ETS-HCPA TEC. ANLISES CLNICAS Competncia AC11.03 Prof.

Brbara Silveira MICROSCOPIA Os microscpios so usados em vrios departamentos de laboratrios clnicos, para avaliar esfregaos sanguneos e tecidos corados, executar contagem de clulas, examinar sedimentos de urina, observar reaes celulares e interpretar esfregaos contendo microrganismos. 1. Tipos de Microscpios Os microscpios esto divididos, basicamente, em duas categorias, com base no tipo de iluminao usado: pticos e Eletrnicos. Os microscpios clnicos so pticos, ou seja, a amostra iluminada usando uma fonte de luz. J os microscpios eletrnicos so mais usados na pesquisa e, em vez de ondas de luz, so feixes de eltrons que permitem a visualizao da amostra. Microscpios pticos Os microscpios pticos modernos tambm so chamados de compostos, pois apresentam dois sistemas de lentes, um sistema nas oculares e outro nas objetivas. Os tipos mais comuns no laboratrio clnico so: * Microscpio de campo claro chamado desta maneira porque o objeto a ser visualizado visto contra um campo claro de exame. Todos os testes rotineiros do laboratrio clnico que exigem microscpio podem ser feitos usando este tipo de aparelho. So especialmente adequados para visualizar as amostras coradas, como esfregaos de sangue corados. * Microscpio de contraste de fase fornece um caminho melhor para visualizar clulas no coradas, que so quase transparentes. Ao instalar objetivas especiais e um condensador de fase, os microscpios de campo claro podem ser equipados para contraste de fase. O contraste de fase til para visualizar amostras como sedimentos de urina e para fazer contagem de plaquetas usando hemacitmetro. Com este aparelho, o campo aparece cinza e a amostra clara. * Microscpio de epifluorescncia usam luz ultravioleta para iluminar a amostra. Isso permite que objetos que foram corados com corantes fluorescents sejam observados. Pode ser usado para identificar microrganismos como micobactrias, detectar a presena de anticorpos em algumas doenas, anlise de DNA, etc. Microscpios Eletrnicos Os microscpios eletrnicos fornecem uma ampliao e um poder de resoluo muito maiores que o microscpio ptico. A imagem de um microscpio eletrnico criada ao expor as amostras a um feixe de eltrons em vez de ilumin-las com uma fonte de luz. Os microscpios eletrnicos tm sido usados em pesquisa mdica h varios anos mas seu uso na clnica est aumentando. Com o microscpio eletrnico, objetos muito pequenos, com medidas iguais a 0,001Mm (pequenos demais para serem vistos em microscpio ptico) podem ser visualizados. Os dois tipos de microscpios eletrnicos so : - de transmisso (MET): o feixe de eltrons passa pela amostra. Portanto, detalhes precisos do interior de uma clula podem ser observados. A imagem projetada em uma tela fosforescente e visualizada com um vidro de proteo ou projetada em um monitor. - de varredura (MEV): o feixe de eltros escaneado sobre a superfcie de uma amostra revestida por

metal, fazendo com que os eltrons reflitam na amostra, o que gera uma imagem tridimensional.

2. Partes do Microscpio ptico Oculares o local onde colocamos os olhos. Um MO pode ser monocular (1 ocular) ou binocular (2 oculares). As oculares localizadas no topo do microscpio so presas ao cilindro ou tubo conectado ao brao do microscpio. Cada ocular, pela qual o objeto visualizado, possui uma lente de aumento (mais comumente 10x). Lentes Objetivas so lentes de aumento mais prximas do objeto a ser visualizado. A face inferior do brao do microscpio possui um revolver giratrio no qual as objetivas so presas. A maioria dos MO possui pelo menos trs objetivas: a de menor aumento (10 ou 20x), a de maior aumento (40, 43 ou 45x) e a objetiva de imerso em leo (95, 97 ou 100x), cada uma marcada com faixas coloridas e com o poder de aumento. Para determinar o grau de aumento, o aumento listado na ocular (geralmente 10x) multiplicado pelo aumento listado na objetiva a ser usada. Existe um limite do grau de aumento que pode ser obtido com um MO e ainda gerar uma imagem clara. A capacidade do microscpio de produzir imagens separadas dos detalhes prximos do objeto a ser visualizado chamada poder de resoluo e determinado pela qualidade das objetivas. Fontes de luz, condensador e diafragma o condensador o aparato localizado abaixo da platina do microscpio que direciona a luz para a objetiva. O diafragma da ris o dispositivo que regula a quantidade de luz que incide sobre a amostra a ser visualizada no microscpio. J o diafragma do campo a fenda ajustvel anexada base do microscpio. O brao do microscpio conecta as objetivas e as oculares base do microscpio. A base tambm contm a luz, que ilumina o objeto a ser visualizado. Localizados acima da luz esto o condensador mvel e o diafragma da ris. O condensador foca ou direciona a luz disponvel na objetiva quando ele elevado o abaixado, aumentando o contraste na amostra. O diafragma da ris pode ser ajustado por uma alavanca mvel. O diafragma de campo usado para alinhar ou focar a luz em um procedimento chamado iluminao de Kohler. Ajustes amplo e fino do foco - os dois parafusos do foco costumam estar localizados nas laterais da base do microscopio. O ajuste amplo usado para focar com a objetiva de pequeno aumento apenas. O ajuste fino usado para fornecer uma imagem mais exata do que a obtida com o ajuste amplo. A distncia de trabalho a distncia ntre a objetiva e a lamina quando a amostra est no foco exato. Quanto maior o aumento da objetiva, menor ser a distncia de trabalho. O ajuste amplo no deve ser usado quando forem necessrios aumentos maiores, para evitar que a objetiva bata na lamina e ambas sejam danificadas. Platina - apoiada pelo brao e est localizda entre o revolver e a fonte de luz. A platina serve de apoio para o objeto a ser visualizado e tem um grampo para manter as lminas fixas. A platina pode ser movida ao usar os botes localizados logo abaixo dela. Estes movem a platina no plano horizontal para a esquerda e direita e para frente e trs.

3. Uso do Microscpio Os microscopistas devem ter conhecimento para fazer todos os ajustes necessrios para alcanar uma imagem ptica de vrios tipos de amostras biolgicas. Devem tambm usar medidas adequadas de segurana e tcnicas de limpeza e manuteno para mater o instrumento operando na capacidade maxima. O microscpio deve ser colocado em uma mesa firma, em uma altura confortvel para o tcnico. Quando no estiver em uso, o microscpio deve ser mantido com a objetiva de menor aumento posicionada. Segurana do Microscpio - Os fios eltricos no devem estar danificados e devem ser conectados em uma tomada aterrada. Devem estar loge de lquidos. necessrio desconectar o microscpio da tomada antes de fazer qualquer manuteno, reparo ou troca de lmpadas. - As lminas de vidro devem ser manuseadas com cuidado, para evitar que lasquem ou quebrem. - Se uma amostra no fixada ou um fluido biolgico for examinado, as precaues-padro e o EPI adequado devem usados e repeitados. - A platina do microscpio deve ser desinfetada aps examinar cada amostra. Avaliao da Qualidade O profissional deve seguir a boa prtica em microscopia no cuidado e no uso do microscpio para evitar danific-lo. = Cuidado e limpeza das lentes: A quantidade e a qualidade das informaes obtidas pelo exame microscpico de uma amostra dependem da condio da lente objetiva. As lentes oculares e as objetivas devem ser limpas antes e depois de cada uso, com papel para lente. Materiais como tecidos, bolas de algodo, papel toalha ou gaze no devem ser usados, pois podem arranhar a lente. A lente que estiver danificada ou manchada deve ser substituda, uma vez que informaoes importantes

podem ser perdidas durante a visualizao de uma amostra com uma lente manchada. = leo de Imerso: Apenas leo de imerso fabricado para microscopia deve ser usado com a objetiva de imerso. O leo de imerso no deve nunca tocar outras objetivas. Aps a objetiva de imerso em leo ser usada, as lentes e o condensador devem ser limpos para remover o leo residual. especialmente importante que as lentes nunca fiquem com leo, poise le amolece a cola que prende as lentes no lugar da objetiva. Um limpador de lentes pode ser usado com papel para lentes, para remover o leo das objetivas. Foco com a objetiva de menor resoluo A objetiva de menor resoluo usada, inicialmente, para localizar objetos e visualizar objetos maiores. O parafuso de foco de ajuste amplo aproxima a objetiva da lmina o mximo possvel. Ento, enquanto olhar pela ocular, o ajuste amplo deve ser usado para afastar a objetiva da lmina, at que o objeto na lamina seja focado. O parafuso de ajuste de foco fino pode ento ser usado para situar a imagem no foco exato. Quando visualizar objetos usando a objetiva de menor aumento, talvesz seja necessrio reduzir a intensidade da luz. Uso da objetiva de maior aumento A objetiva de maior aumento (40x) usada quando necessrio maior aumento, como para contagem de clulas e alinhamento de iluminao da urina. Nesses casos, a objetiva de maior aumento cuidadosamente girada para a posio. O ajuste fino foca o objeto. A maioria das objetivas de microscpios parfocal ( pode ser trocada sem variar o foco do instrumento) e, portanto, exige apenas suaves mudanas no ajuste fino ao trocar de objetiva. Como a distncia de trabalho entre a platina e a objetiva de maior aumento muito pequena, deve-se utilizar apenas o ajuste fino quando usar a objetiva de maior aumento. Isso evita o risco de bater a objetiva na lmina, danificando-as. Para visualizar amostras no coradas usando a objetiva de maior aumento, a intensidade da luz e o diafragma da ris devem ser ajustados, para fornecer iluminao e contraste adequados. Quando visualizar preparaes muito coradas com a objetiva de maior aumento, o condensador deve ser elevado, o diafragma aberto e a intensidade da luz aumentada. Uso da objetiva de imerso em leo A objetiva de imerso em leo usada para visualizar clulas coradas do sangue, sees de tecidos e lminas coradas contendo microrganismos. Essa objetiva fornece o maior aumento das objetivas de campo de luz. Aps o foco inical com a objetiva de menor aumento, a objetiva levemente girada para o lado. Uma gota de leo de imerso colocada na lmina diretamente sobre o condensador. A objetiva de imerso em leo ento girada para a gota de leo, com cuidado para que outras objetivas no entrem em contato com o leo e para que a objetiva de imerso no bata na lmina. O objeto focado usando apenas o ajuste fino. O ajuste amplo NUNCA dever ser usado quando a objetiva de imerso estiver posicionada. Ao visualizar amostras com a objetiva de imerso, o condensador deve ser colocado em sua posio mais elevada (quase tocando o fundo da lmina). O diafragma da ris deve ser aberto e a luz mxima deve ser usada. Aps terminar o exame da lmina, a objetiva de menor aumento girada para a posio e a lmina removida da platina. Todo o leo deve ser removido da objetiva de imerso com papel para lente. A platina e o condensador devem ser limpos, se for necessrio. Ajuste das oculares nos microscpios binoculares

Assim que o objeto estiver em perspectiva, as oculares devem ser ajustadas para acomodar cada um dos olhos do microscopista. Dois ajustes so feitos: - Ajuste da distncia interpupilar: ajustado ao deslizar as oculares para mais prximo ou mais distante, at que a imagem seja vista por ambas as oculares. - Ajuste de dioptria: esse ajuste compensa a visao do microscopista. O observador deve olhar com a ocular direita, usando o olho direito, e com o ajuste amplo focar o objeto. Ento ele deve olhar com a ocular esquerda, usando o olho esquerdo e usar o anel saliente da ocular para focar a amostra. Alinhamento da Iluminao O caminho da luz pelo microscpio deve ser adequadamente alinhado para ter boa resoluo. O alinhamento incorreto leva a resoluo ruim, artefatos e campo iluminado do exame desigual. O realinhamento feito periodicamente por uma empresea profissional de reparo ou servio de microscpio. Os microscpios que possuem um diafragma de campo ajustvel embutido na fonte de luz permitem que o microscopistarealize o realinhamento manualmente (iluminao de Kohler) e deve ser feita cada vez que o microscpio usado, antes da visualizao da amostra. Transporte e Armazenamento do Microscpio Os microscpios devem ficar em posio permanente, em uma mesa firme, de onde no sejam deslocados de maneira abrupta. Entretanto, se um microscpios tiver que ser movido, ele dever ser segurado com firmeza, com uma das mos segurando a base e a outra segurando o brao. Armazenamento do Microscpio: Quando o microscpio no estiver sendo usado, ele deve ficar com a objetiva de menor aumento na posio e o revolver na posio mais baixa. A platina deve estar centralizada de modo que no se projete para nenhum lado. O microscpio dever ser protegido com uma capa contra poeira. LEMBRETES IMPORTANTES - sempre inicie o trabalho usando a objetiva de menor aumento; - limpe todas as oculares e objetivas, com papel para lente, antes e aps cada uso; - use o ajuste amplo apenas com a objetiva de menor aumento; - use o leo de imerso apenas com a objetiva de imerso; - ajuste a distncia interpupilar e a dioptria e alinhe a iluminao antes de usar; - siga as precaues-padro quando usar o microscpio para examinar materiais biolgicos no fixos; - limpe a platina do microscpio com desinfetante de superfcie aps examinar amostras de fluidos, como sedimento de urina; - nunca levante a platina do microscpio olhando pela ocular. Olhe por for a, para no se arriscar a quebrar a lmina e estragar a objetiva; - nunca substitua uma objetiva por outra de maior aumento, sem observar por fora, se a objetiva trocada tocar na lmina. Se este for o caso, abaixe a platina; - caso use culos, guar-de-os ao usar o microscpio pois este corrige o seu defeito de viso; - para calcular a ampliao que est sendo utilizada, basta multiplicar os nmeros gravados nas lentes: ocular e objetiva.