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Fundamentos de Toxicologia Experimental

DETERMINAO DO 11-NOR-9-CARBOXITETRAIDROCANABINOL EM URINA POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

1. Finalidade A finalidade da anlise comprovar o uso recente de preparaes base de Cannabis. Essa anlise usualmente solicitada na esfera da toxicologia forense, mas pode ser requerida na reabilitao de farmacodependentes como reforo para manuteno da abstinncia ou para verificar a quebra do acordo de abstinncia. Outra rea de aplicao a vigilncia toxicolgica, procedimento adotado por algumas empresas como parte de programas de preveno ao abuso do lcool ou drogas e que se dedica monitorizao de indivduos que ocupam posies sensveis segurana.

2. Fundamentos dos Mtodos O principal constituinte ativo da planta Cannabis sativa 9-

tetraidrocanabinol (9-THC), que no organismo rapidamente transformado por reaes de hidroxilao que formam compostos mais polares, alguns ainda ativos. Reaes que ocorrem principalmente pela ao do citocromo P-450. Dentre esses produtos gerados est o cido 11-nor-9tetraidrocanabinol-9carboxlico (9-THC-COOH) que pode ser identificado a pela tcnica de cromatografia em camada delgada, onde a coleta da amostra pode ser feita atravs da urina do indivduo.

Figura 1 - Principais vias de biotransformao do 9-THC

O 9-THC-COOH extrado da urina separado de outros constituintes da matriz por meio de desenvolvimento da placa cromatogrfica, que posteriormente revelada pela reao com o reagente Fast Blue B, podendo-se observar uma banda cor de rosa.

3. Fluxograma dos Mtodos

5 mL de urina (amostra 3) em tubo de centrfuga

Adicionado 0,5 mL de NaOH 1N

Aquecer em banho de gua a 50-60c (15min)

Centrifuga (5 min)

Adicionado 5 mL de nhexano (agitao 20 min)

Adicionado gotas de HCl at pH 2-3

Resfriar em gua

Transferir fase orgnica para bquer afunilado (secar em Banho Maria 90c

Ressuspender (3 gotas de clorofrmio:metanol (3:1))

Transferir o extrato para a placa cromatogrfica

Observar a banda cor de rosa

Nebulizar o revelador fast blue b 0,2%

Deixar a placa secar em temperatura ambiente e eluir em tolueno: hexano

4. Resultados e Discusso Na cromatografia em camada delgada, obtivemos os seguintes valores: Distncia percorrida pelo solvente: 8,8 cm Distncia percorrida pelo padro: 4,3 cm Distncia percorrida pela amostra: 0,0 cm (ausente) Calculando o fator de reteno, Rf, temos: Para o padro, Rf = 0,48 Para a amostra, Rf = 0,0 (ausente)

5. Laudo frente ao resultado Para a amostra 3 no foi observado numa banda que aps a revelao da placa correspondesse ao padro, portanto podemos concluir que a amostra trs no continha o composto 9-THC-COOH. Portanto pode-se afirmar que o

indivduo de qual pertence a amostra, no fez uso de Cannabis sativa que possui o canabinide 9-THC nas 72 horas antes da coleta.

6. Referncias Bibliogrficas MEATHERALL, R.C; GARRIOT, J.C. A sensitive thin-layer chromatographic procedura for the detection of urinary 11-nor-9 tetrahydrocannabinol-9carboxylic acid. J. Anal. Toxicol., v. 12, p. 136-140, 1988.

SPINELLI, E; SILVA, O. A. Identificao de usurios de Cannabis por cromatografia em camada delgada de alta eficincia. Ver. Bras. Toxicol., v. 8, p. 21-28, 1995.