Este documento describe varios métodos para identificar Haemophilus influenzae en muestras clínicas y cultivos. Estos incluyen: 1) observación de bacilos gramnegativos en frotis de líquido cefalorraquídeo coloreado con Gram, 2) desarrollo de colonias grises húmedas de H. influenzae tipo b en agar chocolate, y 3) pruebas para determinar si una cepa requiere factores de desarrollo externos como factor X (hemina) o factor V (NAD).
Este documento describe varios métodos para identificar Haemophilus influenzae en muestras clínicas y cultivos. Estos incluyen: 1) observación de bacilos gramnegativos en frotis de líquido cefalorraquídeo coloreado con Gram, 2) desarrollo de colonias grises húmedas de H. influenzae tipo b en agar chocolate, y 3) pruebas para determinar si una cepa requiere factores de desarrollo externos como factor X (hemina) o factor V (NAD).
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Este documento describe varios métodos para identificar Haemophilus influenzae en muestras clínicas y cultivos. Estos incluyen: 1) observación de bacilos gramnegativos en frotis de líquido cefalorraquídeo coloreado con Gram, 2) desarrollo de colonias grises húmedas de H. influenzae tipo b en agar chocolate, y 3) pruebas para determinar si una cepa requiere factores de desarrollo externos como factor X (hemina) o factor V (NAD).
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A. Frotis de líquido cefalorraquídeo coloreado con
Gram. que muestra leucocitos polimorfonucleares y bacilos gramnegativos dispersos, correspondientes a Haemophilus influenzae. Estos microorganismos tienen un aspecto característico de cocobacilos pequeños, que toman mal la coloración de Gram. en las muestras clínicas. En forma ocasional, pueden verse bacilos más largos, filamentosos, como los que se muestran aquí.
B. Desarrollo de colonias húmedas, lisas y
grises de H. influenzae tipo b en agar chocolate. Este medio contiene hematina (factor X) y está enriquecida con otros cofactores, como el NAD (factor V), que permiten el desarrollo de Haemophilus y otros microorganismos con requerimientos especiales de cultivo.
C. Desarrollo satélite de colonias de una
especie de Haemophilus, alrededor de estrías de Staphylococcus aureus, en agar sangre de carnero. El factor X o hemina es proporcionado por eritrocitos de carnero lisados que rodean las estrías de Staphylococcus, en tanto que éstos proporcionan el factor V o NAD. Estos factores permiten que las minúsculas colonias en gota de rocío de Haemophilus se desarrollen junto a la estría de Staphylococcus. D. Prueba de factores de desarrollo para la identificación de H. influenzae. El microorganismo se siembra sobre una placa de triticasa soja o agar infusión de cerebro-corazón, y se colocan discos con facto X y factor V, cercanos una de otra sobre el inóculo. Después de la incubación en medio rico de CO2. Los factores se determinan observando el desarrollo del microorganismo en relación con ambos discos. En esta fotografía se observa desarrollo entre los discos de factor X y V, lo que indica que este microorganismo requiere tanto factor X como factor V exógenos para su desarrollo.
E Prueba de ALA-porfirina en agar. Es un método
alternativo para determinar los requerimientos de factor X de aislamientos de Haemophilus. El medio agar contiene ácido δ−aminolevulínico (ALA). Los microorganismos se siembran sobre el medio y después de una incubación durante la noche, se observa con luz de lámpara de Wood (ultravioleta); si el desarrollo fluoresce con un color “rojo ladrillo”, el microorganismo es capaz de sintetizar factor X (hemina), y no necesita de factor X exógeno. Esta diapositiva muestra el desarrollo de H. influenzae (izquierda), que es un negativo a la prueba ALA- porfirina, es decir, requiere hemina exógena y de H. parainfluenzae que es un positivo a la prueba ALA- porfirina, es decir, sintetiza factor X en presencia del ALA.