UNIVIX Centro de Educação Superior Farmácia e Bioquímica Bioquímica clínica I Jorge Terrão

Ana Paula Barbosa Bormann Antonielle Lucindo Camila Gonçalves Marinho Luceline Alves Soares de Souza Riaze Fernades 9º período

Diagnóstico laboratorial da diabete

Vitória Março, 2005

No passado. Obs. Quase todas as usualmente utilizadas são atualmente enzimáticas. 1Materiais utilizados: Vidrarias: Pipeta graduada 5ml.0) 100mmol/L.47 mmol/L. O diagnóstico dos distúrbios no metabolismo da glicose depende da demonstração de alterações na concentração de glicose no sangue.Título: Diagnóstico laboratorial da diabetes mellitus.: conservar os três reagentes entre 2 e 8ºC.000 U/L. tubos de ensaio.0). vegetais ricos em amido e legumes) e das reservas corporais (glicogênio). assim como da síntese endógena a partir de proteínas ou do glicerol dos triglicerídeos. #Reagente 3 (reagente enzimático líquido estável): tampão 100 mmol/L (pH7. fenol 10mmol/L. ácido benzóico 20. A incidência de hipoglicemia é desconhecida. peroxidase ≥ 700 U/L. as análises eram.3 mmol/L. por hormônios reguladores. Equipamentos: Pipeta automática 20µl. As várias desordens do metabolismo dos carboidratos podem estar associadas com: o aumento da glicose plasmática (hiperglicemia). 4-aminoantipirina 0. derivando da degradação dos glicídeos da alimentação (cereais. glicose oxidase ≥ 10. raramente são empregadas. Kit de glicose: #Reagente 1 (padrão):glicose 100mg/dL. Muitos procedimentos analíticos são utilizados para dosar os níveis sanguíneos de glicose. O nível de glicose no sangue é mantido dentro de uma faixa razoavelmente estreita. O distúrbio mais freqüente encontrado do metabolismo glicídico é a glicose sanguínea elevada devido a diabetes mellitus. tais como a insulina (diminui a glicose sanguínea). e os métodos mais antigos. jejum prolongado ou exercício intenso). como as técnicas colorimétricas ou de oxidorredução. #Reagente 2 (tampão): tampão fodfato (pH7. Reagentes: Amostras de soro. Resultados normais não devem excluir o diagnóstico de distúrbios do metabolismo dos carboidratos. (dosagem da glicose nos líquidos corporais) Objetivo: Realizar o método de diagnóstico laboratorial da diabetes mellitus para três amostras de soro com concentrações de glicose desconhecidas. azida sódica 15. que resultavam em valores falsamente elevados. 2- 3- . executadas com métodos relativamente inespecíficos. com freqüência.38 mmol/L. mas muito menor. Introdução: A glicose é a principal fonte de energia para o organismo humano. em diversas condições (alimentação. Banho-maria. redução da glicose plasmática (hipoglicemia) e concentração normal ou diminuída da glicose acompanhada de excreção urinária de açúcares redutores diferentes da glicose (erros inatos do metabolismo da glicose). glucagon ou epinefrina (aumentam os níveis sanguíneos de glicose).

seguindo a ordem de intensidade de cor para evitar interferências entre as amostras. mas ele consiste em uma mistura de 24 partes do reagente 2 com 1 parte do reagente 3. Transfere-se os tubos para um banho-maria 37ºC. ajuntando 100% de transmitância. B P1 P2 P3 1 2 3 Reagente 1 20µl 20µl 20µl Amostras 20µl 20µl 20µl Reagente de trabalho 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2Leitura no espectrofotômetro (500nm): Liga-se o espectrofotômetro 20 minutos antes da leitura para estabilização dos componentes. Anota-se o valor de absorbância encontrado para cada amostra. Estante. colocase 20µl do reagente 1 nos três tubos identificados com a letra P. A cada amostra pipetada deve-se trocar a ponteira. Coloca-se a cubeta contendo o branco ( tubo B ).2 e 3. Em seguida. ajustando 0% de absorbância. Em seguida. Seleciona-se no aparelho o modo “T“. Ponteiras. 3 deles com a letra P (padrão) e 3 enumerados de 1 a 3 contendo amostras de pacientes diferentes. Obs.Espectrofotômetro. anotando-se os valores encontrados para cada tubo. deixando-os durante 10 minutos. Metodologia: Preparo das soluções: Identifica-se 7 tubos de ensaio. o reagente de tralho é estável durante 30 dias entre 2 e 8 °C e 7 dias entre 15 e 30°C. 4Diversos: Pêras. Cubetas de quartzo. Resultados e discussões: A glicose é oxidada enzimaticamente pela glicose-oxidase de acordo com a seguinte reação: glicose oxidase Glicose + O2 ácido glucônico + H2O2 peroxidase 1- 2 H2O2 + fenol + 4-aminoantipirina cromógeno cereja + 4H2O . Realiza-se a leitura dos tubos contendo o padrão. faz-se a leitura dos tubos contendo as amostras 1. Utilizando-se uma pipeta automática. pipeta-se 20µl da amostra de soro de cada paciente em seu respectivo tubo. Por fim. Seleciona-se no aparelho o modo “A“. Seleciona-se no aparelho o modo “A“. sendo um deles representado pela letra B (branco).: o reagente de trabalho já havia sido preparado anteriormente. utilizando-se uma pipeta graduada coloca-se 2ml do reagente de trabalho em cada tubo.

331 0. ser empregado para a urina. T. portanto. considerando-se os valores de referência. 2. O método com a glicose oxidase não deve.280.494 0. 286 = 366 mg/dL Tubo 3: CA = 0. encontra-se com valores elevados de glicemia.280 0. Média dos padrões = 0. Valter. O paciente 3 está dentro do limite da faixa de referência (100 a 126 mg/dL) sendo considerado um pré-diabético. Referências bibliográficas: 1.442 . pois do contrário ele pode aumentar o valor de absorbância do padrão e conseqüentemente diminuir o valor da concentração de glicose.Apontamentos de aula. 286 = 126 mg/dL Conclusão: Analisando-se os resultados pode-se dizer que o paciente 1 está dentro da faixa de glicose considerada normal (70 a 99mg/dL). Bioquímica clínica para o labortório-princípios e interpretações. 286 = 95mg/dL Tubo 2: CA = 1. A urina contém altas concentrações de substâncias que interferem com a reação da peroxidase.O peróxido de hidrogênio em presença da peroxidase reage com a 4aminoantipirina e fenol.0. produzindo resultados falsamente baixos.3495 Cálculo da concentração das amostras: Concentração da amostra = Abs da amostra .331 + 0.442 Absorbância Calcula-se a média dos valores de absorbância dos três padrões para diminuir a faixa de erro de pipetagem.368 = 0. 4ª ed. formando um cromógeno vermelho cereja cuja intensidade de cor é proporcional a concentração de glicose.333 . indicando uma quadro de diabetes (acima de 126 mg/dL). nota-se uma discrepância do valor de absorbância do padrão 3. Fc Tubo 1: CA = 0. Porto Alegre: editora médica missau.MOTTA. Os métodos de glicose oxidase são adequados para dosar glicose no liquor. 2003.368 0. . B P1 P2 P3 1 2 3 . tornando-se necessário elimina-lo do cálculo da média. Observando-se os valore de absorbância dos tubos contendo o padrão.3495 2 Fator de calibração = concentração do padrão = 100 = 286 absorbância do padrão 0. Já o paciente 2.333 1.

et al.1998.Carla. .Tretz. Fundamentos de bioquímica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan. 4ª edição.3- BURTIS.

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