CARACTERIZACIN DE CLULAS DEL EPITELIO ESCAMOSO DEL CRVIX

YESID FERNANDO SOSSA MENDOZA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA SEDE MANIZALES FACULTAD DE INGENIERA Y ARQUITECTURA INGENIERA ELECTRNICA MANIZALES 2001

CARACTERIZACIN DE CLULAS DEL EPITELIO ESCAMOSO DEL CRVIX

YESID FERNANDO SOSSA MENDOZA

Trabajo Final para optar al ttulo de Ingeniero Electrnico

Director GUSTAVO ADOLFO OSORIO L. Ingeniero Electrnico

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA SEDE MANIZALES FACULTAD DE INGENIERA Y ARQUITECTURA INGENIERA ELECTRNICA MANIZALES 2001

JUSTIFICACIN

La continua evolucin en el campo del tratamiento digital de imgenes ha promovido un aumento en el inters por la morfologa de las mismas, las redes neuronales, el procesamiento y reconocimiento de imgenes a color y los sistemas inteligentes de anlisis de imgenes.

Este desarrollo tecnolgico dado al tratamiento digital de imgenes ha tenido gran importancia en distintas aplicaciones de la medicina, biologa, ingeniera e industria. Es de gran importancia en medicina un buen desarrollo de nuevas tcnicas que efecten un anlisis ms prctico de las muestras. En este campo, el anlisis celular a nivel del epitelio vaginal, proporciona informacin para la deteccin de deformaciones celulares; que a su vez, puede llevar al diagnstico de enfermedades o la prevencin de las mismas

En la actualidad, casi todos los cientficos del mundo interesados en el estudio del cncer de cuello uterino aceptan que su diagnstico precoz constituye un problema de importancia prctica y social, que permite lograr el mantenimiento de la salud de la mujer y su plena incorporacin a la sociedad [30].

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

Disear un sistema que permita la identificacin de clulas del epitelio poliestratificado del crvix y de la vagina.

OBJETIVOS ESPECFICOS

1. Digitalizar muestras de citologa que contengan clulas de los siguientes tipos: !" Parabasales !" Intermedias !" Superficiales

2.

Caracterizar

clasificar

clulas

provenientes

de imgenes al

microscopio,

procedentes de muestras del epitelio escamoso del crvix y de la vagina. 3. Desarrollar un software que permita almacenar la informacin de los tipos de clulas en las muestras de tejido.

A Dios, gracias por todo. A mi Madre Maria Antonia y mi Padre Oscar. A mi Mamalia, Lilia Martnez y mi abuelo Efran Mendoza (q.e.p.d.). A Efran por tanta paciencia. A mi madrina Amanda Arana y familia. A toda mi Familia y amigos.

AGRADECIMIENTOS

El autor expresa sus agradecimientos a: Gloria Ftima Osorio, Medica, por sus orientaciones, enseanzas y disposicin para entender el campo de la citologa.

Rodrigo Villalobos, Medico, Residente de la unidad de Patologa del Hospital Universitario del Valle, por compartir sus conocimientos y asesora en la toma de las muestras citolgicas y la adquisicin de las imgenes, sin las cuales este trabajo no hubiera sido posible. Gustavo Adolfo colaboracin. Osorio, Ingeniero Electrnico, director de este trabajo por su

Flavio Augusto Prieto, Ingeniero Electrnico, por la disposicin y la indicacin prestada. German Castellanos, Ingeniero Electrnico, PhD y Eduardo Villegas, Ingeniero de Sistemas, jurados de este trabajo por su paciente revisin, correcciones y aportes realizados. El Grupo de Investigacin en Cncer de Cuello Uterino y Mama por el apoyo logstico brindado en la realizacin de este trabajo. Diana Carolina, Jos David, Carolina, Natalia y Familia, Maritza, Gabriela, Claudia Marcela, Alejandra, Alejandro, Jorge Ivn, Viviana, Yazmin, Claudia Pedraza y Marthica, mis compaeros, mis amigos. Gracias por tanta paciencia, generosidad y comprensin. Luis Alfredo, Carmenza, Ana Maria, lvaro, Cristina, Mnica, Carolina y Humberto, por esa confianza y apoyo siempre que lo necesit. A toda mi familia. VI

CONTENIDO
Pg. INTRODUCCIN 1. MARCO CONCEPTUAL 1.1 PROCESAMIENTO DIGITAL DE IMGENES 1.1.1 Adquisicin y Captura de Imgenes 1.1.2 Pre-procesamiento 1.1.3 Segmentacin 1.1.4 Representacin y Descripcin 1.1.5 Representaciones por Frontera - Cdigos de Cadena 1.1.6 Representaciones por Frontera - Firmas 1.1.7 Representaciones por Regiones 1.1.8 Descriptores de Fronteras - Descriptores Simples 1.1.9 Descriptores de Fronteras - Momentos 1.1.10 Descriptores por Regiones - Descriptores Simples 1.1.11 Descriptores por Regiones Momentos Bidimensionales. 1.1.12 Histograma. 1.1.13 Anlisis de Histograma. 1.1.14 Medidas de Localizacin. 1.1.15 Medidas de Localizacin Central.
!"

1 1 2 2 2 2 3 4 4 5 5 6 6 8 8 9 9 9 9 10 10 10 11

Media. o Media Aritmtica. Mediana

!"

1.1.16 Medidas de Dispersin

!" !"

Varianza Desviacin Tpica.

VII

1.1.17 ndices de Fisher, Anlisis Multivariado de Discriminantes de Fisher, Medidas de Correlacin. 1.2 CITOLOGA CERVICOVAGINAL 1.2.0 Fundamento de la Tcnica 1.2.1 Valoracin Hormonal 1.2.2 Valoracin Neoplsica 1.2.3 Valoracin Neoplsica - Metaplasia 1.2.4 Valoracin Neoplsica - Displasia 1.2.5 Valoracin Neoplsica - Carcinoma in situ 1.2.6 Descripcin de las Caractersticas 1.2.7 Tipos de Clulas 1.2.8 Tamao del ncleo 1.2.9 Forma del ncleo 1.2.10 Aumento de la relacin nuclear-citoplasmtica 1.2.11 Multinucleacin y multilobulacin 1.2.12 Koilocitos (Virus del papiloma humano VPH) 2. ANLISIS Y DESARROLLO 2.1 ADQUISICIN Y CAPTURA DE IMGENES 2.2 CARACTERIZACIN 2.2.1 Obtencin de contorno 2.2.2 Firmas 2.2.3 Media y Desviacin Estndar 2.2.4 Momentos 2.2.5 reas 2.2.6 Modelo RGB y HSI 3 ANLISIS DE RESULTADOS 3.1 EXAMEN DE LAS CARACTERSTICAS 3.2 ANLISIS DE FISHER Y PRUEBA DE CORRELACIN 4. CONCLUSIONES BIBLIOGRAFA ANEXOS
VIII

11 13 14 15 15 15 16 16 17 17 18 18 19 19 19 20 20 22 22 27 31 36 37 38 40 42 44 47

LISTA DE TABLAS
Pg. Tabla 1. Resumen de medidas para una clula basal. Tabla 2. Resumen de medidas para una clula superficial Tabla 3. Resumen de medidas para una clula intermedia Tabla 4. Resumen de medidas para una clula con neoplasia de alto grado Tabla 5. Caractersticas obtenidas Tabla 6. Caractersticas discriminantes segn ndices de Fisher Tabla 7. Caractersticas Dependientes 31 31 35 35 41 44 46

IX

LISTA DE FIGURAS
Pag. Figura 1. Direcciones utilizadas para codificar una frontera Figura 2. Firma de dos fronteras distintas Figura 3. a. Puntos en un espacio bidimensional. b. Puntos mezclados cuando se proyectan en una lnea. c. Puntos separados cuando se proyectan en una lnea Figura 4. Maduracin o diferenciacin escamosa de las clulas por capas Figura 5. Representacin de la zona de transformacin Figura 6. Epitelio Vaginal con las tres clases de CIN Figura 7. Tipos de clulas del epitelio escamoso del crvix. a. Basal. b. Parabasal. c. Intermedia. d. Superficial. Figura 8. Imagen tpica en una citologa vaginal Figura 9. Imagen de clulas intermedias. Figura 10. a. Esquema de prueba. b. firma correspondiente Figura 11. Pre-procesamiento de clulas. a. Imagen de una clula superficial. b. Binarizacin de la imagen. c. Obtencin del contorno. Figura 12. Firma resultante de un contorno no cerrado Figura 13. a. Contorno cerrado. b. Firma respectiva Figura 14. a Rotacin de un contorno cerrado. b. Firma respectiva Figura 15. a. Clula superficial. b. Contornos Figura 16. a. Clula Basal. b. Contornos de grosor de un pxel del ncleo y del citoplasma con centros en: Ncleo (67,37); Citoplasma (62,41) Figura 17. Clula Basal a. Firma del ncleo. b Firma del citoplasma Figura 18. Clula Basal. Histograma de distancias. Figura 19. a. Clula superficial. b. Contornos obtenidos Figura 20. a. Clula superficial. b..Firma del ncleo y del citoplasma Figura 21. Clula Superficial. Histograma de las distancias Figura 22. Media contra desviacin en ncleos de clulas superficiales y basales 3 4

12 14 16 17 18 20 21 23 24 24 25 25 27 29 29 29 30 30 30 32

Figura 23. a. Clula Intermedia; b. Contornos de grosor de un pxel del ncleo y del citoplasma con centros en: Ncleo (92,57); Citoplasma (76,61). 33 X

Figura 24. Clula Intermedia. a. Firma del ncleo. b. Firma del citoplasma Figura 25. Clula Intermedia. Histograma de distancias Figura 26. a. Clula con Neoplasia de Alto Grado; b. Contorno de grosor de un pxel del ncleo con centro en (37,44). Figura 27. Clula con Neoplasia de Alto Grado. Firma del ncleo Figura 28. Clula con Neoplasia de Alto Grado. Histograma de distancias Figura 29. Dispersin para clulas normales y clulas con neoplasia de alto grado Figura 30. Momento 2_0 contra Momento 0_2 Figura 31. Media del tono contra media de la saturacin para todas las clulas Figura 32. Diagrama general del experimento Figura 33. Discriminantes de Fisher para 32 caractersticas Figura 34. Discriminantes de Fisher para 15 caractersticas

33 34 34 34 35 36 37 39 40 45 46

XI

LISTA DE ANEXOS

Anexo A. Descripcin Citolgica Anexo B. ndices de neoplasia en Colombia. Anexo C. Tablas de valores de las 32 caractersticas. Anexo D. Tablas de Anlisis de Fisher. Anexo E. Procedimiento para el Anlisis Multivariado Discriminante de Fisher.

XII

GLOSARIO

CINO: masa redondeada de algunas clulas secretoras, alrededor del extremo sin salida del conducto de una glndula. ANAPLASIA: ausencia de diferenciacin [6], es una caracterstica clave de la transformacin maligna. ATIPIA: anomala propia de los tumores malignos en la que la clula sufre una diferenciacin de su morfologa o de sus funciones. Se denomina atipia nuclear a variaciones anormales del tamao, forma y constitucin del ncleo (hipercromasiaaneuploidia) generalmente con polimorfismo nuclear [17]. BIOPSIA: Muestra del tejido humano para examinarlo bajo un microscopio y hacer un diagnstico [27]. CNCER INVASOR: El desarrollo descontrolado y anormal de las clulas, resultando en un tumor maligno que puede invadir y destruir los tejidos normales cercanos [27]. CNCER: Un grupo de enfermedades en las cuales las clulas anormales crecen descontroladamente. Las clulas cancerosas se extienden a travs del cuerpo por medio de la sangre y del sistema linftico [27]. CARCINOMA IN SITU: Cncer localizado solamente en la capa superior del tejido, sin invadir tejidos profundos, es decir, limitados al propio epitelio que tapiza el rea cervical. Se le considera como un estado precanceroso [27]. CARCINOMA: Cncer que comienza en la mucosa o cubierta de los tejidos de un rgano[27]. CLULAS PARENQUIMATOSAS: Borde agresivo de la neoplasia[10]. CLULAS: Estructuras o unidades bsicas de todos los rganos del cuerpo [27].

XIII

CITLISIS: degeneracin especifica y completa de las clulas intermedias dejando libre el ncleo. CONIZACIN: Extraer, por medio de una operacin, tejido en forma de cono, del cuello del tero y el canal cervical. La conizacin se hace para diagnosticar o tratar una enfermedad en el cuello del tero [27]. CUELLO DEL TERO, O DE LA MATRIZ: Seccin estrecha en el extremo ms bajo del tero que se proyecta hacia la vagina [27]. DIFERENCIACIN: indica el grado en que las clulas parenquimatosas remedan las clulas normales comparables tanto morfolgica como funcionalmente. DISCARIOSIS: se presenta cuando la cromatina es muy irregular, desordenada y variable; observable en neoplasias malignas[17]. DISPLASIA: significa literalmente crecimiento desordenado. La displasia se encuentra sobretodo en los epitelios y se caracteriza por un conjunto de cambios entre los que se destaca la perdida de uniformidad de las clulas individuales y la perdida de su orientacin arquitectnica. Por ejemplo, la maduracin progresiva habitual de las clulas altas de la capa basal hacia las escamas aplanadas que ocupan la superficie puede perderse y ser sustituida por un revuelto desorden de clulas oscuras de aspecto basal. La displasia no necesariamente progresa hacia el cncer. Las alteraciones leves o moderadas que no afectan la totalidad del grosor del epitelio pueden ser reversibles y, cuando se eliminan las posibles causas que las provocan el epitelio puede recuperar la normalidad. [10]. Hay tres clasificaciones para la displasia: Leve, moderada y grave [27]. EOSINFILO: dcese de los leucocitos polinucleares cuyo citoplasma granulaciones sensibles a los colorantes cidos, como la eosina. ESTROMA: tejido conjuntivo que forma el armazn de un rgano o un tumor. EXAMEN GINECOLGICO: Examen mdico que normalmente incluye un examen del tero, vagina, ovarios, trompas de Falopio, vejiga y recto. Tambin incluye un examen mdico de los senos [27]. XODO: exfoliacin de grupos de clulas endometriales al final de la fase menstrual o en la posmenstrual, junto con una cantidad de histiocitos. contiene

XIV

HEMOGRAMA: cuadro que muestra el nmero de hemates y leucocitos por mm3 de la sangre de una persona y la proporcin por 100 que guardan entre s las distintas clases de leucocitos. HETEROCROMATINA: presentacin de la cromatina nuclear en forma condensada. Una disminucin en la funcin y metabolismo celular, como sucede en la atrofia simple se acompaa de un aumento de la heterocromatina. [17] HIPERPLASIA: representa un aumento en el numero de clulas de un rgano o tejido, que se puede por tanto acompaar de un incremento del volumen. [10,capitulo 2:34]. HSTICO, A: propio del tejido orgnico. HISTIOCITO: clula joven del tejido reticuloendotelial o del tejido conjuntivo. IN SITU: Frase latina que significa "localizado" o "en el sitio". Ver la definicin de carcinoma in situ [27]. KOILOCITO: Clula intermedia-superficial con gran halo claro perinuclear citoplasmtico y ncleos hipercromticos agrandados. MENOPAUSIA: La etapa en la vida de una mujer en que cesan naturalmente sus perodos de menstruacin de manera permanente; usualmente ocurre entre los 45 o 50 aos de edad [27]. METAPLASIA: La metaplasia [8], es un cambio reversible en el cual una clula adulta (epitelial o mesenquimal) es sustituida por otra de un tipo diferente. Tambin puede representar la sustitucin adaptativa de unas clulas ms sensibles al estrs por otros tipos de clulas que soportan mejor las condiciones adversas. La metaplasia adaptiva ms frecuente es la del epitelio cilndrico a escamoso o plano. La metaplasia implica una reprogramacin de las clulas madre. En un fumador las clulas epiteliales cilndricas ciliadas normales son reemplazadas por clulas epiteliales escamosas estratificadas, ms resistentes que pueden sobrevivir a costa de la perdida (para el organismo) de la produccin de moco. Por tanto la metaplasia es un arma de doble filo y en muchas circunstancias representa un cambio indeseable; es ms, los estmulos que predisponen a la metaplasia, si se mantienen, pueden inducir una transformacin cancerosa del epitelio metaplsico. MUCINOSO: relativo a la mucina, principal constituyente orgnico del moco. NEOPLASIA: literalmente expresa nuevo conocimiento y equivale a tumor. El eminente

XV

onclogo britnico Sir Rupert Willis define: Una neoplasia es una masa anormal de tejido con un crecimiento que sobrepasa al de los tejidos normales y no coordinado con el de estos que conservan el mismo carcter excesivo una vez concluido el estimulo que provoco el cambio. Esta masa amorfa carece de objeto, ataca al husped y es prcticamente autnoma [15]. PLVICO: Esta palabra se relaciona con la pelvis, la regin del cuerpo entre los huesos plvicos. Los rganos de la regin plvica incluyen el tero, la vagina, los ovarios, las trompas de Falopio, la vejiga y el recto [27]. PLEMORFISMO: variaciones de tamao y forma. POLIPLODIA: carcter del ncleo de la clula poliploide. POLIPLOIDE: dcese del ncleo de una clula que posee un nmero de cromosomas que es mltiplo de la dotacin cromosmica normal. ZONA DE TRANSFORMACIN: a la zona de transicin histopatolgica que est en la unin pavimentoso-columnar y que es capaz de transformarse, los colposcopistas la denominan zona de transformacin.

XVI

RESUMEN

El desarrollo tecnolgico dado al tratamiento digital de imgenes ha tenido gran importancia en distintas aplicaciones de la medicina, biologa, ingeniera e industria. Es de gran importancia en medicina un buen desarrollo de nuevas tcnicas que efecten un anlisis ms prctico de las muestras. Por ejemplo, el anlisis celular a nivel del epitelio vaginal proporciona informacin para la deteccin de deformaciones celulares; esto a su vez, puede llevar al diagnstico de enfermedades o la prevencin de las mismas. En este proyecto se analizan clulas del epitelio estratificado del crvix, bajo la premisa que las clulas exhiben caractersticas definidas conforme a un crecimiento determinado y programado. Se recolectaron imgenes de muestras citolgicas que contienen clulas Se emplea el examen de la firma a travs de un anlisis normales y clulas con Neoplasia de Alto y Bajo Grado, pertenecientes al epitelio escamoso del crvix. estadstico del histograma, el rea, los momentos bidimensionales y los centralizados y un estudio en los sistemas de color RGB y HSI. Se aplican los mtodos de ndices de Fisher, Anlisis Multivariado de Discriminantes de Fisher y Medidas de Correlacin. El software de aplicacin implementado permite obtener las caractersticas celulares descritas en este trabajo. Este trabajo se enmarca dentro de un proyecto para la construccin de una herramienta para el anlisis citolgico y que sirva para el prediagnstico de anomalas que puedan presentarse a nivel del tero y crvix como es el caso del cncer de cuello uterino.

XVII

INTRODUCCIN

Debido a que la gran mayora de casos de cncer de crvix (ms del 90%) podran y deberan ser detectados temprano a travs de la prueba de Papanicolau [26], la tasa de mortalidad actual es muy alta y refleja que, an en la actualidad, las pruebas de Papanicolau no se efectan en aproximadamente un tercio de las mujeres que cumplen los requisitos para esta prueba. Un adecuado tamizaje es el primer paso en el aumento de los niveles de morbilidad, con miras a disminuir los de mortalidad. Sin embargo, este objetivo tropieza con el factor econmico a la hora de emprender una campaa masiva de prevencin de la enfermedad, a travs de la deteccin de displasias en las citologas.

CONTENIDO
La implementacin de un sistema de diagnstico de bajo costo, debe contar con un perfil

TABLAS

adecuado de caractersticas en el momento de valorar la informacin suministrada. Entre otros factores se tienen: reas de los ncleos y los citoplasmas, relacin ncleocitoplasma, espectro adecuado de clulas de distintos tejidos, textura de los ncleos, estructura general de las clulas y porcentajes de presencia de clulas, por ejemplo, del epitelio escamoso.

FIGURAS

ANEXOS

El rea de procesamiento de imagen posee la ventaja de brindar varios esquemas de trabajo para el anlisis de la informacin que se tiene. este caso caracterizacin. Esto implica una sucesin de pruebas con trmino en el procedimiento o mtodo idneo a la necesidad planteada, en La extraccin de las caractersticas en clulas del epitelio crvix, para determinar los rasgos que establezcan estratificado escamoso del

diferencias en el momento de hacer una seleccin es el objeto de este estudio.

Este trabajo se enmarca dentro de un proyecto para la construccin de una herramienta para el anlisis citolgico y que sirva para el pre-diagnstico de anomalas que puedan presentarse a nivel del tero y crvix como es el caso del cncer de cuello uterino.

1.MARCO CONCEPTUAL

1.1 PROCESAMIENTO DIGITAL DE IMGENES

Tal y como se define en [33], se podra decir que la visin artificial describe la deduccin automtica de la estructura y propiedades de un mundo tridimensional, posiblemente dinmico, bien a partir de una o varias imgenes bidimensionales de ese mundo. Las imgenes pueden ser monocromticas (de niveles de gris) o multibanda, y pueden

CONTENIDO provenir de una o varias cmaras e incluso cada cmara puede ser fija o mvil. La visin artificial lleva asociada una enorme cantidad de conceptos relacionados con TABLAS
hardware, software, al igual que desarrollos tericos. En este captulo se presentan los pasos fundamentales para llevar a cabo una tarea de visin artificial.

FIGURAS

ANEXOS

Los mtodos que se mencionan en este captulo, fueron implementados en el marco del proyecto: Caracterizacin de Clulas del Epitelio Escamoso del Crvix, como herramientas para el procesamiento digital de imgenes.

Un sistema para el procesamiento digital de imgenes comprende cinco etapas fundamentales:

A. Adquisicin y captura de la imagen. B. Pre-procesamiento. C. Segmentacin. D. Representacin y descripcin. E. Reconocimiento e interpretacin.

1.1.1

Adquisicin y Captura de Imgenes.

La primera etapa en el proceso es la

adquisicin digital de la imagen. Para ello es necesario la utilizacin de un dispositivo (cmara) sensible a una determinada banda del espectro de energa electromagntica (espectro visible) y que produzca una seal elctrica de salida proporcional al nivel de energa detectado. Si la salida del dispositivo no est en formato digital se debe usar un conversor analgico digital (tarjeta digitalizadora). Luego de adquirir los datos Una vez obtenida la digitalizados, stos son almacenados en unidades de memoria.

imagen digital, el siguiente paso consiste en el pre-procesamiento de dicha imagen.

1.1.2 Pre-procesamiento. El preproceso de imgenes comprende: mejoramiento de

imgenes, que modifica una imagen para optimizar su apariencia en el mbito humano; la restauracin de imgenes que corrige la degradacin de imgenes, i.e. un desenfoque por movimiento; y la compresin de imgenes, que pretende la representacin de

CONTENIDO imgenes de forma compacta manteniendo un cierto nivel de calidad.

TABLAS

1.1.3 Segmentacin. Definida en sentido amplio, su objetivo es dividir la imagen en las

FIGURAS
partes u objetos que la conforman cuyos pxeles poseen atributos similares (por ejemplo, niveles de grises), donde cada regin segmentada suele tener un significado fsico dentro de la imagen. La segmentacin se detendr cuando los objetos de inters de una aplicacin hayan sido aislados.

ANEXOS

1.1.4 Representacin y Descripcin. Una vez que una imagen ha sido segmentada en
regiones es necesario representar y describir dichos pxeles de forma que puedan ser procesados posteriormente, es decir, extraer caractersticas de ella que permitan representarla y describirla matemticamente.

Podra decirse que existen dos opciones: internas, es decir, descriptores de regin.

representar una regin en funcin de su

frontera, los descriptores de contorno; y representar en funcin de sus caractersticas

3 La representacin basada en la frontera se utiliza ms cuando el nfasis es en la forma. La representacin basada en la regin se usa ms cuando se buscan propiedades como color y textura. En general, es conveniente que los descriptores, adems de simples, precisos y con gran poder de discriminacin, sean invariantes, si es posible, ante escalado, posicin y rotacin del objeto en la imagen; Por ejemplo, se puede decidir por una representacin basada en la frontera y describir la frontera mediante su longitud, el nmero de concavidades que tiene, y dems.

1.1.5 Representaciones por Frontera - Cdigos de Cadena. Los cdigos de cadena

son usados para representar la frontera sobre la base de un conjunto de segmentos, de una longitud y direccin especfica, conectados entre s. Por lo general, esta representacin est basada en segmentos de 4 u 8 direcciones, codificadas partiendo de 0 (direccin horizontal-derecha) y aumentando en sentido anti-horario. Ver Figura 1.

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

Figura 1. Direcciones utilizadas para codificar una frontera [3].

El procedimiento bsico de obtencin del cdigo de un contorno consiste en recorrer en sentido horario la frontera, mientras se va asignando el cdigo que ms se aproxima a sta. Una manera trivial de hacer esto es unir con un segmento cada par de pxeles adyacentes. Esta solucin, sin embargo, no es aceptable puesto que el cdigo resultante sera muy largo y adems, muy sensible al ruido existente.

1.1.6

Representaciones por Frontera - Firmas.

Una firma es una representacin La

funcional unidimensional de una frontera y puede ser generada de varias formas.

ms sencilla es dibujar la distancia desde el centroide a la frontera en funcin del ngulo, como se ve en la Figura 2. Independientemente de como sea generada la firma, el objetivo es reducir la frontera a una representacin unidimensional, que en principio ser ms fcil de describir que la frontera original bidimensional.

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS
Figura 2. Firma de dos fronteras distintas [3].

ANEXOS

El proceso descrito para generar la firma es invariante por traslaciones pero no es invariante con relacin a la escala y rotacin. Para conseguir la normalizacin por rotacin la idea puede ser comenzar siempre por el mismo punto para generar la firma. El punto puede ser el de distancia mxima al centroide.

1.1.7 Representaciones por Regiones. La forma de un objeto puede representarse

directamente por la regin que ocupa. Por ejemplo, la matriz binaria

1, si (m,n ) u (m, n) = 0, en caso contrario

(1.1)

5 es una representacin de la regin . Obviamente la representacin por fronteras es ms eficiente que este procedimiento. Representaciones caractersticas de este tipo son los cdigos de longitud variable y las proyecciones.

1.1.8 Descriptores de Fronteras - Descriptores Simples. Los descriptores ms simples

y en ocasiones suficientes para caracterizar un objeto son: principal, y el permetro. el centroide, la direccin Los dos primeros aportan informacin, no para reconocer el

objeto, sino para localizarlo en la imagen y en su caso, en el espacio.

El clculo del centroide se efecta promediando las coordenadas x e y de los pxeles del contorno. La direccin o eje principal, fundamental para muchas aplicaciones robticas como el agarre y manipulacin de objetos, define la recta que ajusta la nube de puntos del contorno, tomando como error a minimizar las distancias perpendiculares de stos a la recta. Igualmente, este eje principal determina la direccin para la cual el momento de inercia de los puntos del contorno es mnimo. El permetro viene dado por la

CONTENIDO

TABLAS

longitud, en pxeles, del contorno del objeto. Si contamos el nmero de pxeles en el

FIGURAS

contorno tendremos una aproximacin de su longitud; si la frontera ha sido codificada usando cadenas de cdigos, el nmero de componentes verticales ms el de horizontales, ms el de diagonales multiplicados por 2 nos da la longitud exacta.

ANEXOS

1.1.9 Descriptores de Fronteras - Momentos. La forma de una frontera (y su firma)

puede representarse mediante la utilizacin de momentos. Considere los segmentos de frontera representados como una funcin unidimensional variable r; si se analiza la amplitud de histograma:

g(r) de una determinada

g como una variable aleatoria v y se forma su

p(vi), i = 1, 2,..., K
donde

(1.2)

K es el nmero de valores que toma la variable, entonces se pueden definir los

diferentes momentos,

Vn (v ) = (v i m ) p (v i )
n i =1

(1.3)

donde

m = (vi pi )
i =1

(1.4)

donde m corresponde a la estimacin de la media y

V2 a la de varianza.

1.1.10 Descriptores por Regiones - Descriptores Simples. El rea es el nmero de

pxeles comprendidos en su contorno; el concepto de permetro es el mismo que para los descriptores por frontera. Puesto que estas dos caractersticas, permetro (per) y rea

CONTENIDO

(a), dependen del tamao del objeto, suele utilizarse la combinacin de ambos:

TABLAS

d = per 2 / a
que es adimensional y, por tanto, invariante al tamao.

(1.5) Este descriptor se denomina

FIGURAS

densidad, a veces circularidad, ya que alcanza el mnimo para un crculo y es igual a 4.

ANEXOS

1.1.11 Descriptores por Regiones Momentos Bidimensionales. Dada una funcin

continua

f(x, y) se define su momento de orden p+q como

m pq =

- -

x p y q f(x, y) dx dy

para

p, q +

(1.6)

El problema de esta descripcin es que, en principio, no es invariante. traslaciones) como se observa a continuacin:

Centrando el

sistema de referencia en el objeto se obtienen los momentos centralizados (invariantes a

pq =
con,

- -

(x x ) (y y ) f (x,y )dx dy
p q

(1.7)

x = m10 /m00

y = m01 /m00

(1.8)

como coordenadas del centroide o centro de masas del objeto. En el caso de funciones discretas, las anteriores se convierten en sumas.

Los momentos centrales normalizados, notados

pq

se definen mediante

CONTENIDO

siendo

pq

pq 00

(1.9)

TABLAS

= (p + q)/ 2 + 1

FIGURAS

ANEXOS

Los principales momentos centrales normalizados son:

00 = m00 10 = 0 01 = 0 02 = m20 xm10 20 = m02 ym01

11 = m11 ym 30 = m30 3xm20 + 2m10 x

2 2

12 = m12 2 ym11 xm02 + 2 y m10 21 = m21 2 xm11 ym20 + 2 x m01 03 = m03 3 ym02 + 2 y m01
2 2

(1.10)

Los momentos

20 y 02 son los momentos de inercia del objeto con respecto a los ejes
x e y, respectivamente.
Es importante notar que a partir de los

de coordenadas

8 momentos centralizados de orden dos y tres se pueden obtener siete momentos invariantes a traslaciones, rotaciones y escalado [3]. Estas ecuaciones se encuentran en (1.11).

1 = 20 + 02
2 2 = (20 - 02)2 + 4 11

3 = (30 + 312)2 + (321 - 03)2 4 = (30 + 12)2 + (21 + 03)2 5 = (30 - 312)(30 + 12)[(30 + 12)2 - 3(21 + 03)2]
+(321 + 03)(21 + 03)[3(30 + 12)2 - (21 + 03)2]

(1.11)

6 = (20 - 02)[(30 + 12)2 - (21 + 03)2]

+ 411(30 + 12) (21 + 03)

7 = (312 - 30)(30 + 12)[ (30 + 12)2 - 3(21 + 03)2]

CONTENIDO

+ (312 - 30) (21 + 03)[3(30 + 12)2 (21 + 03)2]

TABLAS

FIGURAS

1.1.12 Histograma. Un histograma es la tabulacin de la frecuencia de ocurrencia de

una variable aleatoria en determinado intervalo. Puede construirse graficando el nmero de veces que se halla la variable aleatoria en cada intervalo, contra el valor de la variable. El histograma permite obtener una primera impresin visual sobre la distribucin de los datos.

ANEXOS

1.1.13 Anlisis de Histograma. La descripcin estadstica de histogramas se refiere a la

coleccin, descripcin y anlisis de informacin numrica; dicha informacin podra representar la medida de una caracterstica fsica en particular. En el anlisis de histogramas, se emplean los mtodos cuantitativos [22], que consideran un conjunto de medidas e indicadores numricos obtenidos como funciones de los datos; entre las principales medidas estn las de localizacin, de variabilidad y de forma.

1.1.14 Medidas de Localizacin.

Las medidas de posicin nos facilitan informacin

sobre la serie de datos que estamos analizando. Estas medidas permiten conocer diversas caractersticas de una serie de datos.

Las medidas de localizacin son de dos tipos:

Medidas de localizacin central: datos.

informan sobre los valores medios de la serie de

Medidas de localizacin no centrales: informan de como se distribuye el resto de los valores de la serie.

1.1.15 Medidas de Localizacin Central. Las principales medidas de posicin central

son las siguientes: la media aritmtica (simple, ponderada, para datos en frecuencias)

CONTENIDO

que presupone la uniformidad de la distribucin, por lo que es muy sensible a valores extremos; la mediana, que no est afectada por valores extremos y la moda, donde la distribucin alcanza su mximo ( pueden existir varias modas en una distribucin) [32].

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

Media. Es el valor medio ponderado de la serie de datos. Se pueden calcular diversos

tipos de media, siendo las ms utilizadas, la media aritmtica y la media geomtrica.

Media Aritmtica.
define como:

Para un conjunto general de datos

x1, x2, x3, ....xn,

la media se

x1 + x 2 + x... + x n 1 n mx = x = = xi n n i =1
histograma. En este caso la media estar dada por:

(1.12)

Si los valores de los datos ocurren con cierta frecuencia f1, f2, f3,...fn, como en un

10

m=

fx
i

donde

F = f1+ f2 +...+ fn.

(1.13)

La media utiliza todos los valores de la serie, por lo que abarca toda su informacin. Sin embargo, ocurre que su valor (tanto en el caso de la media aritmtica como geomtrica) se puede ver muy influido por valores anmalos, que se aparten en exceso del resto de la serie, que podran condicionar en gran medida el valor de la media, perdiendo sta representatividad [21].

Mediana. Es el valor de la serie de datos que se sita justamente en el centro de la

muestra (un 50% de valores son inferiores y otro 50% son superiores). No presentan el problema de estar influido por los valores extremos, pero en cambio no utiliza en su clculo toda la informacin de la serie de datos (no pondera cada valor por el nmero de veces que se ha repetido).

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

1.1.16 Medidas de Dispersin. Las medidas de dispersin son necesarias para ampliar
la descripcin de la distribucin, ya que promedios similares son producidos por distribuciones con recorrido diferente. Las medidas de dispersin ms utilizadas son el rango (diferencia entre el valor mayor y menor), el rango semiintercuartlico, desviacin media, la desviacin tpica y la varianza. la

ANEXOS

Varianza. Mide la distancia existente entre los valores de la serie y la media. Se calcula
como la sumatoria de las diferencias al cuadrado entre cada valor y la media, multiplicadas por el nmero de veces que se ha repetido cada valor. ecuacin: La sumatoria obtenida se divide por el tamao de la muestra. La varianza se presenta en la siguiente

2 x

(x1 x )2 + (x2 x )2 + ... + (xn x )2 =

n

1 n 2 (xi x ) n i =1

(1.14)

11 La varianza siempre ser mayor que cero. Mientras ms se aproxima a cero, ms concentrados estn los valores de la serie alrededor de la media. Por el contrario, mientras mayor sea la varianza, ms dispersos estn.

Desviacin Tpica.

Para evitar tener que trabajar con las unidades cuadradas de la

varianza, se extrae su raz cuadrada.

S x = S x2

(1.15)

1.1.17 ndices de Fisher, Anlisis Multivariado de Discriminantes de Fisher y Medidas

CONTENIDO

de Correlacin. Los ndices de Fisher se obtienen de la siguiente formula

TABLAS

Fij =

(m

mj )

i2 + 2 j

para todo

j>i

(1.16)

FIGURAS

ANEXOS

ij es la combinatoria de clases; mi , mj son las medias y i2 , 2 son las varianzas j de las clases i y j correspondientes.
donde

Este proceso se realiza para cada caracterstica y se promedia, obtenindose un ndice de Fisher particular. caractersticas. De esta forma, tendremos n ndices de Fisher para n Estos ndices proveen la informacin de cuales caractersticas son las

ms discriminantes. Entre ms alto, ms discriminante la caracterstica. El anlisis multivariado discriminante de Fisher [34] agrupa imgenes de la misma clase y separa imgenes de diferentes clases. Las imgenes se proyectan de un espacio Ndimensional a un espacio imgenes). Por ejemplo, C-1 dimensional (donde C es el nmero de clases de considere dos conjuntos de puntos en un espacio

bidimensional que se proyectan en una sola lnea (ver Figura 3a). Dependiendo de la direccin de la lnea, los puntos se pueden mezclar (ver Figura 3b) o separar (ver Figura

12 3c). Este anlisis encuentra la lnea que mejor separa los puntos. El anexo D contiene una explicacin detallada del mtodo para calcular los discriminantes de Fisher.

a.

b.

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

c. Figura 3. a. Puntos en un espacio bidimensional. b. Puntos mezclados cuando se proyectan en una lnea. c. Puntos separados cuando se proyectan en una lnea [34].

Las medidas de correlacin se utilizan para medir el grado de asociacin o de relacin entre las distintas variables. El coeficiente de correlacin ( R ) mide el nivel de asociacin entre dos variables. Puede calcularse como:

R=

COV(x,y) S x(S y )

(1.17)

13 donde e

COV (x,y) es la matriz de covarianzas y Sx , Sy son las desviaciones estndar de x

y respectivamente. Las siguientes son algunas de las propiedades del coeficiente de

correlacin:

Su rango es: 1 R 1. El signo del Coeficiente depende del signo de la covarianza o de la pendiente. El coeficiente es de naturaleza simtrica; lo anterior implica que el coeficiente de correlacin entre X y Y (RXY) es igual al coeficiente de correlacin entre Y y X, (RYX). Si X y Y son estadsticamente independientes, el coeficiente de correlacin entre ellos es cero, pero si R=0, no se puede inferir que las dos variables sean independientes.

1.2 CITOLOGA CERVICOVAGINAL.

CONTENIDO

TABLAS

Descrita por Papanicolau y Traut en 1941, se ha convertido en el mtodo sencillo y econmico ms adecuado para el tamizaje del cncer del cuello uterino. La citologa es un anlisis que nos facilita una muestra de las clulas de la superficie del crvix (extremo del tero que lo comunica con la vagina). Bsicamente es una prueba para detectar los cambios pre-cancergenos del cncer cervical. Debe establecerse desde el comienzo que la citologa vaginal no es un procedimiento de diagnstico por s solo, ya que los cambios citolgicos anormales encontrados a travs de ella deben siempre ser confirmados mediante el estudio histolgico del tejido obtenido por la biopsia o la conizacin, cuando esta ltima est indicada.

FIGURAS

ANEXOS

En pases y regiones como Escocia, British Columbia, Islandia, Manitoba en el Canad, Condado de Maribo en Dinamarca, Condado de Ostfold en Noruega, Suecia y en los Estados Unidos, se ha observado una disminucin de la mortalidad por cncer del cuello uterino, tras la introduccin de programas de tamizaje por citologa [19]. El cncer de cuello uterino constituye la primera causa de cncer en Colombia en general y la primera en mujeres (Anexo caso Colombia). El pronstico de esta enfermedad depende en gran medida de lo avanzada que se encuentre la enfermedad en el momento del diagnstico.

14

1.2.0 Fundamento de la Tcnica. El tracto genital femenino est constituido por el

epitelio glandular y el epitelio plano escamoso multiestratificado (ver anexo Descripcin Citolgica. Citologa). El segundo epitelio, objeto de este estudio, est sujeto a la accin del ciclo hormonal de la progesterona y el estrgeno durante el perodo menstrual, el cual induce la proliferacin (incremento del nmero de clulas), la diferenciacin o maduracin (desarrollo de las caractersticas funcionales y morfolgicas) [24]. maduracin tiene un perodo entre 4 y 5 das. (ver Figura 4). La

El fundamento de la tcnica est sustentado en dos conceptos bsicos: la diferenciacin escamosa de las clulas, es decir las clulas en sus respectivos estados o capas, influenciadas por el ciclo hormonal, i.e. basal, parabasal, intermedia y superficial (ver Figura 4); y la carcinognesis, que se manifiesta por las caractersticas del citoplasma y del ncleo.

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

Figura 4. Maduracin o diferenciacin escamosa de las clulas por capas [11].

15 El segundo concepto se divide igualmente en cuatro niveles: normal; reacciones (ver Anexo

proliferativas benignas como metaplasia; neoplasia intraepitelial, displasia o carcinoma in situ; y finalmente, carcinoma (microinvasivo y francamente invasor). Descripcin Citolgica). Lo expuesto permitir valorar adecuadamente, en la mayora de los casos, el estado de la mucosa cervicovaginal tanto en el aspecto hormonal como neoplsico [25]; sin embargo, este trabajo slo contempla la valoracin neoplsica.

1.2.1 Valoracin Hormonal. El epitelio vaginal se modifica a lo largo del ciclo menstrual
segn la cantidad y tipo de hormonas presentes en la sangre. Estas modificaciones pueden observarse en las clulas de la muestra y es factible inferir los valores hormonales en el extendido; por consiguiente, se expresa en funcin de la presencia porcentual de los tres tipos de clulas (Ver Anexo Descripcin Citolgica).

CONTENIDO

1.2.2 Valoracin Neoplsica. En muchos casos las anormalidades celulares pueden ser
TABLAS
determinadas por medio de la citologa, basado en las alteraciones morfolgicas, en la presencia de clulas inflamatorias o de agentes microbiolgicos [24] (Ver Anexo Descripcin Citolgica tipos de clulas). La valoracin considera los siguientes trminos: metaplasia; neoplasia intraepitelial, lesin escamosa intraepitelial o ambas; esta ltima incluye a la displasia y el carcinoma in situ. La valoracin neoplsica se fundamenta en las alteraciones nucleares (aumento del tamao de los ncleos, hipercromatismo (muy oscuros, tambin llamada picnosis), irregularidad de sus contornos y dems). [25].

FIGURAS

ANEXOS

1.2.3

Valoracin Neoplsica - Metaplasia.

Es la sustitucin del epitelio glandular

endocervical por otro de tipo escamoso en respuesta a diversos estmulos (pH, endocrinos, trauma, inflamacin, etc.). La zona de metaplasia entre epitelio original escamoso y el endocervical se denomina zona de transformacin1 (ver Figura 5), sitio donde se van a originar la gran mayora de los carcinomas escamosos, de ah que sea fundamental tomar de aqu suficiente nmero de clulas. Hay que tener en cuenta que la localizacin de la zona de transformacin cambia gradualmente segn la edad,
1

Algunos autores utilizan el termino UPC, unin pavimentoso-columnar.

16 avanzando cada vez ms hacia endocrvix. La metaplasia, por otra parte, es tan comn que se considera un proceso fisiolgico normal [25].

Figura 5. Representacin de la zona de transformacin [11].

1.2.4 Valoracin Neoplsica - Displasia. La displasia atae al control de la divisin

celular y como ella pierde gradualmente la supervisin de funciones bsicas celulares,

CONTENIDO

esto es, la divisin y la diferenciacin, provocando la transformacin neoplsica.

Las

clulas entonces retienen su capacidad mittica, pero no se diferencian adecuadamente

TABLAS

conforme ascienden en el epitelio, por lo que dicha proliferacin es desordenada [25]. (Ver Anexo Descripcin Citolgica. Displasia).

FIGURAS

ANEXOS

1.2.5 Valoracin Neoplsica - Carcinoma in situ. El carcinoma in situ se presenta

una vez se supera la etapa de neoplasia, podra decirse que, sin tratamiento, es el siguiente paso en la evolucin de la enfermedad; las clulas cada vez se diferencian menos, perdiendo entonces sus caractersticas escamosas hasta que todo el espesor del epitelio est constituido por clulas indiferenciadas, atpicas, de morfologa basaloide. Generalmente se presentan 2 tipos: el carcinoma escamocelular y el adenocarcinoma.

El carcinoma escamocelular (epidermoide) comprende aproximadamente el 90% de los cnceres cervicales, mientras que el adenocarcinoma comprende aproximadamente el 10% de los mismos. Los carcinomas adenoescamosos y carcinomas de clulas pequeas son relativamente poco frecuentes. Se han descrito ocasionalmente sarcomas primarios cervicales y tambin se ha informado sobre la existencia de linfomas malignos

17 cervicales, tanto primarios como secundarios (Ver Anexo Descripcin Citolgica.

Carcinoma). La diferencia esencial entre displasia y carcinoma in situ es la presencia o ausencia, respectivamente, de cualquier signo visible de diferenciacin escamosa en las clulas anormales[11] (Ver Anexo Descripcin Citolgica).

1.2.6 Descripcin de las Caractersticas. La intensidad de las alteraciones nucleares,

la relacin ncleo / citoplasma y las caractersticas citoplasmticas nos permitirn clasificar la lesin como displasia leve, moderada y severa (CIN I, CIN II Y CIN III) y carcinoma in situ [25]. Citolgica). Esto se exhibe en la Figura 6 (Ver Anexo Descripcin

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS
Figura 6. Epitelio Vaginal con las tres clases de CIN [25].

1.2.7 Tipos de Clulas. Por regla general en un extendido normal se presentan clulas
superficiales, intermedias y parabasales. La existencia de clulas de la capa ms interna (capa basal) es sntoma inequvoco de anormalidad; es decir, la aparicin de este tipo de clulas informa la inmadurez o no-diferenciacin del tejido ms externo del crvix. Si la mujer es menopusica, se suministran estrgenos y se presta mucha ms atencin a las dems caractersticas con el fin de obtener un diagnostico ms certero. Es importante mencionar que dos de los criterios que permite diferenciar entre clulas basales, clulas parabasales, clulas intermedias y clulas superficiales son: la relacin ncleo citoplasma y la distribucin de cromatina en el ncleo, sin detrimento de las diversas caractersticas morfolgicas que poseen cada tipo de clula. Las figuras 7a, 7b, 7c y 7d,

18 son representativas de los cuatro tipos de clulas Caractersticas Celulares). (Ver Anexo Descripcin Citolgica.

a.

b.

CONTENIDO

TABLAS
c. d. Figura 7. Tipos de clulas del epitelio escamoso del crvix. a. Basal. b. Parabasal. c. Intermedia. d. Superficial.

FIGURAS

ANEXOS

1.2.8 Tamao del Ncleo. La evaluacin de la anormalidad del tamao nuclear se basa
en compararlo con el tamao de una clula normal del mismo tipo de tejido, y no en el tamao absoluto. El tamao nuclear de las clulas somticas normales es distinto de un tejido a otro y la relacin nuclear-citoplasmtica depende del grado de maduracin de la clula. Las clulas basales del epitelio pavimentoso estratificado tienen una relacin nuclear-citoplasmtica mayor que las superficiales. Una relacin nuclear citoplasmtica aumentada o disminuida se compara con las del resto del tejido originario normal.

1.2.9 Forma del Ncleo. Las clulas epiteliales normales poseen ncleos redondos u
ovales de membranas nucleares lisas y delicadas [11]. Los ncleos pueden deformarse por una alteracin patolgica, que puede ser neoplsica o degenerativa, o a causa de un

19 artificio. Las anormalidades morfolgicas son polidricas con muchas caras, poligonales con angulaciones mltiples y ncleos multilobulillares con varios lobulillos que dan la impresin de ser varios ncleos fusionados entre s.

1.2.10 Aumento de la Relacin Nuclear - Citoplasmtica. La relacin entre el volumen

nuclear y el citoplasmtico se mantiene dentro d lmites constantes en las clulas normales. El aumento del componente nuclear de esta relacin [11], es uno de los rasgos ms distintivos de malignidad. La relacin nuclear-citoplasmtica (relacin N/C) no slo es valiosa para distinguir malignidad, sino que da la pauta del grado de diferenciacin de la clula cancerosa; cuanto menos diferenciadas son las clulas cancerosas, mayor es la relacin N/C. Puede ocurrir agrandamiento nuclear en clulas no malignas por irradiacin, administracin de agentes alquilantes, inflamacin, metaplasia y regeneracin, pero en estos estados las clulas no malignas exhiben un

CONTENIDO aumento de tamao general y conservan la relacin N/C dentro de lmites benignos.

TABLAS

1.2.11 Multinucleacin y Multilobulacin. La multiplicacin y pronunciada indentacin

FIGURAS
o plegamiento de los ncleos se deben a mitosis anormales. La diferenciacin entre multinucleacin maligna y, benigna debe basarse en la alta relacin nuclear-

ANEXOS

citoplasmtica, en la mayor cantidad de material cromtico y en la irregularidad de su distribucin, todo lo cual es caracterstico de malignidad. En la multinucleacin benigna los ncleos son de tamao y forma uniformes y de igual contenido de cromatina.

1.2.12 Koilocitos (Virus del papiloma humano VPH).

Un aspecto de trascendental

importancia hoy da es la identificacin de mujeres afectadas por condiloma en relacin con la infeccin por el virus del papiloma humano (VPH), agente del que cada vez hay ms evidencia de su relacin con el carcinoma de crvix. Con la toma citolgica cervicovaginal se puede identificar un gran porcentaje de casos, ya que existe un cuadro citolgico muy caracterstico, tal como la presencia de koilocitos. Desgraciadamente, no siempre se observan dichas clulas y, adems, disminuyen progresivamente en nmero conforme se incrementa la severidad de la displasia (aunque est ligada a dicha infeccin), siendo excepcionales en casos de cncer invasivo [25].

20

2 ANLISIS Y DESARROLLO

2.1 ADQUISICIN Y CAPTURA DE IMGENES

Las primeras imgenes de las muestras de citologas vaginales se obtuvieron en el laboratorio del Grupo de Investigacin en Cncer de Cuello Uterino y Mama de la Universidad de Caldas (ver Figura 8). Estas fueron tomadas por medio de un microscopio MEIJI TECNO con un lente 0.25 160/0.17. Dicho microscopio tiene acoplada

CONTENIDO una cmara JAVELIN SYSTEMS (JE3942-A). La salida de la cmara se conecta a una de las entradas de vdeo de un PC el cual la guarda en formato pct. La tincin utilizada en TABLAS
las muestras citolgicas es hematoxilina-eosina.

FIGURAS

ANEXOS

Figura 8. Imagen tpica en una citologa vaginal.

21 Este procedimiento slo se realiz una vez en el desarrollo del presente trabajo, obtenindose imgenes con baja calidad de 25 clulas del tipo superficial; esto, en parte a la inexperiencia en el manejo del sistema, lo cual origin una agrupacin de regiones una vez la imagen se lea en un PC.

Buscando una mejor adquisicin de imgenes, se recurri al laboratorio de Patologa de la Universidad del Valle. Aqu se utiliz un microscopio Olympus modelo CH-2, binocular con luz halgena. Para tomar la imagen se ajusta en uno de los objetivos, una cmara Pixera Profesional que a su vez se comunica con una tarjeta PCI. es tpica de las dems obtenidas por este procedimiento. laboratorio es la descrita por Papanicolau. Los archivos de imagen se obtienen utilizando una unidad de escritura en CD. La imagen de la Figura 9 La tincin utilizada en este

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

Figura 9. Imagen de clulas intermedias.

22

2.2 CARACTERIZACIN

La idea es representar el contorno de la clula por mtodos como cdigo de la cadena, firma y dems, buscando relaciones que vislumbren una caracterizacin de la clula.

2.2.1 Obtencin de contorno. Se estudiaron diferentes filtros de pre-procesamiento de

imagen con el nimo de determinar cual o cuales podran mejorar la caracterizacin. De aqu se determin que los ms eficientes eran aquellos que definan el contorno, esto es: Prewitt o Pasaaltos con previa binarizacin [1]; a continuacin, la imagen resultante se introduca al algoritmo de la firma. El algoritmo requiere que se ubique el centro de la figura y posteriormente hace un barrido de su contorno estableciendo una funcin unidimensional con base en una bidimensional.

CONTENIDO

TABLAS

En esta etapa preliminar, el centro de la imagen se calcula obtenindose el pxel ms septentrional (ymin) y el ms meridional (ymax) para obtener la coordenada en

y;

FIGURAS

igualmente se obtiene el pxel ms oriental (xmax) y el ms occidental (xmin) para la coordenada en x. Las coordenadas del centro se definen como:

ANEXOS

(C

y y min x max x max , C y ) = max , 2 2

(2.1)

Para efectos de prueba se introdujo la imagen de un cuadrado ( ver Figura 10a), obtenindose la Figura 10b:

23

a.

b. Figura 10. a. Esquema de prueba. b. Firma correspondiente.

CONTENIDO

TABLAS
Para el caso de las clulas se requieren varias condiciones; la primera es que no exista ruido por fuera de los contornos de la clula, la segunda, que el contorno este muy bien definido. Esto se logr, al inicio del trabajo, con una binarizacin (Figura 10b), aplicacin de filtros de Mediana, erosin, filtro pasabajos y filtro pasaltos (Figura 10c). El resultado del proceso descrito es visualizado en la Figura 11.

FIGURAS

ANEXOS

Estos algoritmos fueron puestos en prctica con la colaboracin de miembros que trabajan en el PCI2, obtenindose las Figuras 11b y 11c a partir de la imagen de una clula proveniente de una muestra obtenida del Instituto Caldense de Patologa.

Grupo de Percepcin & Control Inteligente.

24

a.

b.

c.

Figura 11. Pre-procesamiento de clulas. a. Imagen de una clula superficial. b. Binarizacin de la imagen. c. Obtencin del contorno.

La Figura 11c se introduce al algoritmo de la firma arrojando como centro la posicin en

CONTENIDO pxeles (78,79); ntese que el contorno de la figura 11c no se encuentra cerrado y se
refleja en la firma obtenida (ver Figura 12).

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

Figura 12. Firma resultante de un contorno no cerrado.

25 Al cerrar el contorno de la imagen anterior, se obtiene la Figura 13a con centro en (78,87). La firma correspondiente se encuentra en la Figura 13b. Observe que al rotar la imagen de la Figura 13a, obtenindose la Figura 14a, su firma, visualizada en la Figura 14b, no es la misma y su centro cambia ubicndose en (95,104).

CONTENIDO
a.

TABLAS
b. Figura 13. a. Contorno cerrado. b. Firma respectiva.

FIGURAS

ANEXOS

a.

b. Figura 14. a. Espejo de un contorno cerrado. b. Firma respectiva.

26 De estos resultados se precisan 3 elementos; primero, la imagen debe tener una curva completamente cerrada, en virtud de evitar romper la continuidad de la firma; segundo, tener una firma invariante a la posicin que asuma la clula, con el fin de evitar distintas firmas dismiles para un tipo particular de clula; y tercero, obtener un contorno con grosor de un slo pxel, debido a que pueden presentarse dos distancias para un mismo ngulo o el algoritmo puede cerrarse sobre si mismo sin representar a todo el contorno.

Con la idea de darle una mayor continuidad a las actividades realizadas dentro del PCI, este trabajo de grado utiliza uno previo denominado: Segmentacin de Clulas del Epitelio Escamoso del Crvix[1]. El trabajo de grado en mencin genera, a partir de clulas solas, perfiles de citoplasma y ncleo con un grosor de un solo pxel. Para lograr este objetivo se siguen los siguientes pasos.

CONTENIDO
A. Apertura de la imagen.

TABLAS

B. Aplicacin del perfil en componente verde (Green). C. Empleo del filtro de mediana. D. Opresin del cursor del mouse en el centro tentativo del ncleo de la clula presente en la imagen. E. Administracin del algoritmo de Perfil Completo.

FIGURAS

ANEXOS

El ltimo paso es modificar los valores que especifican los niveles de intensidad, el promedio de trabajo, los lmites que determinan las fronteras de ncleo y de citoplasma, y el nmero de perfiles. Una vez concluido este proceso se obtiene una imagen como se observa en la Figura 15b. La distribucin de colores no es coyuntural; se aprovecha esta caracterstica para facilitar el proceso de recorrido de la imagen, obtenindose dos mscaras: una para analizar el ncleo, la otra para analizar el citoplasma. Se presenta la Figura 15a para visualizar la exactitud de la delimitacin de contornos.

27

a.

b.

Figura 15. a. Clula superficial. b. Contornos

2.2.2 Firmas. La firma se utiliza como elemento de caracterizacin, sustentndose

en la modificacin que ocurre en el rea del ncleo y en el rea del citoplasma de las clulas, bien sea por el proceso normal de maduracin o por algn fenmeno de displasia (ver Anexo Citologa). Esta caracterstica est relacionada con la dispersin de las distancias de cada uno de los puntos que conforman un mismo contorno con el centroide de ste. En primera instancia se solucionaron las exigencias que el

CONTENIDO

TABLAS

algoritmo de la firma requera para ser una buena herramienta de anlisis, esto es,

FIGURAS

contorno cerrado, grosor de un pxel e invariabilidad a los cambios de posicin de la imagen.

ANEXOS

Un contorno cerrado y un grosor de un solo pxel se obtuvo de las modificaciones finales a la tesis Segmentacin de Clulas del Epitelio Escamoso del Crvix [Op. cit.]. La invariabilidad a los cambios de posicin de la imagen se logr buscando el punto ms lejano desde el centroide, para cada una de las clulas, como punto de inicio para construir la firma. El centroide se halla sumando todas las posiciones en x y y de los pxeles de una regin y dividiendo los resultados entre el nmero de pxeles de cada regin. La ecuacin 2.2 muestra la forma de calcular el centroide de una regin:

Cx =

1 N

xi y Cy =
i =1

1 N

x
j =1

(2.2)

28 donde

N es el nmero de pxeles que conforman el contorno y x e y las coordenadas

de cada uno de los puntos del contorno. El centro est dado por (Cx,Cy).

A partir del pxel ms lejano del centro (punto inicial), se inicia el proceso de firma; calculando la distancia desde el centroide hasta dicho punto y del centroide al nuevo punto. Esto con el fin de establecer una relacin de ngulo-distancia. El ngulo se calcula con la ley de cosenos dada en coordenadas cartesianas:

Di =
donde

(Cx xi )2 + (Cy yi )2

(2.3)

Di es la distancia entre cada uno de los puntos de un contorno y su x e y las coordenadas de cada uno de los puntos

correspondiente centroide; siendo

CONTENIDO de un contorno. La ley de cosenos es:

TABLAS

= cos 1 C 2 A 2 + B 2 + 2*A*B
donde:

(2.4)

FIGURAS

C, es la distancia entre el punto inicial y el pxel a evaluar; A, la distancia B, la distancia entre el pxel a evaluar y el

entre el punto inicial y el centroide; y

ANEXOS

centroide.

Las Figuras 16a, 16b y las Figuras 17a, 17b describen el proceso de la firma. En la Figura 16b se presentan dos puntos; el punto azul marca el centro del citoplasma y el punto rojo el centro del ncleo.

29

a.

b.

Figura 16. a. Clula Basal. b. Contornos de grosor de un pxel del ncleo y del citoplasma con centros en: Ncleo (67,37); Citoplasma (62,41).

CONTENIDO

TABLAS

a.

b.

FIGURAS

Figura 17. Clula Basal. a. Firma del ncleo; b. Firma del citoplasma.

ANEXOS
A partir de estas firmas se calcularon los histogramas de distancias tanto del contorno del citoplasma como del contorno del ncleo. . Las Figuras 18a, 18b, representan el histograma de las distancias de las firmas.

a.

b.

Figura 18. Clula Basal. Histograma de distancias. a. Ncleo. b. Citoplasma.

30 El mismo procedimiento se realiz con una clula superficial (vase Figuras 19a, 19b). La firma se observa en las Figuras 20a, 20b. presentan en las Figuras 21a, 21b. Los histogramas de distancias se

a.

b.

Figura 19. a. Clula superficial; b. Contornos de grosor de un pxel del ncleo y del citoplasma con centros en: Ncleo (57,73); Citoplasma (64,68).

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

a.

b.

Figura 20. Clula Superficial. a. Firma del ncleo; b. Firma del citoplasma.

a.

b.

Figura 21. Clula Superficial. Histograma de distancias. a. Ncleo. b. Citoplasma.

31 Es importante notar la dependencia absoluta que posee la firma del tamao de la imagen y, por ende, de la distancia a la cual la foto es adquirida y del aumento que se utiliza en la toma al microscopio.

2.2.3

Media y Desviacin Estndar.

Se busc informacin discriminante entre

clulas basales y superficiales mediante el clculo de la media y la desviacin estndar, calculados bajo la suposicin de gaussividad del proceso en el histograma de distancias para cada firma.

En la Tabla 1 se suministran las medidas de la mxima distancia desde el centroide hasta el contorno y la media y la desviacin de los histogramas, para una clula basal. La tabla 2 presenta los resultados para una clula superficial. La informacin esta

CONTENIDO

calculada en unidades de pxeles. Tabla 1. Resumen de medidas para una clula basal. NCLEO CITOPLASMA

TABLAS

FIGURAS

MXIMA DISTANCIA. MEDIA DESVIACIN

15.811 12.719 1.328

64.257 48.550 9.452

ANEXOS

Tabla 2. Resumen de medidas para una clula superficial. NCLEO CITOPLASMA MXIMA DISTANCIA. MEDIA DESVIACIN 8.602 6.280 1.078 64.846 57.375 4.353

De esta forma se puede determinar que la media del histograma de distancias en las clulas basales es ms alto que el de las clulas superficiales. Para una mejor visualizacin de dicha discriminacin, se graficaron los datos del ncleo del histograma

32 de distancias, en el espacio Media contra Desviacin. El resultado se observa en la Figura 22.

CONTENIDO

Figura 22. Media contra Desviacin en ncleos superficiales y basales.

TABLAS

FIGURAS

Se opt por trabajar slo con los ncleos por que el programa elaborado en el trabajo Segmentacin de Clulas del Epitelio Escamoso del Crvix no siempre obtena un correcto contorno de los citoplasmas.

ANEXOS

Trabajando en el laboratorio de Patologa de la Universidad del Valle, se obtuvieron: 65 imgenes de muestras normales al microscopio, donde aparecen una o ms clulas por muestra as: 24 muestras que contienen clulas superficiales, 27 muestras que involucran clulas intermedias y 14 muestras con clulas parabasales. 44 imgenes de muestras con Neoplasia de alto grado donde se encuentran 2 o ms clulas por muestra, obtenindose un nmero de clulas igual al de las muestras.

33 Las imgenes fueron guardadas en formato jpg, por razones de espacio; aun as, se procur que no hubiera prdida de informacin, conservando el gran tamao de imagen (del orden de 1200 x 900 pxeles).

De aqu se obtiene los contornos y las firmas para clulas intermedias ( ver Figuras 23a, 23b, y Figuras 24a, 24b).

CONTENIDO

a.

b.

Figura 23. a. Clula Intermedia; b. Contornos de grosor de un pxel del ncleo y del

TABLAS

citoplasma con centros en: Ncleo (92,57); Citoplasma (76,61).

FIGURAS

ANEXOS

a.

b.

Figura 24. Clula Intermedia. a. Firma del ncleo; b. Firma del citoplasma.

34 Los histogramas de distancias para una clula intermedia se presentan en la Figura 25.

a.

b.

Figura 25. Clula Intermedia. Histograma de distancias. a. Ncleo. b. Citoplasma

Para clulas con neoplasia de alto grado, nicamente se obtuvieron contornos nucleares ( Ver Figuras 26a, 26b) debido a la naturaleza de la lesin, esto es, el citoplasma se tie

CONTENIDO poco (vase anexo A). La firma del ncleo y el histograma de distancias se presentan en la Figura 27 y en la Figura 28, respectivamente. TABLAS

FIGURAS

ANEXOS
a. b. Figura 26. a. Clula con Neoplasia de Alto Grado; b. Contorno de grosor de un pxel del ncleo con centro en (37,44).

Figura 27. Clula con Neoplasia de Alto Grado. Firma del ncleo.

35

Figura 28. Clula con Neoplasia de Alto Grado. Histograma de distancias en el ncleo

Los datos estadsticos y la mxima distancia desde el centro a los contornos, correspondientes a la clula intermedia descrita, se presentan en la tabla 3. La informacin esta calculada en unidades de pxeles. La informacin para la clula con neoplasia de alto grado presentada, se da en la tabla 4. .

CONTENIDO

Tabla 3. Resumen de medidas para una clula intermedia. NCLEO CITOPLASMA

TABLAS

MXIMA DISTANCIA. MEDIA DESVIACIN

13.601 11.104 1.295

73.790 60.272 5.915

FIGURAS

ANEXOS
Tabla 4. Resumen de medidas para una clula con neoplasia de alto grado. NCLEO MXIMA DISTANCIA. MEDIA DESVIACIN 19.416 16.713 1.343

En dilogo con la citotecnloga de la unidad de patologa, se inform que la presencia de clulas basales esta supeditada a ciertas condiciones, que no son el objetivo de este trabajo y por tanto, su hallazgo era difcil. La Figura 29 presenta la dispersin para las cuatro clases; la tabla de esta grfica se encuentra en el anexo C.

36

CONTENIDO
Figura 29. Dispersin para clulas normales y clulas con neoplasia de alto grado

TABLAS

FIGURAS

El aumento de la desviacin estndar y la media en las clulas con neoplasia de alto grado se debe principalmente a la irregularidad de los contornos, causada por el proceso degenerativo. Este proceso acarrea una prdida de generalidad en forma y tamao en comparacin con las clulas de un extendido normal.

ANEXOS

2.2.4 Momentos. Otro mtodo empleado fue el clculo de 9 momentos centralizados

y de 7 momentos invariantes [3], a partir de la informacin entregada por la firma. Se escogieron los momentos 2_0 y 0_2 como los elementos que ms informacin discriminante entregaban, conforme la informacin impartida por los ndices de Fisher (ver anexo D). La Figura 30 presenta la dispersin para estos datos.

37

CONTENIDO

Figura 30. Momento 2_0 contra Momento 0_2.

TABLAS
Los momentos invariantes suministran muy poca informacin discriminante.

FIGURAS

ANEXOS

2.2.5 reas. Teniendo en cuenta la importancia de la relacin ncleo citoplasma y por

ende la reduccin del tamao del ncleo a medida que madura (ver anexo A Descripcin Citolgica. parmetro. Citologa), se calcul el rea del ncleo en pxeles, como un primer Partiendo de la firma, se calcula el rea bajo la curva descrita por esta El rea se calcula siguiendo la aproximacin del

obteniendo un segundo parmetro.

trapecio [2] como se describe en la ecuacin as:

La aproximacin del trapecio3 a

es:
3

f ( x) dx

con

x =

ba n

(2.5)

Tambin se puede hacer por la regla de Simpson, con muy poca variacin.

38

Tn =

x (y 0 + 2 y1 + 2 y 2 + ... + 2 y n 2 + 2 y n1 + y n ) 2

(2.6)

Se determin que las clulas superficiales se discriminaban del conjunto de clulas parabasales, intermedias y con neoplasia de alto grado. Estas ltimas por su tamao, no se diferenciaban de una clula parabasal normal. Fisher). Aunque esta informacin es discriminante en cierto grado, presenta alta correlacin entre s (ver Anexo D, Indices de

2.2.6 MODELO RGB Y MODELO HSI. Por ltimo, se examinaron los modelos de color
RGB y HSI, iniciando con los ncleos de las clulas normales y terminando con los

CONTENIDO ncleos de las clulas que exhiben neoplasia de alto grado. El experimento se realiz
obtenindose una mascara (archivo) por cada uno de los ncleos.

TABLAS

FIGURAS

Considerando la distribucin de cromatina en los ncleos (ver Anexo A, Descripcin Citolgica. Criterios de Malignidad); y la coyuntura de la tincin de Papanicolau, que El anlisis se apoya en la presenta un espectro de tonalidades dependiendo del tipo de clula, se realiz el histograma de los ncleos en los canales RGB y HSI. estimacin de la media y la desviacin estndar de los histogramas.

ANEXOS

El anlisis de Fisher a este procedimiento, determina que los cuadros con mayor informacin discriminante son los presentados por el sistema HSI. comportamiento en la Figura 31. Observe este

39

CONTENIDO

Figura 31. Media del tono contra media de la saturacin para todas las clulas. Las clulas superficiales continan presentando una buena discriminacin; las clulas intermedias se discriminan del conjunto de datos, pero aunque las clulas neoplsicas presentan una mayor concentracin, no dejan de mezclarse con las clulas parabasales.

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

40

3 ANLISIS DE RESULTADOS

continuacin

se

presentan

los

resultados

obtenidos

en

el

desarrollo

de

la

caracterizacin de clulas del epitelio escamoso del crvix.

Las imgenes obtenidas en el Grupo de Investigacin en cncer de cuello uterino y mama de la universidad de Caldas, no fueron tomadas en cuenta debido a que no contaban con el mismo aumento que el utilizado en la toma de las muestras en el Laboratorio de Patologa del Hospital Universitario del Valle. La figura 30 presenta el esquema completo del proceso aplicado a cada clula. En total se obtuvieron 32 caractersticas (vase la Tabla 5)

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

Figura 32. Diagrama General del Experimento.

41 Una vez se tiene la imagen se buscan clulas aisladas, realizndose una mscara por cada una; despus se limpia quitando una gran cantidad de objetos que pueden alterar la correcta obtencin del contorno nuclear, i.e. clulas sanguneas.

La componente ms utilizada fue Verde, seguida de la componente Azul y la componente Roja. Se utiliza el filtro de mediana y finalmente se aplica el algoritmo para obtener el perfil completo. Con el contorno del ncleo en mano, se calculan las primeras 20 caractersticas (vase la tabla 5).

Al realizar el anlisis en los modelos de color HSI y RGB, se tomaron los ncleos sin tener en cuenta el citoplasma, creando mascaras para cada uno. histograma en cada modelo para cada mscara obtenindose Se construy el las ltimas 12

CONTENIDO

caractersticas.

TABLAS
Tabla 5. Caractersticas obtenidas

FIGURAS
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

CARACTERSTICA Media de la firma del ncleo Desviacin de la firma del ncleo Momento 0_1 Momento 1_0 Momento 1_1 Momento 2_0 Momento 0_2 Momento 3_0 Momento 0_3 Momento 1_2 Momento 2_1 rea de la curva bajo la firma rea en Pxeles Momento Invariante 1 Momento Invariante 2 Momento Invariante 3

17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32

CARACTERSTICA Momento Invariante 4 Momento Invariante 5 Momento Invariante 6 Momento Invariante 7 Media del Canal Rojo Media del Canal Verde Media del Canal Azul Desviacin del Canal Rojo Desviacin del Canal Verde Desviacin del Canal Azul Media del Canal Tono (H) Media del Canal Saturacin Media del Canal Intensidad Desviacin del Canal Tono (H) Desviacin del Canal Saturacin Desviacin del Canal Intensidad

ANEXOS

42 Se realiz tambin el anlisis discriminante empleando los ndices de Fisher para cada una de las caractersticas, asocindolo con la informacin entregada por las matrices de correlacin. De este anlisis se obtuvo 15 caractersticas principales (vase la tabla 6).

Por ltimo se realiz el anlisis multivariado discriminante de Fisher con las 32 caractersticas disponibles y con las 15 caractersticas principales obtenidas del paso anterior. Este proceso permiti obtener una transformacin que entrega tres direcciones principales y que logra separar las cuatro clases existentes (Superficiales, Intermedias, Parabasales y Neoplsicas en Alto Grado)

A partir de las muestras de clulas normales y las muestras de clulas con neoplasia de alto grado, se obtuvieron 166 mascaras (archivos) en formato bmp donde aparece una

CONTENIDO

clula por archivo; as mismo se obtuvo igual nmero de contornos. De esta forma se consiguieron:

TABLAS
50 imgenes de clulas parabasales. 29 imgenes de clulas intermedias. 43 imgenes de clulas superficiales. 44 imgenes de clulas con Neoplasia de Alto Grado.

FIGURAS

ANEXOS

3.1 EXAMEN DE LAS CARACTERSTICAS

Al observar el comportamiento de la media y la varianza de la firma, el aumento de la desviacin estndar en las clulas con neoplasia de alto grado se debe principalmente a la irregularidad de los contornos, causada por el proceso degenerativo. Este proceso acarrea una prdida de generalidad en forma y tamao en comparacin con las clulas de un extendido normal.

43 Referente a las reas, el tamao de los distintos ncleos, debido al proceso de maduracin, presenta una clara diferenciacin en el caso superficiales-basales. Cuando se tiene en cuenta a las intermedias, esto no sucede, lo cual es normal, por la inherencia de ellas a un estado de transicin.

Respecto a las clulas con alto grado de neoplasia, es aceptable la combinacin que presenta con los datos basales; una caracterstica de la degeneracin celular es el gran tamao de los ncleos. La diferenciacin entre clulas basales y neoplsicas se alcanza analizando la relacin ncleo-citoplasma y la textura del ncleo (ver Anexo A, Descripcin citolgica).

Los momentos que ms informacin discriminante entregan corresponden a los

CONTENIDO

momentos generales de menor orden (confirmado por los ndices de Fisher).

De esta

forma, la combinacin del momento 0_2 y del momento 2_0 (la ms adecuada) logra

TABLAS

diferenciar entre las clulas superficiales y el conjunto conformado por las clulas neoplsicas de alto grado, las parabasales y en menor medida las intermedias. Esto En puede ocurrir debido a que los momentos mencionados presentan una mayor invariabilidad al tamao en adicin al comportamiento de los ndices de Fisher. general, en los momentos de menor orden estn concentradas las principales caractersticas de la forma de un contorno cerrado [9].

FIGURAS

ANEXOS

Los momentos invariantes ofrecieron informacin discrimnante, pero slo entre las clulas superficiales y el conjunto conformado por el resto de clulas, en las combinaciones de menor orden i.e. Invariante 2 contra Invariante 3, acorde a los ndices de Fisher. (ver Anexo D).

En cuanto a los modelos de color, el modelo RGB arroja resultados satisfactorios en las caractersticas de Media del canal Verde y Desviacin del canal Azul nicamente para separar a las clulas superficiales de las parabasales y a las primeras de las que exhiben neoplasia de alto grado.

44 En el modelo HSI es importante resaltar que en la componente Intensidad las clulas parabasales se separen de forma drstica del resto, aunado a la accin de desligarse de las clulas con neoplasia de alto grado. Esto tiene fundamento en dos situaciones, la primera, las clulas parabasales son un poco menos oscuras que el resto del extendido normal, mxime cuando el proceso de maduracin implica un proceso de picnosis. La segunda recurre a la distribucin de cromatina en las clulas neoplsicas en alto grado, cuya aglomeracin en forma granular acarrea zonas de oscurecimiento pequeas en rea, pero grandes en nmero.

3.2 ANLISIS DE FISHER Y PRUEBA DE CORRELACIN

En general, se presentaron 15 caractersticas con los valores ms altos en los ndices de Fisher (vase la tabla 6)

CONTENIDO
Tabla 6. Caractersticas Discriminantes segn ndices de Fisher. CARACTERSTICA NDICE DE FISHER 4.88 1.24 1.32 3.34 3.48 1.09 2.45 1.71 2.83 14.86 5.097 3.73 472.3 3.06 27.18

TABLAS

FIGURAS

Media de la firma del ncleo Momento 2_0 Momento 0_2 rea de la curva bajo la firma rea en Pxeles Media del Canal Rojo Media del Canal Verde Media del Canal Azul Desviacin del Canal Azul Media del Canal Tono (H) Media del Canal Saturacin Media del Canal Intensidad Desviacin del Canal Tono (H) Desviacin del Canal Saturacin Desviacin del Canal Intensidad

ANEXOS

45 En la Figura 33 se presentan los resultados obtenidos despus de realizar el anlisis multivariado discriminante de Fisher. Se puede observar que todas las clases son separables despus de realizar la transformacin entregada por el anlisis discriminante

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS
Figura 33. Discriminantes de Fisher para 32 caractersticas. Parabasales en azul, Intermedias en rojo, Superficiales en verde, Neoplasia de Alto Grado en magenta.

Teniendo en cuenta slo las caractersticas discriminantes y comparando con la informacin entregada por la matriz de covarianza para cada clase, se encuentra alta correlacin para ciertas caractersticas por cada clase. el Anexo C. La tabla 7 presenta las caractersticas dependientes. Las tablas de covarianza para cada clase se encuentran en

46 Tabla 7. Caractersticas Dependientes.

Clase
Parabasal Intermedia Superficial Neoplsica AG

Caractersticas
1, 7, 6, 12, 13, 26, 28, 31 1, 6, 7, 12, 13, 26, 32 1, 12, 13 1, 6, 7, 12, 13, 26

Considerando nicamente las caractersticas discriminantes entregadas por los ndices de Fisher, y realizando de nuevo el anlisis multivariado de Fisher se llega a la Figura 34.

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

Figura 34. Discriminantes de Fisher para 15 caractersticas. Parabasales en azul, Intermedias en rojo, Superficiales en verde, Neoplasia de Alto Grado en magenta.

47

4. CONCLUSIONES

Controlar en el proceso de adquisicin aspectos tales como aumento y distancia con que se toman las muestras es determinante en el desempeo de los algoritmos puesto que son requerimientos bsicos para una correcta caracterizacin.

La tincin utilizada en el proceso de fijacin (Hematoxilina - eosina o Papanicolau), proporciona un aumento de contraste entre la seccin del ncleo y la del citoplasma,

CONTENIDO muy til a la hora de obtener los perfiles del ncleo. Es posible hallar diferencias entre
una tincin y otra a la hora de digitalizar la muestra, sin embargo, debido a los problemas que se tuvo en la adquisicin de imgenes con tincin de Hematoxilinaeosina, los resultados no fueron concluyentes.

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

Antes de iniciar el proceso de caracterizacin es necesario que las imgenes tengan un proceso de mejoramiento de histograma o de aumento de contraste, para obtener un adecuado contorno nuclear. De esta forma al utilizar la componente G, se proporciona una mayor contraste entre el citoplasma y los ncleos.

Un problema comn a las firmas, aparte de la variabilidad es la obtencin de un contorno delgado. Cuando esto no se cumple, mas all de la generacin de un ciclo de mquina infinito, no se alcanza una fiel representacin de los contornos de las clulas.

La representacin de caractersticas discriminantes, en el caso de clulas parabasales y superficiales, se recibi a travs de la media y la varianza como primer conjunto de

48 datos; asimismo, la interpretacin de las reas en pxeles contra las reas obtenidas bajo la curva generada por cada firma, como segundo conjunto de datos, proporcionan la suficiente separabilidad para identificar los ncleos.

Al confrontar las clulas intermedias con las clulas superficiales se presento una separacin inequvoca. Sin embargo, una confrontacin con clulas parabasales, no devela informacin discriminante ya que la informacin se presenta mezclada. Esto se presenta a lo largo del trabajo y es debido a su inherente carcter de clulas transitorias.

Al ingresar los datos de las clulas con neoplasia de alto grado, la informacin presenta una mezcla continua con las clulas parabasales por las caractersticas morfolgicas de

CONTENIDO

ambas.

Esta situacin cambia en el cuadro de media contra desviacin del canal I,

resultado de la caracterstica cromtica de las clulas; los ncleos de las clulas que

TABLAS

presentan displasia manifiestan alteraciones que conllevan a una tincin ms oscura que la de las clulas parabasales.

FIGURAS

ANEXOS
Todas aquellas clulas presentes en un extendido normal presentan caractersticas similares y una maduracin controlada y progresiva. Este proceso no se cumple en las clulas neoplsicas, es ms, la irregularidad inherente a ellas hace que una grfica en el espacio media varianza, las agrupe como si tuvieran un crecimiento similar.

Los

momentos

slo

presentaron

informacin

separable

en

la

combinacin

del

Momento_02 con el Momento_20.

Por otro lado, los momentos invariantes no

presentaron informacin discriminante en una tabla con datos de clulas superficiales, intermedias y parabasales. An as, un clasificador bayesiano podra trabajar bien en una relacin de clulas intermedias y parabasales, excluyendo las superficiales.

49 Los resultados del anlisis en el sistema RGB ofrecieron poca informacin a la hora de separar los distintos tipos de clulas. Puede ser necesario incrementar el tamao de la imagen a fin de contar con un campo ms amplio, en el que se observe la aglutinacin de cromatina y otros elementos de juicio como el nmero de nuclolos. permite obtener variaciones significativas de color que puedan ser registradas. Todo esto

Es posible que al obtener la informacin del citoplasma y se calcule la relacin ncleocitoplasma la informacin se torne mucho ms discriminante, al ingresar el aumento de tamao del citoplasma y la prdida de esferidad, con la maduracin epitelial. citoplasmas a medida que aumenta el grado de la lesin. Sin embargo esto no siempre es posible debido a la perdida de tincin y de volumen en los

CONTENIDO

La forma del citoplasma puede ser un elemento de juicio slo en el momento que se obtenga una fiel representacin de ste. No obstante, es usual encontrar clulas cuyos contornos citoplasmticos no estn bien conservados, no se tien adecuadamente, han desaparecido o presentan pliegues. Cuando se presentan estos casos es habitual que los especialistas mdicos, slo observen el ncleo o no observen el conjunto.

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS
El anlisis de los ndices de Fisher permiti establecer cuales eran las caractersticas que ofrecan la mayor informacin discriminante. Se establecieron quince caractersticas a saber: Media de la firma del ncleo, Momento 2_0, Momento 0_2, rea de la curva bajo la firma, rea en Pxeles, Media del Canal Rojo, Media del Canal Verde, Media del Canal Azul, Desviacin del Canal Azul, Media del Canal Tono (H), Media del Canal Saturacin, Media del Canal Intensidad, Desviacin del Canal Tono (H), Desviacin del Canal Saturacin y Desviacin del Canal Intensidad.

Al utilizar los coeficientes de correlacin y analizando nicamente las caractersticas con mayor informacin discriminante, se pudo establecer 9 caractersticas que presentaban la misma informacin por su poca independencia. Este fenmeno no era comn a todas,

50 es decir en ciertas clases exista una mayor correlacin de unas caractersticas que de otras. En general son las siguientes: media de la firma del ncleo, momento 2_0, momento 0_2, rea bajo la curva de la firma, rea en pxeles, desviacin del canal Azul, media del canal Saturacin, desviacin del canal Saturacin, y desviacin del canal Intensidad.

Empleando el estudiadas.

anlisis multivariable discriminante de Fisher fue posible obtener una

transformacin lineal que produce un espacio separable para las cuatro clases

Los tipos de clulas presentes en una citologa cervicovaginal son:

CONTENIDO
Clulas Escamosas: Superficiales (la mayora), Intermedias, Parabasales, basales

TABLAS

(las ms escasas) y aquellas que exhiban Neoplasia de Alto o Bajo grado. Clulas Glandulares: Endocervicales, ms de diez colgajos de ms de 20 clulas en toda la placa; o un nmero similar, para que sea considerada una citologa representativa, adems endometriales (raras veces). Clulas Inflamatorias: Polimorfonucleares, las ms abundantes; linfocitos,

FIGURAS

ANEXOS

macrfagos o histiocitos. Microorganismos: Cocos, cocobacilos, lactobacilos, tricomonas, amebas, etc.

La cromatina del ncleo puede ser normalmente homognea y finamente granular, a veces con pequeos nucleolos. Cuando hay displasia se hace cada vez ms grumosa, el nmero de nucleolos aumenta y su tamao tambin.

51 Es posible investigar el efecto de la condicin de luz en el momento de adquirir las imgenes. Modificar la luminosidad y el contraste, para determinar en qu condiciones se pueden distinguir mejor los contornos citoplasmticos y nucleares. De igual forma es interesante analizar ms a fondo la distribucin de cromatina dentro del ncleo y establecer cul es el aumento requerido para obtener una informacin con fines diagnsticos.

Puede ser difcil evaluar las clulas endocervicales con los criterios utilizados en este trabajo. Por lo general este tipo de tejido no tiene una relacin ncleo-citoplasma constante, es decir presenta diferencias; aunque la caracteriza una cromatina fina y eventualmente posee nucleolos pequeos.

CONTENIDO

La microbiologa es extremadamente difcil de valorar, pues ella esta relacionada ms bien con el "fondo" de la placa; y va con el moco y las clulas inflamatorias; adems son difciles de distinguir las tricomonas, puesto que suelen ser muy plidas.

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

BIBLIOGRAFA

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CONTENIDO
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TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

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CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

[20]-[33] COLOMBIA. INSTITUTO NACIONAL DE CANCEROLOGA. Registro Institucional de Cncer 1999. Ministerio de Salud. Santa Fe de Bogota 2000. En: <URL:http://www.incancerologia.gov.co/registro%201999.pdf> [21] Curso de Estadstica. Madrid Julio del 2000. Obtenido de la red el 7 de octubre del 2001. En: <URL:http://www.aulafacil.org/CursoEstadistica/Lecc-4-est.htm> [22] DAPENA, Jos P. Mtodos Cuantitativos: Estadstica Descriptiva. Universidad del CEMA. Obtenido de la red el 7 de octubre del 2001. En: <URL:http://www.cema.edu.ar/~jd/Metodos/Clases/Clase1.pdf> [23] <URL:http://health.excite.com/content/article/1680.50752> [24] KLATT, Edward C. The Internet Pathology Laboratory: Mini-Tutorials, Cytopathology. Florida State University College of Medicine, Tallahassee, Fl, USA. 2000. En: <URL:http://www-medlib.med.utah.edu/WebPath/TUTORIAL/TUTORIAL.html#1> [25] LZARO MAISANAVA; Jos Miguel, MUNIESA SORIANO, Jos ngel y PARDO MURCIA, Amalia. CITOLOGA EXFOLITATIVA CERVICOVAGINAL: Mtodo de Papanicolau. Servicio de Anatoma Patolgica del Hospital OBISPO POLANCO de Teruel. Boletn Oncolgico n 8, 1.998. Espaa. En: <URL:http://www.opolanco.es/Apat/Boletin2/CITOLOGIA.html> [26] Morris M, Eifel PJ, Lu J, et al.: Pelvic radiation with concurrent chemotherapy compared with pelvic and para-aortic radiation for high-risk cervical cancer. New England Journal of Medicine 340(15): 1137-1143, 1999. En : <URL:http://www.cancernet.nci.nih.gov/clinpdq/soa.sp.html> [27] NCI NATIONAL CANCER INSTITUTE. Definiciones. USA. <URL:http://rex.nci.nih.gov/NCI_Pub_Interface/La_prueba_Pap/definiti.html> En:

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

[28] NCI/PDQ Physician Statement: Cncer del cuello uterino. USA. Junio de 2001. Obtenido de: <URL:http://cancer.med.upenn.edu/pdq_html/1/span/100103-1.html> [29] Papanicolau Disponible en Internet: <URL:http://www.grupomundomedico.com/medicogeneral/enero99/3001.html>

[30] PREZ F, Rigol O; PREZ J; Fernndez J et al. Afecciones genitourinarias. EN: Medicina General Integral. La Habana: Editorial Pueblo y Educacin, 1988. t4:21-32. Disponible en Internet: <URL:http://www.conganat.org/iicongreso/comunic/061/biblio.htm> [31] ROSS, Dennis W. Cancer: The Emerging Molecular Biology. University of North Carolina. The McGraw-Hill Companies. USA. 1999. Disponible en Internet: <URL:http://www.hosppract.com/index.htm> [32] Universidad de Zaragoza. Departamento de Geografa y Ordenacin del Territorio. Tratamiento de la Informacin en Geografa. Tema 5. 2000. Obtenido de la red el 7 de octubre del 2001. Disponible en Internet: <URL:http://http://fyl.unizar.es/Geo/Tigweb/Textos/Tema5.htm> [33] V. S. Nalwa. A Guided Tour of Computer Vision. Addison-Wesley Publishing Company. 1993. Citado por : R. MOLINA. Introduccin al Procesamiento y Anlisis de Imgenes Digitales. Departamento de Ciencias de la Computacin e I.A. Universidad de Granada. Granada (Espaa). 2000. Disponible en Internet: <URL:http:// wwwetsi2.ugr.es/depar/ccia/mia/complementario/Procesamiento_Imagenes/node4.html> [34] YAMBOR S, Wendy. Analysis Of PCA-Based And Fisher Discriminant-Based Image Recognition Algorithms [online]. Technical Report. Fort Collins (Colorado). Colorado State University, july 2000. Available from Internet: <URL: http://www.cs.colostate.edu/~vision/html/projects/yambor/thesis.htm>

CONTENIDO

TABLAS

FIGURAS

ANEXOS

Anexo A. Descripcin Citolgica

1.CITOLOGA1
Citologa es el estudio de la enfermedad o anormalidad de las clulas. De todos los

avances tecnolgicos que han ocurrido en la medicina en los ltimos cien aos, la prueba de Papanicolau, designada as por su investigador, el doctor George Papanicolau, es an uno de los pocos tests que se tienen disponibles que pueden detectar la presencia de lesiones pre-malignas permitiendo la prevencin del cncer. La existencia de la prueba de Papanicolau ha sido importante para el decremento en las muertes por cncer de crvix en mas de un 60% de 1950 a 1980 (en Estados Unidos) [24]. Infortunadamente, se estima que cada ao hay 16,000 casos nuevos de cncer cervical invasivo en los EE.UU. y 5,000 defunciones anuales [28]. El pronostico de esta enfermedad depende en gran medida de lo avanzada que se encuentre la enfermedad en el momento del diagnostico.

QU ES UN EXTENDIDO DE PAPANICOLAU?
Clulas exfoliadas pueden ser obtenidas de varias partes del cuerpo con el propsito de obtener informacin clnica til. Muchas clulas y tejidos del cuerpo estn experimentando un constante proceso de maduracin / muerte / regeneracin y las clulas que mueren se desprenden o se exfolian. La proliferacin y maduracin de las clulas gua a la exfoliacin definitiva de ellas. Los mtodos disponibles recolectan las clulas exfoliadas inicialmente de las capas del epitelio, utilizando una variedad de esptulas o cepillos. Las muestras pueden ser clulas solas o tejidos.

Este anexo har nfasis en las clulas del epitelio escamoso.

El proceso de maduracin y diferenciacin de clulas esta reflejado en las caractersticas morfolgicas delineadas por las tcnicas de tincin, las cuales, permiten una correcta identificacin. Como punto de comunicacin entre el medio ambiente y el interior del cuerpo humano, el cuello uterino esta siendo constantemente bombardeado por una variedad de fuerzas, mecnicas, biolgicas qumicas y alteraciones hormonales. crvix puede responder en una variedad inespecfica de formas: Reacciones inflamatorias crnicas o agudas. Respuestas proliferativas adaptativas (epitelio escamoso, metaplasia escamosa) Alteraciones celulares causadas por el virus de papiloma humano (VPH) Reacciones reparativas El

En muchos casos las anormalidades celulares relacionadas a las entidades patolgicas presentes en el crvix, pueden ser caracterizadas por medio de la prueba de Papanicolau, con base en las alteraciones morfolgicas de las clulas causadas por estas entidades, en la presencia de clulas inflamatorias o en la presencia de agentes microbiolgicos [24].

La razn de que el frotis de Papanicolau sea una prueba de deteccin tan eficaz en la profilaxis del cncer de cuello uterino es que la mayora de los tumores van precedidos de una lesin precancerosa. Esta lesin puede existir en la fase no infiltrante nada menos que durante 20 aos, y pueden estar desprendindose clulas anormales que, a veces, se descubrirn en el examen citolgico. Estas lesiones precancerosas se deben contemplar teniendo en cuenta que: 1) 2) Las lesiones precancerosas constituyen un espectro continuo de cambios morfolgicos cuyas fronteras estn bastante mal delimitadas. Dichas lesiones no siempre evolucionan hacia la formacin de un cncer y pueden regresar espontneamente, donde el riesgo de que persistan o que evolucionen hacia un cncer aumenta a medida que aumenta la gravedad de la lesin precancerosa.

3)

Asociacin con el VPH y los tipos2 de alto riesgo del VPH se encuentran cada vez con mayor frecuencia en las lesiones precursoras de grado ms elevado [10].

1.2 HISTOLOGA DEL TERO Y VAGINA

1.2.1 Histologa del tero. El tero consta de dos partes principales: El cuello y el cuerpo. Anatmicamente el cuello se divide en i) endocrvix, ii) porcin vaginal y iii) zona de transformacin, como se observa en la figura 1.

Figura 1 Unin Pavimentoso-columnar (UPC).

Se refiere a las cepas o variedades del virus del papiloma humano (VPH)

Figura 2. Cambios Hormonales cclicos en la menstruacin [5].

La figura 3, evidencia los cambios del epitelio a causa del ciclo hormonal; la seccin a, fase estrognica, evidencia engrosamiento y maduracin del epitelio mucoso a raz de la estimulacin estrognica, vase el citoplasma abundante de las clulas superficiales; en la seccin b, fase progestgena, el predominio de clulas intermedias del epitelio mucoso aparece como una aglomeracin de ncleos.

Figura 3. Cambio cclico del epitelio vaginal: a. Fase estrognica; b. Fase progestgena.

1.2.2 Histologa de la vagina. La vagina presenta unos pliegues prominentes y se halla tapizada por un epitelio pavimentoso estratificado que responde a los estrgenos, los cuales estimulan la proliferacin epitelial en los aos de la procreacin. Como los cambios citolgicos del epitelio pavimentoso reflejan el estado hormonal, la evaluacin hormonal se hace mediante citologa vaginal, a menos que la paciente tenga vaginitis. La valoracin hormonal no se considera en este estudio pero es mencionada a la hora de determinar la presencia de las distintas clulas.

En general, la mujer en edad frtil va a tener un 40% de clulas intermedias y un 60% de clulas superficiales en la fase preovulatoria. En la fase postovulatoria el porcentaje ser inverso, con un 60% de clulas intermedias y 40% de clulas superficiales. En ambas situaciones no existen clulas basales ni parabasales. En la menopausia habr un 80% de clulas parabasales y un 20% de clulas intermedias (atrofia). No siempre es factible hacer la valoracin hormonal, sobre todo cuando hay inflamacin.

1.3 CLULAS NORMALES DEL TRACTO GENITAL FEMENINO.

Existen varios tipos de clulas en el tracto genital femenino, que por su presencia, se pueden considerar normales (ver figura 4): Clulas pavimentosas estratificadas: Superficiales, intermedias, parabasales y basales; clulas epiteliales de transicin; clulas epiteliales columnares, generalmente clulas ciliadas; y los histiocitos.

1.3.1

Clulas

pavimentosas.

Para

estudio

citolgico

se

analizan

mas

concienzudamente las clulas pavimentosas estratificadas, registrndose cuatro tipos de clulas. Estos cuatro tipos de clulas que se distribuyen de la siguiente forma en el tejido epitelial: basal, capa profunda; parabasal; capa intermedia; y Superficial, capa ms externa. Ver figura 5.

Figura 4. Esquema de clulas representativas.

Figura 5. Histologa de la porcin vaginal del cuello uterino y sus rasgos citolgicos comparativos: clulas superficiales (Sup), clulas intermedias (int) y clulas parabasales (pb).

1.3.1.1

Clulas superficiales.

Se originan en la capa superficial del epitelio stas son las clulas epiteliales ms

pavimentoso estratificado no queratinizante.

comunes en la fase preovulatoria de las mujeres en edad de procrear. Ver figura 6. Citoplasma. El citoplasma es fino, ancho (45 a 50 de dimetro) y polidrico. Los

bordes citoplasmticos son irregulares pero bien definidos, y presentan unos pequeos arrollamientos.
3

La reaccin tintrial suele ser naranjofila o eosinofila, y a veces

cianfila . En ocasiones se ven en tomo del ncleo unos pequeos grnulos puntiformes de queratohialina. Ncleo. El ncleo es pequeo (5 a 7 ), retrado, redondo u oval, y presenta cromatina condensada. La mayora de las clulas superficiales contienen ncleos picnticos. El criterio decisivo para la clula superficial es la picnosis de los ncleos, cualquiera que sea la reaccin tintrial del citoplasma.

1.3.1.2 Clulas Intermedias. Se originan en el estrato medio de clulas espinosas del epitelio pavimentoso estratificado. Estas clulas son las ms comunes en la fase postovulatoria o progestgena de las mujeres en edad de procrear. Ver figura 6. Citoplasma. El citoplasma es adecuado (40 a 50 . de dimetro), fino, transparente y poligonal. Su reaccin tintrial es verde azulada plida4 o rosa (hematoxicilina- eosina). Su borde est plegado y presenta una estructura delgada. Ncleo. El ncleo es redondo u oval, ms grande (9 a 11 ) que el de las clulas Se caracteriza por un borde nuclear delicado y

superficiales y de aspecto vesicular.

ntido, por una cromatina finamente granular y por algunos cariosomas perceptibles. En los bordes nucleares se distinguen las cromatinas sexuales.

1.3.1.2.1

Clulas naviculares.

Estas son variantes de las clulas intermedias que

tienen un citoplasma navicular de tinte amarillento por mayor contenido de glucgeno. El borde celular parece ser grueso porque tiene arrugas. La exfoliacin de este tipo de

3 4

Por tincin de Papanicolau Utilizando Tincin de Papanicolau.

clula,

en

particular en

grupos, ocurre en

ciertos estados como embarazo y

determinados tipos de menopausia. En general, las clulas intermedias tienden a exhibir citlisis en la fase lutenica por la presencia de los bacilos de Dderlein.

1.3.1.3 Clulas parabasales. La descamacin de clulas parabasales provenientes de la capa profunda es infrecuente en mujeres normales en edad de procrear. Es fisiolgica en la prepubertad, posmenopausia (ver figuras 6 y 7 )y perodo lactacional. Citoplasma. Estas clulas tienen un citoplasma ms pequeo que las clulas Las clulas

superficiales e intermedias ( 15 a 30 ) y de borde bien definido. Papanicolau y su forma es polidrica.

parabasales externas son trasparentes, adquieren un color verde azulado claro con Las clulas Parabasales internas son elpticas, densas y se tien de verde azulado intenso. Ncleo. Es redondo u oval (8 a 12 ) y un tanto hipercrmico. La cromatina es

finamente granular y de distribucin pareja.

1.3.1.4

Clulas basales.

Estas clulas provienen de una sola capa basal y no El

aparecen en los raspados ordinarios, a menos que haya hiperplasia basocelular.

citoplasma es escaso y muy basfilo, y el ncleo relativamente grande e hipercromtico.

Es de anotar que la presencia de uno u otro tipo de clulas esta relacionado con el ciclo hormonal, esto es, se presenta un extendido influenciado por el estrgeno (ver figura 7), en cuyo caso se caracteriza por preponderancia de clulas superficiales con eosonofilia y cariopicnosis; o por la progesterona (ver figura 8), donde se define por la preponderancia de clulas intermedias con hacinamiento y arrollamiento.

Figura 6. Extendido vaginal normal que muestra clulas superficiales (Sup), intermedias (Int) y una clula parabasal externa (Pb).

Figura 7. Extendido Vaginal con efecto estrognico.

Figura 8. Extendido vaginal con efecto progestgeno. Tambin es importante saber si la mujer es menopusica o no. En el caso de ser

menopusica, al extendido se le denomina Extendido atrfico, cuyos principales constituyentes celulares son las clulas parabasales internas y externas. Ver figura 9.

Figura 9. Tipo atrfico de menopausia. Extendido con escasas clulas.

La Figura 10 describe los distintos tipos de clulas pavimentosas. a. clula parabasal interna de citoplasma redondo y borde ntido y ncleo vesiculoso oval; pequeo; anterior; picntico. b. Clula parabasal externa de citoplasma esfrico un tanto ms grande y un ncleo vesiculoso c. clula intermedia de ncleo ancho y transparente y ncleo dem al d. clula superficial de citoplasma eosinfilo ancho y un minsculo ncleo

Figura 10 Tipos variables de clulas epiteliales pavimentosas.

1.3.2 muchas

Clulas endocervicales. veces se presentan

Las clulas endocervicales tienden a degenerar y unos ncleos individuales denudados. La

como

condensacin de cromatina en el borde nuclear, como parte de la degeneracin, forma unas protuberancias a modo de perillas o pezones; observe la figura 11, donde los ncleos libres exhiben condensacin de material cromatnico hacia el borde. moderada variacin en el tamao de los ncleos. la figura 12. Citoplasma. La forma y la cantidad varan mucho segn los distintos estados y el grado de degeneracin. Estn mejor preservadas en los raspados cervicales que en los extendidos vaginales. Las clulas endocervicales bien preservadas tienen un citoplasma Existe Si estn bien preservadas, se

distinguen los tipos ciliado y secretor. Por lo general se presentan en grupos, como en

columnar de colas delgadas y sus ncleos son excntricos.

Vistas las clulas

endocervicales desde arriba, se reconoce una imagen franca en panal de abejas con un citoplasma claro y una cromatina finamente granular y de distribucin pareja. Enfocando arriba y abajo se distinguen los bordes citoplasmticos ntidos y de igual forma el contorno nuclear (ver figura 13).

Figura 11. Clulas endocervicales libres en degeneracin avanzada.

Figura 12.

Racimos de clulas endocervicales. El citoplasma

columnar se reconoce en el borde de los grupos celulares.

En ocasiones se ven cilios en los anchos bordes celulares de las clulas endocervicales ciliadas (ver figura 15). (ver figura 14). Aunque los cilios delicados no se ven, en las clulas bien preservadas de la forma ciliada se distinguen las lminas terminales de color lavndula Las clulas endocervicales no ciliadas tienen un citoplasma En el estado de hipersecrecin el semitransparente, finamente vacuolado o acintado.

citoplasma est distendido por la secrecin de moco (forma secretoria). Ncleo. Es redondo u oval y excntrico, y de tamao uniforme. En las clulas bien

preservadas se reconoce un borde nuclear delicado pero bien definido. La cromatina es fina y de distribucin pareja. intacta. A medida que las clulas degeneran, el citoplasma se pierde y se pueden observar ncleos denudados que conservan su cromatina bastante

En la figura 15, se puede observar el estadio ultimo de la degeneracin. Al final de este proceso se forman ncleos picnticos donde la cromatina se licua y, al mismo tiempo, se condensa en el borde nuclear.

Figura 13. Clulas endocervicales de tipo secretorio vistas con mayor aumento. El citoplasma es transparente y columnar, pero mal definido.

Figura 14. Clulas endocervicales libres. Comprende clulas ciliadas bien preservadas.

Figura 15. aumento.

Clulas

endocervicales degeneradas vistas con mayor

Las cromatinas nucleares se han licuado y exhiben condensacin

hacia el borde nuclear. Una clula ciliada bien preservada (flecha).

1.3.3

Histiocitos.

Los histiocitos [13] no aparecen normalmente en los extendidos

cervicales ni vaginales despus del 10 da del ciclo menstrual, a menos que el epitelio mucoso que reviste al tracto genital femenino est erosionado o inflamado. Existen dos tipos de histiocitos de ncleos nicos o mltiples (ver figura 16).

Histiocitos mononucleares comunes. Citoplasma. Suele ser redondo u oval, pero de forma muy variable. Su aspecto es espumoso o finamente vacuolado. Suele colorearse de verde grisceo plido. Contiene partculas extraas fagocitadas, pigmentos sanguneos y gotitas de grasa. Los histiocitos degenerados poseen un citoplasma borroneado y bordes celulares indistintos. El citoplasma puede faltar en la degeneracin avanzada. No es infrecuente que se superpongan leucocitos. Ncleo. Los ncleos son ovales, redondos o reniformes y excntricos. El borde nuclear es delicado pero bien definido. La cromatina es finamente granular. Histiocitos multinucleados Citoplasma. El citoplasma es enorme y de forma variable. Con bordes indefinidos. A veces se superponen leucocitos. Ncleo. Cada uno de los ncleos mltiples presenta rasgos similares caracterizados por una forma oval con ligera variacin de tamao, una cromatina finamente granular y situacin perifrica, con superposiciones.

1.3.4 Clulas endometriales. Las clulas endometriales aparecen en los extendidos vaginales o cervicales durante la menstruacin y justo despus. En general, la presencia de clulas endometriales despus de los 10 primeros das del ciclo significa que hay algn estado patolgico en el endometrio. Una excepcin importante es el uso de dispositivos anticonceptivos intrauterinos, en que pueden emitirse clulas endometriales en la mitad del ciclo. Aunque es necesario distinguir los tipos glandular y estromal de clulas endometriales, por lo general es difcil identificarlos en los extendidos vaginales o cervicales. Las clulas bien preservadas provenientes de las glndulas endometriales vienen muy aglomeradas y presentan superposicin nuclear, (ver figura 16). Las clulas endometriales provenientes del estroma estn dispuestas en lminas planas o en filas simples; los ncleos de las clulas estromales son un tanto elongados, presentando una fina malla de cromatina.

En la figura 16, las densas aglomeraciones de clulas glandulares endometriales rodeadas de histiocitos con una trama de cromatina plida se llaman "xodos".

Figura 16. "xodo" de clulas endometriales en un extendido cervical. Las clulas endometriales se dividen en 2: clulas epiteliales y clulas endometriales

1.3.5.

Clulas epiteliales.

Las clulas bien preservadas se aglomeran en densos

grumos o bolas. La diferenciacin respecto de las clulas endocervicales se basa en la regularidad del tamao nuclear (ms pequeo que el de las clulas endocervicales) y en la escasez y borrosidad del citoplasma. Citoplasma. En los extendidos vaginales ordinarios el citoplasma se pierde a causa de la rpida degeneracin. Cuando el citoplasma est bien preservado, se lo ve como un fondo tenue en torno del ncleo. La reaccin tintrial es dbilmente basfila. Ncleo. Como las clulas aparecen aglomeradas, los ncleos denudados tienden a Las clulas endometriales bien preservadas

adherirse entre s y a superponerse.

exhiben unos ncleos redondos u ovales de bordes delicados y partculas de cromatina

dispersas con uniformidad, pero un tanto condensadas.

Por lo tanto, las clulas

endometriales tienen un aspecto ms oscuro y ms activo que las endocervicales. Las clulas en vas de degenerar en cambio, exhiben variaciones de la forma y no tanto del tamao de los ncleos. nuclear. La cromatina puede estar condensada hacia el borde

1.3.6 Clulas estromales. Las clulas estromales del endometrio se desprenden en lminas irregulares, como aglomeraciones sueltas, con menos superposicin que las del epitelio glandular. En las clulas estromales es caracterstica la borrosidad del citoplasma, la forma elongada (oval o elptica) de los ncleos y los contornos delicados de los mismos, presentando una fina malla de cromatina.. (Vase figura 17).

Figura 17. Clulas del estroma endometrial en un extendido cervical

2 CRITERIOS GENERALES DE IDENTIFICACIN

El criterio general para identificar los tipos de clulas estratificado del crvix es como sigue.
5

que corresponden al epitelio

2.1 CRITERIO GENERAL PARA LA IDENTIFICACIN DE CLULAS BASALES.

Estructura del ncleo: En las clulas bien preservadas, las finas partculas de cromatina estn regularmente dispuestas. En las clulas degeneradas la cromatina se condensa en el borde nuclear, en numerosas masas amorfas (cariorrexis) o en una sola picnosis. Posicin del Ncleo: Usualmente central, puede ser algo excntrico. Relacin del ncleo a la pared celular: el ncleo y los bordes celulares son bien diferenciales en todos sus puntos. El ncleo se halla siempre rodeado de citoplasma. En general, ocupa una posicin caracterstica y constante para cada tipo de clula. El tamao del ncleo guarda relacin con el volumen citoplasmtico. [18] Apariencia del Citoplasma: Delgado, abundante. Forma Celular: Oval o redondeada, ocasionalmente alargada. Nunca poligonal.

2.2 CRITERIO GENERAL PARA LA IDENTIFICACIN DE CLULAS INTERMEDIAS.

Estructura del ncleo: En las clulas bien preservadas pueden identificarse finas partculas individualizadas de cromatina.

Debido a que las clulas intermedias y parabasales comparten varias caractersticas, el criterio de seleccin es el mismo. En realidad, para poder diferenciar una clula intermedia de una parabasal de manera inequvoca es necesaria la tincin de Papanicolau.

Posicin del Ncleo: Central. [18] Apariencia del Citoplasma: Delgado, abundante. Forma Celular: Tendencia al aspecto poligonal. ngulos bien definidos. . Ni Redonda, ni oval. De bordes o

2.3 CRITERIO GENERAL PARA LA IDENTIFICACIN DE CLULAS SUPERFICIALES

Estructura del ncleo: Oscuro, hipercromtico y homogneo. No se observa partculas individualizadas de cromatina, indicando una completa picnosis. La picnosis del ncleo distingue la clula superficial de la clula intermedia. Posicin del Ncleo: Central. Apariencia del Citoplasma: Delgado, abundante. Forma Celular: Tendencia al aspecto poligonal. definidos. Ni Redonda, ni oval. De bordes bien

La distincin entre una capa interna de clulas bsales y la externa, estriba en que la distancia del borde nuclear al celular es menor que el dimetro mximo del ncleo, en el caso de la capa de clulas bsales internas y mayor en la capa externa.

3. Seleccin Preliminar
Durante el proceso de evaluacin de las muestras son importantes los siguientes puntos de observacin y trminos descriptivos para determinar las alteraciones morfolgicas (ver figura 18).

Figura 18 Terminologa para describir las figuras nucleares

3.1 TAMAO DEL NCLEO

La evaluacin de la anormalidad del tamao nuclear se basa en compararlo con el tamao de una clula normal del mismo tipo de tejido, y no en el tamao absoluto. El tamao nuclear de las clulas somticas normales es distinto de un tejido a otro y la relacin nuclear-citoplasmtica depende del grado de maduracin de la clula. citoplasmtica mayor que las superficiales. Las clulas basales del epitelio pavimentoso estratificado tienen una relacin nuclearLas relaciones nucleares citoplasmticas aumentadas o disminuidas se comparan con las del tejido originario normal.

3.2 FORMA DEL NCLEO.

Las clulas epiteliales normales poseen ncleos redondos u ovales de membranas nucleares lisas y delicadas. anormalidades morfolgicas Los ncleos pueden deformarse por una alteracin Las con son polidricas con muchas caras, poligonales patolgica, que puede ser neoplsica o degenerativa, o a causa de un artificio.

angulaciones mltiples y ncleos multilobulillares con varios lobulillos que dan la impresin de ser varios ncleos fusionados entre s.

A las clulas multinucleadas se las define como clulas que poseen mltiples ncleos aglomerados en el centro (tipo Touton), en la periferia (tipo Langhans) o en grupos irregulares (tipo por cuerpo extrao). Las irregularidades del contorno nuclear son indentaciones o plegamientos irregulares, engrosamiento anormal y condensacin despareja de la cromatina en el borde del ncleo.

3.3 DISTRIBUCIN DE CROMATINA EN EL NCLEO.

Se observan y se describen: 1) La cantidad (contenido de ADN), 2) el tamao y 3) el tipo de distribucin. Las cantidades aumentadas o disminuidas de cromatina se conocen como hipercromtismo o hipocromtismo, respectivamente. Los tipos de cromatina se clasifican as:

1. 2. 3. 4.

Cromatina acintada cuyo retculo es parejo y delicado. Cromatina finamente granular con partculas granulares finas distribuidas con uniformidad. Cromatina reticular gruesa que exhibe una red de riendas gruesas. Cromatina reticular gruesa con dispersin gruesa de grnulos de cromatina condensados.

Adems del tipo de distribucin de la cromatina, la descripcin del fondo se expresa en trminos como espacio intercromatnico y halo de paracromatina, que significa un espacio claro en torno de la heterocromatina.

4 CRITERIOS DE MALIGNIDAD
Los siguientes son los criterios ms utilizados por los citlogos para una valoracin neoplsica. La figura 19 exhibe varias muestras con algunos de estos criterios.

Figura 19. Rasgos distintivos de Malignidad.

4.1 AUMENTO DE LA RELACIN NUCLEAR-CITOPLASMTICA

La relacin entre el volumen nuclear y el citoplasmtico se mantiene dentro d lmites constantes en las clulas normales. El aumento del componente nuclear de esta relacin [4] es uno de los rasgos ms distintivos de malignidad, esto es, una alteracin del cociente ncleo : citoplasma, habitualmente 1:4 a 1:6, llegando casi a 1:1 [10]. La relacin nuclear-citoplasmtica (relacin N/C) no slo es valiosa para distinguir malignidad, sino que da la pauta del grado de diferenciacin de la clula cancerosa; cuanto menos diferenciadas son las clulas cancerosas, mayor es la relacin N/C.

Puede

ocurrir

agrandamiento

nuclear

en

clulas

no

malignas

por

irradiacin,

administracin de agentes alquilantes, inflamacin, metaplasia y regeneracin; pero en estos estados las clulas no malignas exhiben un aumento de tamao general y conservan la relacin N/C dentro de lmites benignos, de modo que se las puede diferenciar de las clulas malignas sin mayores dificultades.

4.2 HIPERCROMA DEL NCLEO

Koss [11], define el trmino hipercromtismo como una tincin perceptiblemente ms oscura de los ncleos a la microscopia ptica, de modo que esto significa mayor concentracin de ADN y mayor tingibilidad de sustancias basfilas (heterocromatina) en los ncleos en lugar de un simple aumento del ADN. Los ncleos hipercrmicos grandes suelen ser poliploides y hacen el diagnstico de malignidad. De acuerdo con estudios espectrofotometritos, las clulas malignas en divisin activa no slo contienen ms ADN, sino que ste se halla ampliamente distribuido [7]. Las mayores cantidades de ADN son las causantes de la hipercroma para los colorantes bsicos como verde de metilo3'5.356 y azul de metileno.

4.3 AGLOMERACIN GRANULAR GRUESA DE CROMATINA

Adems del hipercromtismo, la cromatina exhibe una distribucin granular gruesa o en riendas gruesas e irregulares. Las aglomeraciones granulares de cromatina, que se definen como cromocentros, predominan ms en las clulas malignas que en las benignas. El espacio comprendido entre los grumos gruesos parece libre de partculas de cromatina. nuclolos. Las cromatinas asociadas con el nuclolo tambin aparecen en mayor cantidad y son ms grandes, paralelamente al agrandamiento y multiplicacin de los

4.4 IRREGULARIDAD Y ENGROSAMIENTO DEL BORDE NUCLEAR.

El borde del ncleo, que se sola llamar membrana nuclear, se engruesa y adquiere un contorno irregular. Con el microscopio electrnico se observan invaginaciones irregulares o indentaciones del borde nuclear. Recurdese que la membrana nuclear se engruesa por condensacin de cromatina en el borde del ncleo como signo incipiente de degeneracin celular.

4.5 AUMENTO DEL TAMAO Y NUMERO DE NUCLOLOS.

Todo agrandamiento del nuclolo en ms de 5, de dimetro es muy sugestivo de malignidad. La relacin nucleolar-nuclear est aumentada; el agrandamiento nucleolar se asocia con la sntesis de ARN y protena. En la neoplasia maligna este aumento de tamao tambin se debe a un bloqueo del trasporte de los productos nucleolares al citoplasma. Desde el punto de vista funcional del ciclo celular, los nuclolos observados con el microscopio ptico en la fase intermittica pueden ser menos numerosos y destacarse ms por fusin, en comparacin con los que se ven justo despus de la telofase, cuando los nuclolos reaparecen. La cantidad de nuclolos est dada por la cantidad de organizadores nucleolares que hay en los cromosomas. Los nuclolos mltiples son atribuibles a la poliploidia; en teora, la presencia de ms nuclolos que los cinco juegos normales de organizadores nucleolares, significara malignidad.

4.6 MULTINUCLEACIN Y MULTILOBULACIN.

La multiplicacin y pronunciada indentacin o plegamiento de los ncleos se deben a mitosis anormales: un buen ejemplo es la formacin de clulas gigantes por endorreduplicacin, pero recurdese que tambin ocurre multinucleacin en clulas benignas como las columnares de los bronquios o endocrvix, y los histiocitos. La diferenciacin entre multinucleacin maligna y, benigna debe basarse en la alta relacin nuclear-citoplasmtica, en la mayor cantidad de material cromtico y en la irregularidad de su distribucin, todo lo cual es caracterstico de malignidad. En la multinucleacin benigna los ncleos son de tamao y forma uniformes y de igual contenido de cromatina.

4.7 AGLOMERACIN CELULAR CON PLEMORFISMO.

Las clulas cancerosas de origen epitelial tienden a exfoliarse formando grumos de clulas, aunque es frecuente encontrar como clulas individuales ms o menos degeneradas las del carcinoma espinocelular [12]. Uno de los rasgos ms caractersticos de malignidad en estas aglomeraciones celulares son las pronunciadas variaciones de tamao y forma de los ncleos. .

Addendum Variaciones de tamao y de forma del ncleo y del citoplasma Estos son criterios muy notorios de malignidad. pueden acompaarse de agrandamiento Hasta las clulas atpicas benignas prominencia del nuclolo e nuclear,

hipercromtismo de los ncleos, que son muy frecuentes en las neoplasias malignas, pero comparando las clulas malignas entre ellas se reconocen grandes variaciones de tamao y forma en los ncleos y en el citoplasma.

5 CLASIFICACIN DE LA LESIN
La intensidad de las alteraciones nucleares, la relacin ncleo / citoplasma y las caractersticas citoplasmticas nos permitirn clasificar la lesin por la presencia de clulas alteradas y el grado de anormalidad [25], en otras palabras, el sistema de displasia y NCI [29]. Este no es el nico mtodo de descripcin; est el sistema de clasificacin de Papanicolau y el reciente sistema BETHESDA. En la ultima parte de esta seccin se presenta un cuadro comparativo de los tres sistemas.

5.1 RESULTADOS ANORMALES

Resultados anormales son cuando el informe del laboratorio indica que las clulas son diferentes de las clulas de una crvix sana.

5.1.1 Sistema clsico. El mtodo clsico para describir una anormalidad en la escala del 1 al 5 es el siguiente: Normal. Atpico (zona gris). Displasia (pre-cancergeno). Carcinoma in situ (cncer no invasivo). Cncer invasivo

5.1.2 Sistema de Displasia y NIC.

La citologa tambin puede describirse de como

displasia leve, moderada y severa y carcinoma "in situ" [16]; es de anotar que la NIC comienza siempre en la unin cilindro-escamosa, en la zona de transformacin [10]. A continuacin se mencionan las escalas de este sistema y se describe las NIC o CIN6.

Neoplasia Intraepitelial Cervical, por sus siglas en ingles.

Normal. Atpica. Displasia de bajo grado, (CIN I). Displasia de alto grado y (CIN II / III). Cncer (CIS).

CIN I => Atipia coiloctica (efecto citoptico del virus representado por los marcados halos perinucleares) con escasas alteraciones en las otras clulas del epitelio. CIN II => Aparicin de clulas atpicas en las capas inferiores del epitelio escamoso, pero con una diferenciacin persistente (aunque anormal) hacia las capas de clulas espinosas y queratinizadas. Las clulas atpicas muestran: alteraciones del cociente ncleo-citoplasma, variaciones en el tamao de los ncleos (anisocariosis), perdida de la polaridad, aumento de las figuras mitticas con mitosis anormales e hipercromasia; en otras palabras, adquieren algunas de las caractersticas de las clulas malignas. Estos cambios se han asociado a poblaciones de clulas aneuploides y guardan mucha relacin con los tipos de alto riesgo del virus del papiloma humano, reflejando probablemente los cambios precoces asociados a los oncogenes virales de estos virus. CIN III => A medida que la lesin avanza, hay una perdida progresiva de la diferenciacin que afecta a ms y ms capas del epitelio, hasta que ste queda sustituido por clulas atpicas inmaduras que no muestran ninguna diferenciacin en superficie.

5.1.3 Sistema BETHESDA.

En 1989, el taller del National cncer Institute (NCI,

Instituto Nacional de Cncer de Estado Unidos), realizado en Bethesda, Maryland, dio por resultado el desarrollo del Sistema Bethesda para notificacin citolgica. En este sistema, las lesiones potencialmente premalignas corresponden a tres categoras y a una cuarta que ya es cncer, as: ASCUS: Clulas atpicas de dudosa significacin LGSIL : Cambios de bajo grado ( CIN I y cambios por infeccin por HPV) HGSIL : Lesin de alto grado ( CIN II / III) Cncer

La anterior clasificacin llevada al espaol nos entrega [29]: Clulas escamosas atpicas de importancia no determinada (CEAIND). Lesiones intraepiteliales escamosas de grado bajo (LIEGB). Lesiones intraepiteliales escamosas de grado elevado (LIEGE).

La lesin intraepitelial escamosa de grado bajo incluye a NCI 1 (displasia leve); por su parte, las lesiones intraepiteliales escamosas de grado elevado abarcan a las NCI 2 y 3 (displasia moderada, displasia grave y carcinoma in situ. Observe la figura 20.

Figura 20. Alteraciones celulares registradas por el sistema Bethesda.[31].

Cuadro 1. Comparacin de los sistemas de clasificacin citolgica [29].

6 DISPLASIA
The first stage preceding the development of cervical cancer is usually a condition known as dysplasia, which occurs when the squamous cells of the epithelium become abnormal in size and shape and begin to multiply.[23]. Clasificacin Clulas Displasia Leve disqueratsicas Citologa leves y maduras. Pequea cantidad de clulas discariticas. (ver figura 21) Predominio de clulas superficiales discariticas (bajo ndice discaritico) Cromatina X preservada normalmente Clulas muy discariticas e inmaduras. Gran cantidad de clulas discariticas Displasia Severa Predominio de clulas parabasales discariticas (alto ndice discaritico). (ver figura 24) Menor incidencia de cromatina X.

6.1 DISPLASIA LEVE

El cuadro histolgico de la displasia leve se caracteriza por atipia nuclear en las clulas espinosas maduras y no en las basales profundas, estado aglucgeno, maduracin desordenada e interrupcin parcial de la estratificacin por neoformaciones celulares anormales. Aunque puede haber cierta proliferacin de clulas basales, estn dispuestas con regularidad y conservan su polaridad. La membrana basal y la polaridad epitelial se mantienen intactas. En la figura 21, los ncleos son desproporcionadamente grandes e hipercromticos para ser clulas parabasales, aun as, estos cambios se ven en forma pareja. La cromatina est hecha de partculas finas y compactas, aunque en mayor cantidad. El rasgo metaplsico del citoplasma indica displasia metplasica. En general, el agrandamiento nuclear con indentacin y plegamiento de las membranas nucleares, una fina trama de cromatina y poca tincin del citoplasma, significa displasia leve.

En la figura 22, se presenta la misma disposicin de los ncleos e idntica composicin de cromatina; la uniformidad de la discariosis parabasal indica displasia metplasica.

Figura 21. leve.

Discariosis leve a mejorada originada en una displasia

Figura 22. Displasia Metplasica.

Citologa.

Aspecto general del extendido.

La displasia leve se caracteriza por El ndice En la

predominio de clulas discariticas superficiales e intermedias y por un fondo claro sin restos necrticos, aunque puede coexistir con eritrocitos y neutrfilos. discaritico, relacin entre clulas discariticas inmaduras y maduras, es bajo. displasia severa y en el carcinoma in situ. presenta en lminas regulares. Rasgo celular. Los ncleos exhiben un agradamiento moderado, aunque el citoplasma es maduro y est bien preservado. clulas intermedias normales. Son redondos u ovoides. El borde nuclear es delicado y liso, pero en la displasia son notables las arrugas fisuradas que se ven en las La cromatina est un poco aumentada, pero su distribucin es finamente granular y de tincin pareja. Se ven varios cariosomas, pero el aspecto en vidrio esmerilado es un rasgo caracterstico de la trama de cromatina. Los nuclolos no son prominentes. Los cuerpos X a lo largo de la membrana nuclear se hallan preservados con normalidad; en la displasia leve, la incidencia de cuerpos X es ms o menos la misma que en las clulas epiteliales normales.

displasia leve la exfoliacin de clulas discariticas es menos pronunciada que en la Cuando las clulas discariticas se desprenden en aglomeraciones mediante el raspado, la distribucin de los ncleos se

6.2 DISPLASIA MODERADA

La displasia moderada es un tipo intermedio de displasia que se sita arbitrariamente entre las formas leve y severa, y est representada por una poblacin de clulas discariticas con una atipia de severidad intermedia. Ntese en la figura 23 la moderada atipia nuclear, desproporcionada respecto del citoplasma adecuado de las otras clulas normales. Las cromatinas estn aumentadas, pero son finas y de distribucin pareja. Caso de displasia no queratinizante.

Figura 23.

Discariosis moderada de clulas intermedias originada en

moderada displasia.

6.3 DISPLASIA SEVERA

Las alteraciones histolgicas representativas son: 1) 2) 3) 4) 5) Hiperplasia basocelular con distorsin de la distribucin celular (distorsin de la Anormalidad de la maduracin del epitelio con distorsin de primera estratificacin. Presencia de figuras mitticas, por lo general en la mitad inferior del epitelio. Aumento del grado de discariosis. figura 24. Menor incidencia de cromatinas X.

polaridad).

Figura 24.

Considerable Discariosis por displasia severa (no

queratinizante). En la figura 24 se ilustran los puntos diferenciales que permiten la calificacin de displasia, a saber: 1) 2) 3) 4) Trama de cromatina densamente hipercromtica pero homognea. Binucleaciones frecuentes. Indentacin y plegamiento de las membranas nucleares. Nucleolos invisibles. displasia severa estn dados por la gran atipia nuclear, que es

Los criterios de fondo maligno.

desproporcionada para un citoplasma maduro de tipo parabasal, y por la ausencia de un

El hacinamiento de clulas epiteliales es considerable en el estrato de clulas basales, as como en la capa profunda de clulas espinosas, y estas clulas estn dispuestas de manera irregular y apiladas. En consecuencia, existe una importante desviacin de la polaridad. A raz de la anormalidad de la maduracin celular, se observa mucha variacin en el tamao y forma de los ncleos. Las mitosis no son infrecuentes, pero se

confinan al estrato profundo de clulas espinosas, y no llegan por encima de los dos tercios inferiores del epitelio. Las figuras mitticas son de forma regular; en el preparado histolgico se disciernen metafases regulares y anafases simtricas. Citologa. Predominan las clulas discariticas de tipo parabasal, adems de las clulas discariticas superficiales e intermedias (ver figuras 25 y 26). La discariosis con relacin N/C aumentada, hipercroma y trama de cromatina anormal, es mucho ms severa y ms inmadura que en la displasia leve; en consecuencia, el ndice discaritico es alto.

Figuras 25 y 26. Clulas parabasales e intermedias discariticas. Los ncleos son grandes, de tamao variable y un tanto endentados. Como el citoplasma es bastante abundante, la relacin nuclear citoplasmtica no es muy alterada, es decir, se mantiene dentro de los limites benignos. Hay grupos de cromatina que se distinguen como cariosomas; el fondo muestra un aspecto en vidrio esmerilado con distribucin homognea de la cromatina. En ocasiones se ve multiplicacin de los ncleos en las lesiones displsicas.

7. CARCINOMA IN SITU

Clasificacin

Citologa Predominio de clulas malignas de tipo basal y parabasal con escaso citoplasma, aisladas o en aglomeraciones sueltas. Cuadro montono de clulas malignas sin ditesis tumoral. Menor incidencia de cromatina X y aparicin de cromatinas X dobles. Predominio de clulas malignas de tipo parabasal y cantidad pequea a moderada de citoplasma. A veces, clulas malignas disqueratsicas pequeas. Cuadro un tanto polimorfo de clulas malignas, se acompae o no de clulas displsicas. Ausencia de ditesis tumoral. Menor incidencia de cromatina X y aparicin de cromatinas X dobles. Aspecto general del carcinoma invasor: 1. Sanguinolento y empastado por presencia de clulas necrticas (ditesis tumoral). 2. Exfoliacin de clulas cancerosas individuales (a menudo degeneradas) o en una lmina grande (como fragmento de tejido).

Carcinoma in situ A. Indiferenciado, clulas pequeas

Carcinoma in situ B. Diferenciado, clulas grandes

Carcinoma Invasor

Predominan

las

clulas

malignas

fusiformes

indiferenciadas, solas o en grandes aglomeraciones. Clulas malignas de los tipos tercero e intermedio sin queratinizacin. Clulas malignas variables, tipos tercero, intermedio, en vbora, en fibra y en renacuajo como diferenciadas, y a veces, clulas malignas indiferenciadas

7.1 CONCEPTO DE CARCINOMA IN SITU

En el carcinoma in situ o carcinoma intraepitelial, el cncer se confina estrictamente al epitelio de la mucosa, cualquiera que sea el compromiso de las glndulas cervicales, pero las autoridades no se han puesto de acuerdo sobre la entidad del carcinoma in situ. Algunas opiniones conservadoras postulan que su morfognesis es una etapa transitoria del cncer, es decir, una alteracin displsica severa, y se basan en los siguientes hechos (ver figura 27): 1) En ocasiones se obtienen curas o regresiones tras la escisin simple de tejido para biopsia o despus del parto. 2) No todos los casos de carcinoma in situ se convierten en carcinoma invasor. 3) La diferencia entre la edad media de las pacientes con carcinoma in situ y con carcinoma invasor parece ser demasiado grande. 4) Es raro ver carcinoma in situ clsico en los mrgenes del carcinoma microinvasor de tipo espinocelular bien diferenciado. En cambio, muchas otras publicaciones indican que el carcinoma in situ es un cncer verdadero desde los puntos de vista clnico y biolgico: 1) La edad media de las pacientes con carcinoma in situ siempre es, estadsticamente, varios aos menor que la de las pacientes con carcinoma invasor incipiente. 2) De acuerdo con el estudio de Michalkiewicz y col. [14], la tasa de recidivas del carcinoma in situ despus de varios procedimientos teraputicos es baja (3,8 %), pero es casi ocho veces mayor que la de la displasia (0,5 %). 3) La observacin a largo plazo del carcinoma in situ, realizada por Koss y col. [14], confirma que es un precursor del carcinoma invasor, sin que exhiba manifestaciones de involucin espontnea.

Figura 27. Morfognesis del carcinoma de cuello uterino No cabe duda de que el carcinoma in situ que se origina en un campo amplio de epitelio anormal, emite despus prolongaciones que invaden el estroma. Es de notar que el carcinoma espinocelular bien diferenciado salteara la etapa de displasia o de carcinoma in situ porque el carcinoma invasor de clulas grandes queratinizantes se forma junto al epitelio superficial de aspecto normal o apenas displsico. Sin embargo, en algunas ocasiones el epitelio normal aparece ntidamente bordeado por carcinoma porque es reemplazado por el crecimiento de ste [14]; en consecuencia, no siempre es correcto comentar la morfognesis del carcinoma slo por las alteraciones del epitelio contiguo a las invasiones estromales. del contenido nuclear Adems, muchos estudios bsicos, como la determinacin de ADN con el mtodo microespectrofotomtrico, el

comportamiento en cultivos de tejidos, la anormalidad en el anlisis cromosmico y el valor de la gluclisis anaerbica, indican las caractersticas malignas del carcinoma in situ.

En lo referente a la terminologa de las lesiones precancerosas y cancerosas del cuello uterino, ha prevalecido la nomenclatura que se adopt en el editorial de Acta Cytologica, en que a la displasia se la agrupa en dos clases, carcinoma in situ y carcinoma invasor (1962). Aqu se propuso el trmino histogentico neoplasia intraepitelial (CIN), basndose en el concepto de que la entidad patolgica de la displasia y carcinoma in situ es de una ndole continua: "Se designa CIN a un espectro de anormalidades intraepiteliales que empieza como una neoplasia intraepitelial bien diferenciada que por tradicin se clasificaba como displasia leve y conduce al carcinoma invasor pasando por el carcinoma in situ." A la CIN se la subclasifica de acuerdo con el grado de diferenciacin: CIN grado I corresponde a displasia leve, grado II a displasia moderada, grado III a displasia severa y grado IV al carcinoma in situ.

7.2 HISTOLOGA DEL CARCINOMA IN SITU

Las siguientes son los postulados para la identificacin de este tipo de anormalidad: 1) Todo el espesor del epitelio mucoso aparece sustituido por una aglomeracin irregular de pequeas clulas cancerosas redondas o fusiformes que presentan considerable hipercromtismo nuclear y una alta relacin N/C (tipo indiferenciado o de clulas pequeas). En el carcinoma in situ figuran casos que tienden a ir a la diferenciacin superficial. Aunque el citoplasma es un tanto ancho y poligonal, los ncleos que estn en los estratos superficiales son hipercrmicos, de morfologa irregular y de evidente malignidad (tipo diferenciado o de clulas grandes). 2) Se han perdido la polaridad y la estratificacin. La desaparicin de la polaridad en el estrato basal es un criterio seguro para diferenciar entre carcinoma in situ y displasia severa.

3) Las mitosis son frecuentes, no slo en el estrato basal, sino tambin en los estratos intermedios y superficiales de ms de las dos terceras partes de todo el espesor. direccin axial de los husos no es siempre perpendicular a la membrana basal. 4) Se observan frecuentes mitosis anormales (ver figura 28). Se destacan mucho las mitosis multipolares, en especial las tripolares. Tambin son signos de mitosis anormales 1os cromosomas asimtricos en anafase y los cromosomas polares en metafase, que se conocen como metafases de dos grupos y de tres grupos La

Figura 28.

Mitosis Anormales.

Los cromosomas polares, que se conocen

como metafase de 2 o 3 grupos son los ms comunes.7 Citologa. La citologa del carcinoma in situ, en particular el de clulas pequeas, se Los ncleos son Esta cromatina

caracteriza por predominio de clulas cancerosas de tipo basal, dotadas de un citoplasma escaso que da una reaccin tintrial cianfila plida8. hipercromticos y poseen una cromatina densamente granular.

compacta repleta de grnulos finos a medianos y la borrosidad de la prominencia

La mitosis anormal es uno de los criterios histolgicos importantes de carcinoma in situ porque son ms frecuentes que la displasia Utilizando Tincin de Papanicolau.

nucleolar, son rasgos importantes de las clulas cancerosas in situ; la cromatina granular gruesa se presentara en el proceso degenerativo (ver figura 29). Es importante mencionar que los extendidos cervicales que contienen ms del 30 % de clulas cancerosas de tipo basal en los recuentos diferenciales de clulas malignas, tienen mayor probabilidad de ser carcinoma in situ.

Figura 29. epidermoide.

Degeneracin Celular.

a. Clulas tipo A en un carcinoma

Ntense la membrana nuclear delicada y las cromatinas

granulares gruesas, pero distribuidas con uniformidad. b. Clulas tipo B en un carcinoma epidermoide, caracterizadas por tumefaccin nucleolar, disminucin del contenido de cromatina (ncleos grandes y suaves) y engrosamiento de la membrana nuclear. c. Clulas necrobiticas con cariorrexis incipiente; ntense las masas de cromatina aglomeradas en el borde del ncleo.

El carcinoma in situ de clulas grandes exhibe predominio de elementos celulares parabasales cuyo citoplasma es ms abundante que el de las clulas cancerosas bsales del carcinoma in situ de clulas pequeas (figura 30). Adems, a veces se ven escasas clulas malignas de ncleos picnticos y citoplasma disqueratsico; la descamacin de estas clulas se relaciona con la diferenciacin superficial del carcinoma in situ. Estas clulas disqueratsicas difieren de las clulas en renacuajo o fibrosas del carcinoma invasor, por su tamao y su polimorfismo. Muchas veces la aparicin ocasional de

clulas disqueratsicas de los tipos parabasal o intermedio, o una combinacin de ambas, hace que el principiante se confunda y no pueda diferenciar bien entre displasia queratinizante y carcinoma de clulas grandes combinado con displasia9. La clasificacin del carcinoma in situ y de sus respectivas alteraciones se basa en los constituyentes celulares anormales y en el predominio de clulas cancerosas de tipo basal o parabasal, pero tambin es importante el aspecto general del extendido. En el carcinoma in situ y en la displasia, el extendido es limpio porque no hay detritos celulares necrticos (vanse figuras 31 y 33). (figura 34). Tambin merece sealarse que las clulas malignas del mismo tipo basal o parabasal estn diseminadas en la misma direccin que el extendido

Figura 30.

Clulas cancerosas de tipo parabasal con una cantidad de citoplasma La trama de cromatina es granular gruesa y exhibe espacios

pequea a moderada.

claros entre las partculas de cromatina.

No es raro ver extendidos con clulas muy discariticas (clulas displsicas) mezcladas con clulas de cncer in situ. Los estudios histolgicos con piezas de conizacin tambin revelan la coexistencia o transicin de displasia severa y carcinoma in situ. Se considera que estas observaciones corroboran la importancia del concepto de CIN.

Figura 31 Aspecto general de la displasia queratinizante. Preponderancia de clulas superficiales discariticas como rasgo caracterstico. Ntese el fondo limpio.

Addendum: Distincin entre displasia severa y carcinoma in situ. discariticas superficiales e intermedias son fciles de identificar.

Las clulas Es importante

distinguir entre clulas discariticas parabasales y clulas cancerosas de tipo parabasal (tercer tipo de Graham) para trazar la diferencia entre displasia severa y carcinoma in situ. 1. El citoplasma de las clulas discariticas est bien preservado y su cantidad es ms variable que en las clulas del cncer in situ. 2. Las cromatinas nucleares de las clulas discariticas se hallan distribuidas con uniformidad y son densamente homogneas, con excepcin de los cromocentros; sta es la trama de cromatina en vidrio esmerilado. En cambio, en las clulas del cncer in situ existen espacios intercromatinicos claros, o sea zonas claras de paracromatina desprovistas de heterocromatinas. 3. En las clulas con discariosis severa, muchas veces los bordes nucleares son rgidos y exhiben unas arrugas con fisuras o circunvoluciones a modo de nueces.

Las clulas del cncer in situ tienen unos bordes nucleares con contornos bastante lisos. 4. En ocasiones se ve en la displasia multinucleacin doble o triple. 5. La prdida de la cromatina X o la aparicin de dobles cromatinas X es ms frecuente en el carcinoma in situ que en la displasia.

8 TIPIFICACIN DEL CNCER

Desde el punto de vista histolgico, los cnceres se clasifican en tres tipos principales: carcinoma epidermoide o espinocelular, adenocarcinoma y carcinoma indiferenciado. Las clulas exfoliadas tambin exhiben rasgos distintivos que concuerdan con estos tipos histolgicos. En cuanto a la concordancia entre las tipificaciones citolgica e histolgica, recordemos que las caractersticas citolgicas no indican siempre los tipos histolgicos, excepto en determinados cnceres que tienen una distribucin hstica uniforme en todo el tumor.

Puede ocurrir discordancia entre los tipos citolgicos e histolgicos porque la clasificacin histolgica se basa en la diferenciacin extrema de las clulas cancerosas, en tanto que la tipificacin citolgica refleja inevitablemente el tipo de clula cancerosa predominante.

No es raro ver una diferenciacin caracterstica, que puede ser epidermoide o glandular, en nidos de clulas cancerosas anaplsicas. que se designara con diversos trminos Por ejemplo, podemos encontrar una diagnsticos: carcinoma epidermoide, diferenciacin epidermoide abrupta en un carcinoma de pulmn de clulas pequeas, carcinoma de clulas pequeas en parte epidermoide y carcinoma combinado de clulas pequeas y epidermoide.

Lo mismo que el hemograma, el "citograma" que se emplea para estudiar la distribucin de las clulas malignas de acuerdo con los tipos celulares, es un intento encaminado a reconstruir la histologa del cncer. Si no hay suficiente cantidad de clulas malignas, el histograma puede carecer de significacin.

8.1 TIPO GLANDULAR (ADENOCARCINOMA).

Rasgos generales. Un rasgo distintivo de este tipo es la descamacin en grumos de

clulas. Las clulas estn superpuestas a modo de una distribucin glandular (cino) o de formaciones papilferas. .

Caractersticas del citoplasma. 1. Es frecuente la vacuolizacin del citoplasma. Aunque la clula cancerosa

diferenciada puede ir a la vacuolizacin degenerativa, sta es vesicular y borrosa. 2. La formacin de anillos de sello es una forma extrema de vacuolizacin citoplasmtica. El ncleo hipercrmico est desplazado hacia la periferia del La vacuola opaca citoplasma, que se halla cargado de material mucinoso.

muchas veces es PAS positiva y resistente a la digestin con diastasa. La aparicin de inclusiones secretorias citoplasmticas es un fenmeno raro, pero reviste importancia para tipificar las clulas. eosinfilas o cianfilas y PAS positivas. . Se piensa que las secreciones de las clulas adenocarcinomatosas se concentran, formando unas concreciones redondas que son

Caractersticas del ncleo. 1. Los ncleos estn en la periferia del citoplasma. cancerosas, en que los contornos son irregulares. 2. Los nuclolos son escasos, por lo general uno o dos, pero muy prominentes, con una forma redondeada en gota, y a veces eosinfilos; tienden a ser centrales. El contorno nucleolar est bien delineado. 3. La cantidad de cromatina es mayor, pero no tanto como en los otros tipos; la distribucin de las cromatinas es granular bastante fina, por tratarse de clulas malignas. Los rasgos accesorios especficos de alguna variedad de adenocarcinoma son los cuerpos psamomatosos y las inclusiones intranucleares. Los cuerpos psamomatosos son Son ms bien redondos u

ovoides y de contornos lisos, en comparacin con los de otros tipos de clulas

frecuentes en los adenocarcinomas papilferos de tiroides, ovario, pulmn, endometrio, etc.

8.2 TIPO EPIDERMOIDE (CARCINOMA EPIDERMOIDE)

Rasgos generales. Las clulas cancerosas epidermoides o espinocelulares tienden a

exfoliarse en forma individual y a degenerar, de modo que la ditesis tumoral es ms pronunciada que en los otros tipos. Sin embargo, cuando hay descamacin de clulas cancerosas en lminas o grumos, estn dispuestas en un plano y tienen el aspecto de un empedrado.

Caractersticas del citoplasma 1. El citoplasma se presenta grueso, en ocasiones de aspecto creo, y su borde est bien definido. 2. El citoplasma es abundante y de forma variable. Se ven formas grotescas, como clulas en renacuajo, clulas viperinas y clulas en fibra, peculiares del tipo epidermoide diferenciado. 3. La reaccin tintrial es naranjfila o eosinfila, segn su queratinizacin citoplasmtica. Las clulas malignas no queratinizantes son basfilas y se tien de color verde azulado10. 4. En ocasiones se reconoce alguna estructura fibrilar a lo largo del ncleo. 5. El canibalismo o inclusin celular no es caracterstico de este tipo, pero se asocia a menudo con el carcinoma epidermoide. 6. La formacin de perlas malignas, si existe, es patognomnica de carcinoma epidermoide.

Caractersticas del ncleo 1. Hay considerable plemorfismo nuclear anisonucleosis. 2. Es frecuente encontrar considerable hipercroma y picnosis de los ncleos, con

10

Utilizando Tincin de Papanicolau.

aspecto de gotitas de tinta china (vase figura 32). presencia de los nuclolos y los detalles nucleares.

La picnosis oscurece la

La condensacin local de

cromatinas hacia el borde nuclear alterna con espacios intercromatinicos claros. Esta imagen en mosaico significa necrobiosis de clulas cancerosas y es frecuente en el carcinoma epidermoide. 3. Bordes nucleares rgidos y borrosidad de los nucleolos (vase figura 33).

Figura 32.

Clulas malignas del tipo epidermoide en raspados

cervicales. Los rasgos distintivos de este carcinoma son la hipercroma de los ncleos con picnosis en gotitas de tinta china y las formas grotescas.

Figura 33. Lmina de clulas malignas de tipo epidermoide.11 A mayor indiferenciacin, ms borroso es el citoplasma. La flecha indica canibalismo.

8.3 Tipo indiferenciado (carcinoma de clulas Indiferenciadas)

Rasgos generales. En este tipo muchas veces estn el adenocarcinoma y el carcinoma epidermoide poco diferenciados; la desdiferenciacin extrema es el prototipo del carcinoma de clulas grandes indiferenciadas. Aunque no existe ningn rasgo distintivo que caracterice a este tipo, la dbil tingibilidad, la escasez de citoplasma y la interrelacin laxa entre las clulas de un grumo, abonan a favor de este tipo.

Caractersticas del citoplasma 1. El citoplasma es tan escaso que la relacin N/C es la ms alta de los tres tipos principales de clulas malignas. 2. Las clulas cancerosas indiferenciadas suelen descamar en forma individual o en

11

Clulas correspondientes a un carcinoma de cuello uterino.

aglomeraciones celulares sueltas; los ncleos estn dispuestos en una lmina plana sin imgenes de rganoides. No hay formaciones tubulares ni cornificacin celular. 3. El borde citoplasmtico es borroso y la reaccin tintrial es dbilmente basfila o cianfila.12 Caractersticas del ncleo 1. Los ncleos predominan y exhiben considerable plemorfismo, anisonucleosis, hipercroma y grumos de cromatina gruesos, esto es, granular y densa. Vase figura 34. Los contornos nucleares son irregulares y por lo general polidricos. 2. Los nuclolos son variables; van desde uno solo hasta muchos y presentan contornos irregulares y basfilia.

Figura 34. Carcinoma in situ indiferenciado. Los ncleos son redondos u ovales e hipercromticos. El citoplasma es escaso y mal delineado. Ntese la imagen en fila india

12

Utilizando Tincin de Papanicolau.

9. CARCINOMA DEL CUELLO UTERINO

9.1 CARCINOMA EPIDERMOIDE

Alrededor del 95 % de los carcinomas del cuello uterino son epidermoides. Las clulas cancerosas aparecen dispuestas en laminas y columnas anamostasadas que forman una imagen en tejado. Los carcinomas epidermoides estn formados por clulas relativamente grandes, unas veces queratinizadas (bien diferenciadas) y otras no queratinizadas (moderadamente diferenciadas). El otro 5% corresponde al carcinoma de clulas pequeas.

El

10

al

25% de los carcinomas cervicales son

adenocarcinomas, carcinomas

adenoescamosos carcinomas indiferenciados u otros tipos histolgicos infrecuentes. Supuestamente, los adenocarcinomas se originan en las glndulas endocervicales Su aspecto microscpico y su evolucin son similares a las de los carcinomas epidermoides

Citologa.

Los extendidos de la etapa avanzada son sucios por la gran cantidad de

eritrocitos, leucocitos y clulas malignas degeneradas o necrosadas (ditesis tumoral). Se ven clulas picnticas con ncleos en gotitas de tinta china y citoplasma eosinfilo o clulas colicuadas de ncleos borrosos y citoplasma indefinido. El tipo espinocelular, en particular, se caracteriza por diversos tipos de clulas malignas, como clulas en renacuajo, clulas en vbora y clulas en fibra.

9.2 Adenocarcinoma
Los carcinomas adenoescamosos presentan patrones glandulares y escamosos mixtos, y parecen originarse a partir de las clulas de reserva en la capa basal del epitelio endocervical [10]. Aspecto General. El adenocarcinoma del cuello uterino representa el 5 a 7% de los

canceres de esta localizacin. Aunque la incidencia de carcinoma del cuello uterino est

disminuyendo en los ltimos aos, la proporcin de adenocarcinomas cervicales sigue en aumento. Hay una diferencia importante en la tasa de supervivencia entre el adenocarcinoma y el carcinoma epidermoide, aunque la mayora de los adenocarcinomas son morfolgicamente diferenciados.

Citologa.

En el manejo citolgico del adenocarcinoma cervical, los citlogos deben

prestar atencin a: 1) La distincin respecto de la discariosis endocervical o de la displasia glandular, 2) decidir la malignidad en el caso de adenocarcinoma bien diferenciado y 3) diferenciar el adenocarcinoma de acuerdo con su origen, como endocervical, endometrial y extrauterino. La discariosis endocervical, conocida como displasia glandular endocervical, sera un derivado de la hiperplasia de clulas de reserva de las glndulas endocervicales; su citologa se caracteriza por hipertrofia nuclear, hipercromtismo simple sin anormalidad de la trama de cromatina y alta relacin N/C.

ANEXO B NDICES DE NEOPLASIA EN COLOMBIA1

Durante el ao 1999, se diagnosticaron en el Instituto Nacional de Cancerologa 4196 casos nuevos de cncer; presentando una disminucin del 15% con respecto al ao anterior, variacin que tuvo comportamiento similar en el grupo de hombres (12% menos) y en el de mujeres (17% menos), sin que se observaran modificaciones en su relacin (1:2). Por su orden de frecuencia, las cinco primeras localizaciones continan siendo las mismas de 1998, sin embargo el cncer de seno pas del tercer al segundo lugar. El cncer de cuello uterino sigue teniendo el mayor nmero de casos nuevos diagnosticados en el Instituto y representa el 16.4% del total (vase Figura 1).

Figura 1. Casos nuevos de cncer (diez primeras localizaciones) Instituto Nacional de Cancerologa, E.S.E. 1999
1

Informacin obtenida del Instituto Nacional de Cancerologa. Registro 1999.

El porcentaje acumulado de las cinco primeras causas no tuvo variaciones importantes con respecto al ao 1998 (53.7% y 52.8% respectivamente) y para 1999 las diez primeras causas constituyeron el 67% del total de casos.

El comportamiento de las principales causas de cncer en el Instituto refleja el comportamiento de la enfermedad en Colombia a pesar de no conservar el mismo orden de frecuencias; para el ao 1995 las cinco primeras localizaciones del cncer en el pas eran estmago, cuello uterino, seno, pulmn y colon y recto (GLOBOCAN 1998, IARC). Las variaciones que se observan podran relacionarse en primer lugar a las acciones desarrolladas para la prevencin del cncer de cuello uterino y en menor proporcin para el cncer de seno (contrario a lo ocurrido en relacin con el cncer gstrico) situacin que conlleva un mayor diagnstico de estas patologas y por tanto, mayor demanda en centros asistenciales como el Instituto Nacional de Cancerologa.

CNCER DE CUELLO UTERINO

El cncer de cuello uterino constituye la primera causa de cncer en Colombia en general y la primera en mujeres. En el Instituto Nacional de Cancerologa, contina siendo la primera causa de cncer tanto en el grupo de mujeres como al reunir ambos sexos; con 691 casos nuevos represent el 16.4% del total en 1999 (16.8% en 1998) y el 26.8% de los casos en el sexo femenino (26.8% en 1998), es decir que su atendidos en 16.5% con respecto al perodo anterior. participacin porcentual no ha sufrido modificacin, an cuando se disminuy el total de casos El promedio de edad fue 49.5 aos (DT 14.1) y la mediana 47 (R: 16-97). El 39% de los casos provienen de Santa fe de Bogot que junto con el departamento de Cundinamarca rene mas de la mitad de la poblacin (54.9%). Departamentos con facilidad de acceso como Tolima, Boyac y Meta suman un 18.3% adicional, sin embargo el Meta tiene un bajo porcentaje de pacientes (3%), contrario al Huila que aporta similar nmero de pacientes a Boyac (6.7 y 6% respectivamente).

El 23.9% correspondi a carcinomas in situ (de cualquier tipo histolgico) y el 84.7% de los casos son del grupo de los carcinomas escamocelulares (ver Figura 2).

Figura 2. Cncer de Crvix - Distribucin por Tipo Histolgico (Instituto Nacional de Cancerologa, ESE-1999)

La base para el diagnstico fue el estudio histopatolgico en el 97.7% de los casos, an as el 85.5% no tiene consignado el grado de diferenciacin y el 9.1% tienen diagnstico de cncer de crvix sin otra especificacin (Cdigo SAI); de estos ltimos el 73% son carcinomas in situ. Los estadios IA y IB representan el 11.1% de los cnceres invasivos, los estadios IIA a IVA el 76%, los IVB el 6.7% y un 6.3% no tena dato sobre el estadio clnico (Tabla 1).

Tabla 1. Cncer de Crvix Distribucin Estadio Clnico. Instituto Nacional de Cancerologa, ESE 1999. Estadio clnico In situ IA IB II A II B III A III B IV A IV B Sin dato Total Frecuencia. 164 1 57 2 113 2 255 29 35 33 691 Porcentaje 23.7 0.1 8.2 0.3 16.4 0.3 36.9 4.2 5.1 4.8 100

El 12.3% de los casos no tenan documentada ninguna forma de tratamiento en el momento de captura de datos; de los 606 casos con tratamiento documentado, el 34.3% fueron sometidos a ciruga (183 casos slo ciruga y 55 en combinacin con otros tratamientos), el 51.7% recibi slo radioterapia y un 15.4% adicional la recibi en combinacin con otros mtodos, la quimioterapia fue utilizada en el 7.6% de los casos con tratamiento documentado (Tabla 2). De los 183 casos con ciruga sola, 162 corresponden a carcinomas in situ (139) o estadio I (23).

Tabla 2. TRATAMIENTO DEL CNCER DE CRVIX. Instituto Nacional de Cancerologa, ESE 1999. Tipo de tratamiento Radioterapia Ciruga Quimioterapia Otros tratamientos Ciruga y radioterapia Radioterapia y quimioterapia Ciruga y quimioterapia Radioterapia y otros tratamientos Ciruga y otros tratamientos Ciruga, radioterapia y quimioterapia Ciruga, radioterapia y otros tratamientos Ciruga, radioterapia, quimioterapia y otros tratamientos Sin tratamiento Total Frecuencia 314 183 2 12 45 36 2 4 1 5 1 1 85 691 Porcentaje 45.4 26.5 0.3 1.7 6.5 5.2 0.3 0.6 0.1 0.7 0.1 0.1 12.3 100

Cuarenta y ocho casos (7%) tenan metstasis diagnosticada al ingreso, el 54.2% de ellos con compromiso ganglionar, siguiendo en orden de frecuencia las metstasis seas (18.8%) y la invasin heptica (10.4%).

ANEXO C TABLAS

La tabla C-1 contiene los datos de media, desviacin estndar, rea bajo la curva de la firma y el rea medida en pxeles, para los ncleos de todas las clulas procesadas. La tabla C-2 exhibe las cifras obtenidas en el clculo de los momentos. relaciona la informacin generada al evaluar los momentos invariantes. La tabla C-4

Tabla C-1. Datos de Media y Desviacin Estndar para los ncleos REA CURVA REA PXELES

ARCHIVO Parabasales
Mask 1 CEPBN14 400x E_limpio.bmp Mask 1 CEPBN3 400x_E.bmp Mask 1 CEPBN7 400x_E.bmp Mask 1_de_14 CEPBN12 x400(limpio)_E.bmp Mask 1_de_2 CEPBN6 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_2 CEPBN8 400x.bmp Mask 1_de_4 CEPBN13 400x_E.bmp Mask 1_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp Mask 1_de_9 CEPBN5 400x(limpio).bmp Mask 1_de_9 CEPN11 400x(limpio).bmp Mask 10_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 11_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 12_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 14_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 2_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 2_de_2 CEPBN6 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_2 CEPBN8 400x(limpio).bmp Mask 2_de_4 CEPBN13 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp

MEDIA

DESVIACIN

14.339806 16.983051 14.346153 12.815217 12.968085 13.148936 15.228572 13.909092 13.708333 12.135417 12.087913 16.223141 11.955056 10.0125 11.988095 12.411112 9.295774 12.482352 12.945056 14.297029 14.601851 15.981817 10.4875

1.24287 1.234964 1.994074 0.988294 1.824491 1.413893 1.616917 2.429162 1.506352 2.604563 1.770629 1.43445 1.754033 1.373806 1.3407 1.182224 1.079833 1.523245 1.261106 1.375489 2.155698 1.078567 1.396368

1484.691406 2010.618042 1496.90686 1184.790039 1223.968384 1240.350342 1606.350098 1382.645874 1321.1604 1167.505249 1106.178223 1970.99707 1067.474731 807.857361 1011.849915 1123.331055 666.94989 1064.225708 1184.565063 1450.103271 1584.259521 1762.471558 844.603699

715 1000 725 599 600 620 819 685 664 527 537 916 522 383 519 559 327 567 605 722 751 898 411

Mask 2_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_9 CEPN11 400x_E.bmp Mask 3_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 3_de_4 CEPBN13 400x(limpio)_E.bmp Mask 3_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_AC.bmp Mask 3_de_6 CEPBN4 400x_E.bmp Mask 3_de_8 CEPBN10 400x_E.bmp Mask 3_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 4_de_4 CEPBN13 400x_E.bmp Mask 4_de_5 CEPBN9 400x_E.bmp Mask 4_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_AC.bmp Mask 4_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp Mask 4_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 4_de_9 CEPN11 400x(limpio)_E.bmp Mask 5_de_14 CEPBN12 x400(limpio)_E.bmp Mask 5_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 5_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 5_de_9 CEPN11 400x_E.bmp Mask 6_de_8 CEPBN10 400x(limpio)_E.bmp Mask 6_de_9 CEPBN5 400(limpio).bmp Mask 6_de_9 CEPN11 400x(limpio)_E.bmp Mask 7_de_14 CEPBN12 x400_E.bmp Mask 7_de_9 CEPBN5 400x(limpio).bmp Mask 8_de_14 CEPBN12 x400(limpio)_E.bmp Mask 9_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 9_de_9 CEPBN5 400x(limpio).bmp Mask 9_de_9 CEPN11 400x(limpio)_E.bmp

13.144329 13.673914 10.136987 16.100918 15.299066 15.278847 9.675675 11.9 12.263736 12.229885 14.689321 9.314285 11.842697 12.473684 10.450704 16.192659 10.939758 14.04 11.2 14.479592 13.880434 10.901235 9.5 11.481013 10.864198 9.228572 11.835294

1.519561 1.022664 1.11423 1.750203 1.499003 0.752646 1.152062 1.779045 1.436075 2.332682 1.784666 0.837391 1.048261 1.35213 1.616715 1.570818 1.953368 1.248359 2.730223 1.46545 1.249716 1.013549 1.795264 1.491416 1.254651 0.897161 1.196535

1281.445435 1262.060791 744.09375 1760.360352 1647.23291 1595.562134 723.423645 954.766235 1121.310791 1065.92688 1518.236206 658.921875 1059.51416 1191.25415 743.343384 1770.1427 913.294067 1408.636719 956.782593 1423.730835 1278.727295 886.110596 705.128723 909.133484 881.368835 651.502747 1011.246277

629 665 386 894 830 825 356 513 538 532 759 327 516 565 403 926 443 701 435 729 677 442 340 469 435 328 511

Intermedias
Mask_1 CEIN1 400x.bmp Mask_1 CEIN10 400x.bmp Mask_1 CEIN11 400x.bmp Mask_1 CEIN12 400x.bmp Mask_1 CEIN13 400x.bmp Mask_1 CEIN14 400x.bmp Mask_1 CEIN16 400x.bmp Mask_1 CEIN17 400x.bmp Mask_1 CEIN19 400x.bmp Mask_1 CEIN2 400x(prueba2).bmp Mask_1 CEIN23 400x(prueba2).bmp Mask_1 CEIN27 400x.bmp Mask_1 CEIN29 400x.bmp Mask_1 CEIN3 400x(prueba).bmp Mask_1 CEIN3 400x(prueba_2).bmp Mask_1 CEIN30 400x.bmp Mask_1 CEIN31 400x.bmp Mask_1 CEIN4 400x(prueba).bmp Mask_1 CEIN5 400x.bmp Mask_1 CEIN7 400x.bmp 10.775 12.033333 8.56923 10.910256 10.413333 11.025641 10.886075 12.75532 9.69863 9 13.084211 11.534883 10.13924 11.487804 10.817073 9.115942 9.972603 8.383333 10.4875 10 1.717374 1.276645 1.00238 1.840966 1.709509 0.856654 1.567521 0.758787 2.635613 0.964354 1.540066 1.739975 0.843324 1.695866 0.754799 2.274828 1.393261 861.717896 561.191467 851.994812 784.518555 865.810486 866.513916 712.402954 599.699585 993.878967 808.461365 945.328979 890.01123 635.921326 733.248657 508.017487 840.254944 680.344177 415 520 286 441 384 437 442 589 343 308 615 464 390 477 424 317 374 270 382 364 1.715615 1083.836914

1.293899 1200.369141

0.913791 1249.540039

Mask_1 CEIN8 400x.bmp Mask_1_de_2 CEIN21 400x.bmp Mask_1_de_2 CEIN26 400x.bmp Mask_1_de_2 CEIN28 400x.bmp Mask_1_de_4 CEIN18 400x.bmp Mask_2 CEIN16 400x - Azul.bmp Mask_2_de_2 CEIN26 400x.bmp Mask_2_de_2 CEIN28 400x.bmp Mask_2_de_4 CEIN18 400x(Prueba).bmp

10.233767 9.8 8.548387 12 9.73913 8.349206 11.511111 8.540983 13.515463

1.40404 1.177568 1.145502 0.993808 1.223587 1.274397 1.095052

793.58606 742.11615 530.628479 972.250061 677.401611 527.499634 523.556946

401 368 277 511 352 267 490 285 654

1.614135 1040.794434 1.606131 1317.297241

Superficiales
Mask 1 CESN11 400x.bmp Mask 1 CESN12 400x.bmp Mask 1 CESN13 400x.bmp Mask 1 CESN14 400x.bmp Mask 1 CESN15 400x.bmp Mask 1 CESN17 400x.bmp Mask 1 CESN18 400x.bmp Mask 1 CESN19 400x.bmp Mask 1 CESN20 400x_AC.bmp Mask 1 CESN4 400x.bmp Mask 1 CESN5 400x.bmp Mask 1 CESN6 400x.bmp Mask 1 CESN7 400x.bmp Mask 1 CESN8 400x.bmp Mask 1_de_1 CESN9 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN1 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN10 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN16 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN3 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 1_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 1_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 2_de_1 CESN9 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN1 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN16 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN3 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 2_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 2_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 3_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 3_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 3_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 3_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN21 400x.bmp 6.117647 5.0625 5.608696 7.396552 6.592593 5.285714 5.465116 5.76087 6.407407 6.301887 8.180327 5.681818 7.887097 5.847826 5.452381 5.380952 4.470588 6.960784 5.186046 7.107142 5.051282 8.338462 5.081081 5.583333 4.926829 5.487805 7.157895 4.952381 5.886364 5.711111 6.085106 6.340425 5.913043 5.511628 5.609756 5.238095 5.911111 5.977778 0.83189 0.658478 0.674964 1.401227 1.367866 1.07539 0.726535 1.201173 1.240049 1.222199 1.583814 0.791223 1.283956 0.658305 0.980825 0.615374 0.652385 1.399731 0.946372 1.046739 0.904369 1.638732 0.881595 0.975392 0.837832 0.800059 0.720367 1.19428 0.775063 1.002712 1.10761 1.077361 0.951568 0.758582 1.123541 1.211247 0.754902 0.85606 312.892212 159.65155 261.216675 428.167084 355.715393 222.020325 235.956177 266.792511 348.527039 338.07074 499.449371 251.939789 492.761353 271.556458 231.357986 226.876892 151.109283 355.711823 222.365616 402.778534 197.35434 545.708313 187.825836 266.743988 202.710785 225.330475 409.43158 207.10025 262.329163 256.661469 287.53717 300.445648 273.908844 236.907761 230.621231 220.019394 265.815613 270.787506 156 103 133 207 166 119 129 139 172 168 234 140 241 144 129 123 89 190 114 199 110 273 108 131 106 125 203 107 144 132 146 166 146 129 132 114 145 149

Mask 4_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 4_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 5_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 6_de_6 CESN25 400x.bmp

4.947368 7.5 4.166667 5.895833 7.761905

0.686232 1.228033 0.897527 0.87177 1.58078

184.866302 467.591797 125.273643 286.140991 491.37442

103 225 76 146 230

Neoplasia Alto Grado

Mask 1_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 1_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 1_de_3_LEIC-AG10 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG6 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 10_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 11_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 11_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 12_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 13_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 14_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 2_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 2_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 2_de_3_LEIC-AG10 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG6 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 3_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 3_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 3_de_4_LEIC-AG5 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 4_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 4_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 4_de_4_LEIC-AG5 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 5_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 5_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 5_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 5_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 6_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 6_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 6_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 7_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 7_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 8_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp 13.340659 12.915663 13.520833 15.301887 17.216667 13.959596 17.798388 14.244899 10.287671 13.171718 12.617978 14.0101 13.217821 10.9875 14.219048 16.713043 16.084745 16.608696 13.909091 17.034187 10.205128 14.914893 15.347826 11.5375 12.833333 11.160495 14.900001 17.008131 18.047619 10.9625 17.429752 16.205608 14.701923 12.069768 12.147727 12.292135 14.519231 17.254236 12.402174 13.541667 13.531914 12.10465 2.087218 1217.099609 1.701911 1.249826 1074.44519 1303.43335 636 597 655 819 1037 697 1089 718 400 606 578 708 634 445 716 975 904 968 698 981 394 770 801 490 585 448 785 1003 1132 424 1062 921 723 513 531 544 728 1021 548 650 656 510

1.415346 1626.432007 1.587363 2075.044922 0.994116 2.181224 1.026758 1392.86145 2215.17041 752.788208

1.363229 1403.141846 2.132199 1308.664307 0.854671 1131.074951 0.674124 1394.947876 1.286672 1339.722412 1.553172 883.117126 1.400551 1501.759277 1.343359 1932.616577 2.230666 1906.342896 1.17729 1917.143066 0.81762 1385.015625 2.926249 1999.018921 1.35267 802.073364 1.310023 1404.395508 3.783358 1775.236328 1.753167 2.103474 1.605983 925.100891 1081.17688 905.555298

2.090455 1494.826416 1.620478 2100.570557 1.60286 2280.821045 1.840134 880.911011 0.81135 2118.295898 1.843089 1738.987671 3.174053 1531.156006 2.089791 1043.366333 1.192207 1074.189209 1.172745 1095.842285 2.954725 1511.091919 3.340015 2042.307251 2.427469 1146.383179 1.088928 1307.582153 1.849106 1272.639893 1.59963 1043.423584

Mask 8_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 9_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp

10.306666 13.097826

1.574576

773.854248

393 621

1.277394 1209.997925

Tabla C-2. Momentos

ARCHIVO Parabasales
Mask 1 CEPBN14 400x E_limpio.bmp Mask 1 CEPBN3 400x_E.bmp Mask 1 CEPBN7 400x_E.bmp Mask 1_de_14 CEPBN12 x400(limpio)_E.bmp Mask 1_de_2 CEPBN6 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_2 CEPBN8 400x.bmp Mask 1_de_4 CEPBN13 400x_E.bmp Mask 1_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp Mask 1_de_9 CEPBN5 400x(limpio).bmp Mask 1_de_9 CEPN11 400x(limpio).bmp Mask 10_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 11_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 12_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 14_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 2_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 2_de_2 CEPBN6 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_2 CEPBN8 400x(limpio).bmp Mask 2_de_4 CEPBN13 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp Mask 2_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_9 CEPN11 400x_E.bmp Mask 3_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 3_de_4 CEPBN13 400x(limpio)_E.bmp Mask 3_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_AC.bmp Mask 3_de_6 CEPBN4 400x_E.bmp

M 01

M 10

M 11

M 20

M 02

M 30

M 03

M 12

M 21

-517.32135 -400.019287 597.056824

11922.166 15240.5166 -117383.5547 -181618.3906 -40133.5661 -48899.57031

-160.52597 -123.660828 883.692627 16815.6211 19800.9629 -32333.76953 -49329.38281 -31887.591 -26670.25391 -192.423538 -212.923523 2821.29028 14024.5215 10456.498 -78630.63281 -49680.64844 -24213.3828 -32996.49219 -523.91333 -393.216309 1109.61511 10929.3574 10905.5957 -117810.5469 -145965.3281 -32251.5742 -47229.02344 -253.532257 -356.427246 -671.301208 11471.1309 8594.85645 -119005.1875 -63084.82031 -19265.8007 -14087.77148 -626.871826 -449.232635 4889.14063 11151.6758 13348.2734 -125996.8594 -204555.3906 -87097.7343 -87599.71094 -629.057495 -902.312683 3308.30176 18963.5039 19897.9531 -344215 -304638.625 134055.7813 -74847.0625 -368.52478 -335.223267 3348.37622 9471.20313 15034.1758 -87849.36719 -140023.8125 -57953.6445 -47918.18359 -831.041809 -72.625 -404.213989 -426.764954 -76.449875 -443.52417 -348.444824 -467.042145 -312.282166 -299.252319 -346.337067 -375.017792 -632.145996 -170.17514 -127.175415 -215.054001 -391.315063 -561.981689 -419.364624 -218.461411 -656.875 3053.17212 15929.1016 15821.9766 -244070.875 -87.542221 -391.072449 -104.775375 -598.570068 -268177.25 -67725.2968 -99706.625 2366.7312 9926.73145 6223.82031 -24788.35547 -12524.56836 -2075.55762 -2106.678467 562.327393 858.049316 1987.69043 21287.53906 16942.4707 9624.99707 8411.123047 4945.885742 10170.28711 4230.25 9791.875 -162468.6719 -99967.34375 -14828.18164 -146938.8125 -91818.41406 -77034.50781 -97179.61719 -62145.40625 -56863.75781 -149907.5313 -236868.9844 -19891.00391 -38629.99219 -63068.38281 -124651.1172 -287140.75 -103690.6719 -124522.8906 -141404.4219 -52408.72266 -91791.99219 -43885.8125 -9352.72168 -5198.320312 -127139.9531 -51958.92578 -77225.8125 -24840.61719 -83311.42969 -41721.38672 -76311.23438 -14729.57422 -80979.71875 -31147.29883 -134158.7188 -32523.99609 -111969.8281 -58562.19141 -275406.5625 -87540.02344 -28771.54883 -7672.268066 -46849.58203 -8502.567383 -57701.77734 -17812.30664 -69059.3125 -39020.54688 -290458.5938 -109940.1328 -159667.7969 -16989.15234 -72953.5625 -36765.25391 -67043.78125 -58248.09766 -5292.82666 -38179.19141 -39618.19531 -35835.61328 -25690.58984 -34982.83594 -37897.23047 -62216.72656 -89107.42188 -13299.84766 -3169.448975 -20182.92578 -33566.15625 -69142.16406 -56817.07031 -28996.9668

-419.153748 -369.460876 2801.61572 8097.86621 10652.2344 -73753.21875 -125981.4766 -57460.5625 -40756.19922 -354.090332 3204.301758

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Intermedias
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Superficiales
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Mask 1_de_2 CESN3 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 1_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 1_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 2_de_1 CESN9 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN1 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN16 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN3 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 2_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 2_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 3_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 3_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 3_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 3_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 4_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 5_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 6_de_6 CESN25 400x.bmp

-211.069672 -177.488388 911.098022 1377.24731 1655.92004 -11108.44434 -13775.89356 -6780.74218 -6912.856934 -503.839142 -285.803131 2111.90308 3352.28906 5516.78906 -35356.35938 -67855.78906 -21441.8281 -25727.56641 -188.076965 -285.384705 1175.00574 2389.64551 1505.8158 -22308.41406 -12715.5459 -9362.39063 -9618.348633 -470 -401.769531 2714.30518 6114.56104 4992 -77441.99219 -58196 -29464.3809 -42666.03516 -145.081161 -151.243042 652.834229 1023.96155 1229.44995 -7582.584961 -9682.699219 -5463.41553 -4613.570312 -122.562683 -289.000427 782.187988 2445.00073 1207.16834 -22770.57422 -7207.890137 -7219.38818 -7089.555664 -489.024139 -273.292755 2880.62524 2152.99634 5901.41065 -19094.05078 -77711.33594 -34546.5586 -22604.1543 -169.390091 -209.238129 -151.75589 539.545166 1104.58875 1526.54639 -7738.59082 -12384.51172 -4950.69385 -3836.155273 -174.66687 754.063782 1190.44519 1682.12183 -8485.630859 -14394.19727 -5946.06982 -5083.139648 1958 -29092.58984 494.255585 -6112.28418 -8133.12207 -17768.17578 -28385.53906 -12235.70313 -79868.03906 -100376.7813 2749.683594 -13371.61914 -3198.31543 -17361.89648 -19560.80469 -17535.5 -10924.5039 -13417.14844 706.23175 -585.170898 -7831.758789 -3014.417236 -5100.96875 -2462.880371 -45275.44531 -19228.66602 -73060.54688 -32248.0293 -7920.608887 -6988.798828 -61045.24609 -46118.14453 -28427.75781 -28448.82422 3189.184814 970.841675 -20921.65234 -7402.804199 -4367.496582 -2609.918701 -19147.36914 -9663.74707 -24615.5918 -13321.81152 196.760803 -2282.81543 -3381.79541 -15414.38086 -25383.19141 -5939.871582 -49872.31641 -35920.08594 1046.554443 -7307.014648 -2212.251465 -9192.436523 -10166.67285 -298.631592 -674.736267 3112.88477 8884.44043 3189.50513 -130282.4297 -31941.36914 -33719.4844 -40362.81641 -242 -279.454987 1347.00085 2746.89478 -0.00013 -100.127655 -95.217407 -382.232391 -471.511932 -115.428619 -445.444763 -278.888763 66.052498 -201.451447 -94.233223 -234.375 -200.444641

-379.288574 -328.088715 2357.29541 3079.55811 3769.59155 -31887.83984 -41979.28906 -22761.2773 -21446.69727 -0.000168 -94.702194 655.914734 1313.95715 -99.489594 -111.347992 244.584671 334.255066 1156.003418 1451.582886 1315.277832 1002.132263 1957.539917 3930.033203 2781.846191 5575.909668 1539.147705 1192.448975 6008.548828 4937.794922 7190.597656 2721.580811 583.798645 596.944092 2229.620117 2711.715576 552.221069 659.286926 1981.999878 2099.132812 2483.020264 3207.876221

-237.302139 1899.353638 -305.268402 2862.546387 -213.238159 768.313416 -501.444031 4265.972168 -563 2956.888916 54.868473 -154.128906 -94.566635 109.059418 672.867554 382.365143

-230.457916 1078.772583 -224.570953 1163.047241

Neoplasia Alto Grado

Mask 1_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 1_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 1_de_3_LEIC-AG10 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG6 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 10_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 11_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp -194.615646 -207.912689 473.654999 7193.61768 12207.4932 -45690.41797 -42.662689 -357.916473 -57009.375 -32519.5078 -14758.47852 -42.494469 1271.73706 8358.48242 6756.65576 -9864.730469 -6451.154297 -3252.69360 -7324.526367 -341.75 -175.279022 10574.5391 11897.5283 -98489.32031 -111687.3438 -26937.5195 -32584.28711

-506.509094 -538.018127 3140.83423 14897.2725 18129.2656 -182778.7656 -209600.5156 -99292.2656 -81274.63281 -539.800415 -536.098572 1442.91431 19256.5918 26337.9707 -229855.4531 -308746.5938 -101132.148 -72962.11719 -75.909248 -66.333649 912.100708 9302.48047 11957.6396 -9993.511719 -21697.5 -2228.24634 -6581.595215 -183.435852 -142.934509 1743.50354 17879.1875 25238.4414 -41623.51563 -77302.07031 -34476.6289 -39835.22266 -306.275208 -397.837769 2903.01489 13295.9238 11953.6504 -128971.5938 -100903.875 -61552.1016 -57113.35156 -271.849426 -284.21994 1671.06006 5249.55811 6033.46387 -51406.14844 -50825.19922 -28416.7207 -25030.2793

Mask 11_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 12_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 13_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 14_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 2_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 2_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 2_de_3_LEIC-AG10 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG6 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 3_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 3_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 3_de_4_LEIC-AG5 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 4_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 4_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 4_de_4_LEIC-AG5 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 5_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 5_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 5_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 5_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 6_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 6_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 6_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 7_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 7_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 8_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 8_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 9_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp

-229.019562 -232.131805 1747.20508 7151.26807 13776.9707 -45838.52734 -80276.03906 -27585.0234 -16329.61816 -149.943924 -193.201599 919.537659 8481.91797 8027.6167 -48118.68359 -34776.35156 -310.454224 -84.029877 -62.25 -139.466705 -86.644173 -21101.75 -14934.37305 -343.18045 1366.60547 11975.2559 12517.8643 -107347.0469 -92015.07031 -42344.5937 -42990.02344 1269.9967 9532.94434 9870.65137 -16641.26367 -23902.16016 -9003.58594 -7048.637207 9480 14146.8682 -23556 -38773.48438 -15055.3926 -14046.98047 -61.599636 1128.29944 5754.08008 5036.28125 -13657.47852 -9011.847656 -5505.7119 -8345.936523 -120 342.999817

-435.913208 -366.885559 716.829346 17414.8906 21413.6172 -161995.3906 -212479.9063 -51964.9336 -52613.96484 -224.795959 -201.356384 4386.26025 17836.4355 17033.6152 -84571.95313 -94189.35938 -43801.2539 -42260.03125 -254.738464 -239.393707 -217.85376 1943.44666 16950.2344 19209.6836 -94901.98438 -128607.8125 -37411.1914 -36387.05859 -230.30397 828.697388 10843.335 11740.5635 -76558.42188 -75416.86719 -25889.6992 -23667.91016 -49528.5 73.929924 13263.5986 26943.7461 -86911.28906 -202146.0781 -49014.8203

-340.649231 -252.716812 -0.000198 -32.573975 -27.337599

-135.07666 -124.974457 691.672424 4317.01953 5469.28906 -21190.67383 -25204.95898 -4911.62109 -5154.643066 0.000486 2076.61719 10341.4053 11698.4697 6584.463867 11062.43359 -2371.3892 2925.734619 -28.696877 2412.81738 19107.7891 10111.1836 25475.51758 -26832.55273 -27726.4883 7339.279297 -25.412867 1041.57642 6049.18457 5611.2251 -3732.57666 -4313.12793 -557.997131 -4688.822754 8651.0957 8004.84375 -44428.45313 -61435.88672 -27407.8223 -29379.26758

-184.226715 -158.036072 2863.75635

-287.209808 -237.729324 985.471069 5090.81787 8198.39746 -36414.84766 -74478.34375 -26279.7227 -16625.34766 -297.450043 -324.539795 -1679.25293 16386.5488 11475.4736 -130308.2109 -92947.08594 -22651.0312 -32105.80273 -196.179504 -198.537689 2914.22388 17428.8203 22051.3848 -77560.41406 -89094.21094 -49300.0273 -35888.51953 -234.944412 -251.778748 -543.20459 26249.9004 20356.5586 -148823.3281 -221.305237 -342.057831 -27.488434 -101872.25 -21236.7129 -69420.94531 -204.074951 -188.774567 -1138.75256 4981.22022 6922.08887 -30503.80469 -40008.49609 -12529.6191 -2914.318848 -237.96521 1535.49841 21439.1289 19875.082 -107796.3281 -105060.0391 -44883.9726 -37120.05078 -398.11676 -3469.06641 14816.8652 13429.7158 -138372.7656 -100561.5547 -20646.3652 -16958.47656 -32.546307 1869.69739 7704.5918 5941.09815 -5378.008301 -7629.876953 -2894.00732 2208.555664 6.430862 8352.44336 8642.13184 -88365.86719 -63857.86328 -30201.9062 -14454.45606 4902.104 11616.4902 14121.9736 -60669.83594 -72364.5 -49105.0509 -42892.82422 -234.224396 -185.328369 1116.13379 13237.0088 19227.3535 -46977.27344 -115953.4375 -47229.7812 -38364.16016

-253.113541 -382.135498 -203.606415 -204.037231 -76.630127

-117.842972 -118.786133 1308.96875 7220.36914 7989.83887 -28436.2793 -27017.1875 -9684.86914 -8471.330078 -274.245758 -289.373596 -1516.07739 18068.8184 22305.6543 -112247.0313 -186921.7188 -62365.6875 2563.077637 -81.163391 3180.46875 8716.54199 7712.23584 -21824.45703 -9474.623047 -4760.19678 -11903.0918 -213.59375 -189.270203 572.476562 8536.65332 11713.8643 -45848.85547 -64171.51172 -25041.0723 -14094.42871 -282.638123 -376.277649 -761.037354 13784.1152 8842.68066 -146353.4219 -70929.32031 -21477.4570 -29386.17969 -136.232452 -139.442535 -438.171814 -325.108826 -367.694336 2629.70483 6461.3335 7488.53711 -22488.91602 -27103.7832 -18357.8418 -5361.651855 10060.001 10493.8037 -93767.28125 -92623.57031 -55392.9219 -42615.33984 -136.080078 -125.253868 -925.555115 4456.34424 5419.87402 -19109.59375 -26214.18945 -5168.21973 -5346.865723

Tabla C-5.

Momentos Invariantes

ARCHIVO

Parabasales
Mask 1 CEPBN14 400x E_limpio.bmp Mask 1 CEPBN3 400x_E.bmp Mask 1 CEPBN7 400x_E.bmp Mask 1_de_14 CEPBN12 x400(limpio)_E.bmp Mask 1_de_2 CEPBN6 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_2 CEPBN8 400x.bmp Mask 1_de_4 CEPBN13 400x_E.bmp Mask 1_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp Mask 1_de_9 CEPBN5 400x(limpio).bmp Mask 1_de_9 CEPN11 400x(limpio).bmp Mask 10_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 11_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 12_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 14_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 2_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 2_de_2 CEPBN6 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_2 CEPBN8 400x(limpio).bmp Mask 2_de_4 CEPBN13 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp Mask 2_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_9 CEPN11 400x_E.bmp Mask 3_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 3_de_4 CEPBN13 400x(limpio)_E.bmp Mask 3_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_AC.bmp Mask 3_de_6 CEPBN4 400x_E.bmp 2.560343 2.629746 2.263408 2.579744 2.270936 2.772742 3.524849 2.500294 3.445212 1.752447 2.264231 2.277 0.110504 0.06208 0.380982 0.068755 0.12905 1.286455 0.367358 0.789022 0.439148 0.425235 0.552986 0.678071 4.982491 0.757268 2.080643 6.987991 4.31837 20.899998 44.151871 7.203671 24.649723 0.122696 9.710425 4.077972 10.839986 0.295457 21.964008 4.979261 22.984722 4.504248 3.971256 2.30914 7.594537 15.495381 0.599644 0.641411 2.060684 28.66572 25.187141 1.713692 4.548285 6.72405 0.432752 1.431172 9.079711 3.416588 17.817577 29.20612 5.949664 28.52136 0.114763 7.214133 3.455353 7.737339 0.187852 15.994457 4.616819 15.684801 5.167402 3.549632 3.576885 5.022744 14.784861 0.772014 0.55004 1.912922 18.002466 18.652117 4.379826 2.992454 -0.799581 0.131992 0.644305 -7.081965 -1.336712 128.831055 -66.589767 11.966764 -32.461044 -0.002068 21.616787 1.618348 22.642298 0.009147 -6.568835 2.208344 74.911667 -5.52251 3.27601 2.841906 7.211629 7.371362 0.058713 -0.149749 -0.139824 51.371517 -26.866096 -4.114151 0.573912 1.469389 0.069638 0.830631 2.300351 0.141995 20.128225 16.506334 4.777042 18.587725 0.074531 5.267708 0.296443 6.204563 0.054368 9.01628 1.347552 16.714504 0.018199 1.665099 1.724247 3.470832 6.147646 0.181136 0.040541 -0.217393 16.930185 6.696967 -0.205538 0.689575 -4.514719 -0.016575 -0.22375 -10.209474 -4.754443 -76.679405 144.637146 -2.548854 -115.095047 -0.008562 -0.748048 -1.19395 -10.12567 0.000559 23.351961 -4.048955 17.858089 -5.322388 -2.064148 -4.07373 0.393182 -4.55682 -0.227477 0.061306 -0.179466 -8.270591 53.070278 -4.977607 -0.451527

2.611161 0.093975 1.433771 0.084403 2.829105 0.320301 2.207168 0.148985 2.566283 1.140033 2.443937 0.085322 2.230306 0.220444 2.409204 0.257088 2.463497 0.574472 3.123636 0.173906 1.609118 0.065921 1.996089 0.006726 2.344198 3.264101 2.6697 2.597123 0.013833 0.205377 0.002344 0.053653 2.739519 0.885695

Mask 3_de_8 CEPBN10 400x_E.bmp Mask 3_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 4_de_4 CEPBN13 400x_E.bmp Mask 4_de_5 CEPBN9 400x_E.bmp Mask 4_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_AC.bmp Mask 4_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp Mask 4_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 4_de_9 CEPN11 400x(limpio)_E.bmp Mask 5_de_14 CEPBN12 x400(limpio)_E.bmp Mask 5_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 5_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 5_de_9 CEPN11 400x_E.bmp Mask 6_de_8 CEPBN10 400x(limpio)_E.bmp Mask 6_de_9 CEPBN5 400(limpio).bmp Mask 6_de_9 CEPN11 400x(limpio)_E.bmp Mask 7_de_14 CEPBN12 x400_E.bmp Mask 7_de_9 CEPBN5 400x(limpio).bmp Mask 8_de_14 CEPBN12 x400(limpio)_E.bmp Mask 9_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 9_de_9 CEPBN5 400x(limpio).bmp Mask 9_de_9 CEPN11 400x(limpio)_E.bmp

1.568043 2.219699 2.21361 1.937655 2.507489 1.567063 2.131857 1.962867 4.371025 3.222221 1.638404 2.531117 1.88395 2.794795 2.340937 1.917658 1.606672 3.031499 1.724916 1.748331 2.035066

0.007667 0.187921 0.190319 0.461016 0.488228 0.014666 0.307422 0.132969 0.418685 0.196256 0.03056 0.627598 0.340306 0.086364 0.162188 0.32824 1.145507 0.136011 0.270031 0.065423

1.041353 4.818783 7.809671 0.712152 9.056431 1.423314 6.81681 3.306453 15.872893 0.342965 7.677622 1.803546 17.126644 2.876044 3.207992 2.564161 15.772798 1.991414 1.736717 2.395691

0.864189 4.15069 6.149459 0.475369 4.627624 1.316192 5.00491 1.624955 14.516704 0.32753 5.652298 2.061023 10.814503 1.410219 3.411529 1.894492 23.744053 1.211925 3.4872 2.096857

-0.095676 1.819114 4.320796 0.099241 7.944716 -0.011179 5.187369 0.164037 18.234177 0.033381 -4.613279 1.596422 16.681755 -0.12864 1.60007 1.246219 122.106003 0.493712 2.671049 0.089377

0.014125 1.192563 2.498299 0.31717 3.169196 0.134881 2.754567 0.115631 5.860477 0.108606 0.578574 1.235941 6.009654 -0.405901 1.347857 0.954091 24.678593 0.445636 1.812105 0.290341

0.074108 -4.502064 -7.177785 -0.002129 -1.448582 -0.03051 0.142776 1.002627 -41.411842 -0.02221 -1.016906 -0.076846 4.573464 -0.450416 -1.921541 -0.732584 -127.266624 0.135908 -5.521019 0.457501

5.118824 131.980026

79.770889 1740.40637 180.445908 319.829346

Intermedias
Mask_1 CEIN1 400x.bmp Mask_1 CEIN10 400x.bmp Mask_1 CEIN11 400x.bmp Mask_1 CEIN12 400x.bmp Mask_1 CEIN13 400x.bmp Mask_1 CEIN14 400x.bmp Mask_1 CEIN16 400x.bmp Mask_1 CEIN17 400x.bmp Mask_1 CEIN19 400x.bmp Mask_1 CEIN2 400x(prueba2).bmp Mask_1 CEIN23 400x(prueba2).bmp Mask_1 CEIN27 400x.bmp Mask_1 CEIN29 400x.bmp 1.743369 1.959928 2.628244 3.104723 3.101761 3.360561 1.933162 2.24877 3.547695 3.425418 2.154793 1.904572 2.200733 0.296953 0.297546 2.263178 2.029467 0.86064 1.600073 0.119664 0.158315 2.863445 3.432641 0.098868 0.361584 0.496196 1.698875 1.812325 31.815722 37.435322 31.930473 23.900484 3.211948 6.566884 59.88961 74.084457 2.337847 1.281429 8.264678 1.471099 2.403259 0.50989 0.790071 0.801452 1.125653 31.218229 42.579704 0.051532 -2.014042 -15.699599 -99.091255

20.75214 189.405014 29.893381 286.130951 22.598856 3.255059 4.68394 18.764879 1.04891 0.119234 33.236576 205.547043

20.443584 100.608414 41.468102 -179.875931 1.123752 1.835247 68.823639 75.030876 0.780844 -0.161039 6.223725 -1.147189 -0.521422 100.40242 117.71302 -1.40139 -0.406426 -12.041471

40.67181 352.475555 40.501156 566.946472 2.608532 1.312769 8.87427 1.274427 -0.102538 14.721344

Mask_1 CEIN3 400x(prueba).bmp Mask_1 CEIN3 400x(prueba_2).bmp Mask_1 CEIN30 400x.bmp Mask_1 CEIN31 400x.bmp Mask_1 CEIN4 400x(prueba).bmp Mask_1 CEIN5 400x.bmp Mask_1 CEIN7 400x.bmp Mask_1 CEIN8 400x.bmp Mask_1_de_2 CEIN21 400x.bmp Mask_1_de_2 CEIN26 400x.bmp Mask_1_de_2 CEIN28 400x.bmp Mask_1_de_4 CEIN18 400x.bmp Mask_2 CEIN16 400x - Azul.bmp Mask_2_de_2 CEIN26 400x.bmp Mask_2_de_2 CEIN28 400x.bmp Mask_2_de_4 CEIN18 400x(Prueba).bmp

2.048382 2.904727 2.293855 1.665662 2.221813 2.643002 2.596123 2.659883 2.680581 1.428352 3.963382 2.89253 2.028025 2.150802 1.79779 2.426398

0.188573 1.334075 0.81718 0.159115 0.910778 1.739215 0.700474 1.168428 1.090716 0.139316 3.868255 1.10316 1.210336 0.391775 0.242847 0.343833

3.380836 32.187969 11.95295 2.63089 13.237522 19.54047 14.486859 25.487219 12.778212 0.906568 48.310833 29.725616 8.756227 10.177866 3.856861 9.067516

2.914067 22.426743 11.113339 1.50167 10.834103 15.202346 17.476799 17.43762 0.743361 21.152163 9.065699 6.058088 4.128998 5.338262

0.525669 135.89772 35.172188 0.738859 38.647694 38.930458 96.335571 42.146313 0.12085 59.277672 39.430237 8.521045 1.53436 4.927619

0.3592 25.347786 9.999864 0.534811 10.316615 23.129915 12.531472 18.644535 18.211344 0.231489 22.122608 9.97071 3.350848 1.964078 2.786398

-2.24179 -73.852547 -16.381685 0.100581 -8.227259 -61.696217 -17.66474 -26.738417 -81.189034 -0.052434 -1.341265 -32.225174 8.87625 -0.955146 -4.306108

18.129915 163.630814

65.052498 1558.15381 127.826294 -1517.39417

Superficiales
Mask 1 CESN11 400x.bmp Mask 1 CESN12 400x.bmp Mask 1 CESN13 400x.bmp Mask 1 CESN14 400x.bmp Mask 1 CESN15 400x.bmp Mask 1 CESN17 400x.bmp Mask 1 CESN18 400x.bmp Mask 1 CESN19 400x.bmp Mask 1 CESN20 400x_AC.bmp Mask 1 CESN4 400x.bmp Mask 1 CESN5 400x.bmp Mask 1 CESN6 400x.bmp Mask 1 CESN7 400x.bmp Mask 1 CESN8 400x.bmp Mask 1_de_1 CESN9 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN1 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN10 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN16 400x.bmp 1.791901 0.876892 1.138629 1.859704 1.156635 1.981208 1.69716 4.393707 2.988466 1.871281 4.527305 5.509409 1.302598 1.282935 4.1467 1.886966 1.501706 1.806082 0.863744 0.020806 0.095865 0.967213 0.112725 1.064975 0.757152 11.486821 4.56925 1.07191 8.329527 20.814596 0.126448 0.224526 10.286097 1.371118 0.667186 0.299607 10.497122 0.002127 1.81499 9.213707 1.171728 10.976266 9.314024 166.658157 43.144352 8.746716 134.621857 316.150024 1.437948 1.58335 135.117783 14.641059 5.688726 4.966337 5.975194 0.00114 1.146682 6.919609 1.010466 7.472327 5.093451 85.06897 29.944281 7.134267 85.575111 172.497787 0.995307 1.926389 73.465111 7.925952 3.73363 4.812453 12.723811 0.000001 0.254701 19.421614 0.194309 16.018745 9.27728 4451.925781 506.593811 19.887793 3224.501465 20865.27539 0.348364 1.017148 3335.931152 31.694986 5.284861 0.859124 5.553011 -0.000128 0.349419 6.769343 0.284782 7.704042 4.430558 288.196533 64.007248 7.386325 246.916931 786.98584 0.301773 0.911551 235.614639 9.27975 3.049639 2.486445 2.224154 -0.000001 0.236492 -1.230308 -0.274571 5.300866 2.977274 653.226746 -170.371506 -9.1539 -481.268799 -2599.184326 -0.164775 -1.076737 96.87207 3.857948 -0.07952 -4.55047

Mask 1_de_2 CESN3 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 1_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 1_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 2_de_1 CESN9 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN1 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN16 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN3 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 2_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 2_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 3_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 3_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 3_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 3_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 4_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 5_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 6_de_6 CESN25 400x.bmp

1.640437 2.82815 2.561119 2.628772 1.646027 1.585143 1.56522 3.716204 1.628439 2.430214 3.382296 0.891748 1.180437 1.095184 3.184193 1.548524

0.993932 2.290468 2.724819 1.721506 0.932148 0.749659 0.475088 0.808625 2.102401 5.536598 0.096091 0.066942 0.121713 5.358869 0.79745

7.058258 18.200256 31.036007 27.901308 8.536948 8.522702 4.411554 5.307747 26.337187 57.08815 0.006995 1.005721 1.293297 38.734295 9.184776

5.088465

10.914893

5.072885 27.472937 24.168791 5.204394 3.750527 2.502097 4.042542 22.49222 0.00111 0.189355 0.304718 79.553162 3.819

-2.981863 27.233688 -56.856667 0.497639 -0.809414 -0.348534 -2.696112 -4.786531 0.000031 0.054617 -0.091502 -424.49231 5.194792

21.759916 127.678024 16.645678 122.249306 18.617857 142.705154 5.40179 4.332016 3.660814 4.496405 14.370072 7.868735 3.992448 7.587186

32.931454 -172.295517

4.791438 16.718546 130.865295 111.694618 9333.81445 456.668121 -6221.83594 6.744268 102.231834 53.390305 1491.47376 138.653152 -485.629242 15.519603 106.323128 37.985439 736.133118 0.003591 0.809267 0.894494 34.365517 4.297873 0.000011 0.085817 0.247913 662.70636 9.395043

89.379227 -138.343918

4.971895 14.361964 135.227692 115.380966 7872.75635 437.226196 -4808.86572 5.405602 18.031542 300.582855 152.687958 0.817689 1.285467 1.34612 1.771325 1.433836 0.0229 0.13829 0.736143 0.879494 0.376826 0.404657 1.382919 5.216786 8.711313 3.605268 0.401132 1.340891 3.169904 6.01847 2.308533 14740.958 648.365906 1299.39282 0.00307 0.445225 5.844349 13.235396 2.158535 0.060557 0.498201 2.719445 5.644073 1.374475 -0.006649 -0.266581 -0.262944 -0.093907 0.535032

4.894903 13.399148 221.032806 112.376801 7080.83447 411.351898 -1179.96167

Neoplasia Alto Grado

Mask 1_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 1_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 1_de_3_LEIC-AG10 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG6 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 10_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 11_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp 2.342846 2.194098 2.438375 2.93935 3.166289 2.169179 2.804216 2.629069 2.117287 0.379677 0.19038 0.022055 0.395295 0.281992 0.108033 0.280507 0.385005 0.414965 3.314319 0.158922 3.966693 17.35141 11.752204 0.029651 0.778464 11.430615 9.292379 1.805583 0.091859 4.482146 12.267918 10.2581 0.099799 0.665582 6.778107 5.849168 0.662674 0.004463 -2.35549 40.156338 2.741546 -0.000791 0.214591 16.445868 12.568398 0.112047 0.032829 -0.079355 6.963765 2.749454 0.032055 0.267379 4.202165 3.619759 1.288305 -0.004097 -0.947072 12.050088 10.215302 -0.002601 -0.213163 5.223993 3.190557

Mask 11_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 12_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 13_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 14_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 2_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 2_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 2_de_3_LEIC-AG10 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG6 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 3_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 3_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 3_de_4_LEIC-AG5 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 4_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 4_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 4_de_4_LEIC-AG5 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 5_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 5_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 5_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 5_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 6_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 6_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 6_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 7_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 7_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 8_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 8_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 9_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp

2.135317 2.084274 2.499043 1.902127 1.685994 2.143027 2.935993 2.504313 2.734209 2.304244 2.937201 1.608532 2.494327 2.209374 1.821939 2.360536 2.025486 2.786202 2.609571 2.935655 1.859892 2.821816 2.835563 2.611555 1.845009 2.194547 1.920238 2.379666 2.899632 1.941018 2.197322 2.560751 1.886137 1.755772 2.42838

0.584125 0.057196 0.080834 0.063094 0.136901 0.183053 0.103174 0.400261 0.115569 0.036977 0.998824 0.087569 0.244521 0.595914 0.110628 0.667282 0.314581 0.353982 0.241774 0.14248 0.218604 0.055408 0.311774 0.427931 0.312481 0.001402 0.118671 0.875319 0.14001 0.578874 0.134287 0.342421 0.033329 0.137639 0.388747

1.841786 2.24135 5.920151 0.182024 0.356244 0.370927 5.172601 2.085346 2.151945 2.503244 2.627384 0.479892 0.00075 0.284192 0.037951 4.006031 3.983258 3.93189 1.817825 1.778748 1.713301 2.267798 2.537934 3.50088 0.085222 6.149117 0.59236 3.816127 5.572282 0.302213 1.853549 6.094462 1.304633 0.548514 10.440677

1.548247 1.300599 4.272806 0.15372 0.204016 0.335415 5.769924 1.534171 2.223876 2.136028 3.731719 0.555226 0.02908 0.019144 0.030348 3.205992 3.507671 3.903476 1.126494 1.834556 1.127394 1.678133 2.330673 3.213574 0.020793 3.826022 0.485786 2.082334 2.81838 0.176572 1.367588 5.209183 0.578722 0.668134 6.15073

0.448946 0.278668 3.754506 0.004551 0.023475 0.037076 -2.933526 0.714167 0.16307 -0.080919 3.138877 -0.081941 -0.000525 0.001545 -0.000396 4.0427 3.943703 -2.013195 0.442047 0.18931 -0.359738 0.293746 2.835987 -3.773441 -0.00059 -2.035683 -0.003899 2.789154 -2.155487 0.018407 0.186123 1.872405 0.025954 -0.081308 13.424525

0.812054 0.309976 1.160894 0.038554 0.073841 0.062975 0.979635 0.959385 0.720534 0.354486 2.078689 0.140585 0.011272 -0.011088 0.006365 2.464859 1.577702 -0.903814 0.428801 -0.130457 -0.402073 0.363854 0.961488 -1.849637 0.011618 -0.050335 0.156774 1.90879 -0.566308 0.134103 0.215591 0.589201 -0.084944 -0.183161 3.772917

0.211925 0.307486 0.284913 0.000631 -0.0072 -0.018515 0.094469 -0.031342 -0.120417 0.145657 -3.24086 0.01098 0.000409 -0.001932 -0.000883 -2.09578 -0.345485 -3.030987 0.213997 -1.422391 0.425697 0.251992 -1.832102 -2.24772 0.000231 1.058539 0.010773 0.14054 4.375457 -0.01182 0.359221 -10.990757 0.206539 0.01614 7.106916

Tabla C-6. Media y Desviacin Estndar para los sistemas de color RGB y HSI.

ARCHIVO Parabasales
Mask 1 CEPBN14 400x E_limpio.bmp Mask 1 CEPBN3 400x_E.bmp Mask 1 CEPBN7 400x_E.bmp Mask 1_de_14 CEPBN12 x400(limpio)_E.bmp Mask 1_de_2 CEPBN6 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_2 CEPBN8 400x.bmp Mask 1_de_4 CEPBN13 400x_E.bmp Mask 1_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 1_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp Mask 1_de_9 CEPBN5 400x(limpio).bmp Mask 1_de_9 CEPN11 400x(limpio).bmp Mask 10_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 11_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 12_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 14_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 2_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 2_de_2 CEPBN6 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_2 CEPBN8 400x(limpio).bmp Mask 2_de_4 CEPBN13 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp Mask 2_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 2_de_9 CEPN11 400x_E.bmp Mask 3_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 3_de_4 CEPBN13 400x(limpio)_E.bmp Mask 3_de_5 CEPBN9 400x(limpio)_AC.bmp Mask 3_de_6 CEPBN4 400x_E.bmp

M_R

M_G

M_B

DES_R DES_G DES_B

M_H

M_S

M_I

DES_H DES_S DES_I

137.527 137.784 165.375 149.909 132.569 161.779 130.27 121.659 153.493 135.065 137.09 167.679 138.406 149.977 177.362 127.767 121.747 157.559 157.755 164.925 183.792 121.107 119.423 143.375 143.354 131.836 157.481 109.924 102.657 140.633 118.67 120.24 152.15 129.548 132.683 162.461 121.098 120.721 155.574 115.707 115.583 155.678 117.439 110.474 149.25 118.769 115.636 155.535 108.581 106.677 146.725 143.41 154.547 180.949 122.093 116.791 153.697 157.552 166.827 185.07 119.732 117.776 144.988 138.117 132.033 154.055 117.748 112.443 149.789 121.296 121.628 149.653 128.854 130.493 159.299 119.485 122.692 160.115 155.723 162.625 183.982 115.395 113.233 144.469 132.68 127.448 153.185

24.309 22.029 22.631 25.009 26.187 25.086 21.984 16.581 23.103 21.97 21.186 22.883 23.326 24.832 23.583 22.577 22.631 25.112 22.687 25.541 19.139 23.434 21.375 19.688 20.888 27.64 26.227 20.167 22.876

25.794 19.211 20.995 25.913 27.882 23.22 22.545 16.404 20.738 20.672 21.092 23.439 22.797 25.988 22.656 20.732 21.784 26.752 20.695 26.791 19.233 23.812 20.924 19.355 21.283 31.038 26.938 19.815 24.027

21.16 175.282 17.368 23.011 19.911 207.18 191.01 169.49

21.574 145.947 27.574 147.759 26.844 134.718 24.018 145.896 29.644 154.919 28.582 135.36 17.636 168.491 19.264 127.633 23.177 143.888 34.593 117.374 27.431 129.888 23.925 141.242 27.035 132.136 32.686 128.301 34.15 125.39 32.213 129.677 35.078 120.336 27.537 159.277 29.447 130.51 19.983 169.494 22.319 127.087 20.164 140.54 31.023 126.186 22.84 130.526 22.408 139.21 33.366 132.807 19.594 167.113 25.812 124.036 22.956 136.761

20.543 14.745 14.09 15.857 21.016 12.462 37.178 10.03 14.354 9.371 15.296 18.759 8.153 15.512 16.637 10.102 14.609 20.309 13.284 46.691 13.541 23.163 13.033 9.491 11.571 25.493 30.316 10.623 23.18

32.208 24.466 30.696 33.845 33.205 36.244 23.305 27.164 29.415 39.449 33.801 32.677 36.77 41.149 38.171 35.284 34.992 30.161 34.285 27.684 30.682 31.848 33.84 30.631 31.745 42.97 29.324 34.386 31.226

11.572 9.726 9.532 11.633 13.352 10.224 11.307 7.057 9.608 7.241 9.225 11.341 10.207 11.044 10.174 9.732 13.661 12.811 8.482 13.326 8.592 10.206 9.617 8.716 10.466 13.206 13.455 7.993 8.989

18.38 149.236 25.463 183.961 13.491 144.713 17.592 175.202 18.038 202.057 25.722 183.152 24.295 171.054 20.874 163.278 25.292 171.936 29.048 171.792 29.831 183.936 26.025 176.836 29.199 176.03 17.554 149.462 25.956 182.126 14.002 131.567 21.689 176.951 21.68 198.316 27.025 181.312 19.585 171.129 20.076 167.577 29.416 169.992 14.793 148.298 23.255 175.815 22.077 191.843

Mask 3_de_8 CEPBN10 400x_E.bmp Mask 3_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 4_de_4 CEPBN13 400x_E.bmp Mask 4_de_5 CEPBN9 400x_E.bmp Mask 4_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_AC.bmp Mask 4_de_8 CEPBN10 400x(limpio).bmp Mask 4_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 4_de_9 CEPN11 400x(limpio)_E.bmp Mask 5_de_14 CEPBN12 x400(limpio)_E.bmp Mask 5_de_6 CEPBN4 400x(limpio)_E.bmp Mask 5_de_9 CEPBN5 400x(limpio)_E.bmp Mask 5_de_9 CEPN11 400x_E.bmp Mask 6_de_8 CEPBN10 400x(limpio)_E.bmp Mask 6_de_9 CEPBN5 400(limpio).bmp Mask 6_de_9 CEPN11 400x(limpio)_E.bmp Mask 7_de_14 CEPBN12 x400_E.bmp Mask 7_de_9 CEPBN5 400x(limpio).bmp Mask 8_de_14 CEPBN12 x400(limpio)_E.bmp Mask 9_de_14 CEPBN12 x400(limpio).bmp Mask 9_de_9 CEPBN5 400x(limpio).bmp Mask 9_de_9 CEPN11 400x(limpio)_E.bmp

105.474

99.206 136.273

21.281 22.935 26.709 15.775 20.462 16.721 20.468 24.117 32.082 22.708 18.384 25.047 21.902 22.192 25.487 25.431 24.907 25.355 21.07 26.467 25.951

19.36 22.516 35.936 20.267 18.731 14.829 20.272 24.393 31.579 22.275 16.784 24.886 20.056 24.011 26.096 25.762 23.76 26.233 20.844 26.474 24.186

26.715 182.409 26.756 170.482 28.918 188.124 14.924 181.162 20.592 196.443 26.493 180.799 22.535 169.438 20.919 166.753 31.623 172.963 20.279 200.692 22.625 172.655 19.229 166.098 26.92 183.787 22.452 170.276 21.837 167.307 25.23 171.395 29.348 174.725 22.536 169.459 24.511 171.323 33.594 174.527 22.779 180.392

33.893 113.313 30.033 127.482 27.972 147.323 19.613 130.636 23.593 136.144 32.127 118.093 24.25 130.07 24.332 142.036 37.217 128.565 22.497 140.049 28.078 119.464 23.803 145.525 32.27 121.948 23.554 132.512 23.568 145.248 27.527 138.201 32.853 133.157 23.768 148.114 24.401 134.759 35.85 125.588 29.445 138.204

9.801 11.272 42.74 29.508 13.135 8.874 8.628 9.004 7.554 21.584 8.883 7.069 10.167 18.676 14.75 15.998 12.518 23.282 18.758 14.576 11.531

39.296 38.477 24.557 12.212 28.546 29.076 33.379 34.192 55.851 29.267 33.039 34.47 36.934 34.507 35.264 38.603 37.299 33.107 31.534 43.693 36.577

6.653 9.817 20.835 12.685 8.76 7.577 9.205 11.607 12.32 8.761 6.416 11.507 7.684 9.441 12.711 10.805 10.704 11.115 10.719 11.689 11.218

115.09 116.392 151.919 145.438 141.884 164.598 127.121 124.682 143.439 134.162 124.302 150.939 109.73 103.787 141.766 119.669 120.946 150.612 130.509 132.832 163.784 114.659 113.597 158.494 138.26 129.909 154.252 109.034 108.772 141.595 133.84 136.457 167.303 114.32 107.41 145.065 122.652 124.813 152.818 134.122 136.027 166.909 126.458 127.351 162.671 120.533 119.379 160.539 137.164 138.913 170.747 124.995 124.288 156.031 112.23 110.516 155.549 129.464 124.256 161.884

Superficiales
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73.86 103.444 208.089 78.735 94.326 209.417

73.86 103.444 78.735

24.758 139.484 65.295 117.136

50.551 210.688 188.968

89.403 210.688 188.968

Mask 1 CESN8 400x.bmp Mask 1_de_1 CESN9 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN1 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN10 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN16 400x.bmp Mask 1_de_2 CESN3 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 1_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 1_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 1_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 2_de_1 CESN9 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN1 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN16 400x.bmp Mask 2_de_2 CESN3 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 2_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 2_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 2_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 3_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 3_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 3_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 3_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN21 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN23 400x.bmp Mask 4_de_4 CESN24 400x.bmp Mask 4_de_5 CESN22 400x.bmp Mask 5_de_6 CESN25 400x.bmp Mask 6_de_6 CESN25 400x.bmp

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61.486 118.453 58.635 123.12 61.557 124.278 61.701 124.337 55.073 100.127 53.738 105.483 79.315 125.723 74.035 126.353 82.778 131.83 58.801 120.068 53.815 111.261 65.57 122.337 41.104 111.245 71.995 131.846 73.919 124.862 71.102 118.78 87.251 130.665 84.396 137.004 73.435 129.194 86.04 139.031 86.838 127.012 54.867 103.872 86.309 143.028 76.471 120.262 87.611 138.369 81.611 135.643 76.229 131.972 56.734 117.472 44.147 114.018

21.502 22.538 23.783 23.267 20.048 22.906 24.281 25.247 25.527 23.555 25.363 22.776 20.156 36.839 29.595 24.788 22.963 28.397 28.396 26.45 25.353 19.116 28.671 24.609 31.984 28.915 30.514 28.622 22.637 20.438

14.507 16.323 15.817 13.718 11.597 15.467 21.138 18.683 17.002 15.648 15.19 13.439 12.063 26.318 21.013 16.14 16.623 19.034 19.077 19.474 18.57 13.056 19.454 26.558 24.892 28.126 22.058 18.461 13.915 11.141

39.326 204.585 46.503 202.451 46.539 203.747 43.312 205.189 34.914 212.83 48.077 206.718 37.798 199.354 39.829 204.794 33.091 209.316 46.884 203.644 43.687 203.636 38.803 208.977 46.029 208.04

82.637 90.399 85.165 87.512 82.279 80.242 66.412 85.995 89.283 82.42

90.825 204.585 90.742 202.451 92.485 203.747 94.021 205.189 81.388 212.83 79.148 206.718 99.635 204.794 88.801 203.644 82.457 203.636 96.793 208.977 208.04

82.637 90.399 85.165 87.512 82.279 80.242 66.412 85.995 89.283 82.42

90.825 90.742 92.485 94.021 81.388 79.148 99.635 88.801 82.457 96.793 77.018 99.462 95.844

58.074 100.768 199.354 62 108.743 209.316

58.074 100.768 62 108.743

47.397 203.147 118.589 44.25 209.824 38.037 208.229 35.267 211.542 36.808 211.212 39.505 206.639 39.388 205.454 34.943 209.162 46.611 212.296 34.48 205.683 41.793 202.61 32.506 212.818 41.725 201.394 42.309 209.844 36.765 210.032 51.585 207.112 66.619 66.215

77.018 203.147 118.589 99.462 209.824 95.844 208.229 66.619 66.215

75.582 100.841

75.582 100.841

54.187 110.378 211.542 65.396 112.626 211.212 72.178 101.764 206.639 59.542 111.731 205.454 49.092 107.012 209.162 80.384 61.076 80.852 212.296 96.017 202.61 67.264 116.382 205.683 49.277 131.784 212.818 60.143 111.498 201.394 66.873 109.553 209.844 72.683 105.771 210.032 87.014 86.981 207.112

54.187 110.378 65.396 112.626 72.178 101.764 59.542 111.731 49.092 107.012 80.384 61.076 80.852 96.017 67.264 116.382 49.277 131.784 60.143 111.498 66.873 109.553 72.683 105.771 87.014 86.981 81.092

134.873 107.683 153.801

41.154 203.196 116.166

81.092 203.196 116.166

Intermedias
Mask_1 CEIN1 400x.bmp Mask_1 CEIN10 400x.bmp Mask_1 CEIN11 400x.bmp Mask_1 CEIN12 400x.bmp 128.007 102.779 110.056 104.301 84.221 134.479 72.765 131.883 92.373 140.325 76.68 130.108 22.928 25.51 25.382 21.449 15.583 18.188 20.402 14.998 28.411 128.007 33.508 102.779 32.257 110.056 31.63 104.301 84.221 134.479 72.765 131.883 92.373 140.325 76.68 130.108 22.928 25.51 25.382 21.449 15.583 18.188 20.402 14.998 28.411 33.508 32.257 31.63

Mask_1 CEIN13 400x.bmp Mask_1 CEIN14 400x.bmp Mask_1 CEIN16 400x.bmp Mask_1 CEIN17 400x.bmp Mask_1 CEIN19 400x.bmp Mask_1 CEIN2 400x(prueba2).bmp Mask_1 CEIN23 400x(prueba2).bmp Mask_1 CEIN27 400x.bmp Mask_1 CEIN29 400x.bmp Mask_1 CEIN3 400x(prueba).bmp Mask_1 CEIN3 400x(prueba_2).bmp Mask_1 CEIN30 400x.bmp Mask_1 CEIN31 400x.bmp Mask_1 CEIN4 400x(prueba).bmp Mask_1 CEIN5 400x.bmp Mask_1 CEIN7 400x.bmp Mask_1 CEIN8 400x.bmp Mask_1_de_2 CEIN21 400x.bmp Mask_1_de_2 CEIN26 400x.bmp Mask_1_de_2 CEIN28 400x.bmp Mask_1_de_4 CEIN18 400x.bmp Mask_2 CEIN16 400x - Azul.bmp Mask_2_de_2 CEIN26 400x.bmp Mask_2_de_2 CEIN28 400x.bmp Mask_2_de_4 CEIN18 400x(Prueba).bmp

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24.324 21.374 21.986 21.534 28.307 22.424 23.729 32.849 28.237 22.652 29.01 22.062 24.447 22.996 23.036 21.868 22.283 26.596 23.476 26.37 22.599 23.729 22.985 26.305 21.83

20.845 15.12 16.527 15.941 21.774 18.519 20.687 35.195 24.24 19.095 33.41 17.641 16.42 17.786 15.278 15.274 15.176 24.326 21.056 25.488 18.817 15.455 30.5 23.614 19.216

27.472 125.221 110.623 150.864 25.455 114.693 31.893 105.971 25.186 118.904 32.391 121.548 25.946 89.614 139.406 78.175 131.027 93.355 139.826 84.353 137.194

24.324 21.374 21.986 21.534 28.307 22.424 23.729 32.849 28.237 22.652 29.01 22.062 24.447 22.996 23.036 21.868 22.283 26.596 23.476 26.37 22.599 23.729 22.985 26.305 21.83

20.845 15.12 16.527 15.941 21.774 18.519 20.687 35.195 24.24 19.095 33.41 17.641 16.42 17.786 15.278 15.274 15.176 24.326 21.056 25.488 18.817 15.455 30.5 23.614 19.216

27.472 25.455 31.893 25.186 32.391 25.946 19.296 28.124 27.23 25.839 24.016 29.146 30.661 26.357 32.178 30.964 30.028 28.457 33.124 30.441 33.616 35.626 25.521 30.876 24.039

129.41 103.709 143.338 147.906 132.209 157.716 149.507 137.121 162.428 127.428 113.843 151.533 130.082 107.528 140.781 139.672 139.456 160.709 120.314 116.848 120.307 107.599 105.482 121.735 112.519 121.7 100.847 103.512 99.932 138.434 86.701 133.634 95.821 139.077 69.94 129.359 78.04 130.485 88.083 138.536 95.376 137.748 111.21 148.665 81.51 128.42 71.512 135.153

129.41 103.709 143.338

19.296 147.906 132.209 157.716 28.124 149.507 137.121 162.428 27.23 127.428 113.843 151.533 25.839 130.082 107.528 140.781 24.016 139.672 139.456 160.709 29.146 120.314 30.661 116.848 26.357 120.307 32.178 107.599 30.964 105.482 30.028 121.735 33.124 112.519 30.441 121.7 33.616 100.847 35.626 103.512 99.932 138.434 86.701 133.634 95.821 139.077 69.94 129.359 78.04 130.485 88.083 138.536 95.376 137.748 111.21 148.665 81.51 128.42 71.512 135.153

130.204 108.176 141.229

28.457 130.204 108.176 141.229

128.202 111.584 133.633 119.129 106.957 146.293 119.771 106.309 142.886

25.521 128.202 111.584 133.633 30.876 119.129 106.957 146.293 24.039 119.771 106.309 142.886

Neoplasia Alto Grado

Mask 1_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 1_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 1_de_3_LEIC-AG10 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG6 400x.bmp Mask 1_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 10_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 11_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp 121.741 114.267 149.673 113.111 113.625 138.628 116.087 95.111 104.329 105.819 105.413 105.15 130.156 85.245 120.929 95.85 127.207 93.533 127.821 99.966 137.903 21.027 24.851 14.759 20.156 16.18 20.712 21.86 17.68 20.724 22.311 33.961 16.479 22.176 16.286 19.514 20.898 16.571 27.329 24.014 21.031 180.86 193.95 30.883 128.227 33.647 119.049 27.275 116.692 41.459 100.023 33.128 108.806 27.411 121.387 39.289 108.727 33.178 114.092 38.226 121.181 12.271 37.306 17.464 15.111 12.6 13.232 16.552 12.612 27.604 29.035 30.233 19.672 29.813 25.494 30.707 24.866 23.045 30.799 14.52 17.23 11.794 16.555 10.756 11.812 16.636 13.247 15.242 27.066 179.719 28.08 185.621 20.454 184.618 22.115 177.362 24.513 190.128 28.495 180.73 30.083 176.405

113.412 110.501 141.254

109.455 110.529 146.861

Mask 11_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 12_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 13_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 14_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 2_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 2_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 2_de_3_LEIC-AG10 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG6 400x.bmp Mask 2_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 3_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 3_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 3_de_4_LEIC-AG5 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 3_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 4_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 4_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 4_de_4_LEIC-AG5 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 4_de_5_LEIC-AG7 400x.bmp Mask 5_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 5_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 5_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 5_de_5_LEIC-AG3 400x.bmp Mask 6_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 6_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 6_de_5_LEIC-AG2 400x.bmp Mask 7_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 7_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 8_de_11_LEIC-AG4 400x.bmp Mask 8_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp Mask 9_de_14_LEIC-AG1 400x.bmp

105.829 100.185 134.828 110.992 108.912 132.33 115.223 113.176 139.482 115.506 111.568 139.377 104.792 106.041 89.499 93.74 97.895 105.891 120.809 100.799 100.534 100.662 117.545 96.482 90.889 103.689 101.506 97.325 98.073 103.83 102.246 103.141 88.015 92.764 95.795 133.228 97.954 127.965 77.979 116.079 81.58 118.499 85.75 122.326 98.108 87.106 124.24 141.75 115.083 114.587 140.002

23.925 20.623 21.145 21.389 19.035 24.295 17.99 19.995 15.578 19.024 22.771 17.223 19.591 19.759 23.003 17.587 25.018 20.108 20.616 20.604 22.501 14.173 20.892 17.429 22.286 22.309 16.049 19.961 20.228 20.595 18.214 30.002 19.987 29.151 26.617

24.313 29.347 24.739 25.697 20.855 30.278 17.417 21.854 13.877 24.587 20.587 18.442 20.94 13.036 27.934 16.377 25.032 21.883 23.501 14.122 27.542 14.411 18.665 20.784 22.498 25.037 14.793 19.64 21.724 22.004 17.101 28.54 22.56 26.345 25.65

27.454 182.085 22.278 181.502 23.58 181.559 23.174 182.415 25.137 181.742 26.957 179.857 25.156 186.633 28.489 26.567 19.473 21.426 186.9 183.64 181.06 187.12 27.603 189.579 26.538 189.004

35.088 113.042 29.803 115.272 28.444 121.468 29.803 121.066 38.247 110.953 28.732 121.567 30.365 110.249 48.077 42.832 94.114 97.609

19.026 32.828 27.851 25.819 10.823 30.556 13.582 15.225 11.934 26.093 15.845 9.639 18.794 12.645 28.896 10.356 19.726 11.426 21.218 11.795 22.925 12.519 14.906 19.68 14.183 22.165 11.272 12.029 18.881 15.773 14.191 16.904 22.72 14.113 16.369

34.519 27.131 27.652 26.666 29.565 29.384 28.695 29.126 25.888 28.81 30.211 22.094 28.486 23.898 26.224 29.648 30.555 25.18 30.367 26.525 28.729 25.741 28.426 23.879 33.016 30.371 29.315 32.188 20.56 30.862 28.362 48.125 26.647 54.124 50.073

15.106 13.829 14.042 15.582 13.85 18.078 11.076 16.899 10.82 12.74 15.888 13.379 13.761 6.415 17.182 10.497 18.43 15.302 15.537 6.386 20.29 12.218 14.001 11.91 16.201 15.437 9.365 10.454 17.043 16.114 9.458 15.337 13.093 14.29 11.705

109.085 105.359 132.642 112.755 105.137 137.362

29.428 114.362 42.742 101.649 30.427 118.098 29.376 108.896 64.352 116.203 36.115 124.097 38.808 106.675 43.074 105.877 27.444 124.047 34.351 107.472 64.708 114.125 46.422 102.168 50.305 41.508 91.753 105.96

28.074 203.787 23.67 179.874 28.126 185.734 29.119 186.831 22.798 179.591 28.184 180.11 28.057 201.935 30.128 184.882 30.061 195.174 25.171 192.245 22.897 182.828 27.283 183.103 26.202 187.822 27.575 189.97 22.343 180.907 21.354 185.753 30.281 186.202 21.477 182.375 33.628 182.708 23.095 179.766 40.824 180.726 35.005 182.722

118.052 111.909 146.095 90.966 129.307 90.2 128.718 95.816 127.904 85.45 140.311 87.733 124.718 73.897 111.507 89.642 125.561 148.03 94.401 127.266 84.707 123.657 86.526 121.555 96.702 122.138 91.636 132.648 97.163 140.88

117.775 112.183 143.407

124.097 118.285

27.251 129.319 35.153 107.386 48.673 100.992 38.897 101.731 31.585 121.853 29.307 106.985 43.996 108.522 31.921 119.448 42.217 113.289 29.673 123.022 52.18 100.843 46.611 102.604

114.565 108.552 143.414

112.679 106.047 140.643 115.523 111.546 144.191 82.249 133.307 86.021 130.769

ANEXO D. TABLAS DE ANLISIS DE FISHER

Carcter 1
Media N

Carcter 2
Desviacin N 0.03025493 0.88019036 0.07536554 0.51369247 0.16311952 0.89567048 0.42638222 1.48891144 0.19067833 1.38032576 0.19903832 1.00451416 0.07590119 1.71502827 0.48773278

Carcter 3
M 01 0.09703035 0.14545629 0.32859768 0.49273256 0.8426464 0.02784481 0.32238468 -336.630615 31068.0889 -415.766738 33473.838 -246.693556 24540.8812 -213.474334 15090.0871

Carcter 4
M 10 0.03051341 0.1270076 0.2806801 0.32674729 0.60193045 0.02870639 0.23259754 -340.007088 36938.6133 -385.158825 29873.9501 -251.393216 24887.7528 -216.57602 17341.0764

Carcter 5
M 11 0.07980332 0.00229968 0.05863376 0.11217861 0.25330797 0.04038623 0.0911016 1594.07625 1859531.06 2132.29456 1770379.77 1502.81824 1761848.46 1085.08746 2558906.41

Carcter 6
M 20 0.37228658 2.32113978 0.01926563 1.74571812 0.5339091 2.47265909 1.24416305 10562.8753 22304142.6 7233.80984 7465066.04 2713.70442 4238629.26 11540.1391 27268321.9

Carcter 7
M 02 0.26518606 2.53297069 0.10389406 1.91053196 0.58492637 2.51136416 1.31814555 10353.7025 20086028.5 7561.85322 9306249.21 2673.28709 3202350.16 12803.0078 37656416.7

Carcter 8
M 30 0.06046762 0.75858953 0.13375107 0.83987822 0.03158841 0.35492632 0.36320019 -102458.312 6141051556 -80109.5181 2119048250 -28738.4409 1023059158 -67211.585 3147335479

Carcter 9 Carcter 10
M 03 0.00385365 0.81325193 0.04938915 0.86378641 0.02965107 0.50261097 0.37709053 -99707.994 5702327241 -93488.7391 4334673869 -27598.6434 691458348 -77518.7786 4266690324 M 12 0.00150814 0.45034864 0.03909662 0.61823753 0.03566898 0.26476763 0.23493792 -37043.2109 802708667 -35679.943 429600082 -15459.0081 231773889 -29787.8993 543687684

F12 F13 F14 F23 F24 F34

0.83928566 8.80402686 0.17060644 6.71141176 1.81454379 10.9841201 4.88733244

Media P Varianza P Media I Varianza I Media S Varianza S Media N_AG Varianza N_AG

12.7473732 4.22402106 10.4595674 2.01230088 5.98114421 0.97608291 13.992793 4.8674909

Carcter 11 Carcter 12 Carcter 13 Carcter 14 Carcter 15 Carcter 16 Carcter 17 Carcter 18 Carcter 19 Carcter 20 Carcter 21
M 21 0.00712721 0.45633694 0.12602804 0.52233743 0.10502041 0.11111865 0.22132811 -37016.1203 710624147 -34234.6348 374886256 -15801.8295 275590412 -24857.4409 462396393 rea Curva rea Pxeles 0.82694232 6.15142733 0.15521376 4.83232435 1.52861071 6.53610094 3.33843657 1197.74223 123859.91 820.627363 48117.7698 289.241938 10315.905 1416.35511 184048.307 0.84974614 6.02473068 0.16252055 5.34929542 1.64815135 6.82367894 3.47635385 596.9 31215.2347 408.517241 10547.9015 149.790698 1965.78848 707.136364 43557.1903

1
0.01032002 0.00011181 0.00191025 0.00458618 0.0250107 0.00011167 0.00700844 2.38667484 0.33566464 2.47293228 0.38529739 2.37092247 1.88369592 2.35580389 0.1632303

2
0.25570025 0.3455369 0.02900714 0.22151644 0.54826662 0.38005126 0.29667977 0.4067665 0.55773883 1.0443671 1.03214829 3.70499991 30.9246982 0.2739442 0.05044806

3
0.08063897 0.20094785 0.12926789 0.1258987 0.6169245 0.30551176 0.24319828 10.5726234 391.470667 18.3004989 349.114878 47.2007651 6284.99177 3.33243784 14.0460132

4
0.12460679 0.19301275 0.19367398 0.08126926 0.67727801 0.33951144 0.26822537 8.23120968 160.289086 15.2013282 229.597805 28.6824751 2006.68825 2.53306336 7.35796703

5
0.05406582 0.1583016 0.02613213 0.14157481 0.18570693 0.16637231 0.1220256 42.1099698 60989.339 133.159384 92342.2032 1744.06956 18237413.4 2.17149752 49.7542668

6
0.10493494 0.21442184 0.06810946 0.15683151 0.44721325 0.2534013 0.20748538 7.48974178 659.994974

7
0.05030134 0.07288205 0.00096919 0.04558938 0.04950819 0.0722669 0.04858617 2.27431974 3351.86472

M_R
0.14992026 2.4186789 1.66813226 1.37408336 0.75104094 0.19992814 1.09363064 127.1581 169.466208 120.126 160.378674 99.844 138.991463 106.541114 85.3457984

19.9524736 -63.0590513 820.157194 81505.7059

94.736608 -341.171529 34840.1936 0.77302782 2.38359322 1615085.8 0.46876439 11.7886855

Carcter 22 Carcter 23 Carcter 24 Carcter 25 Carcter 26 Carcter 27 Carcter 28 Carcter 29 Carcter 30 Carcter 31 Carcter 32 M_G
1.35073715 7.27832299 2.06257537 1.505298 0.00060425 2.50976118 2.45121649 125.71872 234.921938 97.4888276 355.07207 67.9920465 222.926503 98.0339318 136.67539

M_B
1.28919502 4.26465551 2.72104756 1.28101681 0.3439888 0.3588624 1.70979435 157.24678 132.616811 140.523069 84.3267118 124.220442 123.145702 132.876545 85.6477788

Des_R
0.08983691 0.16387566 0.28048406 0.02490127 0.68574584 0.7300349 0.32914644 23.00264 8.86385824 24.2164483 7.5361989 24.9557674 14.4141978 20.6277727 11.2442171

Des_G
0.17683426 1.04629805 0.04151827 0.20308779 0.0446194 0.51573442 0.33801536 23.0355 15.2611443 20.2265862 29.3568882 17.1189767 18.1951423 21.7644773 23.6494082

Des_B
0.99118938 6.76162586 0.26360013 3.66803436 0.23776114 5.03210045 2.82571855 23.05246 21.6010039 28.9547586 13.5457901 41.0227442 26.1583842 26.2507955 17.2053109

M_H
8.18967144 4.59234106 0.40678242 43.7192396 21.6569193 10.5965337 14.8602479 175.03484 207.765608 120.126 160.378674 206.749302 11.2527766 184.943955 33.6178582

M_S
13.1155918 5.02552507 1.03363962 0.40909673 8.15726923 2.84636746 5.09791498 26.87034 25.1601657 97.4888276 355.07207 78.6864884 509.0951 37.5547955 85.2821837

M_I
0.07648404 5.23519714 2.39366787 8.78655707 4.85752249 1.02680949 3.72937302 136.17866 162.442287 140.523069 84.3267118 96.9013488 132.237575 111.838636 85.0593643

Des_H
0.71597476 422.034098 0.01511887 1773.28683 0.76397844 636.960143 472.296024 16.55434 74.46097 24.2164483 7.5361989 206.749302 11.2527766 17.8967955 44.7401607

Des_S
2.55772534 3.73819154 0.19329817 6.34701001 1.15069349 4.3860644 3.06216383 33.43006 38.8020017 20.2265862 29.3568882 78.6864884 509.0951 29.4251364 44.1755732

Des_I
17.6749514 54.1133825 0.76098418 31.6684905 10.0793258 48.8048931 27.1836713 10.49448 5.73470907 28.9547586 13.5457901 96.9013488 132.237575 13.8524318 9.08273481

ANEXO E Procedimiento para el Anlisis Multivariado Discriminante de Fisher.

La informacin consignada en este anexo, se extrajo de la tesis Computer Science Technical Report ANALYSIS OF PCA-BASED AND FISHER DISCRIMINANT-BASED IMAGE RECOGNITION ALGORITHMS. By Wendy S. Yambor [34]. nicamente se presenta el capitulo 3; la informacin consignada en el CD contiene completa la tesis mencionada en formato pdf.

3. Fisher Discriminants
Fisher discriminants group images of the same class and separates images of different classes. Images are projected from N-dimensional space (where N is the number of pixels in the image) to C-1 dimensional space (where C is the number of classes of images). For example, consider two sets of points in 2-dimensional space that are projected onto a single line (Figure 2a). Depending on the direction of the line, the points can either be mixed together (Figure 2b) or separated (Figure 2c). Fisher discriminants find the line that best separates the points. To identify a test image, the projected test image is compared to each projected training image, and the test image is identifed as the closest training image.

3.1 Fisher Discriminants Tutorial (Original Method) As with eigenspace projection, training images are projected into a subspace. The test images are projected into the same subspace and identified using a similarity measure. What differs is how the subspace is calculated. Following are the steps to follow to find the Fisher discriminants for a set of images. 1. Calculate the within class scatter matrix: The within class scatter matrix measures the amount of scatter between items in the same class. For the ith class, a scatter matrix ( S i ) is calculated as the sum of the covariance matrices of the centered images in that class.

15

Figure 2. (a) Points in 2-dimensional space. (b) Points mixed when projected onto a line. (c) Points separated when projected onto a line.

Si =

x X i

( x m )( x m )
i i

(14)

where mi is the mean of the images in the class. The within class scatter matrix ( SW ) is the sum of all the scatter matrices.
SW = S i
i =1 C

(15)

where C is the number of classes. 2. Calculate the between class scatter matrix: The between class scatter matrix ( S B ) measures the amount of scatter between classes. It is calculated as the sum of the covariance matrices of the difference between the total mean and the mean of each class.
S B = ni (mi m)(mi m) T
i =1 C

(16)

where ni is the number of images in the class, mi is the mean of the images in the class and m is the mean of all the images.

16

3. Solve the generalized eigenvalue problem: Solve for the generalized eigenvectors ( V ) and eigenvalues ( ) of the within class and between class scatter matrices. S BV = S W V (17)

4. Keep first C-l eigenvectors: Sort the eigenvectors by their associated eigenvalues from high to low and keep the first C 1 eigenvectors. These eigenvectors form the Fisher basis vectors. 5. Project images onto Fisher basis vectors: Project all the original (i.e. not centered) images onto the Fisher basis vectors by calculating the dot product of the image with each of the Fisher basis vectors. The original images are projected onto this line because these are the points that the line has been created to discriminate, not the centered images.

Following is an example of calculating the Fisher discriminants for a set of images. Let the twelve images in Figure 3 be training images. There are two classes; images x1 x 6 are in the first class and images x 7 x12 are in the second class. The training images viewed as vectors are: = 196 188 246 208 245 248 35 15 48 16 21 22 234 236 222 235 213 225 232 244 225 255 254 252 x1 = 59 x 2 = 44 x 3 = 40 x 4 = 44 x 5 = 55 x 6 = 30 244 228 226 229 252 240 243 251 208 236 215 242 57 48 35 34 51 27 226 230 234 247 249 244

17

Figure 3. Twelve training images.

224 237 255 232 234 255 251 243 241 255 255 223 215 237 208 231 205 224 245 237 255 247 251 255 x 7 = 0 x 8 = 0 x 9 = 38 x10 = 28 x11 = 19 x 12 = 31 222 251 255 246 251 255 233 227 194 190 238 249 255 225 234 236 253 255 254 237 188 250 240 235 The scatter matrices are: 3.81 0.59 - 1.09 0.14 S1 = - 0.60 0.39 - 1.69 - 0.83 0.77 0.59 0.83 - 0.15 - 0.72 0.05 - 0.09 - 0.63 0.01 - 0.28 - 1.09 - 0.15 0.42 - 0.06 - 0.01 - 0.26 0.62 0.03 - 0.23 0.14 - 0.73 - 0.06 0.79 - 0.10 0.21 0.28 - 0.17 0.48 - 0.60 0.39 - 1.69 - 0.83 0.05 - 0.09 - 0.63 0.01 - 0.01 - 0.26 0.62 0.03 - 0.10 0.21 0.28 - 0.17 0.55 0.28 - 0.07 0.56 0.28 0.55 - 0.09 0.28 - 0.07 - 0.09 1.46 0.11 0.56 0.28 0.11 0.68 - 0.13 0.14 - 0.28 - 0.26 0.77 - 0.28 - 0.23 0.48 - 0.13 0.14 - 0.28 - 0.26 0.46

18

 0.63 - 0.51 0.27 0.08 S 2 = - 0.64 0.36 0.79 0.17 0.21

- 0.51 0.74 - 0.14 - 0.16 0.45 - 0.34 - 0.59 - 0.09 0.50

0.27 - 0.14 0.82 - 0.28 0.25 0.06 - 0.12 - 0.44 0.59

0.08 - 0.16 - 0.28 0.24 - 0.18 0.16 - 0.01 0.22 - 0.41

- 0.64 0.45 0.25 - 0.18 1.31 - 0.47 - 1.54 - 0.49 - 0.00

0.36 - 0.34 0.06 0.16 - 0.47 0.79 - 0.17 - 0.30 - 0.84

0.79 - 0.59 - 0.12 - 0.01 - 1.54 - 0.17 2.94 1.00 1.13

0.17 0.21 - 0.09 0.50 - 0.44 0.59 0.22 - 0.41 - 0.49 - 0.00 - 0.30 - 0.84 1.00 1.13 0.84 0.56 0.56 2.82

The within class scatter matrix is: 4.44 0.08 - 0.82 0.22 SW = S1 + S 2 = - 1.23 0.76 - 0.91 - 0.66 0.98 0.08 1.57 - 0.29 - 0.88 0.50 - 0.42 - 1.22 - 0.08 0.22 - 0.82 0.22 - 1.23 0.76 - 0.29 - 0.88 0.50 - 0.42 1.24 - 0.34 0.25 - 0.20 - 0.34 1.03 - 0.29 0.37 0.25 - 0.29 1.85 - 0.20 - 0.20 0.37 - 0.20 1.33 0.50 0.26 - 1.61 - 0.25 - 0.40 0.06 0.07 - 0.02 0.36 0.07 - 0.13 - 0.70 - 0.91 - 1.22 0.50 0.26 - 1.61 - 0.25 4.40 1.11 0.85 - 0.66 0.98 - 0.08 0.22 - 0.40 0.36 0.06 0.07 0.07 - 0.13 - 0.02 - 0.70 1.11 0.85 1.52 0.30 0.30 3.28

The mean of each class and the total mean are: 221.83 26.17 227.50 243.67 m1 = 45.33 236.50 232.50 42.00 238.33 234.50 228.17 244.67 135.42 220.00 223.75 248.33 246.00 m2 = 19.33 m = 32.33 246.67 241.58 221.83 227.17 243.00 142.50 234.00 236.17

19

The between class scatter matrix is: 0.008 0.138 - 0.005 0.003 S B = - 0.017 0.006 - 0.007 0.127 - 0.003 0.138 2.387 - 0.082 0.051 - 0.284 0.111 - 0.117 2.196 - 0.047 - 0.005 - 0.082 0.003 - 0.002 0.010 - 0.004 0.004 - 0.075 0.002 0.003 0.051 - 0.002 0.001 - 0.006 0.002 - 0.003 0.047 - 0.001 - 0.017 - 0.284 0.010 - 0.006 0.034 - 0.013 0.014 - 0.261 0.006 0.006 0.111 - 0.004 0.002 - 0.013 0.005 - 0.005 0.102 - 0.002 - 0.007 - 0.117 0.004 - 0.003 0.014 - 0.005 0.006 - 0.107 0.002 0.127 2.196 - 0.075 0.047 - 0.261 0.102 - 0.107 2.020 - 0.044 - 0.003 - 0.047 0.002 - 0.001 0.006 - 0.002 0.002 - 0.044 0.001

Since there are two classes, only one eigenvector is kept. The non-zero eigenvector and corresponding eigenvalue of S BV = S W V are:
0.18 0.51 0.48 0.59 v1 = 0.04 - 0.12 0.08 0.23 - 0.22

1 = 291.45

The values of the images projected onto the first eigenvector are shown in Table 1. Figure 4 shows a plot of the points; clearly illustrating the separation between the two classes.

3.2 Fisher Discriminants Tutorial (Orthonormal Basis Method) Two problems arise when using Fisher discriminants. First, the matrices needed for computation are very large, causing slow computation time and possible problems with

20

Table 1. The values of the images projected onto the first eigenvector.

x Class 1

x Class 2

10

11

12

259

255

256

256

254

257

414

413

415

412

409

412

Figure 4. Plot of the images projected onto Fisher basis vectors.

numeric precision. Second, since there are fewer training images than pixels, the data matrix is rank deficient. It is possible to solve the eigenvectors and eigenvalues of a rank deficient matrix by using a generalize singular value decomposition routine, but a simplier solution exists. A simplier solution is to project the data matrix of training images into an orthonormal basis of size PxP (where P is the number of training images). This projection produces a data matrix of full rank that is much smaller and therefore decreases computation time. The projection also preserves information so the final outcome of Fisher discriminants is not affected. Following are the steps to follow to find the Fisher discriminants of a set of images by first projecting the images into any orthonormal basis. 1. Compute means: Compute the mean of the images in each class( mi )and the total mean of all images ( m ). 2. Center the images in each class: Subtract the mean of each class from the images in that class. x X i , X i X , x = x mi (18)

21

3. Center the class means: Subtract the total mean from the class means. m = mi m (19)

4. Create a data matrix: Combine the all images, side-by-side, into one data matrix. 5. Find an orthonormal basis for this data matrix: This can be accomplished by using a QR Orthogonal-triangular decomposition or by calculating the full set of eigenvectors of the covariance matrix of the training data. Let the orthonormal basis be U . 6. Project all centered images into the orthonormal basis: Create vectors that are the dot product of the image and the vectors in the orthonormal basis.

~ =UTx x

(20)

7. Project the centered means into the orthonormal basis:

~ mi = U T mi

(21)

8. Calculate the within class scatter matrix: The within class scatter matrix measures the amount of scatter between items within the same class. For the ith class a scatter matrix ( S i ) is calculated as the sum of the covariance matrices of the projected centered images for that class.

Si =

x X i

xx ~~

(22)

The within class scatter matrix ( SW ) is the sum of all the scatter matrices.
SW = S i
i =1 C

(23)

where C is the number of classes.

22

9. Calculate the between class scatter matrix: The between class scatter matrix ( S B ) measures the amount scatter between classes. It is calculated as the sum of the covariance matrices of the projected centered means of the classes, weighted by the number of images in each class.
~ ~T S B = ni mi mi
i =1 C

(24)

where ni is the number of images in the class. 10. Solve the generalized eigenvalue problem: Solve for the generalized eigenvectors ( V ) and eigenvalues ( ) of the within class and between class scatter matrices. S BV = S W V (25)

11. Keep the first C-l eigenvectors: Sort the eigenvectors by their associated eigenvalues from high to low and keep the first C 1 eigenvectors. These are the Fisher basis vectors. 12. Project images onto eigenvectors: Project all the rotated original (i.e. Not centered) images onto the Fisher basis vectors. First project the original images into the orthonormal basis, and then project these projected images onto the Fisher basis vectors. The original rotated images are projected onto this line because these are the points that the line has been created to discriminate, not the centered images.

The same example as before will be calculated using the orthonormal basis. Let the twelve images in Figure 3 be training images. The training images viewed as vectors, the means of each class and the total mean are the same as in the previous example.

23

The centered images are: 26.17 23.17 - 13.83 24.17 - 33.83 - 25.83 - 4.17 - 5.17 - 10.17 21.83 - 11.17 8.83 - 2.50 - 14.50 7.50 - 5.50 8.50 6.50 8.33 10.33 11.33 - 18.67 0.33 - 11.67 x1 = 13.67 x 2 = - 1.33 x 3 = - 5.33 x 4 = - 1.33 x 5 = 9.67 x 6 = - 15.33 3.50 15.50 - 7.50 - 10.50 - 8.50 7.50 9.50 - 17.50 3.50 - 24.50 18.50 10.50 - 15.00 9.00 - 8.00 - 7.00 6.00 15.00 5.67 10.67 8.67 - 4.33 - 8.33 - 12.33 - 10.50 2.50 - 9.50 - 2.50 - 0.50 20.50 6.33 - 1.67 - 3.67 10.33 10.33 - 21.67 - 5.00 17.00 - 12.00 11.00 - 15.00 4.00 - 3.33 - 11.33 6.67 - 1.33 2.67 6.67 x 7 = - 19.33 x 8 = - 19.33 x 9 = 18.67 x10 = 8.67 x 11 = - 0.33 x12 = 11.67 - 24.67 4.33 8.33 - 0.67 4.33 8.33 11.17 5.17 - 27.83 - 31.83 16.17 27.17 12.00 - 18.00 - 9.00 - 7.00 10.00 12.00 20.00 3.00 - 46.00 16.00 6.00 1.00 The centered class means are: - 6.33 - 109.25 3.75 - 2.33 m1 = 13.00 - 5.08 5.33 - 100.50 2.17 6.33 109.25 - 3.75 2.33 m2 = - 13.00 5.08 - 5.33 100.50 - 2.17

24

The orthonormal basis calculated by eigenspace projection is: - 0.35 - 0.25 0.13 0.07 U = - 0.22 - 0.09 0.81 0.24 0.17 0.80 - 0.09 - 0.13 0.11 - 0.39 0.12 0.17 - 0.05 0.36 - 0.05 0.34 0.16 - 0.21 0.25 - 0.38 - 0.08 0.05 0.77 - 0.03 - 0.39 0.61 0.10 0.01 0.01 - 0.06 - 0.67 0.10 0.07 0.44 0.13 - 0.55 - 0.41 - 0.27 0.21 - 0.30 - 0.32 - 0.16 - 0.09 - 0.42 0.44 - 0.26 - 0.66 - 0.12 - 0.28 - 0.01 - 0.38 0.14 0.45 0.13 - 0.15 - 0.37 0.25 0.02 - 0.33 0.61 0.55 0.06 - 0.02 0.48 - 0.30 - 0.46 0.27 - 0.06 - 0.21 - 0.50 - 0.46 - 0.61 - 0.12 0.14 - 0.13 - 0.16 0.24

The centered images projected into the orthonormal basis are: 0.34 - 21.62 12.47 - 35.92 31.66 13.07 33.29 20.47 - 6.04 11.31 - 27.65 - 31.39 - 7.31 - 0.89 4.71 9.95 - 5.32 - 1.15 9.96 - 10.14 15.99 - 8.87 4.50 - 11.44 ~ 1 = 3.31 ~ 2 = 1.14 ~ 3 = 24.40 ~ 4 = - 7.86 ~ 5 = - 26.12 ~ 6 = 5.12 x x x x x x 5.54 - 5.75 11.87 1.89 4.91 - 18.46 3.35 - 0.62 3.36 - 5.71 - 1.93 1.56 6.10 1.62 - 2.21 - 4.29 - 3.89 2.67 - 2.50 2.58 - 0.47 0.52 2.01 - 2.14

27.79 16.17 - 29.04 - 32.09 1.07 16.12 31.50 13.28 - 11.15 - 28.19 2.14 - 7.59 - 18.05 - 2.16 25.17 - 38.76 3.68 30.11 1.17 - 20.17 11.21 - 1.89 22.01 - 12.33 ~ 7 = - 3.78 ~ 8 = 6.27 ~ 9 = - 10.62 ~ 10 - 1.66 ~ 11 12.41 ~ 12 = - 2.63 x x x x x x - 7.32 4.06 - 4.35 8.19 - 10.83 10.26 - 9.43 14.82 4.15 - 2.02 1.44 - 8.96 - 5.16 - 1.94 - 4.82 2.03 4.30 5.59 - 1.26 0.77 - 1.98 - 0.33 2.99 - 0.18

25