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1, 79-83, 2008 DETERMINAO DE HERBICIDAS USADOS NO CULTIVO DE ARROZ IRRIGADO NA REGIO SUL DO ESTADO DE SANTA CATARINA ATRAVS DA SPME-GC-ECD La L. F. Costa e Ernani S. Santana Departamento de Cincias dos Alimentos, Universidade Federal de Santa Catarina, CP 476, 88040-900 Florianpolis - SC, Brasil Eliane A. Suchara, Vanira S. Benato e Eduardo Carasek* Departamento de Qumica, Universidade Federal de Santa Catarina, CP 476, 88040-900 Florianpolis - SC, Brasil Recebido em 21/12/06; aceito em 21/6/07; publicado na web em 19/12/07

DETERMINATION OF HERBICIDES USED IN IRRIGATED RICE CULTIVATION IN THE SOUTH OF SANTA CATARINA USING SPME-GC-ECD. Evaluation of the pollution by the herbicides alachlor, propanil and atrazine in water samples from four rivers in the cities of Turvo and Meleiro, south of Santa Catarina State, was made using the SPME-GC-ECD method. The proposed method was optimized and validated. The correlation coefficients were higher than 0.997 and linear ranges of the analytical curves were 0.1-4; 0.1-2.5 and 0.1-5 g L-1 for atrazine, alachlor and propanil, respectively. The herbicides were quantified by GC-ECD and identified by GC-MS. Both of the selected rivers presented contamination by at least one of the studied herbicides. Keywords: herbicides; river water; SPME.

INTRODUO A regio sul catarinense abastecida pela bacia hidrogrfica do rio Ararangu, sendo seus principais afluentes os rios Manoel Alves, Amola-Faca e Itoupava. Estes rios tm uma vital importncia para regio sul de Santa Catarina, pois eles banham as reas agriculturveis localizadas as suas margens. Eles beneficiam os rizicultores de todo vale e contribuem tambm para outras culturas, pecuria, pesca, turismo, bem como o abastecimento de gua potvel para os habitantes da regio. Em Santa Catarina, o cultivo de arroz realizado 100% no sistema pr-germinado, alcanando uma produtividade ao redor de 7.000 kg ha-1, em uma rea de 126 mil ha. O Estado ocupa o segundo lugar na produo de arroz irrigado, com cerca de 800 mil t anuais, sendo o sul do estado responsvel por 42% do total da produo1. No entanto, existe a preocupao em relao ao uso indiscriminado dos pesticidas que aps aplicao so absorvidos pelas argilas contidas no solo e permanecem expostos s inmeras reaes qumicas, fsicas e biolgicas. Desta forma, sabe-se que a aplicao destes produtos perceptvel pelo odor caracterstico que se constata em cidade como Turvo e Meleiro1. Geralmente, a populao costuma atribuir os elevados nveis de turbidez dos rios, principalmente na poca do preparo de canchas de arroz, contaminao por pesticidas utilizados na lavoura de arroz. O uso generalizado e intensivo de pesticidas tem gerado diversos problemas relacionados sade pblica e ao desequilbrio ambiental, tais como intoxicaes de agricultores, contaminaes de alimentos, gua e solos, resistncia de espcies combatidas s substncias empregadas e danos em espcies no visadas2. O desequilbrio ecolgico ocasionado acarreta problemas prpria agricultura, agravando o surgimento e proliferao de pragas e doenas e, conseqentemente, aumento da necessidade de usar mais pesticidas3. O despejo de substncias txicas utilizadas na agricultura uma das fontes de contaminao das guas, pois cada vez mais utilizamse inseticidas, herbicidas, fungicidas e toda uma srie de praguicidas.
*e-mail: carasek@qmc.ufsc.br

Mesmo que estas substncias cheguem aos rios e lagos em pequenas quantidades, a bioacumulao far com que sua ao seja prejudicial ao longo da cadeia alimentar, que inclui os seres humanos. rgos internacionais como a Environmental Protection Agency (EPA) dos Estados Unidos e da Comunidade Europia (EC) iniciaram um controle estabelecendo limites em relao s concentraes de pesticidas encontrados em gua. Os nveis permitidos pela EC so determinados pela Drinking Water Directive (80/778/EEC)4 que estabeleceu que a concentrao mxima tolervel de um pesticida individual no deve exceder 0,1 g L-1 e que a concentrao total de pesticidas no deve exceder 0,5 g L-1 em gua potvel. O Brasil apresenta uma legislao que tambm regulamenta os nveis mximos de pesticidas em gua potvel, baseados em sua periculosidade. A Portaria do Ministrio da Sade no 518, de 25 de maro de 2004, estabelece os padres de potabilidade para substncias qumicas que representam risco sade5. Os herbicidas alaclor (2-cloro-N-(26-dietilfenil)-N (metoximetil) acetamida), atrazina (2-cloro-4-etilenodiamino-6isopropilamino-s-triazina) e propanil (3-metil-3,4-diclo-roacetanilida) so amplamente aplicados nas culturas de algodo, soja, amendoim, caf, cana-de-acar, milho e arroz. So considerados produtos de mediana a extremamente txicos, sendo muito perigosos para o ambiente, tendo seus limites mximos para gua de consumo humano estabelecido pela legislao brasileira em 2 g L-1 para atrazina e 20 g L-1 para alaclor e propanil. A determinao destes compostos em matrizes ambientais, de maneira geral, exige o uso de mtodos de preparao de amostras seletivos para uma determinada classe de compostos e que envolvem etapas de extrao, limpeza e pr-concentrao anteriores determinao cromatogrfica6. A extrao lquido-lquido um procedimento de preparo de amostras que consome um volume significativo de solventes orgnicos, longo tempo de extrao e intenso trabalho do analista. A tcnica de extrao em fase slida, apesar de utilizar pequenas quantidades de solvente para eluir os analitos do sorvente, apresenta problemas de entupimento do sistema de extrao e usa grandes volumes de amostra7.

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Nos ltimos anos, vrios avanos na anlise de resduos de pesticidas foram publicados, dentre os quais a microextrao em fase slida (SPME). A aplicao desta tcnica de extrao foi realizada com sucesso na extrao de herbicidas em diferentes tipos de matrizes8-16. Desde a primeira citao por Arthur e Pawliszyn17, a SPME teve um rpido crescimento em seu uso devido sua simplicidade e vasto campo de aplicao como alternativa aos mtodos tradicionais18. O objetivo deste trabalho foi avaliar, atravs da tcnica de SPME e quantificao por GC-ECD, a presena dos herbicidas alaclor, propanil e atrazina em amostras de gua dos rios que abastecem os municpios de Turvo e Meleiro, localizados na regio sul de Santa Catarina, os quais so utilizados para o cultivo de arroz irrigado. PARTE EXPERIMENTAL Amostras e reagentes As amostras foram coletadas nos municpios Turvo e Meleiro, regio sul de Santa Catarina, em junho de 2006. Foram coletadas 5 amostras no rio Amola Faca, 8 amostras no rio Manoel Alves, 1 amostra no rio Itoupava e 1 no rio Jundi. A coleta foi realizada manualmente empregando frascos de vidro mbar de 1 L, acondicionados em caixa de isopor e mantidos sobre refrigerao em gelo. As amostras foram transportadas diretamente para o Laboratrio Central de Sade Pblica de Santa Catarina, onde foram realizadas as anlises. As amostras foram filtradas em membrana de acetato de celulose (0,45 um) e mantidas em freezer a -18 oC at o momento da anlise. Os padres de herbicidas (alaclor, atrazina e propanil) foram adquiridos da Sigma-Aldrich, com grau de pureza superior a 98,3%. Hidrxido de sdio e cloreto de sdio p.a (99%) e cido sulfrico p.a foram obtidos da Synth. gua milli-Q foi obtida de um sistema de purificao de gua Millipore. As solues estoques individuais (alaclor, atrazina e propanil) e a mistura dos herbicidas, todas em concentrao de 500 g L-1, foram preparadas dissolvendo a quantidade apropriada dos padres em acetonitrila grau HPLC (MercK). As solues intermedirias e as de trabalho foram obtidas a partir da diluio da soluo estoque por meio de diluies sucessivas. Estas solues foram utilizadas na determinao da linearidade do mtodo, nas fortificaes das amostras e na obteno das curvas analticas. Instrumentao As anlises foram realizadas em um cromatgrafo a gs Varian CP 3800. A coluna capilar usada foi CP SIL 8CB 50 m x 0,53 mm, com espessura de filme de 5,0 m (Varian, EUA). As injees foram realizadas manualmente no modo splitless com injetor a 280 o C. A vazo do gs de arraste nitrognio (99,999%) foi de 1 mL min-1 na temperatura inicial do forno da coluna. A programao de temperatura da coluna cromatogrfica utilizada para separao dos herbicidas em estudo foi: 60 oC (4 min) aquecimento at 140 oC a 30 oC min-1, de 10 oC min-1 at 270 oC (5 min), e aquecimento para 280 oC a 50 oC min-1 (5 min). A temperatura do detector foi de 300 o C. As identidades dos herbicidas encontrados nas amostras ambientais foram confirmadas atravs do sistema cromatogrfico GC-MS, Saturn 2100 (Varian, EUA) com detector seletivo de massas acoplado e injetor manual split-splitess. A coluna capilar VF5ms, com 30 m x 0,25 mm, com espessura de filme de 0,25 m foi utilizada para a separao dos herbicidas. O gs de arraste hlio foi utilizado com vazo de 1 mL min-1 na temperatura inicial do forno da coluna. A programao de temperatura da coluna croma-togrfica

foi: 60 oC (4 min), aquecimento at 140 oC a 30 oC min-1, de 10 oC min-1 at 270 oC (5 min), e novo aquecimento de 50 oC min-1 at 280 o C (5 min). As temperaturas do injetor e detector foram de 280 e 300 oC, respectivamente. Os dados foram obtidos usando um software MS Workstation 6.0. Microextrao em fase slida Suporte e fibras de SPME foram adquiridas da Supelco. As extraes dos herbicidas das amostras foram realizadas com fibra de poliacrilato (PA) 85 m, sendo usado o modo de extrao direto. O pH da amostra foi ajustado em 4 e a fora inica em 10% pela adio de NaCl. A amostra foi mantida sob agitao (700 rpm) e em temperatura de 70 oC utilizando um agitador magntico modelo VELP Cientfica com temperatura e agitao ajustveis. O volume de amostra foi de 15 mL. Os tempos de extrao e de dessoro foram de 40 e 5 min, respectivamente. Validao do mtodo Para a determinao dos parmetros analticos de mrito, amostras de gua destilada foram fortificadas para gerar as seguintes faixas de concentrao: 0,066 a 0,54; 0,103 a 4; 0,065 a 0,1 g L-1 para alaclor, atrazina e propanil, respectivamente. O limite de deteco do mtodo (LOD = 3,3 x SD a/b) e o limite de quantificao do mtodo (LOQ = 10 x SD a/b), onde: SD = estimativa do desvio padro, a = desvio padro do coeficiente linear, b = coeficiente angular, esto apresentados na Tabela 1. Os ensaios de preciso e repetibilidade do mtodo foram realizados em amostras de gua destilada em 2 nveis de fortificao e seus valores esto na Tabela 2. Tabela 1. Parmetros analticos obtidos para o mtodo de SPME e GC-ECD Analito a Alaclor 1250000 Atrazina 10180,12 Propanil 60705,32 (n = 5) Tabela 2. Recuperao dos herbicidas em gua destilada para o mtodo proposto Recuperao herbicida Alaclor Atrazina Propanil
a

Parmetros analtico b 2240000 6451,09 4,474 R 0,9957 0,999 0,9963 LOD (g/L) 0,049 0,19 0,0078 LOQ (g/L) 0,147 0,57 0,017

c terica c exp (g/L) 0,147c 0,27 0,75 3,00 0,017 0,032 0,17 0,20 0,57 3,20 0,015 0,035

DPa 0,03 0,04 0,04 0,46 0,003 0,007

% 116, 9 75,4 76,1 106,7 96,2 103,9

DPRb 17,3 18,1 6,7 14,3 19,2 21,2

Desvio padro. b Desvio padro relativo. c n = 3

RESULTADOS E DISCUSSO Otimizao do procedimento de SPME Tipo de fibra A sensibilidade de um mtodo de SPME depende de uma seleo correta do revestimento e do tipo da fibra, a respeito do com-

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posto de interesse8,19,20. Diversos autores tm utilizado as fibras de polidimetilsiloxano (PDMS) e PA para determinao de herbicidas em gua21-23. Um estudo recente para a determinao de vrios herbicidas (incluindo alaclor e atrazina), em amostras de gua de rio por SPME e GC-MS, demonstrou que a fibra de PA (85 m) apresenta melhor desempenho que a fibra de PDMS (100 m)11. Komatsu e Vaz24 otimizaram parmetros para determinao de multiresduo de pesticida em gua de rio e avaliaram diferentes tipos de fibras (PDMS, carboxen/polidimetilsiloxano (CAR/PDMS), carbowax/divenilbenzeno (CW/DVB) e PA) e concluram que a fibra com melhor desempenho para atrazina foi a de PA 85 m. Neste estudo as fibras de PDMS (30 m), PA (85 m), CAR/ PDMS (75 m) e CW/DVB (65 m) tiveram suas eficincias de extrao para alaclor, atrazina e propanil comparadas. Conforme mostrado na Figura 1, a fibra que apresentou melhor desempenho para os herbicidas em estudo foi PA 85 m, a qual foi selecionada para os experimentos posteriores.

Figura 2. Influncia do pH sobre a extrao dos herbicidas propanil, alaclor e atrazina utilizando fibra de PA 85 mm

Influncia da adio de sal A influncia da adio de cloreto de sdio em concentraes de 4; 10 e 23,3% sobre a eficincia de extrao dos herbicidas foi investigada. A atrazina foi o herbicida que apresentou um efeito significativo na eficincia de extrao com a adio de NaCl em relao aos outros herbicidas. No entanto foi feita a opo pela concentrao salina de 10% devido s dificuldades encontradas em se trabalhar com concentraes mais elevadas de sal, principalmente pela saturao da fibra de PA 85 m. Velocidade de agitao da amostra De acordo com alguns trabalhos10,24, a velocidade de agitao utilizada para facilitar o transporte de massa entre a fase aquosa e a fibra. Assim, a influncia da velocidade de agitao da amostra entre 0 (sem agitao) e 1000 rpm foi avaliada. Este estudo demonstrou que a eficincia da extrao foi melhor em velocidades de agitao de 1000 rpm, exceto para o propanil onde no foi observada praticamente nenhuma alterao da eficincia da extrao em funo da velocidade de agitao. No entanto, devido a condies laboratoriais fez-se opo pela velocidade de 700 rpm. Temperatura da amostra Segundo Gonalves e Alpendurada10, variaes de temperatura afetam a cintica e a termodinmica do processo de extrao. Temperaturas acima de 60 oC podem ser prejudiciais para extrao dos pesticidas clorados. A maioria dos autores concorda com a importncia da temperatura de extrao por SPME para pesticida e recomenda empregar temperaturas at 100 oC, dependendo do pesticida em estudo e do tipo de matriz20,22,26. Assim, o efeito da temperatura da amostra (27, 40, 70 e 80 oC) sobre o rendimento de extrao foi estudado. Na Figura 3 fica evidenciado que com a elevao da temperatura at 70 oC houve uma melhora na extrao simultnea dos herbicidas. Temperaturas acima de 70 oC diminuram o rendimento de extrao dos herbicidas. Volume da amostra O volume da amostra um parmetro importante na otimizao por SPME porque est relacionado diretamente com a sensibilidade do mtodo27. Neste estudo foram otimizados quatro volumes da amostra (5; 10; 15 e 45 mL). Os volumes de 10 e 15 mL apresentaram os melhores resultados. Desta maneira, fez-se a escolha pelo volume de 15 mL. Geralmente, a quantidade de analito absorvida na fase estacio-

Figura 1. Estudo comparativo da eficincia de extrao de diferentes fibras de SPME sobre a extrao dos herbicidas propanil, alaclor e atrazina

Modos de extrao Os modos de extrao direto (DI-SPME) e de headspace (HSSPME) foram investigados. O modo HS-SPME no apresentou bons resultados para dois dos herbicidas estudados (alaclor e propanil), provavelmente devido alta polaridade e baixa volatilidade destes compostos. Desta maneira, o modo de extrao direto foi selecionado. Cabe enfatizar que a eficincia de cada modo depende das propriedades dos analitos e da matriz. Em geral, o DI-SPME mais sensvel que a HSSPME para analtos presentes em amostras lquidas. No entanto, compostos no volteis presentes na amostra ficam retidos na fibra, podendo reduzir a sua vida til e a repetibilidade de extrao25. Influncia do pH Segundo Gonalves e Alpendurada10, a afinidade dos analtos para o adsorvente age primeiramente por interaes hidrofbicas podendo ser ativada mantendo as molculas na forma no ionizadas. Desde modo, a influncia do pH (3, 4, 5, 7 e 8) sobre a eficincia de extrao dos herbicidas alvos deste estudo foi verificada. A Figura 2 demonstra que para os herbicidas estudados, o mais afetado pela variao do pH foi o alaclor, que teve sua extrao diminuda em pH mais bsico. Para os demais compostos no houve variao significativa da eficincia de extrao para os diferentes valores de pH. As extraes realizadas em pH cido (3 e 4) apresentaram os melhores resultados, sendo o pH 4 selecionado, o qual pode levar reduo de possveis danos fibra, o que resultaria na diminuio do tempo de vida til da mesma.

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Figura 3. Influncia da temperatura da amostra sobre a extrao dos herbicidas propanil, alaclor e atrazina

nria aumenta quando o volume da amostra aumenta e, conseqentemente, a sensibilidade tambm aumenta28. Poucos estudos relatam otimizao de volume da amostra por SPME. Em alguns dos poucos estudos onde o volume de amostra foi otimizado, os volumes de amostra melhores encontrados ficaram entre 4 e 120 mL9. Tempo de extrao Aps a otimizao do tipo de fibra, modo de extrao, pH da amostra, concentrao salina, velocidade de agitao, volume e temperatura, foi estudado o tempo de extrao no intervalo de 20 a 130 min. O resultado deste estudo indicou que mesmo aps 130 min o equilbrio do sistema no foi alcanado. Devido ao fato que o equilbrio no necessrio desde que as condies de extrao sejam mantidas, e considerando a possibilidade da implantao do mtodo em anlise de rotina, foi feita a opo pelo tempo de extrao de 30 min. Efeito de memria O mtodo baseado na SPME pode estar sujeito a efeitos de memria. Estes efeitos so caracterizados pela dessoro incompleta dos analitos adsorvidos na fibra, podendo ser mais acentuada em compostos com maior afinidade pelo recobrimento da fibra27. Para verificar o efeito de memria (efeito carryover) foram testados 3 diferentes tempos: 3, 5 e 10 min de dessoro na temperatura de 280 oC. Com 3 min de dessoro os resduos apresentados j foram menores que 5%; no entanto, para garantir a completa dessoro foi padronizado o tempo de 5 min. Amostras ambientais O mtodo descrito foi aplicado para determinao dos herbicidas em amostras de gua de rio, que foram analisadas por GC-ECD e confirmadas no GC-MS. As amostras foram coletadas de mananciais que so a principal fonte de abastecimento de gua potvel dos municpios de Turvo e Meleiro, na regio sul do estado. Nestes locais o cultivo de arroz irrigado uma das mais importantes atividades agrcolas. Quanto aos resultados encontrados, foram detectados herbicidas em todas as amostras analisadas e com nveis de concentraes estimadas variando de 0,14 a 0,72 g L-1 para alaclor e 0,02 a 0,05 g L-1 para propanil. Cabe enfatizar que foi detectada a presena de pelo menos um dos herbicidas nos rios estudados. Quanto ao rio Manoel Alves, onde foi coletado um nmero maior de amostras (8), em 4 delas foi detectado alaclor e em 2 a presena de propanil com

nveis de 0,14 a 0,32 g L-1, respectivamente. No rio Amola Faca foram analisadas 5 amostras, sendo que 2 apresentaram alaclor com nveis de 0,31 a 0,45 g L-1 e uma 1 apresentou propanil em concentrao de 0,02 g L-1. No rio Itoupava (1 amostra coletada) foi detectada a presena de propanil ao nvel de 0,03 g L 1. No rio Jundi constatou-se a presena de alaclor com nveis de 0,72 g L1 e propanil em 0,05 g L-1 na nica amostra coletada. Em estudos realizados por Carabias-Martinez et al.11, para determinao de herbicidas em gua de rio usando a tcnica de SPME, foi detectada a presena de alaclor nas amostras analisadas. Estes estudos tambm mostraram que no foi detectada a presena de atrazina. Devido s dificuldades de correlacionar nossos dados com literatura brasileira para a mistura destes herbicidas em gua, relacionamos com alguns trabalhos cientficos internacionais. Lambropoulou et al.29, em guas de Rio Kalamas, detectaram atrazina e alaclor em concentraes mdias que variaram de 0,05 a 0,008 g L-1, respectivamente. Outros autores11 tambm analisaram guas de rios e subterrneas da Espanha e detectaram a presena de atrazina com nveis de 0,74 a 0,99 g L-1. Lambropoulou et al.12 encontraram atrazina em amostras de gua do rio Kalamas e os nveis variaram de 0,002 a 0,23 g L-1. Em 2006, Konstantinou et al.15 publicaram uma reviso avaliando os nveis de contaminao por pesticidas das guas dos rios de 1993 a 2004, sendo que das vrias amostras analisadas, 23% apresentaram contaminao por atrazina e os nveis variaram de 0,002 a 0,6 g L-1. Neste estudo, metade das amostras analisadas apresentou resduos de herbicidas em nveis abaixo do permitido pela legislao brasileira (2 g L-1 para atrazina e 20 g L-1 para alaclor e propanil). No entanto, cabe ressaltar que foram detectadas as presenas de alaclor em nossas amostras acima dos nveis aceitveis pela legislao europia (mximo de 0,1 g L-1 para pesticidas individuais e 0,5 g L-1 para pesticidas totais). De acordo com dados da literatura, herbicidas como atrazina tm sido freqentemente detectados em gua naturais30; embora ainda estejam sendo usados em muitos pases, foram recentemente banidos o seu uso na Itlia e na Alemanha, devido ao seu potencial txico. CONCLUSO Todas as amostras de gua analisadas apresentaram contaminao por pelo menos um dos herbicidas, e os nveis variaram de 0,14 a 0,72 g L-1 para alaclor e 0,02 a 0,05 g L-1 para propanil. Mesmo que no tenha sido detectada em nosso estudo uma concentrao dos herbicidas alaclor, propanil e atrazina acima da permitida pela Legislao Brasileira, cabe enfatizar a importncia de monitorar estes herbicidas, principalmente atrazina. A EPA estima que a exposio de 3 g L-1 de atrazina, que o limite mximo estabelecido, apresenta risco de 1/100.000 da pessoa ter cncer durante a vida. Da a necessidade de mtodos simples, rpidos e prticos, como a SPME, para serem aplicadas em anlise de rotina. A tcnica de SPME-GC-ECD apresentou bons resultados analticos quanto linearidade, limite de deteco e determinao, alm de reduzir o tempo de anlise, ser livre de solvente e atender Legislao Brasileira e Comunidade Europia. REFERNCIAS
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