a um receptor nuclear (presente no ncleo, como este exemplo) (Figura modificada de Alberts e col., 2004)

23

O BSICO SOBRE CLULAS-TRONCO

National Institutes of Health Stem cells information - http://stemcells.nih.gov/info/basics/basics1.asp Traduo e adaptao Eliana Maria Beluzzo Dessen

Nota sobre a nomenclatura Clulas-tronco: (A nova fronteira da Medicina. Organizador Marco

Antonio Zago e Dimas Tadeu Covas. Ed. Atheneu)

Apesar de estranha lngua portuguesa, a denominao clula-tronco foi adotada neste livro porque se imps nos ltimos anos na imprensa e nos meios cientficos nacionais. Isso apenas um reconhecimento dessa tendncia por parte dos autores, no uma manifestao explcita de apoio a essa escolha. O termo constitui uma traduo literal do ingls stem cell. As lnguas latinas tm expresses que descrevem melhor sua funo primordial: clula madre (castelhano), cellula staminale (italiano) e cllule souche (francs). Em Portugal h uma forte tendncia para utilizar as expresses clula-me ou clula estaminal, que estariam mais de acordo com a ndole de nossa lngua.

CARACTERSTICAS DAS CLULAS-TRONCO As clulas-tronco possuem trs caractersticas gerais: (a) dividem-se dando origem a clulas iguais a ela, (b) so indiferenciadas e (c) podem dar origem a clulas especializadas ou diferenciadas. Os cientistas esto tentando entender: (a) porque as clulas-tronco embrionrias tm a capacidade de proliferar durante longos perodos, mais de um ano, em laboratrio, sem diferenciarem-se e (b) quais so os fatores nos organismos vivos que normalmente regulam a proliferao e renovao dessas clulas. A elucidao dessas questes pode esclarecer como a proliferao regulada durante o desenvolvimento embrionrio normal e durante o processo de diviso celular alterado que leva ao cncer. Alm disso, tais informaes permitiriam que os cientistas conseguissem cultivar clulas-tronco embrionrias em laboratrio com mais eficincia. As clulas-tronco so indiferenciadas, pois no possuem nenhuma estrutura tecido-especfica que permita a realizao de funes especializadas como, por exemplo, produzir saliva, contrair-se ou transmitir impulsos nervosos. As clulas-tronco so capazes de se renovar por longo perodo. Ao contrrio de clulas diferenciadas como musculares, sanguneas ou nervosas, que no se dividem mais, as clulas-tronco replicam-se muitas vezes. Uma populao inicial de clulas-tronco pode multiplicar-se em laboratrio muitas vezes. Clulas com essa caracterstica so ditas auto-renovveis. Foram necessrios mais de 20 anos de pesquisas para que se aprendesse a cultivar clulas embrionrias sem que elas se diferenciassem espontaneamente. Assim sendo, uma importante rea de estudo com clulas-tronco entender os sinais, no organismo maduro, que mantm a populao de clulas-tronco proliferando e indiferenciadas at que elas sejam necessrias para reparar em tecido. Essa informao fundamental para que os cientistas possam cultivar grande nmero de clulas indiferenciadas no laboratrio para experimentao futura. As clulas-tronco podem originar clulas especializadas. Quando clulas indiferenciadas originam clulas especializadas, o processo chamado diferenciao. O entendimento dos sinais internos e externos da clula que desencadeiam a diferenciao ainda incipiente. Os sinais internos so controlados pelos genes, que so os portadores das instrues para o funcionamento da clula. Os sinais externos para a diferenciao incluem substancias qumicas secretadas por outras clulas, contato fsico com clulas vizinhas e certas molculas no microambiente celular. Muitas questes sobre clulas-tronco permanecem sem resposta. Por exemplo, os sinais internos e externos para a diferenciao so os mesmos para todas as clulas? Existe um conjunto de sinais que pode ser identificado como indutores de diferenciao para todos os tipos de clulas? Respostas a essas perguntas podem levar os

24

pesquisadores a encontrar novas maneiras de controlar a diferenciao de clulas-tronco em laboratrio, uma vez que o cultivo de clulas ou tecidos pode ser usado para propsitos especficos inclusive terapia celular. As clulas-tronco encontradas em organismos no embrionrios, denominadas clulas-tronco do adulto, normalmente do origem aos tipos celulares dos tecidos nos quais residem. Por exemplo, clula-tronco de medula ssea normalmente origina clulas do sangue como hemcias, clulas brancas e plaquetas. At recentemente se achava que clulas hematopoticas - clulas que do origem s clulas do sangue no fossem capazes de gerar clulas de um tecido diferente, como clulas nervosas do crebro. Entretanto, muitos experimentos realizados nos ltimos anos mostraram que clulastronco de um tecido podem originar clulas de um tecido diferente, um fenmeno denominado plasticidade. Um exemplo de plasticidade a origem de neurnios, de clulas musculares cardacas e de clulas produtoras de insulina a partir de clulas hematopoticas. Assim, a possibilidade de usar clulas-tronco de adulto para terapias celulares tornou-se uma rea de investigao muito ativa.

AS CLULAS-TRONCO EMBRIONRIAS
Estgios do desenvolvimento embrionrio importantes para gerar clulas-tronco embrionrias As clulas tronco-embrionrias so derivadas de embries. No caso da espcie humana, os pesquisadores utilizam apenas clulas-tronco de embries que foram obtidos a partir de vulos fertilizados in vitro e que foram doados para fins de pesquisa cientfica. Os embries dos quais as clulas-tronco humanas so derivados tm cerca de 4 a 5 dias e esto no estgio de blastocisto. Os blastocistos tm trs estruturas: o trofoblasto que uma camada de clulas que rodeia o blastocisto, a blastocele cavidade no interior do blastocisto e a massa interna de clulas, com aproximadamente 30 clulas, localizada numa extremidade da blastocele.

Zona pelcida

A
Massa interna de clulas Zona pelcida em degenerao Cavidade do blastocisto trofoblasto

Figura 3. Fases iniciais do desenvolvimento embrionrio. A - Estgio de 8 clulas, B Mrula, C incio de blastocisto, D blastocisto.

25

Cultivo de clulas-tronco embrionrias em laboratrio O cultivo de clulas-tronco em laboratrio chamado de cultura de clulas. As clulas-tronco embrionrias so isoladas por transferncia da massa interna de clulas para uma placa de cultura contendo um meio nutritivo denominado meio de cultura. Nesse meio as clulas se dividem e se distribuem pela superfcie da placa. A superfcie interna da placa de cultura, geralmente, recoberta com clulas epiteliais de camundongo que foram tratadas para no se dividir. Essa camada de clulas denominada feeder layer. Ela fornece uma superfcie aderente na qual as clulas-tronco podem se unir. Alm disso, a feeder layer libera nutrientes no meio de cultura. Recentemente, foram desenvolvidos mtodos de cultivo sem a camada de clulas de camundongos o que corresponde a um grande avano tcnico, pois havia o risco de transmitir contaminantes (vrus e macromolculas) do camundongo para as clulas humanas. Durante vrios dias, as clulas da camada interna do embrio proliferam e comeam a superpopular a placa de cultura. Quando isso ocorre, o excesso de clulas transferido para outras placas de cultura contendo meio fresco. Esse processo de replaquear as clulas repetido muitas vezes, por muitos meses, chamado de subcultura. Cada ciclo de subcultura denominado passagem. Aps 6 meses, as 30 clulas originais da massa de clulas interna do blastocisto gerou milhes de clulastronco embrionrias. Tais clulas-tronco que proliferam em cultura por 6 meses sem se diferenciar so pluripotentes e constituem uma linhagem de clulas-tronco embrionrias. Uma vez estabelecidas as linhagens elas podem ser congeladas ou usadas imediatamente em experimentos. Testes de laboratrio para identificar clulas-tronco embrionrias Os testes para identificao das clulas-tronco embrionrias esto resumidos abaixo: Cultivar as clulas em cultura para ver se permanecem indiferenciadas; Estudar os marcadores de superfcie que so encontrados apenas em clulas indiferenciadas; Verificar a presena da protena Oct-4, um fator de transcrio que ajuda a ligar e a desligar genes no tempo certo, um passo importante no processo de diferenciao e desenvolvimento embrionrio; Analisar os cromossomos para detectar se esto normais; Determinar se as clulas podem ser cultivadas aps serem descongeladas; Testar se clulas so pluripotentes: (a) manipular as clulas para que se diferenciem em diferentes tecidos; (b) permitir que elas se diferenciem espontaneamente em cultura e (c) injetar as clulas em camundongos imunoreprimidos para testar a formao de teratoma, um tipo de tumor benigno. Os teratomas contem uma mistura de clulas diferenciadas ou parcialmente diferenciadas uma indicao de que as clulas-tronco embrionrias so capazes de se diferenciar em muitos tipos de clulas. Estimulao de clulas-tronco embrionrias para diferenciar As clulas-tronco so estimuladas para se diferenciar por meio do acrscimo de diferentes substncias, fatores de crescimento, ou hormnios ao meio de cultura.

CLULAS-TRONCO DO ADULTO

26

Clula-tronco do adulto uma clula indiferenciada localizada entre as clulas diferenciadas que compem tecidos ou rgos de um organismo. No organismo vivo, as clulas-tronco do adulto tm a funo de manter e reparar os tecidos nos quais elas se encontram. Essas clulas so tambm chamadas clulas-tronco adultas ou clulastronco teciduais. A origem das clulas-tronco do adulto nos tecidos desconhecida. Nos ltimos anos, clulas-tronco do adulto foram encontradas em um nmero grande de tecidos. Esse fato levou os cientistas a se perguntarem se elas no poderiam ser usadas em transplantes de clulas. Na realidade, as clulas-tronco da medula ssea (hematopoiticas), que do origem s clulas do sangue, vem sendo usadas em transplantes a cerca de 30 anos. Certos tipos de clulas-tronco do adulto tm a habilidade de se diferenciarem num grande nmero de tipos celulares quando colocadas em ambiente apropriado. Se a diferenciao dessas clulas puder ser controlada em laboratrio. Elas podero vir a ser tornar a base para terapias de muitas doenas. Onde so encontradas as clulas-tronco de adulto? As clulas-tronco do adulto foram identificadas em muitos rgos e tecidos. Um ponto importante a ser entendido sobre essas clulas que h um nmero muito pequeno de clulas-tronco nos tecidos. Acredita-se que elas residam numa pequena rea de cada tecido onde elas permanecem quiescentes (no se dividindo) por muitos anos at que sejam ativadas por doenas ou leses. Os tecidos adultos nos quais clulas-tronco j foram localizadas so: encfalo, medula ssea, sangue perifrico, vasos sanguneos, msculo esqueltico, pele, fgado, polpa dos dentes, e tecido adiposo. uma rea de pesquisa intensa e com freqncia novos tecidos entram para essa lista. Cientistas do mundo inteiro esto tentando encontrar maneiras de crescer clulastronco do adulto em cultura e manipula-las para gerar tipos celulares especficos que possam ser usados no tratamento de leses de diferentes tipos. Alguns exemplos de potenciais tratamentos incluem a substituio de clulas produtoras de dopamina no crebro de doentes de Parkinson, clulas produtoras de insulina para tratamento de diabetes do tipo I e reparo do msculo cardaco danificado por enfarto com clulas da musculatura do corao. O que se sabe sobre a diferenciao de clulas-tronco do adulto? As clulas-tronco do adulto entram em vias de diferenciao para formar clulas especializadas de diferentes tecidos nos quais elas residem (figura 4). Clulas-tronco do adulto de alguns tecidos podem tambm exibir a habilidade de formar tipos celulares de outros tecidos, um processo conhecido como plasticidade.

27

Figura 4. Diferenciao de clulas-tronco mesenquimais e hematopoiticas

Num organismo vivo as clulas-tronco podem se dividir por um longo perodo e originar clulas diferenciadas que tm formas, estruturas e funes especializadas daquele tecido. A seguir so apresentados alguns exemplos de vias de diferenciao de clula-tronco do adulto: Clula-tronco hematopoitica que origina todos os tipos de clulas do sangue: hemcias, linfcitos B e T, clulas killer, neutrfilos, basfilos, eosinfilos, moncitos, macrfagos e plaquetas (figura 4). Clula-tronco mesenquimais (estroma da medula ssea) origina uma variedade de tipos de clulas: clulas do osso (ostecitos), clulas da cartilagem (condrcitos), clulas adiposas, e outros tipos de tecido conectivo tais como os tendes, Clulas-tronco epiteliais do revestimento do trato digestrio ocorrem em criptas profundas e originam vrios tipos de clulas: clulas absortivas, clulas de Paneth e clulas enteroendcrinas, Clulas-tronco da camada basal da epiderme e na base do folculo do plo. As clulas-tronco epidermais do origem aos queratincitos, que migram para a superfcie da pele e formam uma camada protetora. As clulas-tronco foliculares originam o folculo do plo e epiderme. Um grande nmero de experimentos sugere que certas clulas-tronco de adulto so pluripotentes. Essa habilidade de diferenciar-se em mltiplos tipos celulares chamada plasticidade (ou transdiferenciao, por alguns autores). A lista seguinte apresenta exemplos de plasticidade das clulas-tronco de adulto (figura 5): Clulas-tronco hematopoiticas podem se diferenciar em trs tipos principais de clulas nervosas: neurnios, oligodendrcitos e astrcitos; clulas de msculo cardaco; clulas de fgado. Clulas-tronco estromais podem se diferenciar em: clulas de musculatura cardaca e esqueltica Clulas-tronco de crebro podem diferenciar em: clulas sanguneas e clulas de msculo esqueltico.

28

Figura 5. -Plasticidade das clulas-tronco de adulto

Pesquisas esto tentando determinar os mecanismos que conferem plasticidade s clulas-tronco de adulto. Se tais mecanismos forem identificados e controlados, as clulas existentes em um tecido sadio podem ser induzidas a repopular e reparar um tecido doente. PERGUNTAS CHAVE SOBRE CLULAS-TRONCO DO ADULTO E CLULAS-TRONCO EMBRIONRIAs Questes importantes sobre as clulas-tronco permanecem sem resposta. Entre elas esto as que se seguem: Quantos tipos de clulas-tronco do adulto existem e em quais tecidos elas existem? Quais so as fontes de clulas-tronco do adulto no corpo? Sero elas clulastronco remanescentes das clulas-tronco embrionrias, ou elas so originadas de outro modo? Por que elas permanecem num estado indiferenciado quando as clulas ao seu redor foram diferenciadas? As clulas-tronco do adulto exibem plasticidade normalmente, ou elas se transdiferenciam apenas quando manipuladas pelos cientistas? Quais so os sinais que regulam a proliferao e a diferenciao das clulas-tronco que exibem plasticidade? possvel manipular clulas-tronco do adulto para aumentar sua proliferao de modo a produzir clulas suficientes para um transplante? Existe um tipo de clula-tronco de adulto que tenha a capacidade de gerar as clulas de todos os tecidos e rgos? Quais os fatores que estimulam as clulas-tronco a migrarem para locais lesionados ou danificados?

29

SEMELHANAS ENTRE CLULAS-TRONCO EMBRIONRIAS E CLULAS-TRONCO DO ADULTO Tanto as clulas-tronco embrionrias humanas como as clulas-tronco do adulto apresentam vantagens e desvantagens com relao ao seu potencial de uso em terapia celular regenerativa. claro que as clulas-tronco embrionrias so pluripotentes enquanto as clulas-tronco do adulto so multipotentes. Assim sendo, as clulas-tronco do adulto so geralmente limitadas a diferenciar nos tipos de clulas diferentes presentes em seus tecidos ou rgos. Entretanto, h evidencias de plasticidade, como comentado acima, aumentando assim o nmero de tipos celulares que elas podem originar. Grande nmero de clulas-tronco embrionrias pode ser obtido em cultura, enquanto as clulas-tronco de adulto so raras nos tecidos e os mtodos para expandir seu nmero em cultura ainda no foram desenvolvidos. Essa uma diferena importante, pois um grande nmero de clulas necessrio para as terapias regenerativas. Uma vantagem potencial do uso de clulas-tronco do adulto que as clulas do prprio paciente podem ser expandidas e reintroduzidas. Isso significa que no haver problemas de rejeio das clulas transplantadas. As clulas-tronco embrionrias quando injetadas em um paciente podem causar rejeio. Entretanto, ainda no foi determinado se clulas-tronco embrionrias humanas podem causar algum tipo de rejeio.

POSSIBILIDADES DE UTILIZAO DE CLULAS-TRONCO HUMANAS E OS OBSTCULOS A SEREM

VENCIDOS PARA VIABILIZAR SEU USO EM TERAPIA

H vrios entraves de ordem tcnica que precisam ser vencidos para que as clulas-tronco possam passar a ser empregadas rotineiramente em terapia celular. Um dos principais objetivos das pesquisas com clulas-tronco embrionrias humanas a identificao de como as clulas indiferenciadas tornam-se diferenciadas. Os cientistas sabem ligar ou desligar determinados genes um processo crucial. Algumas das mais srias condies mdicas como cncer e defeitos congnitos so devidos a anormalidades na diviso celular anormal e na diferenciao. Uma melhor compreenso do controle gentica e molecular desses processos pode dar informaes sobre como tais doenas ocorrem e sugerir novas estratgias para terapia. Os cientistas ainda no compreendem completamente os sinais que ligam ou desligam genes na diferenciao das clulas-tronco. Uma potencial aplicao das clulas-tronco a gerao de rgo e tecidos para substituir tecidos lesados e que atualmente s possvel a partir de doao de rgos de pessoas com morte cerebral. Para realizar as promessas de uso, os cientistas devem ser capazes de reproduzir, manipular e diferenciar as clulas em nmero suficiente para os transplantes. A seguinte lista de passos precisa ser obtida: Proliferar extensivamente e gerar quantidades suficientes de tecido, Diferenciar as clulas no tipo celular desejado, Garantir a sobrevivncia das clulas no corpo do transplantado, aps o transplante, Garantir a integrao das clulas transplantadas no tecido do receptor, Garantir o correto funcionamento das clulas durante o perodo de vida do transplantado, Evitar qualquer tipo de dano no transplantado, inclusive rejeio.

30

CLONAGEM
Mayana Zatz

A clonagem um mecanismo comum de propagao da espcie em plantas ou bactrias. Em humanos, os clones naturais so os gmeos idnticos que se originam da diviso de um mesmo vulo fertilizado. A grande revoluo da Dolly abriu caminho para a possibilidade de clonagem humana ao demonstrar, pela primeira vez, que era possvel clonar um mamfero - isto , produzir uma cpia geneticamente idntica, a partir de uma clula somtica diferenciada. Para entendermos porque esta experincia foi surpreendente precisamos recordar um pouco de embriologia. Todos ns j fomos uma clula nica, resultante da fuso de um vulo e de um espermatozide. Esta primeira clula j tem no ncleo o DNA com toda a informao gentica necessria para o novo ser. No ncleo das nossas clulas, o DNA se organiza em pares de cromossomos e apresenta-se muito condensado. Com exceo das clulas sexuais o vulo e o espermatozide, que tm 23 cromossomos , em todas as outras clulas do corpo humano h 46 cromossomos (23 pares) em seus ncleos. As clulas do corpo, no sexuais, so as chamadas clulas somticas. A grande contribuio da clonagem da Dolly foi justamente a descoberta que uma clula somtica de mamfero, j diferenciada, poderia ser reprogramada ao estgio inicial e voltar a ser totipotente. Os cientistas escoceses realizaram isso ao transferirem o ncleo de uma clula somtica da glndula mamria de uma ovelha para um vulo enucleado quer dizer, de onde tinham retirado o ncleo. Surpreendentemente, o vulo comeou a comportar-se como um vulo recm-fecundado por um espermatozide. Clonagem reprodutiva Para obteno de um clone, o vulo para o qual os cientistas transferiram o ncleo da clula somtica foi inserido no tero de uma outra ovelha. Se desejssemos fazer clonagem humana reprodutiva, teramos que retirar o ncleo de uma clula somtica que, teoricamente, poderia ser de qualquer tecido de uma criana ou adulto, inserir o ncleo em um vulo, e depois implant-lo no tero de uma mulher, que funcionaria como barriga de aluguel. Se o vulo se desenvolvesse teramos um novo ser com as mesmas caractersticas fsicas da criana ou adulto de quem foi retirada a clula somtica. Seria como um gmeo idntico nascido posteriormente (Figura 6). J sabemos que esse processo no fcil. Dolly s nasceu depois de 276 tentativas fracassadas. Alm disso, dentre os ncleos das 277 clulas da me de Dolly inseridos em um vulo sem ncleo, 90% no alcanaram nem o estgio de blastocisto. As tentativas posteriores de clonar outros mamferos, camundongos, porcos, bezerros, um cavalo e um veado, tambm mostram eficincia muito baixa e uma proporo muito grande de abortos e embries malformados. Penta, a primeira bezerra brasileira clonada a partir de uma clula somtica adulta, em 2002, morreu com um pouco mais de um ms. Ainda em 2002, foi anunciada a clonagem do copycat, o primeiro gato de estimao clonado a partir de uma clula somtica adulta. Para chegar a isso, foram utilizados 188 vulos que geraram 87 embries e apenas um animal vivo. Na realidade, experincias recentes, com diferentes modelos animais, tm mostrado que a reprogramao da clula somtica para um estgio embrionrio, indiferenciado, que originou Dolly, extremamente difcil. Ian Wilmut, o cientista escocs famoso pela experincia que resultou no nascimento de Dolly, afirma que praticamente todos os animais clonados nos ltimos anos a partir de clulas no-embrionrias esto com problemas (Rhind, 2003). Entre os diferentes defeitos dos pouqussimos animais que nasceram vivos aps inmeras tentativas, observaram-se: placentas anormais, gigantismo em ovelhas, defeitos cardacos em porcos, problemas pulmonares em vacas, ovelhas e porcos, problemas imunolgicos, falha na produo de leuccitos, defeitos musculares em carneiros. De acordo com

31

Hochedlinger e Jaenisch (2003), os avanos recentes em clonagem reprodutiva permitem quatro concluses importantes: A maioria dos clones morre no incio da gestao; os animais clonados tm defeitos e anormalidades semelhantes independentemente da clula doadora ou da espcie; essas anormalidades provavelmente ocorrem por falhas na reprogramao do genoma das clulas somticas; a eficincia da clonagem depende do estgio de diferenciao da clula doadora. De fato, a clonagem reprodutiva a partir de clulas embrionrias tm mostrado uma eficincia de 10 a 20 vezes maior, provavelmente porque os genes importantes no incio da embriognese esto ainda ativos no genoma da clula doadora. (Hochedlinger e Jaenisch, 2003). Entre todos os mamferos j clonados, interessante notar que a eficincia um pouco maior em bezerros. Outro fato intrigante no se ter notcias de macaco que tenha sido clonado. Talvez por essa razo, a cientista inglesa Ann McLaren afirma que as falhas na reprogramao do ncleo somtico podem vir a se constituir em barreira intransponvel para a clonagem humana. Mesmo assim, pessoas como o mdico italiano Antinori e a seita dos raelianos defendem a clonagem humana, um procedimento que tem sido proibido em todos os pases. De fato, em 2003, as academias de cincias de 63 pases, inclusive a brasileira, formalizaram documento conjunto em que pedem o banimento da clonagem reprodutiva humana. O fato que a simples possibilidade de clonar humanos suscita discusses ticas em todos os segmentos da sociedade: Por que clonar? Quem deveria ser clonado? Quem iria decidir? Quem ser o pai ou a me do clone? O que fazer com os clones que nascerem defeituosos? Na realidade o maior problema tico atual o enorme risco biolgico associado clonagem reprodutiva. Apesar de todos estes argumentos contra a clonagem humana reprodutiva, as experincias com animais clonados tm nos ensinado muito acerca do funcionamento celular. Por outro lado, a tecnologia de transferncia de ncleo para fins teraputicos, a chamada clonagem teraputica, poder ser extremamente til para obteno de clulastronco embrionrias. A tcnica de clonagem teraputica para obteno de clulas-tronco embrionrias Se tivermos um vulo humano cujo ncleo foi substitudo por um ncleo de clula somtica e deixarmos que se divida no laboratrio no em um tero -, teramos a possibilidade terica de obter blastocistos e usar suas clulas-tronco embrionrias pluripotentes para formar diferentes clulas (Figura 7). Isso j foi feito em animais. Com isso, abrir-se-iam perspectivas fantsticas para futuros tratamentos. Hoje, s se consegue cultivar em laboratrio clulas com as mesmas caractersticas do tecido de onde foram retiradas ou transform-las em poucos tipos celulares. importante esclarecer que, na clonagem para fins teraputicos, os tecidos seriam produzidos apenas em laboratrio. No se trata de clonar um feto at alguns meses dentro do tero para depois lhe retirar os rgos para transplante, como alguns acreditam.

32

Figura 6. Clonagem reprodutiva

. Figura 7. Clonagem teraputica

33

Aspectos ticos As 63 academias de cincia do mundo que se posicionaram contra a clonagem reprodutiva defendem as pesquisas com clulas embrionrias para fins teraputicos. Em relao aos que acham que a clonagem teraputica pode abrir caminho para clonagem reprodutiva, devemos lembrar que existe uma diferena fundamental entre os dois procedimentos: a implantao ou no em um tero humano. Bastaria simplesmente proibir a implantao no tero para conter os abusos! A cultura de tecidos uma prtica comum em laboratrio. realizada a partir de diversos tipos de clulas, sem dilemas ticos. No caso da clonagem teraputica, a diferena seria o incio da cultura a partir de vulos que permitiriam a produo de qualquer tecido no laboratrio. Ou seja: ao invs de poder produzir-se apenas um tipo de tecido, j especializado, o uso de vulos permitiria fabricar qualquer tipo de tecido. Em relao ao risco de comrcio de vulos, esse risco seria o equivalente ao que ocorre hoje com transplante de rgos. Em relao ao problema da destruio de embries humanos, novamente devemos lembrar que estamos falando de cultivar tecidos - ou, futuramente, rgos -, a partir de embries e que esses nunca sero inseridos em um tero. Sabemos que 90% dos embries gerados em clnicas de fertilizao e inseridos no tero de uma mulher no geram vida. Alm disso, um trabalho recente (Mitalipova et al., 2003) mostrou que clulas obtidas de embries de m qualidade, que no teriam potencial para gerar uma vida, mantm a capacidade de gerar linhagens de clulas-tronco embrionrias em laboratrio e, portanto, de gerar tecidos. Ao usar clulas-tronco embrionrias com potencial baixssimo de gerar indivduos para regenerar tecidos em uma pessoa condenada por uma doena letal, poderamos interpretar que na realidade estamos criando vida. Isso comparvel ao que se faz hoje em transplante quando se retira rgos de uma pessoa com morte cerebral (mas que poderia permanecer em vida artificialmente mantida por mais tempo). extremamente importante que as pessoas entendam a diferena entre clonagem reprodutiva humana, clonagem teraputica e terapia celular com clulas-tronco embrionrias antes de tomar posio. Por outro lado, tambm no podemos acreditar que as clulas-tronco vo curar todas as doenas humanas. As pesquisas que esto iniciando agora sero fundamentais para responder a questes sobre o potencial das clulas-tronco adultas em comparao com as embrionrias, que doenas podero ser tratadas e quais so os benefcios e riscos da terapia celular. Situao brasileira Com a aprovao pela Cmara dos Deputados da Lei de Biossegurana, no dia 2 de maro de 2005, o Brasil entra na seleta lista de pases do mundo em que os cientistas podem realizar pesquisas com clulas-tronco embrionrias e trabalhar para encontrar tratamentos para doenas genticas at hoje incurveis e para leses fsicas ainda irreversveis. Em alguns casos, as clulas-tronco embrionrias so a nica esperana. Os cientistas apostam muito nessas clulas embrionrias, pois elas so as nicas capazes de produzir todos os 216 tecidos do nosso corpo. A esperana que inmeras doenas, entre elas as neuromusculares, o diabetes, o mal de Parkinson e as leses de medula possam ser tratadas pela substituio ou correo de clulas ou tecidos defeituosos. A terapia celular com clulas-tronco representa tambm um grande avano nas tcnicas existentes hoje de transplante de rgos. Se as pesquisas derem os resultados esperados, dever ser possvel no futuro fabricar tecidos e rgos em quantidade suficiente para todos. Seria o fim das longas filas de transplante de rgos. Do mesmo modo que trocamos peas do nosso carro poderemos substituir ou corrigir a funo de rgos com defeitos. Mas para chegar l, ainda temos que pesquisar e estudar muito.

34

As pesquisas com clulas-tronco do adulto, por sua vez, j foram iniciadas em pacientes cardacos e em outras doenas como esclerose mltipla, acidente vascular ou diabetes, a maior pesquisa do mundo com pacientes cardacos est sendo realizada no Brasil com 1.200 pessoas. Mas essas clulas tm algumas limitaes. Hoje, elas s podem ser transformadas em clulas de alguns dos tecidos do corpo. Em especial, os pesquisadores sabem como transformar as clulas-tronco do adulto em clulas dos rgos ou tecidos de onde foram retiradas: por exemplo, em clulas da medula ssea, que produz os componentes bsicos do sangue. A terapia com clulas-tronco do adulto tm dado bons resultados no tratamento de leucemia. Nele, clulas-tronco do adulto da medula ssea e mais recentemente do cordo umbilical e da placenta, so transplantadas nos pacientes a partir de doadores compatveis. Outra tcnica utilizada ainda experimentalmente a de auto-transplante na qual as clulas-tronco so retiradas e reinjetadas no paciente para o tratamento de leses cardacas e na recuperao do tecido nervoso de pessoas que sofreram acidentes vasculares. Mas ningum sabe ainda se o tratamento eficiente - por enquanto, uma tentativa teraputica experimental. A m notcia que o auto-transplante no pode resolver o problema dos mais de 5 milhes de brasileiros portadores de doenas genticas, pois o defeito est presente em todas as suas clulas. Para essas pessoas talvez seja necessrio o uso de clulas-tronco obtidas de embries.
Referncias: Hochedlinger K, Jaenish R (2003): Nuclear transplantation, embryonic stem cells and the potential for cell therapy. N. Engl. Journal of Medicine 349:275-212 Mitalipova M, Calhoun J, Shin S, Wininger D et al. (2003): Human embryonic stem cells lines derived from discarded embryos. Stem cells 21:521-526 Rhind SM, Taylor JE, De Sousa PA, King TUI, McGarry M, Wilmut I (2003): Human Cloning: can it be made safe? Nature reviews 4:855-864

35

REPROGRAMAO CELULAR
Fernando Nodari

Ao longo do desenvolvimento de um embrio, suas clulas vo se comprometendo e diferenciando, o que as tornam cada vez mais especializadas e cada vez menos potentes. Esses processos de desenvolvimento e diferenciao celular so acompanhados por modificaes epigenticas no DNA da clula. Essas modificaes no alteram a seqncia de bases do DNA, mas so transmitidas para as clulas filhas aps a mitose, e fazem com que genes especficos sejam expressos ou reprimidos. Como conseqncia das modificaes epigenticas cada linhagem celular tem um conjunto especfico de genes expressos e reprimidos. Aparentemente esse processo de diferenciao irreversvel, a no ser atravs de modificaes experimentais. Fazer com que uma clula diferenciada ou comprometida volte alguns passos do caminho da diferenciao e se desdiferencie chamado reprogramao celular. Para que isso ocorra no basta apagar as modificaes epigenticas de uma clula, necessrio, tambm, refazer as modificaes morfolgicas e funcionais caractersticas de uma clula desdiferenciada. Dois tipos de experimentos tentam entender a reprogramao celular: a) experimentos de clonagem e b) experimentos que testam a plasticidade celular. Experimentos de clonagem Para realizar uma clonagem so necessrias duas clulas: um ovcito e uma clula diferenciada como, por exemplo, uma clula diplide da pele. A clula diferenciada induzida a se manter no estgio G0 (Fig. 8), seu ncleo removido e implantado em um ovcito previamente anucleado. Em seguida so aplicados dois estmulos: um deles (choque eltrico, no caso de ovelhas, e meio de cultura com estrncio, no caso de ratos) induz a fuso do ncleo com o citoplasma do ovcito e o outro (estmulo qumico) ativa o ovcito. Tais estmulos provocam a reprogramao do ncleo, ou seja, ele se desdiferencia e se o processo de reprogramao ocorrer de modo correto a clula tornase totipotente. O genoma dessa nova clula idntico ao da clula diferenciada, doadora do ncleo. A eficincia da clonagem est diretamente relacionada ao estado de diferenciao da clula doadora do ncleo. O que diferencia os dois tipos de clonagem, reprodutiva ou teraputica, o destino dado nova clula. Na clonagem teraputica, ela induzida, em laboratrio, a diferenciarse em um tipo celular especifico, tecido ou rgo a ser usado em terapia celular. Por exemplo, um paciente portador de mal de Alzheimer poderia doar clulas diferenciadas de pele para que, em laboratrio, elas fossem diferenciadas em clulas do sistema nervoso e em seguida fossem implantadas em seu crebro. Esse tipo de terapia ainda no realizado atualmente. Na clonagem reprodutiva, essa nova clula implantada num tero de uma me de aluguel para dar origem a um organismo com genoma idntico ao do doador da clula diferenciada. H barreiras tcnicas na clonagem reprodutiva. Uma delas a ausncia das modificaes epigenticas desencadeadas pela maturao do ovcito e do espermatozide e pela fertilizao do ovcito que preparam o genoma dos gametas para o incio correto do desenvolvimento embrionrio. Em outras palavras, quanto mais diferenciada for a clula doadora do ncleo, menor ser a eficincia de clonagem. Dependendo da qualidade do processo de reprogramao trs resultados so possveis: 1. a ausncia de reprogramao do genoma resulta na morte imediata do embrio; 2. a reprogramao parcial permite a sobrevivncia dos clones por um certo perodo, porm resulta em fentipos anormais e/ou letais em vrios estgios do desenvolvimento; 3. a ocorrncia de reprogramao completa, resulta em animais completamente normais. Os fentipos de embries clonados observados at hoje sugerem que a reprogramao completa a exceo. Para aumentar a porcentagem de sucesso da clonagem reprodutiva necessrio tratar separadamente os dois genomas

36

parentais para induzir as modificaes epigenticas estabelecidas durante a gametognese. Atualmente, no possvel realizar tais modificaes. As dificuldades tcnicas acima mencionadas nos levam a duas perguntas muito distintas: 1. Falhas na reprogramao celular podem interferir na clonagem teraputica? A clula-tronco embrionria clonada para fins teraputicos no precisa ter a habilidade de refazer todo o desenvolvimento fetal e produzir um organismo completo, ela precisa, apenas, ser capaz de produzir, em laboratrio, um tipo celular, um tecido ou um rgo. Assim sendo, as clulas cuja reprogramao no foi adequada so automaticamente descartadas caso no conseguem seguir adiante o processo de diferenciao desejado. 2. Um embrio clonado equivalente a um embrio fertilizado? No embrio originado por clonagem o contedo gentico derivado de um nico indivduo e, assim sendo, esse embrio produto de tecnologia laboratorial e no de um evento natural. Por essa razo, h pesquisadores que defendem o ponto de vista de que no h criao de uma nova vida, mas sim apenas a propagao de uma vida existente, pois no ocorreu meiose, troca gentica ou concepo. Experimentos que testam a plasticidade celular Uma das possibilidades de testar a plasticidade de clulas por meio da fuso de clulas diferenciadas com clulas-tronco embrionrias. Nesse caso espera-se que fatores presentes na clula-tronco embrionria induzam a desdiferenciao do ncleo diferenciado. Esse processo produz clulas com caractersticas de clula-tronco embrionria, porm, tetraplides (4n). Em outra linha de pesquisa cultivam-se clulas diferenciadas em meio de cultura apropriado para clulas-tronco embrionrias e adicionam-se alguns dos fatores de transcrio responsveis por manter uma clula-tronco indiferenciada. Esse procedimento induz as clulas diferenciadas a desdiferenciar. Essas clulas so capazes de produzir clulas das trs camadas germinativas (ectoderma, mesoderma e endoderma), porm, de forma desordenada e sem controle. Em uma terceira linha de pesquisa tenta-se demonstrar que clulas-tronco adultas presentes nos tecidos originados de um determinado folheto embrionrio (ectoderma, por exemplo), sob condies especficas de cultura ou atravs de implantao em diferentes tecidos, seriam capazes de produzir clulas diferenciadas de um folheto embrionrio diferente, alm do seu prprio, Ou seja, elas passariam de pluripotentes a multipotentes. Todas as pesquisas citadas nos itens a e b tentam entender quais so os fatores envolvidos no processo de desdiferenciao e como eles atuam, ou seja, tentam compreender como modificaes epigenticas no DNA so feitas e desfeitas. Com isso, ser possvel produzir clulas-tronco pluripotentes ou totipotentes a partir de clulas que podem ser encontradas no organismo adulto e utilizar essas clulas desdiferenciadas nas terapias em vez das polmicas clulas tronco embrionrias. Porm, muitos cientistas dizem que ainda no h evidncias de que as clulas-tronco adultas possam ser to versteis quanto as embrionrias. Apesar dos cientistas j terem conseguido clonar algumas espcies de animais (exemplo, ovelhas, ratos e vacas) e j terem conseguido produzir clulas desdiferenciadas em laboratrio, os mecanismos moleculares responsveis pelo processo de desdiferenciao ainda so desconhecidos.H indicaes de que RNAs mensageiros e/ou protenas citoplasmticas (ex.: fatores de transcrio) exeram um papel importante na reprogramao do ncleo celular. H, porm, muitas dificuldades de ordem tcnica nesses tipos de experimentos, com isso, so necessrias anlises cuidadosas dos resultados, por exemplo, atualmente so exigidas evidncias de desdiferenciao (expresso de genes relacionados a pluripotncia, represso da expresso de genes caractersticos de uma clula diferenciada, capacidade de auto-renovao e plasticidade) para comprov-la. Isso faz com que os resultados surjam lentamente, porm, de forma confivel.

37

At o momento essas pesquisas produziram muitos resultados promissores, porm, ainda sero necessrios muitos anos para que consigamos entender como podemos reprogramar uma clula e mudar seu destino.

Figura 8: Fases do ciclo de vida celular.

38

CLULAS-TRONCO: PROGRESSOS CIENTFICOS E O FUTURO DAS PESQUISAS

Silvio Higa

O que se sabe a respeito de clulas-tronco embrionrias (pluripotentes)? So obtidas de blastocisto pr-implantacionais, cerca de 5 dias aps a fertilizao. J possvel cultivar estas clulas in vitro por mais de dois anos sem que haja diferenciao. O gene da enzima telomerase est ativo o que possibilita a manuteno de longos telmeros, isto garante a capacidade de replicao por muitas geraes. No possuem cromatina sexual, ou seja, ainda no ocorreu a inativao de um dos cromossomos X. O que se sabe a respeito de clulas-tronco adultas? Podem ser encontradas no crebro, medulas sseas, sangue perifrico, msculos esquelticos, tecido adiposo, tecido epitelial da pele e do tubo digestrio, crnea, polpa dentria, retina, fgado e pncreas. Portanto, so encontradas em tecidos que tem origem a partir dos trs folhetos embrionrios (ectoderma, mesoderma e endoderma). No h evidencias de que sejam pluripotentes. So raras. Geralmente so difceis de serem identificadas, isoladas e purificadas. Estima-se que na medula ssea apenas 1 em cada 10.000 ou 15.000 clulas seja uma clula-tronco. O mtodo usado para identific-las depende da determinao dos marcadores de superfcie celular e observao de padres de diferenciao em meios de cultura. No proliferarem in vitro, por um longo perodo de tempo, como o fazem in vivo. A melhor estudada at hoje a proveniente da medula ssea: clula-tronco hematopoitica que possui capacidade restrita de proliferar e de se manter indiferenciada em meio de cultura. Estes so os dois principais fatores que limitam seu uso em pesquisas e transplantes. Parece no haver diferenas qualitativas entre clulas-tronco adultas obtidas de medula ssea, cordo umbilical e sangue perifrico. Algumas parecem possuir plasticidade, ou seja, capacidade de se diferenciar em clulas de outro tecido diferente daquele do qual se originou. Por exemplo, j foi demonstrado em humanos e ratos: clulas-tronco da medula ssea deram origem a neurnios, oligodentrcitos e astrcitos. J foi demonstrado em ratos que uma nica clula-tronco hematopoitica capaz de reconstituir toda a medula ssea aps a mesma ter sido destruda por radiao. difcil - se no impossvel - distinguir clulas-tronco adultas de clulas progenitoras (clula-tronco progenitora especializada). Comparao entre clulas-tronco embrionrias e adultas O que elas tm em comum? Possuem capacidade de auto-renovao e de dar origem a clulas especializadas. Os cientistas usam tcnicas similares para marcar e monitorar a expresso de certos genes afim de identific-las. So capazes de proliferar e de se especializar quando transplantadas para animais cujo sistema imunolgico foi suprimido. O que elas tm de diferente? A principal diferena est na origem, os cientistas acreditam que as embrionrias existam apenas nos embries e que as adultas esto presentes em diversos tipos de tecidos do corpo humano.

39

As embrionrias so pluripotentes, ou seja, podem dar origem a tecidos provenientes dos trs folhetos germinativos (ectoderma, mesoderma e endoderme). Ainda no se sabe se as adultas possuem a mesma capacidade. Em laboratrio, as embrionrias podem se multiplicar por muitas geraes sem que haja diferenciao; j as adultas, sofrem diferenciao. As embrionrias, quando injetadas em cobaia cujo sistema imunolgico foi suprimido, geram teratomas (mistura de diferentes tipos celulares). O mesmo resultado no observado com as adultas.

Quais so as perguntas que ainda precisam ser respondidas a respeito de clulastronco? Existe uma cula-tronco universal? Ou seja, existe uma clula-tronco (talvez circulando no sangue) que possa gerar clulas de quaisquer rgos ou tecidos? Quais so as origens das clulas-tronco no adulto? Elas so "sobras" de clulastronco embrionrias ou elas surgem de alguma outra forma? E se a ltima alternativa for a verdadeira - como parece ser - exatamente como elas surgem e como elas permanecem em um estado indiferenciado enquanto todas as clulas ao seu redor se encontram diferenciadas? Quantos tipos de clulas-tronco adultas existem e em quais tecidos? Clulas-tronco adultas podem proliferar em meio de cultura at que seja obtida a quantidade necessria para transplante? Quais as evidncias de que clulas especializadas geradas a partir de transplantes de clulas-tronco possam substituir clulas de tecidos lesados ou danificados? A plasticidade apresentada por clulas-tronco adultas in vitro tambm ocorre in vivo? Quais so os sinais que regulam a proliferao e diferenciao das clulastronco que apresentam plasticidade? Quais so os fatores responsveis pela migrao das clulas-tronco at os tecidos danificados? Quais so os controles intrnsecos que fazem uma clula-tronco se diferenciar em determinado tipo celular ao invs de outro? Quais os mecanismos que permitem as clulas-tronco embrionrias proliferarem in vitro sem que haja diferenciao? A partir do conhecimento dos mecanismos que regulam a especializao de clulas-tronco embrionrias podero os cientistas a controlar o mesmo processo em clulas-tronco adultas? Culturas de clulas-tronco embrionrias so de fato homogneas e indiferenciadas ou elas apenas parecem ser? Toda clula-tronco pluripotente passa pelo estgio de clula-progenitora enquanto se especializa? Em caso afirmativo, a clula progenitora poderia ser usada para transplante? Qual o estgio de diferenciao da clula-tronco o melhor para o transplante? O mesmo estgio o melhor para qualquer tipo de transplante ou varia de caso para caso? Qual o melhor estgio de diferenciao de uma clula-tronco para se testar drogas e toxinas? Potenciais usos das clulas-tronco embrionrias Transplante para repor ou restaurar tecidos que foram danificados por doenas ou acidentes. Exemplos: leses na medula espinhal, problemas cardacos, mal de Parkinson's, diabetes, distrofia muscular Duchenne, cncer, entre outras. Atravs das tcnicas de transferncia nuclear poderiam ser reprogramadas para ficarem idnticas s clulas do receptor, evitando, assim, a rejeio.

40

Usadas no estudo do desenvolvimento do embrio, melhorando a compreenso das causas de abortos espontneos. Meio para testar novas drogas teraputicas. Atualmente so usadas cobaias e seres humanos voluntrios. No desenvolvimento de novas tcnicas de engenharia gentica que modificam ou introduzem novos genes obtendo, assim, as protenas desejadas.

Principais etapas para o desenvolvimento de terapias de transplante de clulas tronco humanas Clula-tronco humana

Estabelecimento de uma cultura pura de uma clula especfica (exemplo: clulas do pncreas que produzem insulina)

Teste fisiolgico (exemplo: testar in vitro a insulina produzida)

Demonstrao de eficincia em roedores e em macacos Rhesus Evoluo da integrao com o tecido hospedeiro

Demonstrao de segurana em Teste em humanos macacos Rhesus: no forma tumores e no transmite agentes infecciosos

Testes de metodologia para preveno de rejeio: drogas imunosupressoras; induzir as clulastronco a expressarem os genes MHC do receptor; estabelecimento de uma quimera hematopoitica i l i t

Teste em humanos

Fonte de consulta: Stem Cells: Scientific Progress and Future Research Directions http://www.stemcells.nih.gov/index.asp

41

TERAPIA CELULAR - O USO DE CLULAS-TRONCO NO TRATAMENTO DE DOENAS: ETAPAS E QUESTES GERADAS

Antes que um novo procedimento de terapia comece a ser utilizado no tratamento de doentes so necessrios os seguintes requisitos: uma idia que possa ser testada com base em experimentos cientficos no caso da terapia celular, a idia usar clulas-tronco para reparar ou substituir tecidos ou rgos danificados. Pesquisas e testes em laboratrio geralmente, os experimentos preliminares so feitos em placas de cultura com clulas humanas e de outros animais. Essa etapa inclui o desenvolvimento de diferentes linhagens de clulas-tronco em laboratrio, a verificao da eficcia que cada tipo celular apresenta no reparo de diversos tecidos, etc. Estabelecimento de um modelo experimental que simula o modo de utilizao em seres humanos - modelos de terapia mais refinados so testados em modelos animais. Os resultados devem ser reprodutveis e a segurana de sua aplicao deve ser provada. Para cada nova aplicao da tcnica de terapia celular devem ser considerados: Quais so os benefcios? Quais so os riscos? Quem ser beneficiado? H potenciais riscos na aplicao? O que significa para mim? Para minha famlia? Para meus conhecidos? Por que outras pessoas podem ter opinies diferentes das minhas? H trs tipos de questes que devem ser consideradas quando ns pensamos em clonagem teraputica: Questes ticas so aquelas que nos convidam a pensar sobre as potenciais conseqncias originadas por um determinado procedimento ou pelo emprego de alguma metodologia. Questes legais tanto o pblico como as pessoas que fazem as leis precisam da ajuda dos cientistas para entender a tcnica, seu significado e como o seu emprego deve ser regulamentado pelo governo. Questes sociais dizem respeito ao impacto da aplicao da tcnica na sociedade. Link para o vdeo Globo News http://www.video.google.com/videoplay?docid=8414495255301311833

42

A POLMICA DAS CLULAS-TRONCO EMBRIONRIAS

Trechos do livro Clonagem da ovelha Dolly s clulas-tronco a Lygia da Veiga Pereira. Editora Moderna, 2 edio, reformulada, pginas 77 a 88, 2005

Apesar de to promissoras como forma de terapia, as clulas-tronco embrionrias foram centro de enorme polmica nos Estados Unidos, onde em 2001 foi proibido o desenvolvimento de novas linhagens dessas clulas utilizando-se verba do governo federal. Aqui no Brasil, at 2004, as pesquisas com embries humanos no eram permitidas. Nesse ano foi criado um projeto de Lei de Biossegurana que proibia o uso de embries humanos como material biolgico disponvel, impedindo o desenvolvimento das pesquisas com clulas-tronco embrionrias no pas. Esse projeto de Lei foi muito criticado por vrias instituies cientficas, incluindo a Academia Brasileira de Cincias, a Sociedade Brasileira para o Progresso da Cincia (SBPC) e a Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (Fapesp), o que levou criao no Senado Federal de uma emenda que permitiria o uso para a pesquisa de embries congelados a mais de trs anos. Depois de muita discusso envolvendo a sociedade, cientistas, grupos religiosos e associaes de docentes, em maro de 2005 esse projeto de Lei foi aprovado na Cmara dos Deputados e sancionado pelo presidente da repblica Lus Incio Lula da Silva. A partir desse momento, ficou permitida no Brasil pesquisa com embries humanos congelados a mais de trs anos para extrao de clulas-tronco embrionrias, mas a clonagem teraputica foi proibida. Mas por que tanta polmica em torno das clulas-tronco embrionrias? O grande problema que essas clulas so extradas de embries humanos, produzidos por clonagem teraputica ou aqueles excedentes de processos de fertilizao in vitro. Durante um ciclo de fertilizao invitro so gerados de 5 a 8 embries. Desses, 2 ou 3 so transferidos para o tero da mulher. Os embries restantes devem ser congelados para serem utilizados em uma futura tentativa de gravidez. Porm, muitas vezes o casal no quer mais engravidar, e esses embries ficam esquecidos nos congeladores. Com o passar do tempo, a capacidade dos embries congelados darem origem a um beb vai diminuindo. So justamente esses embries que so destrudos para se extrair as clulastronco embrionrias.Para algumas pessoas isso equivale a matar uma pessoa e por isso inaceitvel. Essa uma questo delicada, que envolve aspectos legais, ticos, culturais e religiosos. Vale lembrar que estamos falando de um embrio de cinco dias, basicamente um conglomerado amorfo de clulas. Um embrio gerado no ventre de uma mulher nesse estgio do desenvolvimento possui somente 20% de chance de se implantar e se desenvolver em um beb. Se isso j caracteriza uma vida ou no, no sei, mas importante fazer uma distino entre embrio e um aborto de um feto de 3-4 meses. Pela cultura judaica, por exemplo, a vida comea depois de o embrio se implantar no tero materno, e dessa forma no h nenhum problema em utilizar esses embries para produzir clulas-tronco embrionrias. A definio de vida muito complexa, mas uma coisa eu posso garantir: aquele embrio excedente trar muito mais benefcios vida de pessoas j vivas na forma de clulas-tronco embrionrias do que no fundo de uma lata de lixo, onde descartado nas clnicas de reproduo assistida, ou esquecido em um congelador, caso o casal no queira ter mais filhos. Outro argumento contra o uso de clulas-tronco embrionrias o medo de que seja criado um comrcio de embries. Seguindo essa mesma argumentao, no deveramos permitir transfuses de sangue nem doaes de rgos, pois tambm poderia ser criado comrcio deles. Com uma legislao sria e vigilncia, evitamos o comrcio de sangue ou rgos, permitindo que milhes de vidas sejam salvas com transplantes. Da mesma forma, precisamos discutir a melhor forma de trabalharmos com as clulas-tronco embrionrias sem ferir direitos nem deveres, mas proporcionando humanidade uma nova e revolucionria forma de terapia para inmeras enfermidades.

43

A questo do uso de embries humanos para a pesquisa polmica em todo o mundo, e cada pas tem sua prpria forma de legislar sobre o assunto. At 2005, o Reino Unido tinha uma legislao mais liberal, permitindo a pesquisa com embries humanos gerados especificamente para a extrao de clulas-tronco embrionrias, e tambm a clonagem teraputica. Porm, antes de comearem as pesquisas, os grupos interessados devem submeter seus projetos a um rgo federal que fornece licena para estes estudos. Blgica, Japo, Coria do Sul tambm permitem a pesquisa com clulas-tronco embrionrias e a clonagem teraputica. J na Frana e no Canad, a clonagem teraputica proibida, e pode-se utilizar para pesquisa somente embries excedentes de clnicas de fertilizao. Nos Estados Unidos, as pesquisas com clulas-tronco embrionrias, incluindo a clonagem teraputica, so liberadas somente com o uso de dinheiro da iniciativa privada dinheiro do governo federal no pode ser utilizado nessas pesquisa, o que limita em muito a capacidade da comunidade cientfica norte-americana de realizar trabalhos nessa rea. O impacto da aprovao das pesquisas com embries humanos no Brasil foi discutido no artigo publicado no jornal o Estado de So Paulo. Esperana por um fio Dra.Lygia, com a aprovao do Projeto de Lei de Biossegurana pela Cmara dos Deputados, quantos pacientes sairo das filas de transplantes? Gelei com a pergunta feita em entrevista ao vivo, no dia seguinte da aprovao do uso de embries humanos para a extrao de clulas-tronco embrionrias. Ela sintetiza toda a expectativa que a luta por essa aprovao gerou no ltimo ano. Respirei fundo e respondi: Nenhum.... Nenhum hoje, nenhum at mesmo nos prximos anos. Mas quem sabe muitos no longo prazo, agora que podemos trabalhar com clulas-tronco embrionrias humanas no Brasil. Talvez um certo sensacionalismo faa parte do jogo, e tenha sido importante para mobilizar a sociedade e os parlamentares e levar aprovao do Projeto de Lei de Biossegurana. Mas agora que a poeira baixou, quais so as reais possibilidades das clulas-tronco embrionrias? As clulas-tronco embrionrias so o tipo mais verstil de clulas-tronco at hoje identificadas em mamferos. Enquanto as clulas-tronco derivadas da medula ssea ou do sangue de cordo umbilical conseguem se transformar em somente alguns tecidos, as clulas-tronco embrionrias possuem a formidvel capacidade de dar origem a todos os tecidos do corpo. Estas clulas no so uma novidade da cincia desde a dcada de 1980 faz-se pesquisas com clulas-tronco embrionrias de camundongos. Trabalhando com eles, descobrimos como multiplica-las e transforma-las no laboratrio em clulas da medula ssea, do msculo cardaco, em neurnios, entre outras. E mais: quando transplantadas em animais doentes, estas clulas derivadas das clulas-tronco embrionrias foram capazes de aliviar os sintomas de diversas doenas, desde leucemia e doena de Parkinson at paralisia causada por trauma da medula espinhal (da o entusiasmo do Super-Homem Christopher Reeve em relao a essas clulas). Em 1998 surgiram as primeiras linhagens de clulas-tronco embrionrias humanas, e junto com elas a enorme expectativa de seu uso teraputico. Porm, antes de comearmos testes clnicos injetando clulas-tronco embrionrias em seres humanos, temos algumas questes fundamentais que devem ser resolvidas. A primeira diz respeito segurana dessas clulas. Quando injetadas em seu estado nativo em camundongos, as clulas-tronco embrionrias podem formar teratomas. Assim se injetarmos essas clulas nos pacientes (seja ele um camundongo ou uma pessoa) temos que primeiro induzi-las no laboratrio a se transformar no tipo celular que nos interessa. Caso contrrio, no organismo elas se multiplicam e podem se diferenciar descontroladamente formando tumores. Uma segunda questo importantssima diz respeito compatibilidade entre as clulas-tronco embrionrias e o paciente. Ora, em qualquer transplante necessrio

44

existir uma compatibilidade entre doador e receptor para que o rgo no seja rejeitado. O mesmo deve acontecer com um transplante de clulas-tronco embrionrias. Como garantir que teremos clulas-tronco embrionrias compatveis com todos os pacientes? Uma forma seria criar um banco dessas clulas, cada uma derivada de um embrio diferente, e torcer para encontrar uma compatvel com o paciente. Porm, nossa experincia com bancos de medula ssea demonstrou que isso extremamente difcil de se conseguir. Uma alternativa seria ento criar clulas-tronco embrionrias sob medida, ou seja, geneticamente idnticas ao paciente. Com as tcnicas de clonagem, podemos criar um embrio clonado do paciente, e dele extrair as clulas-tronco embrionrias. Estas poderiam gerar tecidos 100% compatveis com o paciente. Essa tcnica chama-se clonagem teraputica, e foi realizada pela primeira vez em seres humanos na Coria no incio de 2004. importante ressaltar que, apesar da clonagem teraputica resolver a questo da compatibilidade das clulas-tronco embrionrias, infelizmente ela no poderia ser usada em indivduos com doenas genticas. As clulas-tronco embrionrias geradas a partir das clulas destes pacientes tambm carregariam a doena, e por isso no seriam capazes de gerar tecidos sadios para transplante. Assim, para o tratamento de doenas genticas com clulas-tronco sejam embrionrias, da medula ou do sangue do cordo -, a melhor alternativa conseguir um doador aparentado, que tem maior chance de ser compatvel com o paciente. E no Brasil, como andam as pesquisas com clulas-tronco embrionrias? Em 1999, com o financiamento da Fapesp, nosso grupo estabeleceu as primeiras linhagens de clulas-tronco embrionrias de camundongo totalmente made in Brazil, implantando a tecnologia no pas e a disponibilizando para outros grupos de pesquisa. Atualmente, pelo menos cinco grupos trabalham com essas clulas, estudando sua capacidade de transformao em diferentes tecidos, e j esto capacitados a trabalhar com as clulastronco embrionrias humanas s dependiam da aprovao da lei de Biossegurana. Provavelmente com toda a discusso em torno destas clulas, outros grupos de pesquisa se interessaro por trabalhar com elas. Para que estas pesquisas avancem no pas, ser fundamental um financiamento consistente por parte dos governos estaduais e do governo federal. Quanto clonagem teraputica, a colaborao entre grupos que fazem clonagem animal e aqueles que trabalham com clulas-tronco embrionrias poderia tornar esta prtica uma realidade no pas. Porm, como resultado das negociaes envolvidas na aprovao do Projeto de Lei de Biossegurana, este probe a clonagem teraputica. No tem problema, a conquista do direito de utilizar embries congelados para pesquisa foi um primeiro e importantssimo passo quem sabe em uma segunda rodada a clonagem teraputica possa ser renegociada? E enquanto no podemos utiliza-las como agente teraputico temos muito a aprender com as embrionrias. Ao desvendarmos os mecanismos envolvidos em sua capacidade de se transformar em qualquer tipo de clula, aprendemos sobre a biologia do ser humano esses conhecimentos bsicos tero ao longo prazo grandes benefcios sade humana. Em concluso, o uso teraputico das clulas-tronco embrionrias ainda est longe de se tornar uma realidade, tanto no Brasil quanto no mundo. Porm, para que exista alguma chance de isso um dia acontecer, precisamos pesquisar e foi este direito que adquirimos esta semana, passando de meros observadores do desenvolvimento de uma rea promissora da medicina para jogadores muito competitivos. Afinal de contas, as pesquisas com clulas-tronco embrionrias de medula e de cordo umbilical no Brasil so motivo de orgulho nacional. Agora poderemos fazer o mesmo bonito com as clulastronco embrionrias.
Lygia da Veiga Pereira, O Estado de So Paulo, 6 maro de 2005

45

Medicina regenerativa A clonagem teraputica em plantas j realizada h muito tempo: a partir de algumas clulas de uma planta adulta, podemos gerar no laboratrio os diversos rgos dessa planta: razes, caule, folhas, flores, etc. Comparando com plantas, ainda estamos no incio do desenvolvimento da cincia da regenerao celular em animais. No entanto, medida que dominarmos os mecanismos de reprogramao das clulas, iniciaremos uma nova era da medicina: a medicina regenerativa. Com ela, clulas programadas e multiplicadas em laboratrio regeneraro rgos e tecidos danificados quando re-implantadas em pacientes, acabando com as angustiantes esperas por doadores de rgos. Um dia at, quem sabe, conheceremos to bem os processos de diferenciao celular que nem precisaremos transplantar clulas. Conseguiremos induzir, por exemplo, o toco da perna de uma pessoa que sofreu uma amputao a reiniciar o desenvolvimento e regenerar aquela perna como a lagartixa que regenera seu rabo cortado. Assim, o momento de abrir o leque das pesquisas sobre diferenciao e reprogramao celular. Estudos com os clones animais e com os diversos tipos de clulas-tronco nos ajudaro a entender esses processos e dessa forma controla-los. Na tabela voc pode ver o nmero de indivduos nos Estados Unidos acometidos pelas mais diversas doenas que se beneficiaro dessas pesquisas.
Tabela. Estimativa de afetados por doenas que se beneficiaro com pesquisa em clulas-tronco humanas (EUA)

Doenas Doenas cardiovasculares Doenas auto-imunes Diabetes Osteoporose Cncer Alzheimer Parkinson Queimaduras severas Trauma de medula espinhal Defeitos de nascimento Total

Nmero de pessoas afetadas (em milhes) 58 30 16 10 8,2 4 1,5 0,3 0,25 0,15 128,4

Clonagem reprodutiva versus clonagem teraputica Mesmo sem iniciar experimentos de clonagem humana de fato, os defensores da clonagem reprodutiva j vm causando um grande mal humanidade. Com suas declaraes de que iniciaro experimentos de clonagem com seres humanos, revelia da opinio da comunidade cientfica internacional que repudia esses experimentos, eles geraram um medo da clonagem em geral, que em 2001 correu o risco de ser totalmente proibida nos Estados Unidos e tambm no Brasil. Mas isso no bom? No, pois podemos acabar proibindo a clonagem teraputica tambm, o que, alis, aconteceu no Brasil em 2005. Estamos em um momento delicado. Tecnicamente, a clonagem humana se aproxima mais e mais da realidade. Temos agora de decidir o que fazer com ela. Ao longo da histria, a humanidade j esteve nessa posio algumas vezes. A descoberta da energia nuclear, por exemplo, nos proporcionou a tomografia computadorizada e a ressonncia magntica e ao mesmo tempo duas exploses de bombas atmicas. Aprendemos pelo menos uma lio: o poder deve ser usado com responsabilidade. A

46

clonagem teraputica revolucionar a medicina, proporcionando tecidos para transplantes que aliviaro as mais diversas enfermidades humanas. Por sua vez, a clonagem como forma de reproduo comprovadamente um fracasso, e consenso na comunidade cientifica mundial que no deve ser realizada em seres humanos. Devemos evitar a proibio cega remanescente da poca de Galileu Galilei -, que invariavelmente leva ao atraso da cincia e da melhora da qualidade de vida humana. Precisamos sim de legislao e vigilncia para nos defender da clonagem reprodutiva at que seja demonstrado que este um mtodo seguro de reproduo assistida, e ao mesmo tempo usufruir os potenciais de aplicaes mdicas da clonagem teraputica. Vamos utilizar de forma responsvel os nossos poderes da clonagem com fins exclusivamente teraputicos, para que possamos viver as reais maravilhas deste admirvel mundo novo. Curiosidade versus responsabilidade Voc pode estar pensando: Mas como resistir curiosidade cientfica e no tentar fazer um clone humano? A cincia no pode parar, imagine tudo que poderemos aprender com esses experimentos! Deixe-me ento lembra-lo de uma figura clebre pelas razes erradas na histria da cincia mundial: o mdico nazista Joseph Menguele. Durante a segunda guerra mundial, o Dr. Menguele realizou uma srie de experimentos em seres humanos, sem nenhuma restrio tica/moral a cincia sem limites. Com todas essa liberdade, Menguele aprendeu infinitamente menos sobre gentica humana diria at NADA do que o frei Gregor Mendel no sculo XIX, trabalhando com ervilhas! Estudando essas plantas, esse, sim, ilustre personagem na histria da cincia estabeleceu as leis bsicas da gentica e da hereditariedade que se aplicam desde a uma ervilha at ao ser humano. Assim, a cincia sria realizada de forma tica em modelos experimentais mais simples, que nos ajudam a desvendar os mistrios da complexa e fascinante biologia humana.

47

48

49

50

51

52

53

54

55

56

57

58

REPRODUO ASSISTIDA
Lcia Machado Adaptado de Marilena C. D. V. Corra e Cristiano Costa http://www.ghente.org/temas/reproducao/index.htm

No Brasil, o nmero de casais que procuram clnicas especializadas em Reproduo Assistida (R.A.) vem aumentando consideravelmente. Espera-se que um aumento ainda mais significativo ocorra em cidades que ofeream, gratuitamente, em hospitais pblicos este tipo de tratamento, como o caso de So Paulo. Reproduo Assistida um conjunto de tcnicas, utilizadas por mdicos especializados, que tem como principal objetivo tentar viabilizar a gestao em mulheres com dificuldades de engravidar. Muitas vezes essas dificuldades, at mesmo a infertilidade do casal ou um de seus membros, podem trazer srios prejuzos ao relacionamento conjugal. As diferentes variantes tcnicas do conjunto da RA podem ser reunidas em dois grupos: 1. As mais antigas e mais simples - nas quais a fecundao se d dentro do corpo da mulher - so chamadas de inseminao artificial. Caso os gametas utilizados na inseminao sejam do prprio casal, chamamos de inseminao homloga; caso um ou ambos os gametas sejam obtidos a partir de doadores annimos, chamamos de inseminao heterloga. 2. As tcnicas mais modernas de inseminao artificial - nas quais a fecundao se d fora do corpo da mulher, ou seja, pelo procedimento de fertilizao in vitro. Existem diversas variantes tcnicas da fertilizao in vitro, como descritas abaixo: os gametas masculino e feminino so transferidos diretamente na tuba uterina da mulher. Essa tcnica encontra o apoio da Igreja Catlica, quando os gametas utilizados so do prprio casal; os ovcitos so fertilizados por espermatozides em laboratrio, e aps 3 a 4 dias, os blastocistos so transferidos por via vaginal, na altura das tubas uterinas; os espermatozide so injetados no interior do ovcito e o embrio transferido, por via vaginal, para a tuba uterina. Os espermatozides so colocados, por via vaginal, diretamente na altura da tuba uterina. Congelamento de Embries Quando a tcnica empregada a de fertilizao in vitro, o mdico produz um grande nmero de embries a partir dos ovcitos e espermatozides doados. Somente alguns destes embries sero implantados no tero materno, os demais sero mantidos congelados (criopreservados), para utilizao posterior, caso seja necessrio. De acordo com a Resoluo 1358/92 do Conselho Federal de Medicina (CFM), os embries criopreservados no podem ser destrudos ou descartados, devendo permanecer congelados por tempo indeterminado. O destino a ser dado a esses embries caso ocorra divrcio, doena grave ou morte de um ou ambos os cnjuges, deve ser anunciado previamente por escrito pelo casal. Mas qual destino possvel aos Embries Congelados? No Brasil, a nica possibilidade a doao voluntria e annima destes embries para mulheres estreis que desejam gerar um filho. A escolha do doador e da receptora do embrio realizada pelas clnicas de reproduo assistida, visando obter a maior semelhana fenotpica possvel entre a futura me e beb a ser gerado. Em outros pases, entretanto, os embries congelados passados um prazo legal pr-estabelecido podem ser utilizados para pesquisa mdica. Na Inglaterra as pesquisas

59

mdicas permitidas so aquelas que: venham a promover avanos no tratamento da infertilidade; promovam o desenvolvimento de novas tcnicas contraceptivas; aumentem o conhecimento de doenas congnitas ou a deteco de anormalidades gnicas ou cromossmicas no embrio antes da implantao. Tambm permitido o uso destes embries para a obteno de clulas-tronco. A clonagem teraputica de clulas embrionrias permitida em pases como Alemanha e EUA. Em ambos, o limite mximo permitido para o desenvolvimento do embrio in vitro de 14 dias, sendo permitido em casos especiais o desenvolvimento do embrio at o limite de 18 dias. Lembramos que a clonagem dita teraputica aquela que visa a produo de clulas-tronco embrionrias para utilizao em pesquisa - no visa em hiptese alguma a obteno de seres humanos inteiros.

Alguns problemas derivados da tcnica de fertilizao in vitro O que fazer com os embries excedentes que no foram implantados? Homens doadores annimos de espermatozides em clnicas de fertilizao podem ser acionados na justia para reconhecimento de paternidade? lcito escolher o sexo do bebe antes da implantao do embrio no tero? lcito vender vulos e espermatozides para fertilizao assistida de terceiros? lcito implantar mais do que um embrio para garantir o sucesso do procedimento? Uma mulher que alugou sua barriga para possibilitar o desenvolvimento de um embrio originado da unio de ovcitos e espermatozides de terceiros tem direito legal sobre a criana?

Link: http://www.brightcone.com/title.jsp?title=855969956 http://www.brightcone.com/title.jsp?title=769641514

60

MEDULA SSEA E AS CLULAS-TRONCO HEMATOPOITICAS

Ana Carolina Susuki Dias Cintra

A medula ssea vermelha dos humanos constituda por um tecido esponjoso e mole (conhecido popularmente como tutano) localizado no interior dos ossos nos fetos e ao longo dos anos passa a ficar restrita a apenas alguns ossos nos adultos, como as costelas, vrtebras, partes esponjosas de ossos curtos, extremidades de ossos longos dos membros e interior dos ossos do crnio e do esterno. Esse tecido responsvel por parte da reciclagem celular, destruio e produo de novas clulas que compem o tecido sanguneo e imunolgico, como os glbulos vermelhos, glbulos brancos e plaquetas. As clulas sanguneas esto em constante renovao, pois possuem uma vida til curta: enquanto um eritrcito vive cerca de 120 dias, por exemplo, um trombcito vive cerca de 9 dias e um leuccito, 7 dias. ATENO: No confundir medula ssea com medula espinhal!! A medula espinhal formada de tecido nervoso que ocupa o espao dentro da coluna vertebral e tem como funo transmitir os impulsos nervosos, a partir do crebro, para todo o corpo. Clulas componentes do sangue e hematopoise: Eritrcito ou glbulos vermelhos ou hemcias: responsveis pelo transporte de oxignio e de pequena quantidade de gs carbnico; Leuccitos ou glbulos brancos: o Neutrfilos: destroem partculas relativamente pequenas por fagocitose; o Eosinfilos: atacam parasitas e inativam substncias que produzem inflamaes; o Basfilos; liberam anticoagulantes que previnem a coagulao do sangue, alm de liberar histamina, responsvel pela inflamao; o Moncitos: originam o macrfago, que destri partculas relativamente grandes por fagocitose; o Linfcitos: responsveis pela resposta imunolgica, mecanismos de defesa do organismo; Plaquetas: importantes da coagulao do sangue.

A medula ssea possui clulas-tronco hematopoiticas (CTH) e clulas estromais. As CTH so um grupo de clulas-tronco no-embrionrias (adultas) pluripotentes, que tm a capacidade de se dividir e originar todos os tipos de clulas sanguneas, com capacidade de auto-renovao (vida longa) e de se dividir sem diferenciao. J as clulas estromais tambm possuem a capacidade de se dividir e de se diferenciar, alm de ser responsvel pela liberao de sinais reguladores da diferenciao das CTH. Diferenciao: as clulas-tronco hematopoiticas geram dois tipos de clulas progenitoras multipotentes (CPM), de vida curta: clula Progenitora Mielide: responsvel pela formao de clulas do sangue Clula Progenitora Linfide: responsvel pela formao de clulas do sistema imune Uma pequena populao de clulas-tronco hematopoiticas (CTH) na medula ssea a fonte da maioria dos diferentes tipos de clulas do sangue e do sistema imunolgico. As CTHs residem em um micro-ambiente cercado por clulas estromais que fornecem importantes sinais reguladores de sua diviso e diferenciao. Quando necessrio produzir mais sangue ou clulas imunolgicas, uma CTH se divide gerando uma cpia de vida longa, que permanece no micro-ambiente e retm sua identidade de CTH pluripotente, enquanto a outra cpia tem vida curta e chamada progenitora multipotente (CPM). Esta, por sua vez, se divide para produzir progenitoras

61

especializadas na formao de linhagens mielides (do sangue) e linfides (do sistema imune). medida que as descendentes dessas linhagens se tornam progressivamente especializadas, vo perdendo a capacidade de se proliferar, at parar de se dividir. Nessa etapa, esto completamente diferenciadas. Apenas a clula-tronco retm o potencial proliferativo ilimitado devido a sua capacidade de auto-renovao permanente e de diviso sem diferenciao.

Figura 9. Diferenciao das clulas do sangue e sua potencialidade nas diferentes fases. Scientific American Brasil ano 5, no. 51, pg.38 agosto de 2006.

Doenas que afetam as clulas sanguneas: o Anemias: caracterizada pela baixa concentrao de hemoglobina no sangue, e pode estar relacionada produo insuficiente ou defeituosa de glbulos vermelhos, ocasionada por diversos fatores. Dessa forma, o transporte de oxignio afetado e, conseqentemente, menos energia sendo produzida pelas clulas, ocasionando fraqueza, cansao, atraso no crescimento e sistema imunolgico deficiente. o Anemia Falciforme: doena hereditria que afeta a estrutura da hemoglobina, deformando as hemcias (originando um formato de foice) e prejudicando sua estabilidade e o seu transporte, ocasionando quadro anmico. o Hemofilia: doena ocasionada por defeito gentico, que pode ser hereditrio, na produo de fatores de coagulao sangunea que acarreta sangramentos excessivos e lenta coagulao do sangue. o Cncer: so muitas as formas de cncer que ocorrem nas clulas do sangue. Umas delas, muito conhecida, a leucemia, que afeta as clulas-tronco que do origem aos leuccitos (glbulos brancos) e ocasionada por mutao no DNA que leva a um descontrole no processo de diviso celular, caracterizando um tumor. Alm de se dividir descontroladamente, as clulas cancerosas permanecem em estgio no diferenciado.
Texto adaptado de: o Sangue o fluido da vida. o Scientific American Brasil ano 5, no. 51, pg.38 agosto de 2006.

62

TRANSPLANTE DE MEDULA SSEA UMA TERAPIA CELULAR BEM CONHECIDA

Vivian Lavander Mendona

As origens do transplante de medula ssea As primeiras tentativas cientficas de utilizao da medula ssea de indivduos saudveis para recompor a funo perdida por uma medula doente comearam no final da Segunda Guerra Mundial, com vtimas de acidentes na produo de bombas atmicas. O transplante de medula ssea surgiu da seguinte idia: como todas as clulas do sangue e do sistema imunolgico so originadas a partir de clulas da medula dos ossos, caso haja algum dano ou problema com esse sistema em uma pessoa, pode-se substitulo por um sistema saudvel. Na verdade, so as clulas-tronco hematopoticas da medula ssea que garantem ao receptor a funo antes prejudicada, de gerao de todas as clulas do sangue. Casos em que o transplante de medula ssea realizado O transplante indicado para o tratamento de vrias doenas graves que afetam as clulas do sangue, como anemia aplsica grave (doena em que no h formao das clulas sangneas), algumas doenas hereditrias (talassemias) e vrios tipos de leucemias (leucemia mielide aguda, leucemia mielide crnica, leucemia linfide aguda). O diagnstico da doena exige, entre outros exames, a avaliao histolgica, citogentica e molecular de clulas da medula ssea do paciente, que so aspiradas geralmente do osso ilaco ou do esterno (ou da tbia, em crianas). Antes do transplante, os pacientes devem ser tratados com altas doses de quimioterpicos e radiao para eliminar as clulas da medula ssea doente. Esse procedimento delicado, pois faz com que o nmero de clulas sangneas seja drasticamente reduzido. O tecido sadio de um doador ento introduzido atravs de uma veia do receptor e as clulas migram para a medula ssea. Se o transplante tiver sucesso, em um ms a funo da medula ser restabelecida. Mesmo assim, o paciente deve receber acompanhamento mdico durante um perodo mnimo de um ano aps o transplante, para deteco e tratamento de possveis complicaes. Condies para ser um doador de medula ssea Transplante autognico No caso de transplantes de clulas-tronco autognicas no h barreiras imunolgicas, uma vez que as prprias clulas do indivduo so re-introduzidas. Para viabilizar esse procedimento necessrio que o indivduo, apesar de doente, tenha um nmero suficiente de clulas-tronco sadias. Essa forma de transplante utilizada principalmente em alguns casos de cncer. So duas as principais preocupaes nos transplantes autognicos: a obteno de um nmero suficiente de clulas sadias e a eliminao completa das clulas cancerosas presentes no organismo do doente. H vrias tcnicas sendo desenvolvidas para essa finalidade, inclusive o uso de drogas especificamente testadas para agir sobre clulas cancerosas, sem efeito sobre as clulas sadias. Os transplantes autognicos geralmente so bem sucedidos, sendo o principal risco a recorrncia da doena no caso de clulas cancerosas sobreviverem terapia anterior ao transplante. Transplante alognico Neste caso, o principal risco para o paciente a ocorrncia de rejeio ao tecido transplantado. Vamos entender por que a rejeio ocorre. As clulas do sangue apresentam em sua superfcie protenas especficas, codificadas por um conjunto de genes conhecidos como Complexo Principal de

63

Histocompatilidade MHC (Major Histocompatibity Complex). Essas protenas funcionam como antgenos, ou seja, induzem formao de anticorpos, se transferidas para outro organismo. Nos seres humanos, esses antgenos so denominados HLA (Human Leukocyte Antigen) e como alguns desses genes possuem mais de 40 alelos diferentes, variam muito entre indivduos, sendo iguais no caso de gmeos idnticos. Quanto mais aparentados forem dois indivduos, mais alelos do MHC eles tero em comum. Quando clulas so retiradas de um doador e transplantadas em um receptor no gmeo, vrios desses antgenos HLA so diferentes. O sistema imunolgico do receptor considera essas clulas como estranhas e tenta mat-las, e as clulas do doador tambm tentam eliminar as clulas do receptor. a que se d o processo de rejeio. Antes que o transplante ocorra, os tecidos do receptor e do doador em potencial devem ser analisados para verificar a compatibilidade, ou seja, o grau de semelhana, dos antgenos HLA. Porm, como no fcil encontrar um doador compatvel, muitas vezes so realizados transplantes em que a compatibilidade HLA entre doador e receptor parcial. O grau de disparidade entre os antgenos da superfcie celular do doador e do receptor vai determinar a intensidade das reaes de rejeio, que podem ser minimizadas com medicamentos. E se no for possvel encontrar um doador compatvel? A probabilidade de se encontrar um doador compatvel entre irmos de 35%, mas este nmero cai para 0,0001% entre doadores no aparentados. Quando no h acesso a um doador compatvel, a soluo procurar em Bancos de Doadores de Medula. Nesses bancos, voluntrios de todo o mundo so cadastrados e tm seus antgenos HLA determinados. No Brasil, h um Registro Nacional de Doadores de Medula ssea (Redome), que coordena a pesquisa de doadores e est instalado no Instituto Nacional do Cncer (Inca). De acordo com este Instituto, o nmero de doadores cadastrados vem crescendo, tendo mais de 300 mil em 2006, e a campanha para aumentar o registro continua para garantir que mais pessoas sejam beneficiadas por esses transplantes no pas. Obteno de clulas-tronco para transplante de medula ssea As clulas-tronco utuilizadas em transplantes de medula ssea podem ser retiradas de trs fontes diferentes: a) da medula do doador: o doador anestesiado e submetido a mltiplas punes, com agulhas, nos ossos posteriores da bacia. Uma pequena parte da medula aspirada. b) do sangue circulante:um pequeno nmero de clulas-tronco est presente no sangue circulante. A administrao de certas drogas estimula a sada de parte dessas clulas da medula, aumentando assim seu nmero na circulao. possvel, ento, coletar a quantidade necessria de clulas-tronco fazendo com que o sangue do doador circule por uma mquina que retira especificamente as clulas desejadas. c) do sangue do cordo umbilical e da placenta: o cordo umbilical um rgo que liga o feto placenta e lhe assegura a nutrio por meio de vasos sangneos durante a gestao. Imediatamente aps o parto, o cordo pinado, para impedir que o sangue contido em seu interior se perca, e o sangue retirado com o auxlio de uma agulha. As clulas vermelhas do sangue so coletadas e a amostra congelada e armazenada por at 15 anos, sem que haja perda da qualidade das clulas-tronco. Este um procedimento simples e que permite a obteno de clulas a partir de um rgo que em geral era descartado.

64

Figura 10: coleta de clulas-tronco hematopoiticas para transplante: (A) da medula ssea, (B) do cordo umbilical.

O uso de clulas-tronco do sangue de cordo umbilical em transplantes mais vantajoso do que o de medula ssea, por vrios motivos: elas se implantam mais eficientemente, so mais tolerantes incompatibilidade entre receptor e doador, tm disponibilidade imediata e h possibilidade de realizao do transplante sem que o doador seja submetido a qualquer tipo de procedimento cirrgico. A facilidade de coleta e da anlise prvia de antgenos HLA estimulou a criao de Bancos de Sangue de Cordo Umbilical no Brasil, tambm coordenados pelo Redome. Esses bancos seguem normas rgidas para coleta, processamento e armazenamento dos tecidos de cordo umbilical, definidas pela Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (Anvisa), e a coleta s realizada se a pessoa estiver ciente da gratuidade da doao e autorizar o possvel descarte do material aps o prazo seguro para sua utilizao. O que podemos esperar para o futuro? Clulas-tronco hematopoticas cultivadas em laboratrio podem se diferenciar em clulas de outros tecidos, tais como fgado, intestino, pele, msculo cardaco, e talvez, clulas nervosas. Embora se saiba da existncia dessas diversas possibilidades de diferenciao, a maneira como isso ocorre ainda no est clara. Por isso, pesquisadores no mundo inteiro buscam compreender os mecanismos envolvidos na diferenciao celular. Os resultados animadores de algumas pesquisas com clulas-tronco levam a crer que os transplantes de medula ssea sero apenas uma das modalidades de terapia utilizando essas clulas. Pelas caractersticas das clulas-tronco, acredita-se no potencial dessas terapias para tratamento de diversas doenas, inclusive as crnico-degenerativas. Vamos apresentar brevemente alguns desses resultados animadores obtidos em pesquisas com clulas-tronco hematopoticas. A equipe do Centro de Pesquisa Gonalo Moniz, da Fiocruz Bahia, realizou em 2003 o primeiro transplante de clulas de medula ssea em pacientes com insuficincia cardaca devida doena de Chagas, procedimento at ento indito no mundo. Outra fonte de pesquisas interessante o tratamento de infartos do miocrdio. Nestes casos, h morte de parte do tecido cardaco e as clulas remanescentes no so capazes de reconstituir o tecido morto. Experimentos indicam que as clulas-tronco hematopoticas introduzidas so capazes de migrar para reas doentes e de originar novas clulas de msculo cardaco e de vasos sangneos.

65

catter
Seringa contendo clulas-tronco

catter
Balo do catter Zona da borda rea enfartada

Figura 11 Tratamento do corao contendo clulas danificadas por infarto. As clulas-tronco so introduzidas com o auxilio de seringa e cateter.

No Instituto do Corao (Incor) de So Paulo, esto sendo realizadas aplicaes de clulas-tronco em pacientes com insuficincia cardaca, causada por doena de Chagas, hipertenso ou de origem desconhecida. Duas tcnicas diferentes tm sido utilizadas: a aplicao de clulas-tronco isoladas da medula ssea e a utilizao de um hormnio que estimula a liberao das clulas-tronco da medula ssea do prprio paciente para a circulao sangunea dali as clulas migram para as reas lesadas. As clulas-tronco tambm tm sido utilizadas em pesquisas para tratamento de doenas auto-imunes, tais como a artrite reumatide e o lpus eritematoso sistmico. Uma equipe do Hospital das Clnicas da Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto, da USP (HCFMRP-USP), empregou clulas-tronco de medula ssea, retiradas do prprio paciente e submetidas quimioterapia, para transplante. A quimioterapia destri as clulas defeituosas do sistema imune. Os resultados foram animadores e esto sendo agora comparados com os resultados obtidos com a terapia convencional, que no envolve clulas-tronco. Apesar do entusiasmo dos cientistas e da sociedade com os resultados positivos da terapia celular, importante lembrar que ainda so necessrias muitas pesquisas (compostas de diversas etapas at o estabelecimento de um novo procedimento mdico), financiamentos e discusses no campo poltico, tico e legal. Este o cenrio ideal para o desenvolvimento dessa nova forma de terapia.
Texto adaptado de: Sangue fluido da vida. Parte 3 Terapia celular: sonhos e realidade -Departamento de Gentica e Biologia Evolutiva Centro de Estudos do Genoma Humano - Eliana Maria Beluzzo Dessen, Maria Gabriela Guimares Ribeiro dos Santos, Rodrigo Venturoso Mendes da Silveira e Regina Clia Mingroni Netto Outras fontes consultadas Revista Pesquisa Fapesp - Clulas tronco Marcos Pivetta Ed. 110; Abril 2005. Pginas da Internet: Com Cincia. Artigo: Clulas-tronco Pesquisa brasileira em CT j apresenta resultados. Luciene Zanchetta. 10/02/2004 (http://www.comciencia.br)

Inca Instituto Nacional do Cncer. 15/04/2007 (http://www.inca.gov.br)

66

67

68

69

70

71

O ARTIGO 5 DA LEI N 11.105, DE 2005, NO INCONSTITUCIONAL

Reginaldo Minar -Advogado e Diretor Jurdico da ANBio. www.anbio.org.br

No dia 30 de maio de 2005 o Procurador-Geral da Repblica ajuizou Ao Direta de Inconstitucionalidade Adin n 3510 alegando ser inconstitucional o artigo 5 da Lei n 11.105/05, que permite, cumpridas determinadas exigncias, a utilizao de clulastronco embrionrias em pesquisas e terapias. A Adin 3510, cujo relator o Ministro Carlos Brito, tem por assunto tema de fundamental relevncia, principalmente para aqueles que so portadores de determinadas doenas ainda incurveis e para os que sero em futuro breve, j conta com diversas instituies admitidas na qualidade de amicus curiae e foi tema de audincia pblica no Supremo Tribunal Federal - STF, e atualmente est com o Ministro relator para anlise da transcrio dos argumentos apresentados na audincia pblica realizada no dia 20/04/2007. Na ao proposta, o Procurador-Geral tenta demonstrar que o artigo 5 da Lei n 11.105/05 incompatvel com o que est disposto no caput do artigo 5 da Constituio Federal CF e no artigo 1 inciso III tambm da CF. Dispe o artigo 5 da Lei 11.105/05: "Art. 5 permitida, para fins de pesquisa e terapia, a utilizao de clulas-tronco embrionrias obtidas de embries humanos produzidos por fertilizao in vitro e no utilizados no respectivo procedimento, atendidas as seguintes condies:

I sejam embries inviveis; ou II sejam embries congelados h 3 (trs) anos ou mais, na data da publicao desta Lei, ou que, j congelados na data da publicao desta Lei, depois de completarem 3 (trs) anos, contados a partir da data de congelamento. 1 Em qualquer caso, necessrio o consentimento dos genitores. 2 Instituies de pesquisa e servios de sade que realizem pesquisa ou terapia com clulas-tronco embrionrias humanas devero submeter seus projetos apreciao e aprovao dos respectivos comits de tica em pesquisa. 3 vedada a comercializao do material biolgico a que se refere este artigo e sua prtica implica o crime tipificado no art. 15 da Lei no 9.434, de 4 de fevereiro de 1997". Dispe o artigo 5 caput e artigo 1 inciso III, ambos da CF: "Art. 5 Todos so iguais perante a lei, sem distino de qualquer natureza, garantindo-se aos brasileiros e aos estrangeiros residentes no Pas a inviolabilidade do direito vida, liberdade, igualdade, segurana e propriedade, nos termos seguintes: Art. 1 A Repblica Federativa do Brasil, formada pela unio indissolvel dos Estados e Municpios e do Distrito Federal, constitui-se em Estado Democrtico de Direito e tem como fundamentos:

III - a dignidade da pessoa humana;"

72

Contestar os argumentos do Procurador-Geral e defender a constitucionalidade do artigo 5 da Lei 11.105/05 , ao mesmo tempo, a realizao de um exerccio profundo da hermenutica cujos argumentos e concluses devem ser apresentados dentro de uma retrica precisa e objetiva. Poder-se-ia tambm dizer que a contestao da Adin est dentro do campo de uma discusso poltica e tica, que se realiza na sociedade global e no apenas na sociedade brasileira. Todavia, acredito que, no Brasil, o debate poltico e tico j foi realizado no mbito do Congresso Nacional, onde diversas audincias pblicas sobre o tema foram elaboradas, a sociedade participou e os representantes eleitos pelo povo, respeitando todas as regras do procedimento democrtico estabelecido pela CF, votaram, em sua grande maioria, pela aprovao da redao do artigo 5 da Lei 11.105/05. Assim, e considerando que a CF em seu artigo 102 estabelece que ao STF compete a guarda da Constituio, entendo que a anlise do tema neste frum deve ser realizada de forma precisa e objetivando responder se o artigo 5 da Lei 11.105/05 afronta o artigo 5 caput da CF ou o princpio da dignidade humana previsto no inciso III do artigo 1 da CF. Na ao proposta, argumenta o Procurador-geral que pelo fato da vida humana iniciar no momento da concepo e a Constituio garantir a inviolabilidade do direito vida, de todo brasileiro e estrangeiro residente no Brasil, a proteo deste bem jurdico deve ser realizada, de forma absoluta e dogmtica, a partir do momento da concepo, no permitindo qualquer flexibilizao. Que a vida est presente no momento da fecundao algo que no contexto, pois no conheo argumento convincente na biologia que afirme o contrrio. Todavia, considero pertinente o questionamento feito por Umberto Eco, - na obra Em que crem os que no crem? -, que pergunta, para ilustrar sua proposta de reflexo sobre at onde possvel retroceder, se vida e humanidade j no esto no smen, e podemos dizer tambm no vulo, antes mesmo do encontro entre os 23 cromossomos masculinos com os 23 cromossomos femininos? Para problematizar seu questionamento, Umberto Eco prope a reflexo sobre o que dizer a respeito do desperdcio de smen por parte de um adolescente em tentao? Estas questes colocadas so pertinentes, pois nos convida a refletir com profundidade sobre qual o significado conceitual da palavra vida no contexto do artigo 5 da CF, e a intensidade do alcance do artigo. Fazendo uma anlise literal do texto constitucional, fica claro que a CF objetivou garantir a vida de brasileiros e estrangeiros residentes no Pas. Assim, no resta dvida que o constituinte de 1988 no tinha a inteno de retroceder ao ponto de atingir aquele adolescente em tentao lembrado por Umberto Eco. Tambm no nos parece razovel atribuir ao constituinte a idia de que, com a redao que aprovou, tinha a inteno de considerar um embrio congelado importado da Nova Zelndia como um estrangeiro residente no Pas. Por outro lado, compreendendo ser o comando contido no caput do artigo 5 da Constituio o estabelecimento de um princpio, imperioso se faz estabelecer o entendimento sobre qual seria a intensidade da proteo necessria para garantir que o princpio do direito vida no fosse violado pela legislao e, tambm, refletir sobre situaes onde outros princpios constitucionais com ele concorriam. Afirmar que para garantir a inviolabilidade do princpio do direito vida seria necessria uma proteo absoluta e inflexvel, inclusive para embries congelados e inviveis para a reproduo humana, sem dvidas seria uma argumentao simplista e at falaciosa. Pois, fazendo uma afirmao nesse sentido, seria difcil depois justificar a constitucionalidade do aborto em caso de gravidez oriunda de estupro, que um procedimento garantido pelo Cdigo Penal, o aborto no caso de anencefalia do feto, que j uma prtica autorizada em muitos casos pelo Poder Judicirio, onde caudalosa a jurisprudncia nesse sentido, e at mesmo os critrios utilizados para assegurar a preferncia pela vida da gestante em casos onde a preservao das vidas do feto e da gestante no so compatveis. Tudo isso, sem falar que a prpria Constituio j

73

relativizou a proteo ao direito vida ao permitir que, em caso de guerra declarada, seja adota a pena de morte. Diante do que at aqui foi argumentado, resta claro que interpretar o caput do artigo 5 da CF como comando para uma proteo absoluta e inflexvel do direito vida no um exerccio razovel da hermenutica e, conseqentemente, a retrica fica desprovida de fundamento slido e convencedor. Efetivamente, ao aprovar a redao do artigo 5 da Lei 11.105/05, o Congresso Nacional em nada violou o princpio de proteo do direito vida. O que fez o Parlamento foi legitimar um interesse da sociedade, pelo menos o interesse da maioria representada, que considera que em nada viola o princpio do direito vida o fato de permitir a realizao de pesquisas com clula-tronco embrionria para tentar descobrir a cura ou tratamento para melhorar as condies de vida de crianas, adolescentes, jovens e idosos, que so acometidos por doenas incurveis at o momento ou com poucas possibilidades de tratamento. Alm disso, o Parlamento no atuou de forma irresponsvel no momento que legislou. O artigo 5 da Lei 11.105/05 tem uma redao que permite o uso de clula-tronco embrionria de forma contida, muito criteriosa e amparada por instrumentos coercitivos que podem ser utilizados em qualquer situao que configurar a prtica de um excesso ou banalizao. Modo de proceder que de forma alguma torna banal o uso de embries humanos. Segundo dispe o artigo 5 da Lei 11.105/05, s permitido o uso de clulastronco embrionrias obtidas de embries humanos produzidos por fertilizao in vitro e no utilizados no respectivo procedimento; e que sejam oriundas de embries congelados h 3 (trs) anos ou mais at a data da publicao da Lei ou que, j congelados na data da publicao da Lei, completaram 3 (trs) anos, contados a partir da data de congelamento, ou que sejam inviveis. Exige ainda o referido artigo 5 em anlise que, em qualquer caso, o uso de embries congelados deve se precedido do consentimento dos genitores, e que os protocolos de pesquisas sejam aprovados pelos Comits de tica em Pesquisa CEP. Para garantir que os critrios estabelecidos sejam cumpridos, a prpria Lei 11.105/05, em seu artigo 24, criminalizou o uso de embries humanos em desacordo com as regras estabelecidas em seu artigo 5. J para garantir que a permisso no sirva para fomentar a criao de um mercado de embries e de clulas-tronco embrionrias, o prprio artigo 5 probe, em seu 3, a comercializao do material biolgico afirmando que sua prtica configura o crime tipificado no artigo 15 da Lei 9.434/97, lei que dispe dobre a remoo de rgos, tecidos e partes do corpo humano para fins de transplante e tratamento. Evidente, portanto, que o artigo 5 da Lei 11.105/05, em nada viola o artigo 5 caput da CF. Logo, o argumento de inconstitucionalidade no pode ser legitimo para retir-lo do ordenamento jurdico brasileiro. J a defesa da tese de que a preservao da dignidade da pessoa humana estaria ameaada com a manuteno do artigo 5 da Lei 11.105/05 no ordenamento jurdico ptrio, sem dvida trilha o caminho da contramo do consenso estabelecido pela maioria. O que ficou demonstrado com a deliberao do Congresso Nacional que a aprovao da matria disciplinada nos termos do mencionado artigo 5 aprimora o respeito ao princpio da dignidade da pessoa humana. Inclusive, foi esta a tese que aglutinou o consenso da maioria no procedimento de legitimao pela democracia, e no aquela defendida pelo Procurador-Geral, que exatamente a tese contrria que foi derrotada no Parlamento e que no contou com o veto do Chefe do Poder Executivo. Locuo cristaliza na maioria das lnguas, mas pouco comentada e definida, o significado conceitual da expresso "dignidade humana" um daqueles conceitos que imaginamos conhecer muito e ter pleno domnio, mas que ao sermos convidados a coment-lo e explic-lo percebemos que nossa convico no to clara como acreditvamos. Oriunda do latim dignitas, a palavra dignidade significa valor, distino,

74

princpio ao qual est baseado o proceder que enseja respeito, e corresponde traduo feita por ncio Bocio e os escolsticos da palavra grega aksima axioma -, que segundo Aristteles significa a proposio primeira de que parte a demonstrao, o princpio basilar que deve ser necessariamente possudo por quem queira aprender o que quer que seja. Na modernidade, Immanuel Kant, na obra Fundamentao da Metafsica dos Costumes, procura demonstrar que o ser humano possui um valor em si mesmo, uma dignidade, e constri o famoso imperativo prtico: "Age de tal maneira que uses a humanidade, tanto na tua pessoa como na pessoa de qualquer outro, sempre e simultaneamente como fim e nunca simplesmente como meio". Para que o ser humano identifique a limitao que esse imperativo prtico impe s suas aes, Kant prope a seguinte reflexo: "Age sempre segundo aquela mxima cuja universalidade como lei possas querer ao mesmo tempo". Segundo Kant, essa a frmula para extrair ou identificar uma vontade boa. Em nosso momento histrico, esse imperativo prtico kantiano muito citado como significado da expresso "dignidade da pessoa humana". A idia de uma dignidade inerente a todos os membros da famlia humana se encontra na base da Carta Internacional dos Direitos Humanos, e no Brasil o artigo 1, inciso III, da CF afirma que a Repblica Federativa do Brasil se constitui em Estado Democrtico de Direito e tem como um de seus fundamentos a dignidade da pessoa humana. O Procurador-Geral, para desenvolver sua tese, levanta a existncia de conflito de princpios constitucionais, argumentando que o uso de clulas-tronco embrionrias, por violar o princpio do direito vida, necessariamente viola o princpio da dignidade humana. Fica claro, em seus argumentos, que o Procurador coloca o princpio do direito vida em patamar absolutamente superior ao princpio da dignidade da pessoa humana, no aceitando que em nenhum momento essa ordem hierrquica seja invertida. No admite, por exemplo, que em nome do respeito ao princpio da dignidade humana, a milhares de crianas portadoras de distrofias musculares sejam-lhes dada a oportunidade da cincia atuar na tentativa de encontrar cura para uma doena que deteriorar seus msculos e as levar morte precoce. No admite, tambm, que em nome do respeito ao princpio da dignidade humana, a milhares de idosos, atuais e futuros, que trabalharam para construir as famlias e o Estado, e que so portadores de doenas degenerativas, sejam-lhes garantido o direito de ver os cientistas trabalhando para encontrar a cura da doena que comprometer integralmente o gozo de sua velhice. Evidente, portanto, que ao aprofundar a reflexo sobre o que se pretende realizar com o desenvolvimento de pesquisas com as clulas-tronco embrionrias, no d para querer que a pretenso do Procurador-geral que props a ao de inconstitucionalidade seja elevada universalidade como uma lei que posso querer que seja tambm aplicada a mim e ao meu prximo. Cabe observar ainda que o argumento de que as pesquisas com clulas-tronco oriundas de outras fontes, como cordo umbilical, poderiam substituir o uso das clulastronco embrionrias no processo de busca de cura para os males acima mencionados, tambm no justifica a pretenso do Procurador-Geral. Visto que, sendo possvel lanar mo tambm do uso de clula-tronco embrionria, modalidade de pesquisa que considerada por significativo nmero de cientistas com mais apta a atingir objetivo to nobre, no razovel privar a sociedade da liberdade de pelo menos tentar. Assim, resta indubitvel que a pretenso que objetiva colocar o princpio do direito vida em patamar absolutamente superior ao princpio da dignidade da pessoa humana, e dogmatizar uma hierarquia de princpios constitucionais nestes termos, no pode ser acolhida, visto no possuir a razoabilidade que se espera ver aplicada em processo que, em seu mago, suscitado conflito de princpios constitucionais. Principalmente, quando neste momento histrico a interpretao dos sistemas jurdicos no mais se baseia apenas no ideal clssico da cincia oriunda da fsica aristotlica, pois com ele concorre o

75

prprio relativismo ou incertezas da fsica moderna e o probabilismo da cincia experimental. Neste caso especfico, garantir, com regras claras e razoveis, a liberdade para que a sociedade possa pesquisar a cura para milhares de pessoas , sem dvida, uma alternativa mais prxima ao respeito do princpio da dignidade humana do que aquela que objetiva proibir a pesquisa com clulas-tronco embrionrias, oriundas de embries inviveis para reproduo ou congelados a mais de trs anos, em nome do respeito ao princpio do direito vida. Caso seja acolhida a tese do combativo Procurador-Geral, resta indubitvel que no s o fundamento do Estado Democrtico de Direito previsto no inciso III do artigo 1 da CF estaria sendo violado, como tambm o pargrafo primeiro desse mesmo artigo 1 da CF, que dispe: "Todo o poder emana do povo, que o exerce por meio de representantes eleitos ou diretamente, nos termos desta Constituio". Para concluir, cabe lembrar que aquele que, por motivo de crena, no concordar com o procedimento estabelecido pelo artigo 5 da Lei 11.105/05, tem todo direito de no autorizar o uso de seus embries e, inclusive, no fazer uso quando desenvolvida uma tcnica baseada nesta pesquisa.

76

QUANDO COMEA A VIDA?

Revista Pesquisa Fapesp 23/04/2007 - Fbio de Castro

Agncia FAPESP As clulas-tronco embrionrias humanas devem ser utilizadas em pesquisas cientficas? A importncia, dvidas e a complexidade da questo so to grandes que, pela primeira vez, o Supremo Tribunal Federal (STF) realizou uma audincia pblica sobre um assunto em julgamento na casa. Na audincia, realizada em Braslia na ltima sexta-feira (20/4), 34 cientistas apresentaram posies favorveis e contrrias ao uso das clulas-tronco. O objetivo era fornecer subsdios cientficos para os 11 ministros que compem o STF. Em maro de 2005, as pesquisas com clulas-tronco embrionrias humanas foram aprovadas no Brasil, no mbito da Lei de Biossegurana. Em maio do mesmo ano, no entanto, o ento procurador-geral da Repblica, Cludio Fonteles, entrou no STF com uma Ao Direta de Inconstitucionalidade contra o artigo a respeito das pesquisas, sob a alegao de que estudos do gnero ferem o direito de embries. O pedido de Fonteles foi acatado no fim de 2006 pelo ministro do STF Carlos Ayres Britto, que foi relator do caso. Para decidir a questo, os ministros precisaro, segundo Britto, discutir quando a vida humana comea. O relator convocou ento a audincia, para a qual convidou 18 cientistas. Outros 11 foram chamados pela Procuradoria Geral da Repblica. Quatro foram convidados pela presidncia da Repblica e um pela Confederao Nacional dos Bispos do Brasil (CNBB). Para Ayres Britto, do ponto de vista tcnico no existe na Constituio um conceito claro de quando comea a vida. O subsdio oferecido pela comunidade cientfica, segundo ele, permitiria aos ministros do STF formular um conceito operacional de vida. Para alguns dos cientistas presentes na audincia, a vida comea na fecundao. Outros alegaram que ela surge apenas no terceiro ou quarto dia, quando ocorre a nidao processo em que a clula migra para o tero materno. Um terceiro grupo defendeu que o embrio s pode ser considerado vivo quando acontece a formao do sistema nervoso e que questes ticas que envolvem o tema impediram, at agora, o avano de pesquisas na rea. A geneticista Mayana Zatz, do Centro de Estudos do Genoma Humano da Universidade de So Paulo (USP), destacou a importncia de que a legislao permita as pesquisas com clulastronco embrionrias humanas, que, segundo ela, so hoje as nicas com potencial para recuperar certas doenas neurolgicas incurveis. Para Mayana, a possibilidade de serem desenvolvidas pesquisas com tais clulas definir, no futuro, a existncia ou no de tratamento para inmeras doenas degenerativas que atingem a populao. Segundo ela, a clula-tronco embrionria s se tornaria um feto por meio da interveno humana, j que, para isso, ela tem de ser inserida no tero. O que eticamente mais correto: preservar um embrio congelado, mesmo sabendo que a probabilidade de ele gerar um ser humano praticamente zero, ou do-lo para pesquisas que podero resultar em futuros tratamentos?, questionou. De acordo com a cientista, 7 mil doenas genticas degenerativas atingem mais de 5 milhes de crianas nascidas de pais normais no Brasil. Toda clula vida, um corao a ser transplantado vivo, mas no um ser humano. Estamos defendendo que, da mesma maneira que um indivduo em morte cerebral doa rgos, um embrio congelado possa doar suas clulas, disse. Muita discusso, pouca concluso Patrcia Pranke, professora da Universidade Federal do Rio Grande do Sul e diretorapresidente do Instituto de Pesquisa com Clula-Tronco, falou na audincia no STF que s a partir do quarto dia o embrio (blastocisto) pode ser implantado no tero, o nico ambiente em que poder se desenvolver. Segundo ela, os embries ou so implantados no tero ou so congelados. O prprio congelamento diminui a possibilidade de o embrio se desenvolver depois. Por que no do-los para pequisa?, disse. Para Lcia Braga, da Rede Sarah de Hospitais de Reabilitao, a pergunta correta a ser feita : qual destino ser dado aos embries que no chegam a ser implantados no tero? Podemos ficar aqui dias discutindo quando a vida comea, sem chegar a uma concluso, afirmou.

77

J para a professora-adjunta do Departamento de Biologia Celular da Universidade de Braslia (UnB) Lenise Martins, a vida humana comea na fecundao. Segundo ela, todo ser vivo tem fases diferentes durante o seu ciclo de vida. Como exemplo, ela utilizou o desenvolvimento da lagarta e da borboleta, que so um mesmo animal em fases diferentes de um mesmo ciclo de vida. O indivduo no precisa comear a manifestar sua sabedoria para ser considerado humano. O embrio humano j da espcie Homo sapiens mesmo que no possa ainda aprender, afirmou. O mdico Marcelo Vacari Mazzenoti, da Universidade Federal de So Paulo (Unifesp), especializado em crianas com m-formao, tambm defendeu que a vida humana comea na fecundao e afirmou que a utilizao de clulas-tronco embrionrias humanas no necessria para a medicina atual. Podemos utilizar clulas-tronco adultas em diversas situaes, como [no estudo de tratamentos contra] doena de Chagas, doenas auto-imunes, acidentes vasculares cerebrais, leses de medula espinhal e doenas genticas, dentre outras. J com relao utilizao de clulas tronco embrionrias, no h fato objetivo e concreto que confirme a sua utilidade, defendeu. Mazzenoti mencionou que h 72 aplicaes clnicas descritas com o uso de clulas-tronco adultas e nenhuma aplicao descrita de clulas-tronco embrionrias humanas. No preciso interromper a vida para trabalhar com clulas-tronco. A professora da Universidade Federal do Rio de janeiro (UFRJ) Cludia Maria de Castro Batista defendeu a autonomia do embrio humano. Para ela, a vida humana um processo contnuo, coordenado e progressivo que comea a partir da fecundao do vulo pelo espermatozide. Uma vez que o vulo fecundado, forma-se a primeira clula do Homo sapiens e todo um programa de fertilizao disparado. O direito vida e integridade fsica desde o primeiro momento da existncia o princpio de igualdade que deve ser respeitado, afirmou. Llian Piero Ea, do Instituto de Pesquisas com Clulas-Tronco (IPCTron), fez uma exposio sobre o dilogo entre o embrio humano e sua me. A cientista defendeu que duas a trs horas depois da fecundao, aps o encontro do espermatozide com o vulo, o embrio j se comunica com a me. Pelo menos cem neurotransmissores so emitidos pelo embrio para os 75 trilhes de clulas existentes no corpo da gestante, que comea a sofrer mudanas hormonais, disse. Segundo a pesquisadora, essa a forma de o embrio falar para o corpo da me se preparar para a gravidez. O coordenador da Diviso de Medicina ssea da Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto (FMRP) da USP, Jlio Csar Voltarelli, questionou o que considera o principal argumento por parte dos que so contra o uso das clulas de embries: que no seriam necessrias uma vez que benefcios clnicos poderiam ser conseguidos com as clulas adultas. Para Voltarelli, a utilizao somente de clulas-tronco adultas no suficiente para tratar vrias doenas auto-imunes em estgio precoce. Alm disso, no caso da esclerose lateral amiotrfica, por exemplo, 95% dos pacientes morrem at os 4 anos de idade. S a utilizao de clulas-adultas no suficiente nesses casos. Precisamos utilizar clulas-tronco embrionrias, disse. Saiba mais lendo a pgina do Centro de Estudos do Genoma Humano: http://www.genoma.ib.usp.br constitucional pesquisar clulas-tronco a partir de embries? Erickson Gavazza Marques http://www.genoma.ib.usp.br/noticias/pdf/rep-erickson_marques070420.pdf STF assiste a disputa ideolgica pela vida Laura Capriglione http://www.genoma.ib.usp.br/noticias/pdf/rep-laura_capriglione70421.pdf Deciso suprema Luis Carlos Azevedo - http://www.genoma.ib.usp.br/noticias/pdf/artluiz_azevedo070504.pdf

78

So Paulo, quinta-feira, 03 de maio de 2007

Que vida, biolgica ou moral?

Oscar Vilhena Vieira

POUCO TEMPO antes de deixar o comando do Ministrio Pblico Federal, o ento procurador-geral Claudio Fonteles props uma ao direta de inconstitucionalidade contra dispositivos da Lei de Biossegurana que autorizam a pesquisa, para fins teraputicos, com clulas de embries inviveis para fertilizao. Argumenta o ex-procurador-geral da Repblica que a lei inconstitucional, pois violaria o direto vida, bem como o princpio da dignidade humana -ambos entrincheirados em nossa Constituio. O raciocnio simples. A vida comea com a fecundao. O direito vida protegido pela Constituio. Logo, fazer pesquisa com clulas embrionrias atentar contra a dignidade da vida humana. O raciocnio do ex-procurador-geral to cartesiano quanto incorreto. O primeiro equvoco do ex-procurador-geral no reconhecer que o debate colocado ante o Supremo Tribunal Federal de natureza prevalentemente moral, e no de natureza "estritamente cientfica", como prope em artigo nesta Folha de S.Paulo ("Tendncias/Debates", 26/4). A questo fundamental, portanto, no quando comea a vida biolgica, mas sim que grau de proteo jurdica deve ser conferido vida em cada etapa de seu desenvolvimento. Reconhecer que o embrio tem vida no significa que estejamos dispostos a equipar-lo moral e juridicamente a uma pessoa. Seria como comparar uma semente de jacarand encontrada no cho da floresta com uma rvore centenria que protegemos com nossa legislao ambiental. A dor de ver uma semente sendo comida por um passarinho no equiparvel quela de ver uma rvore derrubada por um raio, como nos lembra o filsofo Michael Sandel. Todos que j perderam uma pessoa querida sabem o que significa a morte de um ser humano, e esta no pode ser comparada com o no-desenvolvimento de um embrio, ainda mais quando falamos de um embrio que se encontra fora do tero e invivel para fertilizao. Essa distino no valor atribudo a cada uma das diversas etapas de evoluo da vida j feita pelo nosso direito e, at onde sei, jamais foi questionada pelo exprocurador-geral da Repblica Claudio Fonteles. Nosso Cdigo Penal permite, por exemplo, o aborto quando houver risco de vida para a me. Ou seja, na ponderao feita pelo legislador, ele deu mais importncia vida da me do que expectativa de vida do feto -e razovel que assim tenha feito. Importante destacar, por outro lado, que a pesquisa autorizada pela Lei de Biossegurana se resume apenas queles embries que foram produzidos fora do tero materno para fins de fertilizao, mas que no se demonstraram viveis para esse mesmo fim, seja por um problema de natureza fisiolgica, seja porque, depois de trs anos congelados, no mais podem ser implantados com segurana em um tero materno. Ou seja, estamos falando de embries que no possuem nenhuma expectativa de evoluir para a condio humana. A equiparao mecnica feita pelo ex-procurador-geral , portanto, destituda de sentido. Isso no quer dizer que o embrio no tenha valor e que no deva ser protegido. Antes o contrrio. Ele tem valor e devemos proteg-lo. Porm, essa proteo deve ser distinta daquela proteo que conferimos s pessoas.

79

 exatamente isso o que faz a Lei de Biossegurana. Ela probe a pesquisa com qualquer embrio que seja vivel. Mais do que isso, probe qualquer pesquisa que no tenha fins teraputicos, portanto, humanitrios. O terceiro aspecto preocupante do argumento levado a cabo pelo ex-procuradorgeral da Repblica a sua omisso em relao dignidade e prpria vida de milhes de pessoas humanas que sofrem doenas graves e letais, como Parkinson, diabetes, doenas coronrias ou leses de medula, que poderiam ser beneficiadas com o progresso nas pesquisas com clulas-tronco. Ao elevar o embrio invivel condio de ser humano, o sofrimento de milhares de seres humanos reais est sendo relegado mais absoluta irrelevncia. E essa no parece ser uma escolha moralmente adequada por quem luta em favor da vida.
OSCAR VILHENA VIEIRA, 41, advogado, mestre em direito pela Universidade de Colmbia (EUA) e doutor em cincias polticas pela USP, professor de direito constitucional da Escola de Direito da Fundao Getlio Vargas e diretor jurdico da Conectas Direitos Humanos. autor, entre outras obras, de "Direitos Fundamentais: uma Leitura da Jurisprudncia do STF".

80

GLOSSRIO
Biotica - O estudo dos problemas ticos suscitados pelas pesquisas biolgicas e pelas suas aplicaes por pesquisadores, mdicos, etc. Blastocisto embrio, em fase de pre-implantao no tero, com cerca de 150 clulas produzidas por diviso celular aps a fertilizao. O blastocisto uma esfera formada por uma camada externa de clulas (o trofoblasto), uma cavidade (a blastocele), contendo em seu interior um conjunto de clulas denominado massa interna de clulas. Clula-tronco - clula capaz de se dividir por perodos indefinidos sem dar origem a clulas especializadas. Clula-tronco do adulto - clula indiferenciada encontrada em tecidos que pode renovarse a si mesma (com certas limitaes) e se diferenciar em todas as clulas especializadas do tecido do qual foi originada. Clula-tronco do adulto tambm denominada clulatronco adulta, ou tecidual. Clulas-tronco de cordo umbilical clulas-tronco coletadas do cordo umbilical imediatamente aps o nascimento podem produzir todos os tipos de clulas sanguneas. As clulas-tronco de cordo so normalmente usadas para tratar pacientes com cncer ou outras doenas do sangue, aps sofreram quimioterapia para destruir sua prpria medula ssea. Clula-tronco embrionria - clula indiferenciada encontrada no embrio que tem o potencial para se diferenciar numa ampla variedade de clulas especializadas. Clula-tronco hematopoitica clula-tronco que origina todas as clulas do sangue: hemcias, glbulos brancos (todos os tipos) e plaquetas. Clula pluripotente: clula capaz de gerar os trs tipos de clulas germinativas (ectoderme, mesoderme e endoderme), ou seja, tem o potencial para se desenvolver nos mais de 200 tipos celulares conhecidos do corpo humano. Clula-progenitora: derivada da clula-tronco e que dar origem a clulas diferencidas. Clula totipotente: capaz de dar origem aos tecidos que formaro o embrio. Ex.: zigoto. Clula-tronco unipotente: capaz de dar origem a uma nica linhagem de clulas diferenciadas. Clonagem reprodutiva o objetivo da clonagem reprodutiva a criao de um animal idntico ao doador do ncleo da clula somtica. O embrio implantado no tero e desenvolve em um ser vivo. O primeiro animal a ser criado por clonagem reprodutiva foi a ovelha Dolly, nascida no Instituto Roslin na Esccia, em 1996. Clonagem teraputica a meta da clonagem teraputica a criao de clulas perfeitamente compatveis com as do paciente no qual elas sero injetadas. Nessa tcnica os cientistas combinam o ncleo de uma clula somtica do paciente com uma clula ovo da qual o ncleo foi retirado. Essa nova clula, ao se dividir, origina clulastronco embrionrias que so coletadas e usadas para gerar tecidos que so compatveis com o organismo do paciente, isto , o tecido formado no causar rejeio quando transplantado. Clone gerao de cpias idnticas de uma molcula, clula, ou organismo.

81

Cultura de clulas crescimento de clulas in vitro em um meio artificial para experimentos em laboratrio. Diferenciao: o processo atravs do qual uma clula no especializada torna-se especializada. Ectoderma folheto embrionrio mais externo formado por clulas derivadas da camada interna do blastocisto, origina o sistema nervoso, rgos do sentido, pele e estruturas relacionadas. Embrio em humanos, o organismo em desenvolvimento a partir da fertilizao at o final da oitava semana de gestao, quando ento passa a ser chamado de feto. Endoderma folheto embrionrio com posio mais interna formado por clulas derivadas da camada interna do blastocisto, origina os pulmes e outras estruturas respiratrias e os rgos do aparelho digestrio. tica - Estudo dos juzos de apreciao referentes conduta humana suscetvel de qualificao do ponto de vista do bem e do mal, seja relativamente a determinada sociedade, seja de modo absoluto. Feed layer Clulas usadas em co-cultura para manter as clulas-tronco embrionrias. Para o cultivo de clulas-tronco embrionrias, so includos na cultura fibroblastos de embrio de camundongo ou humanos que foram tratados de modo a impedir sua diviso. Fertilizao in vitro tcnica que une ovcito e espermatozide em laboratrio. Gene unidade funcional de herana e que corresponde a um segmento de DNA nos cromossomos. O gene uma unidade de transcrio. In vitro denominao em latim para dentro de vidro, ou em tubo de ensaio em experimentos de laboratrio, um meio artificial, fora do organismo. Marcadores de superfcie protenas presentes na superfcie externa da clula e que so nicas para determinados tipos celulares. Elas podem ser detectadas por meio de anticorpos e outros mtodos de deteco. Massa interna de clulas grupo de clulas dentro do blastocisto. Essas clulas do origem ao embrio e finalmente ao feto. A partir dessas clulas so geradas as linhagens de clulas-tronco embrionrias. Meio de cultura liquido que cobre as clulas numa placa de cultura e que contem nutrientes para alimentar as clulas. O meio pode tambm incluir outros fatores adicionados para produzir mudanas nas clulas. Mesoderma folheto embrionrio com posio mediana formado por clulas derivadas da camada interna do blastocisto, origina os ossos, msculos, tecido conectivo, rins e estruturas relacionadas. Micro ambiente molculas e compostos tais como nutrientes e fatores de crescimento no fluido que rodeia a clula num organismo ou no laboratrio e que tem um importante papel na determinao das caractersticas da clula. Passagem um ciclo de crescimento celular e proliferao em cultura.

82

Plasticidade: a capacidade de uma cula-tronco adulta de um tecido gerar uma clula(s) especializada(s) de um outro tecido. Por exemplo, j foi demonstrado in vitro que clulas-tronco hematopoiticas so capazes de gerar neurnios. Sinais fatores internos e externos que controlam as mudanas na estrutura e funo das clulas Terapia celular ou medicina regenerativa tratamento no qual as clulas-tronco so induzidas em tipos celulares especficos necessrios para reparar tecidos danificados ou substituir clulas que foram destrudas. Teratoma os cientistas comprovam se eles conseguiram obter uma linhagem de clulas-tronco embrionrias injetando essas clulas em camundongo com o sistema imune reprimido. Uma vez que elas no podem ser destrudas pelo sistema imune do camundongo, elas sobrevivem e formam um tumor benigno, com muitas camadas, denominado teratoma. Mesmo que a formao de tumores no seja normalmente desejada, nesse teste, os teratomas servem para verificar a capacidade das clulastronco de originar todos os tecidos celulares. Isso porque os teratomas contem todos os tipos celulares derivados das trs camadas germinativas do embrio. Trofoblasto tecido extra embrionrio responsvel pela implantao, desenvolvimento em placenta, e controle das trocas de oxignio e matablitos entre a me e o embrio.
Clulatronco

transdiferenciao Clula progenitora

desdiferenciao

diferenciao

Clula madura transdiferenciao

Figura 1. Termos chave usados no debate da plasticidade das clulas-tronco.

83

ATIVIDADES

84

ATIVIDADE DE ACOLHIMENTO E CONTRATO PEDAGGICO

Curso: Desvendando as clulas-tronco: dos sonhos realidade Nome da Oficina: NIBUS, uma viagem para...................... Metodologia: Oficina introdutria para o curso: Construo de um nibus para dar incio a uma viagem (curso) que ser iniciada no dia 16 s 9:00 horas e chegar ao local de destino no dia 20 s 16:30 horas. Material: 1. Desenho de um nibus grande. 2. Etiquetas adesivas: 2.1. Motor: retangulares 2x1cm 2.2. Parafusos: retangulares 0,5 x 0,5 cm aproximadamente 2.3. Carcaa: quadradas 2x2 2.4. Bagagem: 8x5 cm com borda colorida (desenho da ala da mala) 2.5. Combustvel: retangulares 5x3cm. Recortar duas Gotas deixando o meio unido. 2.6. Passageiros e motoristas: 2 cm de dimetro branca ou colorida no metlica 2.7. Pedras do caminho retangulares 5x3 ou quadradas 5x5 cm para serem recortadas em formas de pedras com espao para escrita no meio. 3. Dois fachos de luz para os faris = avaliao. 4. Um envelope retangular padro para ser colado em cima do nibus onde sero colocadas as malas com as bagagens. 5. 8 envelopes onde sero colocadas cada uma das diferentes etiquetas conforme as metforas. Os envelopes devero ser identificados com o numero da ordem de acordo com a dinmica pr-estabelecida e a metfora correspondente. 6. Papel com o destino do nibus. 7. 1 rolo de fita adesiva para colagem do envelope e dos faris. 8. Crachs com lugar para colocar os nomes: Caso alguma atividade prevista durante o curso for realizada por grupos, os grupos podero ser identificados com esferas adesivas coloridas nos crachs. Cronograma da atividade: Sugestes para a organizao prvia dos professores: 1. Distribuir entre os participantes, na entrada para a sala de aula um crach (em branco) e um envelope contendo todas as pecas de etiquetas que sero usadas durante a oficina. 2. Comunicar aos mesmos que devero ter um lpis ou caneta na mo para os registros. 3. A cada situao, esclarecer qual a etiqueta a ser usada. 4. Distribuir, previamente entre os professores as diferentes funes: distribuio dos crachs, colagem das etiquetas, recolhimento dos dados que sero entregues no momento da oficina, coordenador da fala introdutria, confeco do nibus, etc. Tempo total: 50 minutos Introduo: - 5 min. - Apresentao da idia da viagem e construo do transporte para que ela acontea. - Explicar que a participao, no momento da construo sera de apenas uma frao pequena do grupo (6 pessoas) porem que aps o termino todos devero colocar as

85

suas contribuies nos respectivos lugares para que possam ser conhecidas tanto pelos alunos como pelos professores. - Explicar que o nibus permanecera no local do curso para que todos tenham a oportunidade de conhecer o que foi escrito por todos. - Definir ou colar o destino. Sugesto de pergunta para o inicio da atividade: - O que necessrio para que um nibus possa ser usado para uma viagem? Inicio da construo do nibus: o 3 min. Motor: as pecas do motor devero ser colocadas na hora enquanto vo sendo lidas pelo monitor responsvel; sugerimos que seja o contedo do curso previamente escritos nas pecas. o 2 min. Parafusos: habilidades que os alunos e professores devero desenvolver para que a viagem acontea; previamente escritas e coladas na hora unindo as pecas do motor. 5 minutos. Combustvel: energia que mobilizara os participantes para a viagem/curso. Cada participante devera escrever um grande desejo e um grande medo em relao a viagem que ter inicio = expectativas. 2 min. Para escrever e 3 min. para a colagem e leitura (se assim desejarem os participantes) 5 min. Carcaa: Limites ou regras construdas coletivamente. 3 min para escrever e 2 min. para ver se todos esto de acordo.= validao das regras. Nesse momento os professores tb podem contribuir com sugestes. 3 min. Pedras do caminho: - problemas que podero aparecer durante a viagem/curso. 3 min. Faris e espelhos retrovisores: Avaliao continua.

o 3 min. Bagagem: Sugesto: O que na minha vida me motivou a fazer este curso ou participar desta viagem?
o 5 min. finais.- Subida no nibus; definio de papeis e partida. Cada passageiro devera colocar o seu nome no crach, desenhar a sua cara na etiqueta esfrica e ir colocando se em algum lugar no nibus e falando o seu nome.

86

Levantamento de conceitos
1. Dentre as frases seguintes a que melhor define um gene a) uma unidade de transcrio na molcula de DNA b) uma molcula de DNA em um cromossomo c) uma cadeia simples de DNA que codifica um polipeptdio d) um segmento da molcula de DNA que codifica um polipeptdio e) no tenho certeza da resposta 2. Na clula eucaritica a atividades dos genes regulada principalmente pelo controle a) do incio da transcrio b) da traduo c) do processamento das protenas d) do splicing do pr-mRNA e) no sei responder 3. Comparando-se o zigoto de uma determinada espcie com uma clula muscular do organismo adulto verifica-se que a) a seqncia de DNA muda dependendo do tipo de diferenciao celular b) a morfologia dos dois tipos de clulas diferente c) o genoma dos dois tipos celulares diferente d) o padro de genes ativos e o mesmo e) no sei responder 4. Dois tipos celulares diferentes de um mesmo organismo, por exemplo, clulas nervosas e clulas musculares a) apresentam uma coleo de protenas diferentes b) possuem os mesmos genes em atividades c) apresentam genomas com diferentes seqncias de DNA d) diferenciaram-se somente durante o desenvolvimento embrionrio e) no sei responder 5. Clulas-tronco so a) todas as clulas presentes em um embrio em qualquer fase do desenvolvimento b) clulas presentes apenas em embries de vegetais e animais c) clulas com potencialidade para originar diferentes tipos celulares d) clulas com alto grau de diferenciao e) no sei responder 6. Durante a diferenciao celular a) clulas-tronco dividem-se com muita freqncia b) todos os genes do genoma esto em funcionamento c) clulas indiferenciadas originam clulas especializadas d) clulas diferenciadas transformam-se em clulas especializadas e) no sei responder

87

ESTUDO DIRIGIDO 1
IDENTIFICAO DE CONCEITOS RELATIVOS A CLULAS-TRONCO Classe dividida em grupos de 6. Leia o texto acima. A compreenso do texto depende do entendimento de vrios conceitos nele includos. Durante sua leitura grife pelo menos 15 desses conceitos. Os conceitos devero ser classificados em uma das seguintes categorias: (1) conceitos bsicos relacionados ao tema, (2) tica, (3) procedimentos experimentais. Aps a leitura compare os conceitos selecionados por voc durante a leitura com a seleo feita pelos demais colegas. Questes para discutir em grupo: a) Nas clulas-tronco qual o alvo do estmulo proveniente das clulas vizinhas? b) Qual a diferena entre clula-tronco embrionria e de adulto? c) Qual a pergunta da equipe de pesquisadores para a realizao do experimento? d) Faa um esquema do experimento realizado pela equipe de Gerd Hasenfuss. e) Qual o resultado obtido e o que ele comprova? S PARA ELES: CLULAS-TRONCO ADULTAS QUE SE COMPORTAM COMO EMBRIONRIAS PODEM DERRUBAR OBSTCULO PESQUISA - MARINA VERJOVSKY - CINCIA HOJE ON-LINE - 31/03/2006 Um estudo alemo pode representar o fim dos dilemas ticos enfrentados na pesquisa sobre clulas-tronco embrionrias. Essas clulas, capazes de se diferenciar em todos tecidos do organismo, so apontadas como o futuro da medicina regenerativa. No entanto, sua obteno requer o sacrifcio de embries, proibido em muitos pases e criticado por diversos setores da sociedade. Agora, a equipe de Gerd Hasenfuss, da Universidade Georg-August, em Gttingen, mostrou que h no testculo de camundongos clulas-tronco adultas que, dependendo do meio usado para cultivo, adquirem propriedades das clulas embrionrias, ou seja, a capacidade de gerar qualquer tecido do organismo. Caso clulas do mesmo tipo sejam encontradas em humanos como acreditam os autores do estudo , um grande obstculo pesquisa na rea cair por terra. No estudo publicado em 24 de maro no site da revista Nature, a equipe de Hasenfuss verificou que, quando essas clulas-tronco esto nos testculos dos camundongos, produzem espermatozides devido ao estmulo de outras clulas locais. A equipe alem resolveu testar o que aconteceria na ausncia desse estmulo: para isso, as clulas foram injetadas na pele de camundongos ou cultivadas in vitro. Os pesquisadores constataram que, nessas condies, as clulas se comportavam como as clulas-tronco ditas pluripotentes, ou seja, elas eram capazes de se transformar em vrios tipos celulares, como msculos, gordura, ossos, cartilagem ou tecido neuronal e intestinal. No entanto, os pesquisadores no conseguiram encontrar esse tipo celular no ovrio de roedoras eles ainda no sabem se elas realmente no existem ou se a equipe no foi capaz de identific-las. Por ora, este avano s vlido para os animais do sexo masculino. Potencialidades: As clulas-tronco so importantes para a medicina porque podem ser teis no tratamento de doenas cardacas, leucemia, Alzheimer e Parkinson, alm de permitirem a

88

reconstituio de medula ssea e de tecidos queimados ou destrudos sem risco de rejeio, caso o doador seja o prprio paciente. No Brasil, o Instituto do Corao (Incor), vinculado ao Hospital das Clnicas da Universidade de So Paulo (USP), vem estudando o tratamento da insuficincia cardaca com o transplante de clulas-tronco adultas extradas da medula ssea dos pacientes e injetadas no msculo cardaco. Os resultados preliminares indicam que se trata de um procedimento seguro. Porm, o fato das clulas-tronco adultas no apresentarem a plasticidade das embrionrias restringe a sua utilizao em alguns tratamentos, pois nenhuma delas foi capaz, at o momento, de se diferenciar em certos tipos celulares, como por exemplo, as clulas produtoras de insulina. O trabalho do grupo alemo importante justamente por reunir as qualidades de ambos os tipos de clulas-tronco. As clulas adultas que apresentam plasticidade so um grande passo para acabar com os problemas ticos que vm sendo enfrentados atualmente, avalia o cardiologista Jos Eduardo Krieger, vice-coordenador do projeto que estuda clulas-tronco adultas no Incor. Se esta nova descoberta se reproduzir em humanos pode ser um avano importante para a pesquisa de reparao de rgos humanos.

89

ATIVIDADE 1. DIFERENCIAO DA HEMCIA

Renato Chimaso dos Santos Yoshikawa

Objetivo da atividade: Visualizar a diferenciao da hemcia, estabelecendo a relao entre o sinal celular e o fentipo. Material por grupo: Massa de modelar de 6 cores; contas de diferentes cores e tamanhos, 1m de fio colorido; 4 envelopes contendo as cartas de sinais. Metodologia: Modelagem de uma clula com as estruturas mais relevantes para o processo de diferenciao da hemcia. a) Montagem inicial Modelar um PROERITROBLASTO de acordo com as seguintes caractersticas: a maior clula da linhagem celular que forma a hemcia; represente-o com 10 cm de dimetro; Apresenta os elementos caractersticos de uma clula que sintetiza intensamente protenas; represente 10 poli ribossomos; O ncleo esfrico e central; tem um ou dois grandes nuclolos, a cromatina pouco condensada; Ao redor do ncleo, encontram-se seis mitocndrias; H pequena produo de hemoglobina; representar 10 molculas de hemoglobina. b) Em cada uma das quatro etapas do processo de diferenciao, cada grupo dever escolher trs cartas de sinais pertinentes. Quando possvel, o efeito de cada sinal deve ser modelado em massinha. Selecionar do envelope I as trs cartas de sinais que devero ser aplicados clula modelada inicialmente para que se transforme no ERITROBLASTO BASFILO. Selecionar do envelope II as trs cartas de sinais que devero ser aplicados clula para que se transforme no PR-RETICULCITO. Selecionar do envelope III as trs cartas de sinais que devero ser aplicados clula para que se transforme no RETICULCITO. Selecionar do envelope IV as trs cartas de sinais que devero ser aplicados clula para que se transforme na HEMCIA.

Abaixo esto representadas as quatro etapas de diferenciao celular para a transformao de um PROERITROBLASTO em HEMCIA:

90

I. Eritroblasto basfilo polirribossomo

mitocndria

hemoglobina

II. Pr-reticulcito

III

IV.

91

ATIVIDADE 2 UM CASO MUITO INTERESSANTE DE DIFERENCIAO CELULAR

Vivian Lavander Mendona - Adaptado de Differentiation in the Amoeboflagellate Naegleria, disponvel em http://7e.devbio.com/article.php?ch=12&id=10

Quando consideramos o processo de diferenciao celular, logo pensamos no desenvolvimento dos animais, que apresentam centenas de tipos celulares diferentes geradas a partir de uma nica clula, o zigoto. Existe, no entanto, um caso muito interessante de diferenciao celular que ocorre em um ser unicelular: trata-se do protozorio Naegleria gruberi. A clula de N. gruberi mais comumente encontrada na forma amebide, locomovendo-se por meio de pseudpodes entre as partculas do solo. Os pseudpodes tambm so usados na captura de bactrias, que constituem seu alimento. Em algumas situaes, como aps uma chuva, torna-se mais difcil a captura das bactrias, que ficam dispersas na gua que passa a ocupar os espaos entre as partculas do solo. Em pouco mais de uma hora, N. gruberi se transforma em uma clula alongada e portadora de dois longos flagelos. Com eles, os protozorios locomovem-se com agilidade no meio lquido e localizam rapidamente seu alimento. Observe as principais mudanas no fentipo desse protozorio no grfico abaixo:

A = incio da sntese de tubulina B = sntese intensa de tubulina C = organizam-se os corpsculos basais e em seguida os flagelos tornam-se visveis; clula se torna arredondada D = clula se torna alongada

Figura. Diferenciao em indivduos de Naegleria gruberi. Indivduos com clula amebide foram cultivados em meio contendo bactrias; no tempo 0, foi adicionada gua no meio, simulando o que ocorre aps uma chuva. Aps 80 minutos, quase 100% da populao apresenta a forma flagelada. Para que se formem flagelos, a clula deve sintetizar diversas protenas, como a tubulina, que compe o corpsculo basal e os microtbulos. Essa protena est ausente nos indivduos com fentipo amebide, o que significa que os genes envolvidos esto desligados nessas clulas. Como a clula sabe que deve ativar modificar a expresso de seus genes e sintetizar as protenas dos flagelos? Temos a um indcio de que existe um processo de sinalizao entre a clula e o meio externo. A presena ou ausncia de determinadas substncias no meio extracelular pode ser detectada pela membrana plasmtica e pode desencadear uma srie de reaes qumicas no citoplasma. Essa cascata de reaes pode gerar molculas capazes de

92

entrar no ncleo da clula e ativar/desativar certos genes. No caso do protozorio, a mudana no meio externo desencadeia um processo que leva ativao dos genes que comandam a sntese das protenas flagelares. Assim, a mudana na forma da clula resulta de modificaes na expresso dos genes de cada indivduo. Utilizando marcadores de RNAm, pesquisadores observaram que, aps a transcrio dos genes que codificam a tubulina, as molculas de RNAm se dirigem para a periferia da clula e se agrupam em uma regio determinada, onde ocorrer a sntese das subunidades que vo compor a protena e onde, em seguida, surgiro os flagelos. O citoesqueleto participa desse processo de transporte e ancoragem das molculas de RNAm em pontos especficos do citoplasma. Temos a um indcio de que existe tambm uma sinalizao interna, responsvel pela orientao das substncias dentro da clula. Aps a sntese protica, molculas de tubulinas organizam-se formando microtbulos. Outras protenas tambm participam da estrutura do flagelo. Assim, podemos destacar trs eventos fundamentais no processo de diferenciao celular: a sinalizao entre a clula e o meio externo a ela, resultando em mudanas na expresso gnica; a sinalizao interna, da qual participa o citoesqueleto, resultando em orientao de molculas dentro da clula; a organizao das protenas aps a sntese protica, resultando em mudanas no fentipo da clula. Adaptado de Differentiation in the Amoeboflagellate Naegleria, disponvel em http://7e.devbio.com/article.php?ch=12&id=10 Outras fontes de consulta: Han, J. W.; Park, J. H.; Kim, M.; Lee, J. 1997. mRNAs for microtubule proteins are specifically colocalized during the seqencial formation of basal body, flagella and cytoskeletal microtubules in the differentiation of Naegleria gruberi. The Journal of Cell Biology, vol. 137: 871-879. Walsh, C. 1984. Synthesis and assembly of the cytoskeleton of Naegleria gruberi flagellates. The Journal of Cell Biology, vol. 98: 449-456.

93

ATIVIDADE - DIFERENCIAO NO PROTOZORIO NAEGLERIA GRUBERI Desafio da atividade: Representar as etapas de diferenciao do protozorio Naegleria gruberi a partir da escolha de sinais apropriados diferenciao celular. Nmero de participantes: organizar-se em grupos de no mximo 6 pessoas. Materiais: Massa de modelar (6 cores); Total de 28 Cartas de Sinais, organizadas em 4 conjuntos (A, B, C e D); Guia de figuras. Montagem inicial: Modele um indivduo amebide de Naegleria gruberi de acordo com as seguintes caractersticas: a. O ncleo esfrico; b. O citoplasma apresenta as organelas caractersticas de uma clula eucaritica animal por simplificao, represente apenas os ribossomos, as mitocndrias e as vesculas, que compreendem: fagossomos, lisossomos, vacolos digestivos; c. No estgio amebide o ncleo e as organelas citoplasmticas no apresentam posies fixas na clula; d. Represente o indivduo amebide capturando uma bactria. Procedimento Para cada etapa (A, B, C e D), o grupo deve escolher trs cartas de sinais a serem aplicados na clula. Discutindo em conjunto, julguem quais sinais so necessrios para a diferenciao celular. O efeito de cada sinal deve ser representado em massinha pelo grupo. Guia de figuras Fotografias ao microscpio ptico; preparao com lugol:

94

Grfico esquematizado:
Concentrao de tubulina na clula

0 Tempo

120 min

Esquema:

95

DIFERENCIAO CELULAR EM TECIDO SSEO

Renato Chimaso dos Santos Yoshikawa

A Figura 1 apresenta a organizao do tecido sseo: imersos numa matriz calcificada encontram-se os ostecitos, ou seja, as clulas sseas diferenciadas. Outros tipos celulares: as clulas precursoras mesenquimais e os osteoblastos (clula osteognica, no completamente diferenciada, que sintetiza a parte orgnica da matriz ssea) esto localizadas na regio no calcificada desse tecido.

clulas precursoras de osteoblasto osteoblasto matriz no calcificada matriz calcificada

ostecito

Figura 1: Distribuio das clulas precursoras mesenquimais, osteoblastos e ostecitos no tecido sseo.

No processo de osteognese, isto , de formao do osso, os ostecitos e os osteoblastos originam-se por diferenciao celular a partir de clulas precursoras mesenquimais (Figura 2).

clula precursora mesenquimal

osteoblasto

ostecito

Figura 2: Via de diferenciao celular em que uma clula precursora mesenquimal origina osteoblasto e ostecito. O osteoblasto produz a matriz no calcificada composta principalmente por colgeno tipo I. O ostecito uma clula em forma de estrela.

Na diferenciao osteoblstica, so expressos genes que so considerados marcadores fenotpicos de osteoblasto, como o gene que produz o colgeno tipo I, substncia caracterstica da matriz orgnica do osso. Para que haja a diferenciao celular osteoblstica, necessria a presena de um fator de transcrio especfico dos osteoblastos, o fator Cbfa1 (core binding factor a1), o mais precoce e especfico marcador da osteognese. Protenas morfognicas do osso (BMP) e o TGF (transforming growth factor) induzem a expresso de Cbfa 1.

96

Em comparao com o osteoblasto, o ostecito apresenta uma forma estrelar, aspecto conferido graas presena de projees celulares finas denominadas processos dendrticos. Estudos de biologia molecular identificaram nesses processos dendrticos a protena E11 que desempenha papel fundamental na formao dessas estruturas. A protena E11 interage com outras protenas, a CD44 e a ezrina, formando um complexo que ativa a organizao de filamentos de actina e miosina em regies da clula em que se formaro os processos dendrticos (Figura 3).
processo dendrtico

actina

E11
CD44
miosina ezrina

Figura 3: papel da protena E11 na formao do processo dendrtico em ostecito. Note que a protena CD44, ligada E11, ativa a protena ezrina, que atua na interao entre miosina e actina, organizando o citoesqueleto.

Nas clulas precursoras mesenquimais o gene da protena E11 est inativo e, assim sendo, os processos dendrticos no esto presentes no fentipo dessas clulas. A ativao do gene E11 ocorre somente na presena de protenas especficas como a Sp1 e Ap1, que atuam como fatores de transcrio para o gene E11. Por sua vez, tais protenas foram sintetizadas a partir da ativao dos seus respectivos genes, o que acontece, por exemplo, graas a sinais mecnicos oriundos do meio ambiente e recebidos pelo ostecito em estgio inicial de desenvolvimento. Referncias:
Harris, S. E., Bonewald, L. F., Harris, M. A., Sabatini, M., Dallas, S., Feng, J. Q., Ghosh-Choudhury, N., Wozney, J., e Mundy, G. R. 1994. Effects of transforming growth factor beta on bone nodule formation and expression of bone morphogenetic protein 2, osteocalcin, osteopontin, alkaline phosphatase, and type I collagen mRNA in long-term cultures of fetal rat calvarial osteoblasts. J. Bone Miner. Res. 9: 855863. Karsenty, G. Transcriptional control of osteoblast differentiation. Endocrinoly 142: 2731-2733. Kato, Y., Windle J. J., Koop, B. A., Mundy, G. R., Bonewald, L. F. 1997. Establishment of an osteocyte-like cell line, MLO-Y4. J. Bone Miner. Res. 12: 20142023. Zhang, K., Barragan-Adjemian, C., Ye, L., Kotha,S., Dallas, M., Lu, Y., Zhao, S., Harris, M., Harris, S. E., Feng, J. Q. e Bonewald, L. F. 2006. E11/gp38 Selective Expression in Osteocytes: Regulation by Mechanical Strain and Role in Dendrite Elongation. Molecular and Cellular Biology, p. 45394552.

97

ATIVIDADE 3
DIFERENCIAO CELULAR EM OSSO Introduo No osso, os osteoblastos so as clulas que originam ostecitos. Uma caracterstica morfolgica prpria dos ostecitos a presena de processos dendrticos, projees celulares longas e finas. Objetivo da atividade: A partir de um osteoblasto, formar um ostecito, ou seja, uma clula com processos dendrticos, entendendo como se d a regulao gnica necessria para essa diferenciao celular. Materiais
Tipo de material Pano 4 fios de telefone 4 pregadores Tabuleiro circular 15 peas vermelhas 8 cartelas quadradas O que representa Membrana plasmtica Filamentos de actina Protena acoplada membrana Ncleo Protenas DNA; RNAm; RNAt; RNAr

Montagem inicial Dispor o pano ao redor do tabuleiro circular simulando uma clula com citoplasma e ncleo: essa clula o osteoblasto. Espalhar pelo citoplasma do osteoblasto as peas (protenas), os fios e as cartelas. Procedimento: Siga as instrues abaixo: 1. Encontre a nica protena que se liga ao promotor (I) do gene Sp1. 2. Essa protena, uma vez ligada ao promotor do gene Sp1, ativa sua transcrio. Identifique o produto da transcrio desse gene dentre as cartelas. Coloque-o na rea tracejada (II). 3. Continuando o processo de expresso desse gene, forma-se outro produto, que se dirige ao citoplasma (III). Escolha-o dentre as peas. 4. Esse ltimo produto deve se ligar agora ao promotor do gene E11. Houve realmente o encaixe da pea, isto , a ligao (IV)? Se no, escolha outra pea at achar aquela que se liga ao promotor do gene E11. 5. A ligao dessa protena no promotor do gene E11 ativa sua transcrio. O produto da transcrio deve ser identificado dentre as cartelas quadradas (V). 6. Os transcritos so traduzidos dando origem a protena E11, simbolizada pelo pregador (VI). 7. As molculas da protena E11 aderem-se membrana e junto com outras molculas orienta os filamentos de actina. Prenda os filamentos de actina e forme os processos dendrticos (VII). Consideraes finais Acredita-se que os ostecitos tocam-se graas aos processos dendrticos, o que estabelece uma comunicao entre essas clulas. A comunicao fundamental para os ostecitos, uma vez que eles se encontram imersos em uma matriz calcificada. Sem os processos dendrticos, a comunicao celular ficaria comprometida.

98

ATIVIDADE 4 - DIFERENCIAO DE CLULAS EMBRIONRIAS: A FORMAO DO TROFOBLASTO

Vivian Lavander Mendona

Introduo: Dois grupos, organizados lado a lado, participaro desta oficina cada um recebendo um kit de materiais. O objetivo da oficina compreender essencialmente o papel dos fatores de transcrio na regulao da atividade dos genes e a relao entre o que acontece no nvel gnico com a diferenciao de uma clula. Vale ressaltar que o processo de diferenciao bastante complexo e o processo aqui utilizado foi simplificado. No decorrer da oficina os participantes tambm utilizaro conhecimentos bsicos de biologia celular e molecular. Materiais: modelo de clula (blastmero), que servir de tabuleiro, constitudo de base de pano representando o citoplasma e os limites da clula (onde estaria a membrana plasmtica), e a prancha representando o ncleo com trechos de dois cromossomos (A e B) em seu interior (ao modelo no obedece s propores reais entre as estruturas); peas em cartolina com as opes: DNA, RNAr (RNA ribossmico), RNAt (RNA transportador) e RNAm (RNA mensageiro); peas em resina com diferentes contornos; peas tubulares com regio de encaixe; clipes coloridos; texto de apoio As primeiras mudanas morfolgicas no embrio, disponvel na pgina 101 da apostila (consultar durante o jogo se necessrio; recomendamos a leitura do texto ao trmino da oficina). Regras da oficina: 1. Disponha a prancha-ncleo na base de pano que representa o citoplasma da clula. Disponha clipes coloridos em uma regio do citoplasma. Esses clipes representam estmulos que uma clula pode enviar para uma vizinha. 2. No ncleo, inicia-se a transcrio do gene S, localizado no cromossomo A. Localize a pea que indica corretamente qual o produto da transcrio e coloque-a no quadro amarelo correspondente. 3. Aps a transcrio do gene S, ocorre a traduo no citoplasma, com a formao da protena S. 4. A protena S atravessa a membrana nuclear e, dentro do ncleo, liga-se regio promotora do gene CDH-1, localizada no cromossomo B. Sabendo disso, identifique a pea que representa a protena S e coloque-a no devido lugar. 5. A protena S ligada regio promotora do gene CDH-1 impede a transcrio desse gene. 6. Aproxime seu blastmero do da outra equipe. Quando os limites se tocarem, envie os estmulos para seu vizinho e receba os dele. Os estmulos vo at o ncleo e impedem a transcrio do gene S. Represente esta etapa e represente as conseqncias desse bloqueio, retirando todos os transcritos do gene S e todas as protenas S de sua clula. 7. Agora a regio promotora do gene CDH-1 est desbloqueada, e o gene pode ser transcrito. Localize a pea que indica corretamente qual o produto da transcrio e coloque-a no quadro amarelo correspondente. 8. Aps a transcrio do gene CDH-1, ocorre a sua traduo no citoplasma, com a formao da protena E-caderina. Essa protena vai para a membrana

99

plasmtica do blastmero, na regio de contato com a clula vizinha. Represente esta etapa utilizando a pea adequada. 9. Agora o seu blastmero vai aderir ao blastmero do outro grupo atravs das Ecaderinas. Represente esta etapa e tambm o achatamento da clula manipulando a base de pano. 10. O desenho abaixo representa um blastocisto, em corte transversal. Identifique no desenho abaixo em qual das camadas 1, 2, 3 ou 4 o seu blastmero estaria e justifique a escolha:

100

AS PRIMEIRAS MUDANAS MORFOLGICAS NO EMBRIO O incio do desenvolvimento embrionrio nos vertebrados caracteriza-se por uma fase de segmentao, que envolve uma srie de divises mitticas a partir do zigoto, seguida da formao da blstula (ou blastocisto, no caso dos mamferos) e da gstrula. Nesses dois ltimos estgios, alm das divises mitticas ocorrem rearranjos espaciais das clulas do embrio e o incio da diferenciao dos folhetos embrionrios, que em outro momento daro origem aos diversos tecidos e rgos. Vamos analisar aqui alguns dos fatores envolvidos na determinao do arranjo das clulas no embrio logo no incio de seu desenvolvimento, tomando como exemplo o embrio de camundongo, o mais estudado entre as espcies de mamferos. Formao do trofoblasto: a primeira modificao na arquitetura celular do embrio Aps a fecundao, o zigoto inicia a primeira diviso mittica, originando duas clulas morfologicamente idnticas chamadas blastmeros. Cada blastmero sofre novas divises, chegando ao estgio de mrula (amora, em Latim). Os blastmeros mantm-se unidos uns aos outros, formando uma estrutura mais compacta. A figura a seguir resume esses eventos iniciais da vida embrionria:

Figura 1. Incio da segmentao no embrio.

A partir do estgio de 16 clulas, os blastmeros mais superficiais sofrem um achatamento progressivo e passam a expressar em suas membranas plasmticas estruturas de adeso tpicas de clulas epiteliais, como as znulas de adeso, as znulas de ocluso e as junes comunicantes (gap junctions). Essas clulas modificadas formam o primeiro epitlio do embrio, o trofoblasto. As clulas do trofoblasto migram determinando o aparecimento de uma cavidade interna, a blastocele. As clulas embrionrias que no sofrem essas transformaes passam a compor a massa celular interna ou boto embrionrio. O embrio apresentando trofoblasto, massa celular interna e blastocele chamado blastocisto.

Figura 2: Esquema de blastocisto, representado em corte. (1) Massa celular interna; (2) cpsula protetora; (3) trofoblasto; (4) blastocele. Repare a diferena morfolgica entre as clulas da massa interna e da massa externa do embrio.

101

Adeso entre clulas: muito alm de uma simples unio Observa-se que, medida que o nmero de clulas aumenta na mrula, a formao de estruturas de adeso tambm aumenta, como indica a figura a seguir. O resultado a compactao da mrula.

Figura 3. Mudanas na forma e na ocorrncia de estruturas de adeso de membrana plasmtica em clulas da mrula.

A formao das junes celulares nos blastmeros est relacionada com a presena de diversas protenas que se ligam membrana plasmtica e ao citoesqueleto. Uma dessas protenas a E-caderina (E de epitelial), codificada pelo gene CDH-1 e fundamental para a formao das znulas de adeso.

Figura 4. Detalhe da adeso entre duas clulas vizinhas com a participao da E-caderina.

O zigoto herda de sua me molculas de E-caderina, pois sua expresso ocorre no vulo. Aps a primeira diviso do zigoto, so os prprios blastmeros que sintetizam a protena, indicando que o gene CDH-1 est ativado. Para que o gene CDH-1 permanea ativo, um outro gene, o Snail, deve estar bloqueado. Quando o gene Snail, localizado em outro cromossomo, no est bloqueado, seu transcrito traduzido em uma protena que bloqueia a transcrio do gene CDH-1.

Aparentemente, existe uma comunicao entre os blastmeros mais externos da mrula. Graas a essa comunicao ocorre liberao de fatores que bloqueiam o gene Snail e como conseqncia o gene Cdh-1 ativado. Assim, quando uma clula se desenvolve tendo contato ntimo com clulas vizinhas a expresso de E-caderina aumenta e h formao das junes entre as clulas, o que resulta no aumento da adeso entre os blastmeros, na compactao da mrula e depois na formao das clulas do trofoblasto. Nas clulas que do origem massa interna do embrio o gene Snail est ativado e a expresso de E-caderina reduzida em relao s clulas do trofoblasto. Observe novamente a figura 3. possvel perceber que no ocorre apenas um aumento no nmero de junes entre as clulas; tambm ocorre a polarizao de clulas embrionrias, sendo possvel distinguir as regies basal, laterais e o apical. Cada uma dessas reas apresenta estruturas distintas na membrana plasmtica: microvilos na regio apical, znulas de ocluso e de adeso e junes comunicantes na regio lateral, estruturas de adeso na regio basal. O citoesqueleto tambm se reorganiza, mudando o formato dessas clulas, que passam a ser achatadas. As clulas embrionrias que sofrem essas modificaes durante a formao do blastocisto passam a formar o trofoblasto. A relao entre adeso celular e expresso de E-caderina tambm se verifica nas clulas do organismo adulto. A reduo da expresso de E-caderina em clulas tumorais humanas j foi verificada em certos tipos de tumores invasivos de pele, cabea, pulmo, mama, tireide, estmago, intestino e ovrio. Essa reduo um indcio de malignidade, pois as clulas tumorais esto mais desagregadas e podem, sob influncia de outros fatores, se espalhar para outros tecidos do corpo. O que apresentamos aqui, embora de modo bastante simplificado, mostra que o contato entre clulas vizinhas possui um efeito sinalizador e que a comunicao intercelular um fator fundamental na regulao do processo de diferenciao. Mostra, ainda, que os sinais recebidos por uma clula resultam em diferenciao porque a atividade de certos genes alterada. Fontes de consulta:
Alberts et al. Molecular Biology of the Cell. Garland Science, 2002. Jamora, C. et al. Links between signal transduction, transcription and adhesion in epithelial bud development. Nature (2003) 422: 317-322. University of Washington - Gene Reviews: www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?call=bv.View..ShowTOC&rid=gene.TOC Eurekah Bioscience Database www.eurekah.com/

Questes: a) Faa um esquema mostrando a relao funcional entre os genes Cdh-1 e Snail no zigoto e aps a primeira diviso clular. b) Qual a conseqncia morfolgica da ativao do gene Xdh-1?

103

ATIVIDADE 5 - DIFERENCIAO MUSCULAR

Paula Cristina Gorgueira Onofre

Objetivo da atividade: Entender como se d a diferenciao muscular e quais so suas etapas. Materiais Massinha de modelar de uma nica cor Miangas vermelhas, azuis e verdes Pedao de papel plastificado representando o tecido Carto plastificado representando o ncleo Envelope com as protenas Montagem inicial Retire o material do envelope e disponha-o sobre a bancada. Procedimento Siga as instrues abaixo e v respondendo as perguntas a medida que manipula o material: 1. Com a massa de modelar modele mioblastos (clula precursora do fibroblasto) com aproximadamente 3 cm de dimetro e coloque-os dentro da rea no tecido. Um novo mioblasto deve ser colocado a cada 5 segundos. 2. Quando um mioblasto tocar cinco ou mais, ligue o gene MyoD no ncleo. Qual o estmulo para esta ativao? O que produzido com a ativao do gene MyoD? Em quantas etapas? Marque a ativao do MyoD nos mioblastos usando a mianga vermelha. Nesta etapa a clula j est comprometida com a via de diferenciao muscular. 3. Repita os passos anteriores at que sejam produzidos MyoD em 3 ou mais clulas. Neste ponto, no ncleo, remova o inibidor do gene 2 e faa o MyoD atuar. O que acontece? Qual o papel funcional do MyoD? Marque as clulas com o gene 2 ativo utilizando o percevejo azul e alongue-as no formato de um fuso, mantendo-as na mesma posio no tecido. 4. No ncleo, faa o outro fator de transcrio atuar nos genes especficos musculares. O que acontece? O que produzido? Marque a ativao dos outros genes com um percevejo verde e funda estas clulas marcadas duas a duas. Nesta etapa a clula chamada de miotubo, est completamente diferenciada e torna-se contrtil.

104

Texto de apoio DESENVOLVIMENTO MUSCULAR O msculo esqueltico dos vertebrados derivado de estruturas mesodrmicas segmentadas, chamadas somitos (figura 1). A diferenciao muscular precedida por muitos passos, durante os quais as clulas precursoras migram, proliferam e finalmente so determinadas pela expresso de fatores miognicos. O principal fator miognico o MyoD. Esta protena um fator de transcrio que leva a ativao de diversos genes, responsveis pela modificao da clula precursora mesodermal em outra, j determinada, chamada de mioblasto. Os mioblastos j apresentam comprometimento na via de diferenciao muscular, porm ainda no expressam as protenas do msculo diferenciado e so capazes de proliferar. Quando submetidos a alguns estmulos especficos os mioblastos param de proliferar e prosseguem na via de diferenciao. O MyoD passa a ativar outros fatores de transcrio (como a miogenina), que vo agir apenas nos genes das clulas de msculo. Aps uma cascata de eventos regulatrios passam a expressar miosina e outras protenas musculares constituintes dos sarcmeros organizados, fundem-se, alongam-se e assim passam a constituir as estruturas do msculo propriamente dito, chamadas miotubos (figura 2). Aps o nascimento, algumas clulas permanecem determinadas, porm no diferenciadas no tecido muscular (no estgio de mioblasto). So as chamadas clulas satlite, responsveis pela regenerao muscular ao longo da vida do indivduo. Quando so necessrias, como no caso de leses musculares, as clulas satlite passam pelas mesmas etapas de diferenciao j descritas acima e podem restaurar as fibras musculares, tanto pela sua fuso nos locais lesionados (causando hipertrofia) quanto pela formao de novas fibras (causando hiperplasia). Uma caracterstica das fibras regeneradas a posio dos ncleos celulares, que se localizam centralmente, enquanto que nas fibras normais os ncleos localizam-se nas periferias do sinccio (figura 3).

Figura 1: Cortes transversais mostrando o desenvolvimento da camada mesodrmica. Dias aps o desenvolvimento: A. 17. B. 19. C. 20. D. 21. A camada fina do mesoderma d origem aos somitos.

105

Figura 2. Etapas da diferencia o muscular.

Figura 3. Processo de regenerao muscular

Referncias: http://connection.lww.com/Products/sadler/imagebank.asp http://departments.oxy.edu/biology/Franck/Bio130S_2002/bio130_april26_lecture_devbio.htm http://www.yorku.ca/thawke/images.html Buckingham, M; Bajard, L.; Chang, T; et al. The formation of skeletal muscle: from somite to limb. J. Anat. (2003) 202, pp 59-68. Brand-Saberi, B.; Christ, B. Genetic and epigenetic control of muscle development in vertebrates. Cell tissue res (1999) 296:199-212

106

ESTUDO DIRIGIDO 2
CLONAGEM REPRODUTIVA versus CLONAGEM TERAPUTICA
Fernando Nodari

Com base na figura acima, responda as seguintes questes: 1. Compare a formao dos zigotos nos esquemas A, B e C. 2. Levante uma hiptese que explique porque nos procedimentos para clonagem reprodutiva (B) e clonagem teraputica (C) o ncleo do ovcito removido. Justifique. 3. Diferencie a clonagem reprodutiva (B) da teraputica (C). 4. Se, no esquema B, a clula diferenciada for de um camundongo preto macho e o ovcito for de um camundongo branco fmea, qual ser o fentipo do camundongo clonado? 5. Se as clulas sangneas produzidas no esquema C forem implantadas no mesmo indivduo que doou a clula diferenciada, esse indivduo pode desenvolver uma rejeio a essas clulas sangneas? Por qu? Para pensar: Suponha que a clula diferenciada no esquema B seja uma clula da pele. Como o ncleo dessa clula, que expressa os genes especficos de uma clula da pele, foi capaz de parar de express-los e passar a expressar os genes de um zigoto?

107

ATIVIDADE 6 JOGO DA CLULA-TRONCO

Silvio Higa

Para jogar com tabuleiro: 1. Cada jogador escolhe uma pea identificada por cor diferente. 1. Inicia o jogo a pessoa que obtiver o maior nmero ao jogar um dado. 2. O primeiro jogador retira uma carta do monte e l a pergunta (inclusive as alternativas) para o jogador que se encontra sua direita. 3. Se o jogador acertar, avana seis casas, mas se errar, recua duas. O jogador pode optar por passar a vez, dando a chance para o prximo a sua direita responder. Este jogador tambm pode passar a vez. Se nenhum jogador acertar a resposta a carta utilizada volta para o final do monte. 4. O segundo jogador retira uma nova carta e reinicia a rodada. 5. Vence aquele que chegar primeiro no final do tabuleiro. Para jogar sem tabuleiro: 1. Sortear a pessoa que iniciar o jogo. 2. O primeiro jogador deve retirar uma carta do monte e ler (inclusive as alternativas) para o jogador que se encontra sua direita. 3. Se o jogador acertar, fica com a carta, se errar, a carta eliminada do jogo. 4.. O jogo termina aps o final do tempo previamente determinado pelo grupo ou quando terminarem as cartas. 6. Vence aquele que acumular maior quantidade de cartas.

Observaes: O tabuleiro encontra-se nas pginas 109 e 110 Os enunciados das cartas encontram-se nas pginas 111 a 117

108

INCIO

FIM

O BLASTOCISTO CONTM CLULAS-TRONCO PLURIPOTENTES

blastocisto
Ovo fertilizado Cerca de 4 dias em cultura

morula
Clula-tronco embrionria

Massa interna de clulas

trofoblasto

Placas na incubadora

Avance mais uma casa

Retorne uma casa

109

Avance mais uma casa

Avance mais duas casas

Retorne uma casa

Avance mais uma casa

110

Cartas do jogo Clula capaz de gerar os trs tipos de clulas germinativas (ectoderma, mesoderma e endoderma), ou seja, tem o potencial para se desenvolver nos mais de 200 tipos celulares conhecidos do corpo humano. a) Clula-tronco adulta. b) Pluripotente. c) Multipotente. Clula incapaz de formar outros tipos celulares. Exemplo: hemcia. a) Multipotente b) Oligopotente. c) Nulipotente. Clula capaz de se dividir por perodos indefinidos sem dar origem a clulas especializadas. a) pluripotente. b) oligopotente. c) nulipotente. Clula capaz de formar vrios tipos celulares. Exemplo: clula-tronco adulta. a) Totipotente. b) Pluripotente. c) Multipotente

Clula capaz de formar todos os tipos celulares Exemplos: zigoto e blastmeros. a) Totipotente. b) Pluripotente. c) Multipotente.

Clula capaz de formar poucos tipos celulares. Exemplo: clula precursora mielide. a) Multipotente b) Oligopotente. c) Nulipotente.

Clula indiferenciada encontrada em tecidos adultos que pode renovar-se a si mesma (com certas limitaes) e se diferenciar em todas as clulas especializadas do tecido do qual foi originada. a) Clula-tronco adulta. b) Clula-tronco embrionria. c) zigoto

Clula indiferenciada encontrada no embrio que tem o potencial para se diferenciar numa ampla variedade de clulas especializadas. a) Clula-tronco adulta. b) Clula-tronco embrionria. c) Zigoto.

o processo atravs do qual uma clula no especializada torna-se especializada. a) Mitose. b) Diferenciao. c) Transcrio.

a capacidade de uma clula-tronco adulta de um tecido gerar clulas especializadas de um outro tecido. Exemplo: clulastronco hematopoiticas podem gerar neurnios. a) Transcrio. b) Diferenciao. c) Plasticidade.

So obtidas de blastocisto primplantacionais, cerca de 5 dias aps a fertilizao. a) Clula-tronco embrionria ou celular pluripotente. b) Clula totipotente ou zigoto. c) Clula unipotente ou nulipotente.

Podem ser encontradas no crebro, medulas sseas, sangue perifrico, msculos esquelticos, tecido epitelial da pele e do tubo digestrio, crnea, polpa dentria, retina, fgado e pncreas. a) Clula-tronco adulta. b) Clula-tronco embrionria. c) Blastmero.

111

So obtidas de blastocisto pr-implantacionais, cerca de 5 dias aps a fertilizao.

a) Clula-tronco embrionria ou celular pluripotente. b) Clula totipotente ou zigoto. c) Clula unipotente ou a) Clula-tronco adulta. nulipotente. b) Clula-tronco embrionria c) Blastmero.

Podem ser encontradas no crebro, medulas sseas, sangue perifrico, msculos esquelticos, tecido epitelial da pele e do tubo digestrio, crnea, polpa dentria, retina, fgado e pncreas.

Existe uma clula-tronco adulta universal, ou seja, capaz de dar origem a qualquer tecido? a) Sim, existe. b) No existe. c) Os cientistas ainda no sabem responder esta pergunta. uma celula multipotente.

Clula diferenciada de um tecido assume caracterstica de clulas de outro tecido a) Diferenciao. b) Desdiferenciao c) Transdiferenciao. uma clula totipotente. a) Clula-tronco embrionria. b) Clula-tronco adulta. c) Zigoto.

uma clula pluripotente. a) Clula-tronco embrionria. b) Clula-tronco adulta. c) Zigoto. a) Clula-tronco embrionria. b) Clula-tronco adulta. c) Zigoto.

So obtidas de blastocistos primplantacionais, cerca de 5 dias aps a fertilizao. a) Linhagens de clulas-tronco embrionrias. b) Linhagens de clulas-tronco adultas. c) Linhagens de clulas multipotentes.

Existe uma clula-tronco adulta universal, ou seja, capaz de dar origem a qualquer tecido? a) Sim, existe. b) No existe c) Os cientistas ainda no sabem responder esta pergunta.

Possui enzima telomerase que possibilita a manuteno de longos telmeros, isto garante a capacidade de replicao por muitas geraes. a) Clula pluripotente. b) Clula oligopotente. c) ClulanNulipotente.

So raras e, geralmente, difceis de serem identificadas, isoladas e purificadas. a) Clulas-tronco embrionrias. b) Clulas-tronco adultas. c) Clulas nulipotentes.

J foi demonstrado que uma nica clula-tronco hematopoitica capaz de reconstituir toda a medula ssea aps a mesma ter sido destruda por radiao. A afirmativa : a) falsa. b) verdadeira, mas s foi demonstrado em ratos. c) verdadeira e j foi demonstrado em ratos e humanos.

112

Em laboratrio, as clulastronco __1__ podem multiplicar-se por muitas geraes sem que haja diferenciao; j as __2__ , sofrem diferenciao. 1 e 2 podem ser substitudos por a) adultas e embrionrias. b) embrionrias e adultas. c) adultas e pluripotentes.

J foi demonstrado que clulastronco adultas da medula ssea so capazes de dar origem a neurnios. A este fenmeno d-se o nome de a) diferenciao. b) desdiferenciao c) plasticidade.

Clulas-tronco embrionrias, quando injetadas em cobaias cujo sistema imunolgico foi suprimido, geram teratomas (mistura de diferentes tipos celulares). A afirmativa : a) verdadeira. b) falsa, pois o fenmeno foi observado com clulas tronco adultas. c) falsa, pois geram tumores, mas no geram teratomas. Clulas-tronco adultas e embrionrias so capazes de proliferar e de se especializar quando transplantadas para animais cujo sistema imunolgico foi ... a) estimulado. b) suprimido. c) mantido. Existe uma clula-tronco adulta universal, ou seja, capaz de dar origem a qualquer tecido?

J foi demonstrado que uma nica clula-tronco hematopoitica capaz de reconstituir toda a medula ssea aps a mesma ter sido destruda por radiao. A afirmativa : d) falsa. e) verdadeira, mas s foi demonstrado em ratos. As clulas-tronco no adulto so "sobras" das clulastronco embrionrias? a) Sim. b) No. c) Os cientistas ainda no sabem responder esta pergunta. Os cientistas ainda NO sabem: (1) quais so os fatores responsveis pela migrao das clulas-tronco at os tecidos danificados, (2) quais so os controles intrnsecos que fazem uma clula-tronco se diferenciar em determinado tipo celular ao invs de outro. As afirmativas 1 e 2 so: a) ambas verdadeiras. b) ambas falsas. c) verdadeira e falsa, respectivamente.

Clulas-tronco adultas e embrionrias possuem a capacidade de auto-replicao e de dar origem a clulas especializadas. A afirmativa : a) totalmente falsa. b) totalmente verdadeira. c) parcialmente verdadeira.

A plasticidade apresentada pelas clulas-tronco in vitro tambm ocorre in vivo? a) b) c)

a) Sim, existe. Sim. b) No existe c) Os cientistas ainda no sabem No. Os cientistas ainda no responder esta pergunta. sabem responder esta pergunta. Os cientistas ainda NO sabem: (1) quais so os mecanismos que NO podemos considerar como permitem as clulas-tronco potencial uso das clulas-tronco: embrionrias proliferarem in vitro sem que haja diferenciao, (2) a) transplante para restaurar qual estgio de diferenciao da leses na medula espinhal. clula-tronco o melhor para b) meio para testar novas transplante. As afirmativas 1 e 2 drogas teraputicas. c) cura para Sndrome de so: a) ambas verdadeiras. Down. b) ambas falsas. c) verdadeira e falsa, respectivamente.

113

As tcnicas de transferncia nuclear podem reprogramar uma clula de tal forma que fique idntica s clulas do receptor, evitando, assim, a rejeio. A frase est relacionada com a) clonagem reprodutiva. b) clonagem teraputica. c) transgnicos. . As clulas que constituem o sangue tm origem a partir de qual folheto embrionrio? a) Ectoderma b) Mesoderma. c) Endoderma

As clulas do sistema nervoso tm origem a partir de qual folheto embrionrio? a) Ectoderma. b) Mesoderma. c) Endoderma.

As clulas da epiderme e seus anexos (plos, glndulas, ) tem origem a partir de qual folheto embrionrio? a) b) c) . Ectoderma. Mesoderma. Endoderma

As clulas musculares tm origem a partir de qual folheto embrionrio? a) b) c) Ectoderma. Mesoderma. Endoderma.

As clulas que constituem os ossos tm origem a partir de qual folheto embrionrio? a) Ectoderma. b) Mesoderma. c) Endoderma.

As clulas que constituem o epitlio do tubo digestrio tm origem a partir de qual folheto embrionrio? a) Ectoderma. b) Mesoderma. c) Endoderma.

As clulas que constituem o pncreas e o estomago tm origem a partir de qual folheto embrionrio? a) Ectoderma. b) Mesoderma. c) Endoderma.

Estgio do desenvolvimento embrionrio que sucede a mrula. uma bola oca de clulas com uma cavidade interna, a blastocele, delimitada por uma camada celular. a) Blstula. b) Gstrula. c) Nurula.

Estgio do desenvolvimento embrionrio que sucede a blstula. Apresenta uma cavidade, o arquntero que se comunica com o exterior atravs do blastporo. a) Blstula. b) Gstrula. c) Nurula.

Estrutura macia de clulas. Fase anterior blstula. a) Mrula. b) Gstrula. c) Nurula.

114

Cada uma das divises celulares que ocorrem no ovo, nas primeiras fases do desenvolvimento embrionrio. a) b) c) Clivagem. Clasmocitose. Diapedese.

Estgio do desenvolvimento embrionrio que sucede a gstrula. a) b) c) Mrula. Blstula. Nurula.

Nome dado a qualquer um dos trs tecidos embrionrios que daro origem aos diversos tecidos e rgos do animal adulto. a) b) c) Blstula. Folheto germinativo. Ectoderma.

Molcula que contm simultaneamente grupos funcionais amina e cido carboxlico. a) aminocido b) carboidrato c) nucleotdeo.

O DNA e o RNA so formados por a) aminocidos b) carboidratos c) nucleotdeos

No seu interior existe grande quantidade de DNA. a) ribossomo b) lisossomo c) ncleo.

No seu interior atua a enzima RNA polimerase. a) ribossomo b) lisossomo c) ncleo

No seu interior ocorre a transcrio. a) ribossomo b) lisossomo c) ncleo

Organela responsvel pela sntese e transporte de protenas. a) reticulo endoplasmtico liso b) Retculo endoplasmtico rugoso. c) Complexo golgiense. Organela que pode ser encontrada aderida ao retculo endoplasmtico rugoso, dentro das mitocndrias e livre no hialoplasma. a) Lisossomo b) Peroxissomo c) Ribossomo.

Organela responsvel pela sntese protica e que possui uma subunidade grande e outra pequena. a) Mitocndria. b) Ncleo c) Ribossomo.

Organela na qual ocorre o encontro do cdon com o anticdon, possui uma subunidade grande e outra pequena. a) Mitocndria. b) Ncleo. c) Ribossomo.

Organela responsvel pela sntese de cidos graxos, esterides e fosfolipdios. a) Retculo endoplasmtico liso. b) Retculo endoplasmtico rugoso. c) Complexo golgiense.

Organela que armazena enzimas digestivas e que ir se juntar ao fagossomo ou pinossomo. b) Lisossomo c) Fagossomo d) Peroxissomo.

Organela que tem origem a partir do complexo golgiense e que est relacionada autofagia (digesto de partculas da prpria clula). a) b) c) Lisossomo. Fagossomo. Peroxissomo.

115

Originado a partir da fagocitose e que ir se junta ao lisossomo formando o vacolo digestivo. a) Lisossomo. b) Fagossomo. c) Peroxissomo.

Organela que armazena catalase, enzima responsvel pela degradao da gua oxigenada. a) Lisossomo. b) Fagossomo. c) Peroxissomo.

Organela formada por bolsas membranosas achatadas e que recebe vesculas do RER. a) b) c) . Reticulo endoplasmtico. Complexo golgiense. Centrolo

Conjunto de fibras e tbulos proticos que d sustentao e define a forma da clula. Relacionado tambm com a movimentao dos cromossomos durante a diviso celular. a) Enzimas. b) Fibras do fuso Local no interior da clula onde ocorrem diversos fenmenos como gliclise, por exemplo a) Mitocndria. b) Hialoplasma. c) Ribossomo.

Conjunto de fibras proticas que permitem a contrao muscular, o movimento amebide, o movimento dos clios e flagelos. a) b) c) Enzimas. fibras do fuso. Citoesqueleto.

Organela que origina lisossomos, vesculas de secreo o acrossomo do espermatozide. a) Reticulo endoplasmtico b) Complexo golgiense. c) Centrolo.

Organela no interior da qual ocorre a respirao celular a) Retculo endoplasmtico. b) Ribossomo. c) Mitocndria.

Organela com DNA circular a) b) c) Retculo endoplasmtico. Ribossomo. Mitocndria.

Constituda por lipdeos e protenas, semipermevel e isola a clula do ambiente externo. a) Enzimas. b) Membrana plasmtica. c) Carioteca.

Organela responsvel pela formao de clios, flagelos e das fibras do fuso. a) Centrolo. b) Ribossomo. c) Lisossomo.

No interior desta organela ocorre o ciclo de Krebs e a cadeia respiratria com produo de ATP, gs carbnico e gua. a) Retculo endoplasmtico. a) Ribossomo. b) Mitocndria. Nome dado ao cromossomo X inativado e condensado das fmeas de mamferos. a) Cromatina sexual. b) Cromtide-irm. c) Caritipo .

Cada uma das formas que um gene pode apresentar. a) Homlogo. b) Anlogo. c) Alelo.

Cada um dos dois filamentos do cromossomo duplicado que se mantm unidos pelo centrmero. a) Cromtides. b) DNA. c) Cromossomos.

116

Cada um dos longos filamentos de DNA presentes no ncleo de clulas eucariticas. a) Corpsculo de Barr. b) Genoma. c) Cromossomo. cido nuclico constitudo por desoxirribose, fosfato e bases nitrogenadas. Forma uma molcula filamentosa com cadeia dupla e arranjo helicoidal. a) DNA. b) RNA mensageiro. c) RNA transportador. Segmento de molcula de DNA que contm uma instruo gnica codificada para a sntese de uma protena. a) Cdon. b) Anticdon. c) Gene.

Um par de cromossomos geneticamente equivalentes, presente em uma clula diplide. a) Cromtides-irms. b) Cromossomos homlogos. c) Cromatina sexual.

Regio cromossmica pela qual as cromtides-irms mantm-se unidas. a) Centrolo. a) Centrmero. b) Nuclolo.

a substncia que forma os genes. a) b) c) DNA. RNA mensageiro. RNA transportador.

Constituio gentica de um indivduo que, em interao com o ambiente, determina suas caractersticas (fentipo). a) b) c) Caritipo. Fentipo. Gentipo.

Revestimento formado por molculas de glicdios frouxamente entrelaadas, situados externamente membrana plasmtica de clulas animais. a) Parede celular de celulose. b) Glicoclix. c) Desmossomos.

Caracterstica ou conjunto de caractersticas fsicas, fisiolgicas ou comportamentais de um ser vivo. a) Caritipo. b) Fentipo. c) Gentipo.

117

ATIVIDADE 6 - HEMATOPOIESE: SEGUINDO UMA VIA DE DIFERENCIAO Materiais: um tabuleiro com a indicao de trs regies: medula ssea, sangue (circulao sangunea) e outro tecido; uma chave de classificao descrevendo tipos de clulas sanguneas em diferentes nveis de diferenciao, reconstituindo vias de diferenciao durante a hematopoiese; um dado de seis faces; peas representando clulas do sangue em diferentes nveis de diferenciao. Regras da atividade: 1. Iniciar com a leitura da primeira pgina da chave de classificao. Localizar a pea que representa a clula-tronco hematopotica multipotente inicial e coloc-la no tabuleiro na regio correspondente medula ssea. 2. Lanar o dado quando solicitado e seguir as instrues da chave, indo para a pgina indicada. 3. De uma pgina para outra, ocorre um evento de diferenciao, resultando em um determinado tipo celular. Localizar esse tipo celular entre as peas disponveis e arranjar no tabuleiro no local adequado. 4. Ao final da oficina espera-se obter uma seqncia de tipos celulares representando uma via de diferenciao hematopoitica. Tempo estimado: 30 minutos Observao: a chave de classificao encontra-se a seguir.

118

Chave de classificao
Pg. 1 Clula-tronco hematopotica (CT-H) Principal caracterstica: uma clula-tronco multipotente, pois tem o potencial de gerar linhagens de clulas que daro origem aos diversos tipos de clulas do sangue, como as hemcias, os granulcitos, os linfcitos, os moncitos e os megacaricitos (de onde se originam as plaquetas). A clula-tronco hematopotica multipotente origina por mitose clulas-filhas que seguem dois destinos: umas permanecem como clulas-tronco, mantendo a populao dessas clulas na medula ssea vermelha, e outras se tornam clulas progenitoras, que tambm so multipotentes mas com potencialidade reduzida em relao clulatronco inicial. Voc uma CT-H que responde a um fator A, presente no meio extracelular. O fator A estimula a diviso mittica em clulas-tronco. Para saber o seu destino aps a diviso, lance o dado e: se sair um nmero par, v para a pgina 2; se sair um nmero mpar, v para a pgina 3. Pg. 2 2. Voc continua na medula ssea como clula-tronco, mantendo o mesmo nvel de potencialidade do estgio anterior. Lance o dado e: se sair um nmero par, continue nesta pgina e lance o dado novamente; se sair um nmero mpar, v para a pgina 3. Pg. 3 3. Voc se transformou em uma clula-tronco progenitora multipotente. Dois fatores esto presentes no meio extracelular: o fator B, que determina a reduo da atividade mittica, e o IL-3, que um fator de crescimento celular. Para saber a qual dos fatores voc capaz de responder, lance o dado e: se sair 1 ou 2, v para a pgina 2; se sair 3 ou 4, v para a pgina 4; se sair 5 ou 6, v para a pgina 5. Pg. 4 4. Voc respondeu ao fator B, reduzindo sua atividade mittica, e no respondeu ao fator IL-3. Tornou-se uma clulatronco linfide multipotente. Dois fatores E e F esto presentes no meio extracelular e atuam promovendo vias de determinao distintas. Uma clula determinada torna-se mais comprometida com um destino de diferenciao, reduzindo sua potencialidade. Para saber a qual dos fatores de determinao voc capaz de responder, lance o dado e: se sair 1 ou 2, voc no responde aos estmulos v para a pgina 2; se sair 3 ou 4, v para a pgina 6; se sair 5 ou 6, v para a pgina 7. Pg. 5 5. Voc respondeu ao fator B, reduzindo sua atividade mittica, e tambm respondeu ao fator IL-3, tornando-se uma clula-tronco mielide multipotente. Dois fatores G e H esto presentes no meio extracelular e atuam promovendo vias de determinao distintas. Uma clula determinada torna-se mais comprometida com um destino de diferenciao, reduzindo sua potencialidade. Para saber a qual dos fatores de determinao voc capaz de responder, lance o dado e: se sair 1 ou 2, voc no responde aos estmulos v para a pgina 2; se sair 3 ou 4, v para a pgina 12; se sair 5 ou 6, v para a pgina 13. Pg. 6 6. Voc respondeu ao fator E, que um estmulo de determinao e tambm estimula sua ida ao timo. Voc se tornou, ento, uma clula progenitora de linfcito T e migrou para o timo. Para saber o que vai acontecer com voc chegando ao timo, v para a pgina 10. Pg. 7 7. Voc respondeu ao fator F, que um estmulo de determinao. Voc se tornou, ento, uma clula progenitora de linfcito B, que permanece na medula ssea. Para saber o que vai acontecer com voc, v para a pgina 8. Pg. 8 8. Existem fatores de diferenciao presentes na medula ssea e voc respondeu a eles, tornando-se a clula precursora de linfcitos B ou linfoblasto-B. Em seguida, voc recebeu estmulos para se dividir e estmulos para diferenciao de todas as clulas-filhas. Para saber o que vai acontecer com voc e com suas clulas-filhas, v para a pgina 9. Pg. 9 9. Voc respondeu a fatores de diferenciao, sofreu um processo de maturao e se tornou um linfcito B. Voc no responde mais aos estmulos de diviso e no se multiplica mais. Voc liberado para a corrente sangnea.

119

Para saber qual a sua morfologia e funo quando vai para o sangue, v para a pgina 25. Pg. 10 10. No timo, voc entrou em contato com fatores de diferenciao. Voc respondeu presena deles, tornando-se a clula precursora de linfcitos T ou linfoblasto-T. O timo tambm libera um hormnio chamado timosina. Para saber se o que vai acontecer com voc aps a liberao de timosina, v para a pgina 11. Pg. 11 11. Voc apresentava receptores em sua membrana plasmtica que reconhecem o hormnio timosina e, como resposta ligao entre os receptores e as molculas de timosina, voc sofreu diferenciao tornando-se um linfcito T. Para conhecer a sua morfologia e funo, v para a pgina 24. Pg. 12 12. Voc respondeu ao fator G, que um estmulo de determinao. Voc se tornou, ento, uma clula progenitora granuloctica/monoctica da medula ssea. Dois fatores I e J esto presentes no meio extracelular e atuam promovendo vias de determinao distintas. Uma clula determinada torna-se mais comprometida com um destino de diferenciao, reduzindo sua potencialidade. Para saber o que vai acontecer com voc, lance o dado e: se sair 1 ou 2, voc no responde aos estmulos v para a pgina 2; se sair 3 ou 4, v para a pgina 14; se sair 5 ou 6, v para a pgina 15. Pg. 13 13. Voc respondeu ao fator H, que um estmulo de determinao. Voc se tornou, ento, uma clula progenitora megacarioctica/eritroctica da medula ssea. Dois hormnios presentes no sangue atuam promovendo vias de determinao distintas na medula ssea: so os hormnios trombopoetina e eritropoetina. Uma clula determinada torna-se mais comprometida com um destino de diferenciao, reduzindo sua potencialidade. Para saber o que vai acontecer com voc, lance o dado e: se sair 1 ou 2, voc no responde aos hormnios v para a pgina 2; se sair 3 ou 4, v para a pgina 20; se sair 5 ou 6, v para a pgina 21. Pg. 14 14. Voc respondeu ao fator I e se tornou uma clula determinada: o mieloblasto granuloctico. Em seguida, voc recebeu estmulos para o incio da diferenciao. Para saber qual a via de diferenciao que vai seguir, lance o dado e: se sair 1, 2 ou 3, v para a pgina 17; se sair 4 ou 5, v para a pgina 18; se sair 6, v para a pgina 19. Pg. 15 15. Voc respondeu ao fator J e se tornou uma clula determinada: o promoncito. Em seguida, voc recebeu estmulos para se dividir e estmulos para diferenciao de todas as clulas-filhas. Para saber o que vai acontecer nessa diferenciao, v para a pgina 16. Pg. 16 16. Aps duas divises mitticas, voc aumentou de volume e se tornou uma clula diferenciada rica em lisossomos. Voc agora recebe o nome de moncito. Para saber como sua morfologia e funo, v para a pgina 29. Pg. 17 17. Voc se tornou um mielcito neutrfilo, uma clula que acumula em seu citoplasma grande quantidade de grnulos especficos e lisossomos. Voc no se divide mais. O processo de diferenciao celular continua. Voc finalmente liberado para o sangue. Para saber o resultado desse processo, v para a pgina 31. Pg. 18 18. Voc se tornou um mielcito eosinfilo, uma clula que acumula em seu citoplasma grande quantidade de grnulos acidfilos (que se coram quando a clula submetida a tratamento com corantes cidos). Voc no se divide mais. O processo de diferenciao celular continua. Voc finalmente liberado para o sangue. Para saber o resultado desse processo, v para a pgina 32. Pg. 19 19. Voc se tornou um mielcito basfilo, uma clula que acumula em seu citoplasma grande quantidade de grnulos de histamina. Voc no se divide mais. O processo de diferenciao celular continua. Voc finalmente liberado para o sangue. Para saber o resultado desse processo, v para a pgina 33. Pg. 20

120

20. A trombopoetina sintetizada pelo fgado, liberada na corrente sangnea e ao passar pela medula ssea difunde para o tecido hematopotico. Voc respondeu presena do hormnio trombopoetina, pois apresentava os receptores para esse hormnio na membrana plasmtica. Como resposta a essa ligao, voc se tornou uma clula precursora de megacaricito (ou megacarioblasto). Voc vai entrar em uma via de diferenciao. Para saber o que vai acontecer, v para a pgina 22. Pg. 21 21. A eritropoetina sintetizada pelos rins, liberada na corrente sangnea e ao passar pela medula ssea difunde para o tecido hematopotico. Voc respondeu presena do hormnio eritropoetina, pois apresentava os receptores para esse hormnio na membrana plasmtica. Como resposta a essa ligao, voc se tornou uma clula precursora de eritrcito ou pr-eritroblasto. Voc no se divide mais, a cromatina apresenta-se condensada e no citoplasma tem incio a sntese da protena hemoglobina. Voc vai entrar em uma via de diferenciao. Para saber o que vai acontecer, v para a pgina 23. Pg. 22 22. Voc se tornou um megacaricito: uma clula grande, que apresenta granulaes no citoplasma. Voc est sintetizando protenas que vo futuramente atuar como fatores de coagulao sangnea. As granulaes do citoplasma comeam a se desprender, gerando fragmentos de clula que so liberados no sangue. Para saber o que acontece a esses fragmentos, v para a pgina 35. Pg. 23 23. Voc se tornou um eritroblasto. Seu tamanho est reduzido em relao ao pr-eritroblasto e voc est produzindo hemoglobina intensamente no citoplasma. Em cerca de 24 horas, voc sofre transformaes intensas e passa a ser chamado de reticulcito. Nesse estgio, que dura cerca de 3 dias, o ncleo deslocado para a periferia da clula at ser eliminado. Para saber o resultado dessas transformaes, v para a pgina 34. Pg. 24 Linfcitos T Do timo, os linfcitos T so liberados para a circulao sangnea e podem migrar para diversos tecidos do corpo quando ocorre uma infeco. Aps o combate infeco, eles podem voltar ao sangue, circulando continuamente. Os linfcitos T no sintetizam anticorpos, mas apresentam receptores na membrana plasmtica que detectam antgenos especficos. Assim, um determinado linfcito T possui apenas um tipo de receptor, que reconhece um nico tipo de antgeno. Os linfcitos T podem ser classificados em subtipos de acordo com sua ao aps o reconhecimento do antgeno especfico: existem os citotxicos, capazes de destruir as clulas que apresentam o antgeno; os auxiliares, que ativam linfcitos B; e os supressores, que inibem a liberao de anticorpos pelos linfcitos B quando necessrio. Pg. 25 Linfcitos B Voc passou para a circulao sangnea no estado maduro, ou seja, com anticorpos j expostos na membrana plasmtica. Do sangue, voc tambm pode ir para o sistema circulatrio linftico, passando pela linfa, por linfonodos e pelo bao. Um linfcito B produz apenas um tipo especfico de anticorpo. No sangue, molculas de um antgeno so reconhecidas pelos anticorpos que esto na sua membrana plasmtica, resultando em uma resposta. Para descobrir que resposta essa, v para a pgina 26. Pg. 26 Voc reconheceu a presena de seu antgeno especfico no organismo. Com a ligao antgeno anticorpo, voc aumenta de volume e divide-se por mitose, por diversas vezes. Ao final do processo, formam-se numerosas clulas idnticas. Para saber o que acontece em seguida, lance o dado e: se sair um nmero par, v para a pgina 27; se sair um nmero mpar, v para a pgina 28. Pg. 27 PLASMCITO Ao final das sucessivas divises, voc faz parte de um grupo de linfcitos B que se transformam em plasmcitos. O plasmcito uma clula que produz anticorpos intensamente, liberando-os na corrente sangnea. Esses anticorpos reconhecem os antgenos especficos e chamam a ateno de macrfagos, neutrfilos e eosinfilos, que vo para o local da infeco e eliminam as bactrias que possuem o tal antgeno. Pg. 28 Ao final das sucessivas divises, voc faz parte de um grupo de linfcitos B que se tornam clulas B de memria. Voc no participar do combate infeco bacteriana que est ocorrendo no organismo neste momento. Voc ter vida longa no organismo, circulando pelo sangue e pela linfa, e ficar de prontido para sintetizar rapidamente seus anticorpos especficos se o organismo entrar novamente em contato com as bactrias que possuem o antgeno. Pg. 29 MONCITO

121

Os moncitos tm o ncleo oval ou em forma de ferradura. O citoplasma rico em lisossomos, que aparecem em preparaes como numerosos grnulos. As mitocndrias tambm so numerosas e o complexo golgiense, muito desenvolvido, j que ali so formados os lisossomos. Voc um moncito que acabou de ser liberado da medula ssea para o sangue. Para saber o seu destino, lance o dado e: se sair um nmero par, v para pgina 30; se sair um nmero mpar, significa que voc circular pelo sangue por 2 horas. Lance novamente o dado. Voc pode circular pelo sangue por at 8 horas. Obs.: se voc permanecer circulando no sangue por mais de 8 horas, v direto para a pg. 30. Pg. 30 MACRFAGO Os moncitos so clulas precursoras de macrfagos. Quando os moncitos saem dos vasos sanguneos e se dirigem aos tecidos, completam sua maturao, tornando-se macrfagos. Nessa maturao, a clula aumenta de volume e torna-se ainda mais rica em lisossomos. Os macrfagos apresentam ncleo grande e em forma de ferradura. Eles participam do mecanismo de defesa do organismo por fagocitose. Podem ficar entre as clulas de um tecido durante meses, e so ativados na presena de clulas ou partculas estranhas ao organismo. Nessas situaes, emitem pseudpodes e fagocitam as partculas estranhas, ao mesmo tempo em que liberam substncias que desencadeiam uma resposta inflamatria. Com a resposta inflamatria, mais macrfagos so atrados para o local infectado. Pg. 31 NEUTRFILO Os neutrfilos so clulas maduras (diferenciadas) tambm conhecidas como leuccitos polimorfonucleares, porque a forma do ncleo pode variar, apresentando de dois a cinco lbulos. No citoplasma, os neutrfilos apresentam grande quantidade de lisossomos e de grnulos especficos. Os neutrfilos fazem parte do sistema de defesa do organismo contra invaso de microrganismos. Enquanto esto circulando no sangue, so esfricos, mas em contato com um substrato slido emitem pseudpodes e podem fagocitar os invasores. Aps a fagocitose, ocorre a digesto dos invasores pelas enzimas lisossmicas. No entanto, em uma infeco nem todas as bactrias so mortas e algumas podem atacar os neutrfilos, escapando da ao fagocitria dos neutrfilos. Nessas situaes, forma-se um lquido amarelado que contm bactrias, neutrfilos mortos e lquido extracelular: o pus. Pg. 32 EOSINFILOS Os eosinfilos so clulas maduras (diferenciadas) que constituem cerca de 5% do total de leuccitos. Possuem ncleo com dois lbulos e citoplasma cheio de grnulos ovais acidfilos, alm de grande quantidade de lisossomos. Os eosinfilos fagocitam e digerem complexos de antgenos-anticorpos, principalmente aqueles formados em processos de alergia. O nmero de eosinfilos no sangue aumenta durante reaes alrgicas e em infeces por vermes parasitas, como o esquistossomo. Pg. 33 BASFILOS Os basfilos so clulas maduras (diferenciadas) que se caracterizam por um ncleo volumoso e de forma irregular. O citoplasma rico em grnulos maiores do que os dos outros granulcitos. Esses grnulos contm heparina e histamina, uma substncia que atrai eosinfilos e neutrfilos. Quando ocorre uma infeco, a presena de determinados anticorpos na circulao sangnea faz com que os basfilos liberem o contedo dos grnulos. A conseqncia a migrao de eosinfilos e neutrfilos para o local, o que intensifica o combate aos causadores da infeco. Os basfilos constituem menos de 1% dos leuccitos do sangue. Pg. 34 HEMCIAS ou ERITRCITOS ou GLBULOS VERMELHOS Assim que os reticulcitos so liberados na corrente sangnea, passam a ser chamados de eritrcitos, ou glbulos vermelhos. Os eritrcitos so clulas anucleadas com formato de disco bicncavo, com cerca de 7m de dimetro. O citoplasma acumula molculas de hemoglobina e possui pequena quantidade de ribossomos e mitocndrias. Sua funo o transporte de oxignio e, em menor proporo, de gs carbnico. Pg. 35 PLAQUETAS As plaquetas correspondem a fragmentos de citoplasma do megacaricito. Elas so fundamentais para o processo de coagulao sangnea. A coagulao sangunea bloqueia leses em vasos, impedindo a ocorrncia de hemorragias. Sob estmulo das clulas lesadas, as plaquetas se agregam auxiliando na formao do cogulo. Alm disso, as plaquetas liberam fatores de coagulao que participam de uma cascata de reaes junto com outros fatores presentes no plasma sanguneo. Ao final desse processo, forma-se a protena fibrina. As molculas de fibrina se agrupam formando uma rede que aprisiona hemcias, glbulos brancos e plaquetas, formando assim o cogulo. O cogulo pra o fluxo de sangue na regio lesada do vaso.

122

ATIVIDADE 8 - REGRAS PARA O DEBATE A polmica sobre a utilizao de clulas-tronco embrionrias em terapia humana 8 grupos de 7 a 8 membros cada Haver um mediador Cada grupo far o papel de um dos seguintes membros da sociedade: 1. cientista 2. jurista 3. doente passvel de ser tratado com clulas-tronco embrionrias 4. jornalista 5. religioso 6. poltico 7. dono de uma clinica de reproduo assistida 8. mulher que vai se submeter a reproduo assistida Cada grupo prepara 7 perguntas: uma para um dos demais grupos participantes. Por exemplo, o grupo 1 (o do cientista) preparar perguntas para os grupos 2, 3, 4, 5, 6, 7 e 8. Cada grupo deve eleger um relator, que se sentar mesa para participar do debate. Os demais membros podero dar assessoria, se necessrio. Os grupos tero tempo livre para preparar suas participaes O debate ocorrer como se segue: o Inicialmente, cada relator ter no mximo 3 minutos para apresentar o seu posicionamento. o Na primeira rodada de perguntas, a ordem de formulao das perguntas ser sorteada, assim como tambm ser sorteado quem dever responder. Por exemplo, o grupo 1 (o do cientista) sorteou o nmero 6 e, assim sendo, far uma pergunta para o relator do grupo 6 (que representa o poltico). o Na segunda rodada de perguntas, a ordem de fazer perguntas ser sorteada, mas o participante poder escolher quem ir responder. Por exemplo, sorteado o nmero 2 o jurista far uma pergunta para quem lhe aprouver. o Pequeno intervalo o Durante o intervalo, um grupo de jurados far uma seleo de perguntas interessantes, feitas por todos os grupos e que ainda no foram usadas. O mediador far as perguntas para os participantes do debate.

Terminado o debate, a classe ser dividida em grupos e participar de uma atividade de discusso das seguintes situaes: 1. Tenho um filho com morte cerebral constatada. Devo doar seus rgos para transplante? 2. Tenho um filho de 9 anos gerado por FIV. Tenho embries excedentes congelados. No entanto,
perdi o tero recentemente. Meu filho desenvolve quadro de doena grave e incurvel, sem doadores compatveis para transplante. (2a) lcito usar esses embries para obter clulas-tronco e realizar uma terapia baseada em clulas? 3. Tenho um filho de nove anos com doena grave e incurvel, sem doadores compatveis para transplante. (a) lcito fazer FIV, selecionar um embrio compatvel com o filho atual, implantar e gerar uma criana para ser doadora do irmo mais velho? 4. Fiz fertilizao in vitro e atualmente estou grvida de sxtuplos. Os mdicos afirmam que nessa situao corro risco de vida, assim como os embries. lcito fazer a reduo, ou seja, eliminar alguns dos embries?Tenho um filho de nove anos com doena grave e incurvel, sem doadores compatveis para transplante. (a) lcito realizar clonagem teraputica, obter um blastocisto com clulas geneticamente idnticas s do meu filho para realizar uma terapia baseada em clulas tronco? (b) permitido pela lei brasileira?

123

ATIVIDADE 9 - PALAVRAS CRUZADAS CLULAS-TRONCO

Silvio Higa

124

HORIZONTAIS 1h O sistema nervoso tem origem a partir deste folheto embrionrio. 2h - Sinnimo de plasticidade. 3h Sinnimo de diviso celular. 4h Vida em ingls. 5h - ___ trinca de bases nitrogenadas codifica um aminocido. 6h Composto por clulas-tronco. 7h Camada de tecido do globo ocular responsvel pela sustentao. 8h No estmago cido e no duodeno bsico. 9h Multiplica uma amostra de DNA milhares de vezes em poucos minutos. 10h - Neste local produzida a maior parte do oxignio que respiramos. 11h Quantas bases nitrogenadas compem um cdon? 12h Sinnimo de ato sexual. 13h Posio ocupada por um gene no cromossomo. 14h Sintetizado nas cristas mitocondriais. 15h Camada mais interna da pele, firmemente unida epiderme. 16h Elemento qumico relacionado a um tipo de transporte ativo. 17h Iniciais da organela que sintetiza e transporta protenas. 18h As quatro bases nitrogenadas do DNA. 19h Faz parte da pele e constituda por densa rede de tecido conjuntivo. 20h Cada uma das formas que um gene pode apresentar. 21h - As quatro bases nitrogenadas do RNA. 22h Gera duas clulas-filhas com o mesmo nmero de cromossomos da clula-me. 23h Clula capaz de formar poucos tipos celulares. 24h Produto da transcrio. 25h Resultante das primeiras clivagens dos blastmeros. 26h - a capacidade de uma cula-tronco adulta de um tecido gerar clulas especializadas de um outro tecido. 27h Fase do desenvolvimento embrionrio no qual j possvel observar notocorda e tubo neural. 28h Nos animais forma gametas e nos vegetais forma esporos. 29h - Elemento qumico relacionado a um tipo de transporte ativo. 30h Organela na qual ocorre a sntese protica. 31h Tecido atualmente muito utilizado como fonte de clulas-tronco adultas. VERTICAIS 1v - Clula capaz de formar todos os tipos celulares. Exemplos: zigoto e blastmeros. 2v Organela que tem origem a partir do complexo golgiense. 3v Possui sistema nervoso difuso. 4v Vertebrado homeotrmico e com diafragma. 5v Fase anterior blstula. 6v - Clula incapaz de formar outros tipos celulares. Exemplo: hemcia. 7v Um dos filamentos que compe o miclio. 8v - o processo atravs do qual uma clula no especializada torna-se especializada. 9v - Tm grande importncia econmica como alimento e para a produo de fertilizantes, fibras, gar, potassa e iodo. 10v Clula totipotente. 11v So clulas pluripotentes. 12v Flor de monocotiledneas. 13v Marsupial. 14v A clula-tronco embrionria uma clula ... 15v Macromolcula compota por nucleotdeos. 16v A joaninha um tipo de ... 17v Elemento qumico presente tanto no nucleotdeo como no aminocido. 18v - A clula-tronco adulta uma clula ... 19v Produzido na medula ssea. 20v Vertebrado com hemcias anucleadas. 21v Principal excreta nitrogenado dos mamferos. 22v Fatores internos e externos que controlam modificaes na estrutura e funo da clula. 23v Deixa o ncleo atravs dos poros da carioteca. 24v - Tcnica de transferncia nuclear que reprograma clulas para fiquem idnticas s do receptor, evitando, assim, a rejeio. 25v Clula-tronco em ingls.

Soluo pgina 128

125

ANEXOS
Respostas do Estudo dirigido 2 Clonagem reprodutiva versus clonagem teraputica 1. o esquema A o zigoto proveniente de uma fecundao, ou seja, ele formado por dois ncleos haplides (o ncleo do ovcito e do espermatozide) que se fundiram e formaram um ncleo diplide. J os zigotos dos esquemas B e C so provenientes de transferncia nuclear, ou seja, eles recebem apenas um ncleo, que, por ser de uma clula diferenciada, j diplide. 2. O ncleo do ovcito removido nos procedimentos de clonagem (B e C) porque, neste mesmo ovcito, ser implantado um ncleo diplide. Se o ncleo do ovcito no fosse removido, formaramos um embrio triplide, o que seria invivel. 3. A diferena da clonagem reprodutiva (B) e da teraputica (C) est em o que feito com o blastocisto. Na clonagem reprodutiva (B), ele implantado num tero maduro para dar origem a um indivduo idntico ao doador da clula diferenciada. Na clonagem teraputica (C), as clulas-tronco embrionrias do blastocisto so cultivadas em laboratrio para dar origem a algum tipo celular ou tecido ou rgo especfico. 4. Como a clula diferenciada doa o ncleo, ou seja, doa o DNA, o fentipo do camundongo clonado deve ser o mesmo do camundongo doador do ncleo. Com isso, o camundongo clonado seria um macho preto. 5. Se as clulas sangneas produzidas no esquema C forem implantadas no mesmo indivduo que doou a clula diferenciada, esse indivduo no desenvolver uma rejeio a essas clulas sangneas. Porque rejeio ocorre quando o organismo de uma pessoa identifica um rgo ou um tecido como um invasor e passa a ataclo; como as clulas sangneas produzidas por clonagem teraputica tm o mesmo genoma das clulas da pessoa que vai receb-las, as novas clulas sangneas seriam reconhecidas como se fossem da prpria pessoa e no como invasoras. Para pensar: resposta no texto Reprogramao Celular.

CARTAS E GABARITO DA ATIVIDADE 1 - DIFERENCIAO DA HEMCIA CARTAS DE SINAIS: I. Eritroblasto basfilo 1. Diminuir o volume celular e perder duas mitocndrias. 2. Ativar a produo de receptores de membrana para transferrina, que uma protena transportadora de ferro. Aps se combinarem, o complexo receptor-transferrina penetra no citoplasma por endocitose. 3. Perder o ncleo 4. Manter a clula inalterada 5. Expressar os genes responsveis pela sntese de hemoglobina. 6. Desativar todos os processos de transcrio da clula 7. Perder todos os polirribossomos II. Pr-reticulcito 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Diminuir o volume celular e perder trs mitocndrias. Condensar a cromatina e perder alguns polirribossomos. Perder o ncleo Formar uma projeo celular onde se situa o ncleo. Desativar todos os processos de transcrio da clula Expressar o gene que produz colgeno tipo I Perder todos os polirribossomos

126

III. Reticulcito 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. IV. Hemcia 1. Fragmentar a clula, produzindo as plaquetas 2. Sintetizar hemoglobina para completar a maturao do eritrcito. 3. Manter a clula inalterada 4. Manter a configurao do citoesqueleto como na etapa anterior 5. Configurar uma clula bicncava. 6. Conferir uma nova organizao do citoesqueleto, tornando-o contrtil; com isso, a clula pode atravessar capilares sinusides, penetrando, assim, na corrente sangnea. 7. Produzir um novo ncleo Manter a clula inalterada Sintetizar hemoglobina. Expressar o gene que produz colgeno tipo I O ncleo deve ser expelido com uma poro delgada de citoplasma ao seu redor. Diminuir o volume celular e perder duas mitocndrias Desenvolver trs projees citoplasmticas. Perder uma mitocndria

Gabarito (I) 1-2-5, (II) 1-2-4, (III) 2-4-6 e (IV) 2-5-6.

CARTAS E GABARITO DA ATIVIDADES 2 - DIFERENCIAO NO PROTOZORIO NAEGLERIA GRUBERI Etapa A 1. Diminuir o volume celular e nuclear 2. No ncleo, iniciar sntese de RNA-mensageiro para tubulina. O RNam vai para o citoplasma. 3. Desativar todos os processos de transcrio da clula 4. Manter a forma amebide. 5. Inibir os genes responsveis pela sntese de tubulinas 6. Expressar o nico gene responsvel pela sntese do flagelo 7. No citoplasma, organizam-se polirribossomos e inicia-se sntese de tubulina. 8. Condensar a cromatina Gabarito: 2 4 7 Etapa B 1. Acumular tubulina em regio especfica do citoplasma. 2. Condensar a cromatina e perder alguns ribossomos 3. Perder o ncleo 4. Estimular a diviso celular 5. Expressar os genes responsveis pela sntese de tubulinas. 6. Manter forma amebide, mas reduzir emisso de pseudpodes. 7. Cessar sntese de tubulinas no citoplasma 8. Inibir atividade dos genes responsveis pela sntese de tubulinas Gabarito: 1 5 - 6

Etapa C 1. Manter a clula inalterada 2. Formar dois corpsculos basais. 3. Estimular a diviso celular 4. Tomar forma arredondada. 5. Perder todos os ribossomos

127

6. Fagocitar bactrias 7. Iniciar formao do flagelo, a partir da organizao de tubulinas e outras protenas em microtbulos. 8. Reduzir o nmero de mitocndrias Gabarito: 2 4 7 Etapa D 1. Tomar forma alongada. 2. Estimular a diviso celular 3. Manter a clula inalterada 4. Emitir pseudpodes 5. Organizar tubulinas e outras protenas para alongamento dos flagelos. 6. Degradar mitocndrias 7. Perder o ncleo 8. Posio fixa do ncleo na base da clula. Gabarito: 1 5 8

128

Soluo das palavras cruzadas

129

BIBLIOGRAFIA sobre cncer e clulas-tronco

Bapat, S. A. 2006. Evolution of cancer stem cells. Seminars in Cancer Biology Bishop. J. M. 1997. Cancer: what should be done? Science 278 (5340): 995. Bissel, M. J. & M. A. LaBarge. 2005. Are tumor stem cells also regulated by the microenvironment? Cancer Cell 7 (1): 17-23. Clarke, M. F. & M. W. Becker. 2006. O lado maligno das clulas-tronco. Scientific American Brasil 51: 38-46. Clarke, M. F. & M. Fuller. 2006. Stem cells and cancer: two faces of Eve. Cell 124: 1111-1115. Daz, B. & E. Moreno. 2005. Competitive nature of cells. Exper. Cell Res. 306: 317-322. Fearon, E. R. 1997. Human cancer syndromes: clues to the origin and nature of cancer. Science, 278: 1043-1050. Gibbs, W. W. 2003. Desvendando as razes do cncer. Scientific American Brasil 15: 38-47. Gibbs, W. W. 2007. As razes do mal. Cincia e Sade 3:26-34. Gisselsson, D. Cancer cells: Differentiation block or developmental back-tracking? 2006. Seminars in cancer biology. Houghton, J. M., Morozov, A., Smirnova, I. & Wangh, T. C. 2006. Stem cells and cancer. Seminars in cancer Biology. Huff, C. A., Matsui, W. H., Smith, B. Douglas & Jones, R. J. 2006. Strategies to eliminate cancer stem cells: clinical implications. Eur. J. of Cancer 42: 12193-1297. Keith, W. N. 2006. Cancer stem cells: opportunities for novel diagnostics and drug discovery. Eur. J. of Cancer 42: 1195-1196. Krtolica, A. 2005. Stem cell: balancing aging and cancer. Int. J. Biochem. Cell Biol. 37: 935-941. Look, A. T. 1997. Oncogenic transcription factors in the human acute leukemias. Science 278 (5340): 1059-1064. Nguyen, D. X. & Joan Massagu. 2007. Genetic determinants of cancer metastasis. Nature Review/Genetics 8: 341-352. Ponder, B. 1997. Genetic testing for cancer risk. Science 278 (5340): 1050-1054. Rossi, D. J. & I. L. Weissman. 2006. Cell 125: 229-231. Stewart, R., Stojkovic & M. Lako. 2006. Mechanisms of sef-renewal in human embryonic stem cells. Eur. J. Cancer 42: 1257-1272. Vaidya, J. S. 2006. An alternative model of cancer cell growth and metastasis. Int. J. of Surgery: 13. Wang, J. C. Y. & J. E. Dick. 2005. Cancer stem cells: lessons from leukemia. Trends in Cell Biology 15 (9): 494-501. Weinberg, R. A. 1996. How cancer arises. Scientific American 275 (3): 32-41.

130