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SEXAJE Y CONTROL SANITARIO DE AVES

PROYECTO Caracterizacin y Prevencin de la Enfermedad del Pico y las Plumas en Espaa


CAMBRICO BIOTECH, S.L. Inscrita en el Registro Mercantil de Sevilla , folio 10 del Tomo 5.365 de la Seccin General, Hoja SE-89.402 , inscripcin 1. CIF . B-91934554 http://cambri.co/investigacion.html

DETECCION DEL VIRUS DE LA ENFERMEDAD DEL PICO Y LAS PLUMAS (PBFD)


En CAMBRICO BIOTECH utilizamos la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) para diagnosticar la Enfermedad del Pico y las Plumas. La PCR puede amplificar cantidades extremadamente pequeas de ADN y hacerlas detectables. Numerosos artculos cientficos describen a la PCR como la tcnica ms sensible y especfica para el diagnstico de enfermedades. Despus de comprobar que las pruebas de PCR para la deteccin del virus PBFD descritas en la bibliografa son poco sensibles y especficas, CAMBRICO ha diseado un protocolo exclusivo basndose en la informacin depositada en las bases de datos del National Center for Biotechnology Information (NCBI). Este protocolo ha sido validado siguiendo una serie de procedimientos complejos y rigurosos, y ha demostrado ser ms sensible que las tcnicas clsicas. A continuacin, se presentan los resultados obtenidos al analizar el virus de PBFD en tres aves diferentes mediante la tcnica descrita en la bibliografa y la tcnica desarrollada por CAMBRICO. La muestra 1 proviene de un Agarponis personatus que mostraba prdidas y malformacin de plumas, el anlisis se realiz hace 70 das y el ave sigue an vivo. La muestra 2 proviene de un Agapornis roseicollis, se analiz hace 47 das y carecemos de informacin sobre el estado actual del ave. La muestra 3 proviene de un Agapornis roseicollis. Esta ave muri a los 60 das de haber sido realizado el anlisis con signos claros descritos para la enfermedad PBFD. Como se refleja en la figura 1, la deteccin del ADN viral mediante la tcnica diseada por CAMBRICO es ms sensible que la tcnica clsica. En las muestras 1 y 2 las dos tcnicas son vlidas para detectar el ADN viral, sin embargo en la muestra 3 slo la tcnica diseada por CAMBRICO detecta la presencia viral. Cmo podemos saber que efectivamente estamos detectando el virus de PBFD y no es un falso positivo? Para confirmar estos resultados se procedi a secuenciar los fragmentos de ADN obtenidos y los resultados se compararon con la base de datos del NCBI. Todos los fragmentos presentaron una alta homologa con las secuencias del virus causante de PBFD y no mostraron homologa con secuencias de organismos diferentes a este virus. Esto demuestra, sin lugar a dudas, que los resultados obtenidos por la tcnica utilizada por CAMBRICO se debe a la deteccin del virus de PBFD y no a falsos positivos. Asimismo, con las secuencias obtenidas se ha generado un rbol filogentico que se muestra en la Figura 2. Para realizar este estudio, se han incluido secuencias de aislados del virus de PBFD que presentan una alta homologa (parecido gentico) con los aislados obtenidos en CAMBRICO; como el aislado IT40 de Psittacus erithacus procedente de Italia (GenBanK: JF501531), o el aislado PT09 de Psittacus erithacus procedente de Portugal (GenBanK: GQ304750); y, a ttulo comparativo, la secuencia de un aislado de Cacatua galerita procedente de Australia (GenBanK: AF311302). En este rbol filogentico se puede apreciar que estamos ante la presencia de variantes del virus de PBFD parecidas a otros aislados procedentes de Europa y diferentes de los aislados del virus procedente de Australia, pas de origen de esta enfermedad. Como ya sabis, y a iniciativa del sector, desde CAMBRICO, hemos iniciado un Proyecto de Caracterizacin y Prevencin de la Enfermedad del Pico y las Plumas en Espaa (http://cambri.co/investigacion.htm) para aportar nuestro granito de arena en la lucha contra esta enfermedad. Como siguiente paso en el Proyecto y en base a los resultados de variabilidad obtenida en los aislados vricos, nos hemos propuesto realizar un estudio de caracterizacin molecular de los aislados y relacionarlos con la manifestacin y evolucin de la enfermedad en el ave. Para ello, hemos elaborado una encuesta inicial dirigida a los criadores/aficionados sobre las aves portadoras de PBFD y una Encuesta de Seguimiento, para recabar la informacin del estado de las aves a los 30, 90 das, 1 ao y 2 aos de haber sido diagnosticada la enfermedad. Vuestra aportacin de informacin es fundamental para enriquecer los conocimientos sobre esta enfermedad e identificar los aislados ms patognicos y su peligrosidad para las diferentes especies.

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02/03/2012

SEXAJE Y CONTROL SANITARIO DE AVES

CAMBRICO BIOTECH, S.L. Inscrita en el Registro Mercantil de Sevilla , folio 10 del Tomo 5.365 de la Seccin General, Hoja SE-89.402 , inscripcin 1. CIF . B-91934554

Fluorescencia

Muestra 1

Muestra 2

Muestra 3
Deteccin del ADN del virus mediante tcnica descrita

Muestra 1
Fluorescencia

Muestra 2

Muestra 3

Deteccin del ADN del virus mediante tcnica desarrollada por CAMBRICO

Figura 1. Electroferograma mostrando los picos que representan la presencia del ADN viral en las muestras 1, 2 y 3, analizadas mediante la tcnica descrita en la bibliografa y la tcnica desarrollada por CAMBRICO. Solo la tcnica diseada por CAMBRICO detecta la presencia viral de PBFD.

Muestra 1 A. personatus
Polimorfismos/ 100 pb

Aislado IT40 (Italia)

Muestra 2 A. roseicollis

Muestra 3 A. roseicollis

Aislado PT09 (Portugal)

Aislado de Cacatua (Australia)

3.3

Figura 2. rbol filogentico que compara los aislados obtenidos por CAMBRICO (Muestra 1,2, y 3) con aislados aislado publicados en la base de datos del NCBI: aislado IT40, aislado PT09 y Aislado de Cacatua de Australia.

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Si desea mayor informacin acerca de los detalles de las metodologas utilizada por CAMBRICO BIOTECH, puede escribirnos a info@cambri.co

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02/03/2012

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