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Reactivo de Shiff
Reacciones histoqumicas basadas en la demostracin de grupos carbonilo formados sobre los hidratos de carbono por oxidacin previa: Reaccin de PAS (periodic acid schiff). Es la reaccin ms comnmente utilizada en histoqumica debido a que: Es de amplia aplicacin en el diagnostico histopatologico rutinario. Puede colorear numerosos componentes bioqumicos (hidratos de carbono o sustancias relacionadas con ellos) Siendo una reaccin poco especifica, puede convertirse en enormemente selectiva mediante los correspondientes controles. Esta tcnica fue descubierta, de forma independiente y prcticamente simultnea, por Hotchkiss, Mcmanus y Lillie.
Reactivo de Shiff:
Se obtiene a partir de la fucsina bsica, la cual es tratada con acido sulfuroso, que hace desaparecer un doble enlace existente en el centro de la molecula, transformndose en una sustancia incolora, acido sulfofucsinico o reactivo de Shiff.
Cuando el reactivo de Shiff reacciona con dos grupos aldehidicos contiguos flanqueados por sus respectivos radicales OH aparece de nuevo el doble enlace (grupo cromoforo) y con el, la coloracin rojo fucsina caracterstica. Mediante estudios de espectrofotometra se ha podido concluir que, para un correcto desarrollo de la reaccin, es necesario que ambos grupos aldehicos se encuentren a una distancia cifrada entre 1 y 1.1 nm, similar a la que separa a los radicales bencnicos de la fucsina.
Procedimiento tcnico
Fijacin: formol tamponado al 10 por 100, lquido de Carnoy, liquido de Bouin Soluciones:
Llevar hasta ebullicin el agua destilada y aadir la fucsina. Disolver y enfriar a 50 C, filtrar y aadir: Metabisulfito sdico anhidro.1g Acido clorihidrico 1N.20ml
Dejar en reposo 24 horas (la solucin debe tomar un color rosa palido ) y filtrar a travs de carbn activado , lo cual debe decolorarla. Almacenar en el refrigerador.
Hematoxilina de Harris
Modo de operar:
1. Desparafinar e hidratar. 2. Acido peryodico al 0.5 por 100, 5 minutos3. Lavado en agua destilada. 4. Reactivo de Schiff, 15 a 30 minutos. 5. Aclarar en tres cambios de bao sulfuroso, 2 minutos en cada uno. 6. Lavar en agua corriente durante 5 minutos. 7. Hematoxilina de Harris, 30 a 50 segundos. 8. Lavar en agua corriente durante 5 minutos. 9. Deshidratar, aclarar y montar.
Resultados
Ncleos.. .Azul Material PASS positivo Rojo oscuro a Magenta (Fucsina)