METODOS DE DIAGNOSTICO DE LAS AFECCIONES VIRALES

Prof. Aurico Sousa Fonseca Ctedra de Microbiologa e Inmunologa FCV-UCV

CUANDO?
Pronostico y tratamiento en clnica Certificacin de zona libre Aplicacin de tecnologa:
Inseminacin Artificial Transplante de embriones Transplantes de tejidos, etc.

Programas de erradicacin Control de zoonosis

ESPCIMEN
Tejido, liquido o secrecin de inters Utilizar: Hisopados, jeringas o envases estriles Sangre para serologa En ocasiones, medios de transporte especial

ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE
Envo inmediato Protegido Refrigerado (4C) Internacional: Hielo seco y bien protegido Historia clnica completa

PROCESAMIENTO INICIAL

LOS MTODOS DEBEN SER:

Rpidos Simples Sensibles Especficos Bajos costo

MTODOS DE DIAGNSTICOS

DETECCIN DEL VIRUS, SUS CONSTITUYENTES O SU CIDO NUCLEICO

AISLAMIENTO
Medios de cultivo:
Huevos embrionados Animales de laboratorio Cultivo de tejidos

Deteccin por Microscopa Electrnica y/o otras Pruebas serolgicas

Huevos embrionados

Cultivos celulares

Efecto citoptico

Deteccin por IF y otras pruebas

Identificacin por pruebas serolgicas con antisueros especficos

Enfermedad Parlisis Encefalitis Muerte Otros efectos Animales de laboratorio

HUEVOS EMBRIONADOS
Embriones 5-14 das Muy utilizados en virus aviares Varias vas de inoculacin

Cavidad Amnitica
Cscara Albumina

HUEVOS EMBRIONADOS
Membrana de la Cscara
Saco de aireo
Inoculacin Amnitica

Inoculacin corioalantoidea

Inoculacin Saco Vitelino

Cavidad Alantoidea Saco Vitelino

Inoculacin Alantoidea

Membrana Corioalantoidea

Animales
Poco tiles en diagnostico Manejo costoso y engorroso Se utilizan en investigacin, produccin de antisueros y anticuerpos monoclonales

Cultivo de Tejidos
Ideales para:
Aislamiento viral Desarrollo de vacunas Estudio de replicacin y morfologa

Se emplean desde 1949

Cultivo de Tejidos

EVIDENCIA DEL CRECIMIENTO VIRAL

Deteccin del Virus

Microscopia Electrnica Tcnicas Inmunolgicas Tcnicas de deteccin del genoma viral

Microscopia Electrnica
Mtodo obvio de identificacin Reconoce morfologa tpica Baja sensibilidad
107 viriones por ml

Solo laboratorios de referencias y de investigacin.

Deteccin del Genoma

Hibridacin
Se basa en el proceso natural de apareamiento de bases complementarias Se forman estructuras de doble hebra de gran estabilidad que pueden ser:
Hbridos homodplex
ADN-ADN o ARN-ARN

Hbridos heterodplex
ADN-ARN

Amplificacin del Genoma Viral

Mtodo: Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) Objetivo: Amplificar un gen o fragmentos de ADN presente en una muestra sin purificacin previa del espcimen. Permite:
Detectar virus donde antes era imposible Altamente sensible y especifico. Utiliza cantidades mnimas de muestras Requiere porciones mnimas de genoma (< 100pb)

PCR

Serologa Viral
Deteccin del Virus a travs de la Respuesta Inmune
Determinacin indirecta de infeccin viral por determinacin de presencia de anticuerpos

Tcnicas empleadas:
Elisa Western inmunoblot Neutralizacin viral Hemaglutinacin e inhibicin de la hemaglutinacin Inmunoflorescencia