MED203A - Histologa Humana

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Clase N 1 - 08/03/2010
Parte I. Introduccin al Curso de Histologa
(Profesora: Dra. Cecilia Koenig) Este curso estudia:
Las bases celulares y moleculares de la estructura tisular (biologa celular y molecular de los tejidos) y, La organizacin morfo-funcional de los rganos del cuerpo humano (lo que tradicionalmente era la histologa antigua). Corresponde a la anatoma microscpica de las estructuras.

Para entender la organizacin de las estructuras que realizan las funciones de cada rgano se requiere relacionar:
La anatoma microscpica de estas estructuras, La biologa celular y molecular de las clulas y de la matriz extracelular que los forman, La dinmica subyacente a la mantencin tisular del estado diferenciado propio de un organismo sano. Las estructuras de un determinado rgano se observan siempre iguales, pero en realidad estn en constante renovacin. Cada individuo est formado por distintos tipos de clulas diferenciadas, que se asocian entre s constituyendo los tejidos. La palabra tejido (texere (latn) = tejer) fue usada por el mdico Andr Bichat (1771-1802) al observar las texturas que encontraba al disecar el cuerpo humano. La histologa (histos (griego) = tejido) es la disciplina que estudia los tejidos y la forma en que se asocian para constituir los rganos. Los tejidos estn formados por: 1. Clulas que se organizan en agrupaciones cooperativas 2. Redes extracelulares de macromolculas secretadas por ellas 3. Espacios intercelulares que contienen un medio hacia el cual difunden los fluidos que nutren y oxigenan a las clulas

Visin de Histologa Funcional de Wheater

Una de las cosas entretenidas de estudiar histologa es ver la muy estrecha asociacin que hay en las estructuras que uno observa, tanto desde el nivel molecular y subcelular, hasta la forma como se organizan los rganos para responder en un mecanismo funcional.

La pared del intestino delgado como modelo de organizacin morfo-funcional

En la estructura de la pared interna del intestino delgado se observa a simple vista una serie de pliegues (Fig. 1, izquierda). La funcin ms importante del intestino delgado es la absorcin de nutrientes y para esto es fundamental disponer de la mayor superficie posible de contacto entre el material contenido en el lumen y la pared.

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Al observar al microscopio, con muy poco aumento (Fig. 1, centro), se distinguen unos pliegues circulares que permiten que la superficie que mira hacia el lumen intestinal sea 3 veces mayor de lo que sera sin ellos. Cuando se mira con mayor aumento (Fig. 1, derecha), se distinguen una serie de vellosidades que aumentan aun ms la superficie luminal, haciendo que sta sea 8 veces mayor. Adems, las clulas que revisten esta superficie tienen microvellosidades, lo que aumenta en 30 veces ms el rea de contacto. El resultado es que la superficie interna de membrana celular que mira hacia el lumen intestinal es de 200m2.

Fig. 1 - La pared del intestino delgado como modelo de organizacin morfo-funcional

Microvellosidades con glicoclix

En un aumento aun mayor (Fig. 2, izquierda), se observan los ncleos de las clulas teidos en azul y, en el borde del tejido que mira hacia el lumen (en crculo), se encuentran las microvellosidades.

Fig. 2 - Microvellosidades con glicoclix

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En la imagen central y superior se ven las microvellosidades que aumentan el rea de membranas celulares. Con un aumento aun mayor (Fig. 2, central inferior), se alcanza a ver el glicoclix, que son estructuras moleculares que se proyectan desde la membrana hacia fuera. Entre las protenas de la membrana celular existe una que la atraviesa (Fig. 2, derecha), unida a un grupo glicopeptdico muy largo, que se repliega muchas veces, esto es el glicoclix.

Existen 4 tipos bsicos de tejidos:

I. Epiteliales:
Cubren la superficie externa del cuerpo, delimitan todas las cavidades corporales y forman las todas las glndulas. Ejemplos: epidermis, tejido de revestimiento del tubo digestivo, etc.

II. Conjuntivos:
Son una variedad muy grande. Subyacen, rodean o sostienen a otros tejidos y contienen clulas capaces de migrar por el organismo. Ejemplos: hueso, sangre, etc.

III. Nerviosos:
Reciben informacin externa y la procesan, para luego generar y conducir las seales necesarias para entregar respuestas rpidas y especficas.

IV. Musculares:
Producen los movimientos que ocurren en el organismo y estn formados por clulas contrctiles, las que se asocian para funcionar a tejidos conjuntivo y nervioso.

Los distintos tejidos tienen en comn:

Irrigacin sangunea, por capilares delimitados por clulas endoteliales Inervacin por terminales axnicos rodeados por clulas de Schwann Contienen macrfagos que remueven a las clulas y a la matriz extracelular daadas y leucocitos responsables de la defensa ante agentes txicos. Las clulas que realizan estas funciones se originan fuera del tejido y lo invaden, ya sea durante el desarrollo o a lo largo de la vida. As cada tejido contiene, junto a sus componentes especficos, varios tipos celulares que deben permanecer diferentes entre s, mientras coexisten en el mismo medio.

La mantencin de la forma y funcin especfica de un tejido depende de dos propiedades de las clulas especializadas:
Una clula est determinada si experimenta en la morfognesis un cambio estable autoperpetuado en su genoma que restringe sus posibilidades de diferenciacin, adquiriendo una memoria celular que le permite mantenerse en ese estado y transmitirlo a su progenie. Una clula est diferenciada cuando expresa su fenotipo, haciendo aparente su especializacin. El fenotipo de cada clula diferenciada resulta de la expresin selectiva de genes, la que es regulada por el medio ambiente que rodea a la clula. 3

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La composicin celular de un vertebrado adulto, en su vida normal, se parece a un ecosistema estable, en el cul una generacin de clulas reemplaza a otra, sin modificarse la organizacin total del sistema. El tejido epitelial pluriestratificado (Fig. 3) est formado por muchas capas de clulas. Entre las clulas ms cercanas al conjuntivo subyacente (dermis) existen clulas troncales. stas quedaron determinadas durante el desarrollo embrionario para que, mientras permanezcan en ese ambiente, ella y sus hijas slo formen clulas epiteliales de la epidermis. Al dividirse las clulas troncales, una de ellas reemplaza a la madre y la otra se puede multiplicar un par de veces. Luego de multiplicarse, estas clulas comienzan a diferenciarse para ir constituyendo el rgano correspondiente.

Fig. 3 - (Izquierda) Vista al microscopio ptico de un epitelio cornificado de la epidermis en la zona del abdomen. (Derecha) Esquema del mismo tipo de tejido.

Cada clula del embrin puede ser conducida a una determinada va de desarrollo. Una de estas vas es mediada por la protena receptora Notch y un ejemplo es su rol en la formacin de clulas nerviosas en Drosophila. Las clulas nerviosas se diferencian inicialmente a partir de clulas aisladas de una lmina epitelial de clulas precursoras. Durante el proceso, cada futura clula nerviosa da seales a las clulas vecinas indicando que no deben desarrollarse igual a ella: proceso conocido como inhibicin lateral (Fig. 4).

Fig. 4 - Diferenciacin celular por inhibicin lateral.

La inhibicin lateral depende de la expresin de la protena receptora llamada Delta (Fig. 5, en rojo) que al unirse a las protenas receptoras Notch (Fig. 5, en verde) de la superficie de las clulas vecinas genera en ellas una seal que inhibe su diferenciacin a neuronas. 4

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Al ser activada la protena Notch por su unin a Delta, una proteasa corta el extremo intracelular de la protena Notch, el cual se desplaza hacia el ncleo y activa la transcripcin de un set de genes (Fig. 5, centro). Este segmento de Notch se une a la protena reguladora CSL la cul es un represor de la expresin gnica, pero al unirse al segmento de Notch se transforma en activador de la expresin de un set de genes que codifican protenas represoras de la expresin de los genes requeridos para la diferenciacin a clula nerviosa (Fig. 5, derecha).

Fig. 5 - Inhibicin lateral mediada por Notch-Delta durante el desarrollo de clulas nerviosas.

Principios bsicos de la histologa molecular:

Slo molculas correctas en el sitio correcto generan clulas, tejidos y rganos normales.

Parte II. Tejidos Epiteliales: Estructura y Funcin

(Profesora: Dra. Cecilia Koenig) Ejemplos de epitelios pluriestratificados:
El epitelio de la cornea est formado por mltiples estratos de clulas, y las ms superficiales tienen un ncleo aplanado, por eso se les dice planas. Las clulas troncales se ubican cerca de la superficie basal (Fig. 6, indicada con flecha). En el caso de los humanos, este epitelio se recambia completo cada semana. Lo caracterstico de este epitelio es que las clulas estn muy estrechamente asociadas entre s, en general no se ve una cantidad importante de material intercelular. Sin embargo, el estrato ms basal del epitelio descansa en un tejido distinto: la lmina basal. sta lmina cumple la funcin de anclar el epitelio al tejido subyacente (Fig. 7).

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Fig. 6 (izquierda) - Vista al microscopio ptico de un epitelio pluriestratificado plano de crnea. Fig. 7 (derecha) - Esquema del mismo tipo de epitelio.

El epitelio de la cornea es muy resistente, y su resistencia est dada por la presencia de uniones entre las clulas adyacentes. Estas uniones corresponden a los sitios donde se anclan los citoesqueletos de filamentos intermedios (Fig. 8).

Fig. 8 (izquierda) - Localizacin inmunocitoqumica de filamentos intermedios de queratina. Fig. 9 (derecha) - Vista al microscopio ptico de un epitelio pluriestratificado plano de esfago.

Normalmente los capilares sanguneos no penetran en el epitelio pluriestratificado y no atraviesan la lmina basal. En el epitelio del esfago las clulas son pocas y existen zonas de grosor distinto. (Fig. 9). Los nutrientes y el oxigeno llegan hasta las clulas del epitelio por medio de difusin a travs de papilas de tejido conjuntivo (Fig. 9, indicadas con flechas rojas).

Ejemplos de epitelios monoestratificados:

El epitelio de los tbulos del rin est formado por una sola capa de clulas cuboidales, que separa el lumen y los capilares sanguneos, es decir, acta como interfase entre la sangre y la orina (Fig. 10).

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Fig. 10 - (Izquierda) Vista al microscopio ptico de un epitelio monoestratificado de los tbulos renales. (Derecha) Ampliacin de la imagen anterior. Con L se muestra el lumen.

El epitelio del intestino (Fig. 11) es monoestratificado cilndrico. Es decir, est formado por una sola capa de clulas que son alargadas.

Fig. 11 - (Izquierda) Vista al microscopio ptico de un epitelio monoestratificado cilndrico de vellosidad intestinales. (Derecha) Mismo tejido, visto con un microscopio electrnico de barrido (MEB).

Clula asimtrica o polarizada:

Entre las caras laterales de las clulas hay espacios intercelulares en los que puede haber lquido. Existe, adems, un complejo que permite anclar el epitelio a la lmina basal. En general, las clulas epiteliales, aunque es mucho ms claro en epitelios monoestratificados, son clulas polarizadas. La superficie luminal mira hacia un medio que es muy distinto al que da hacia la circulacin. Esto se logra porque existen complejos de uniones intercelulares que tienen dos funciones: 1. Mantener las clulas juntas, para que la lmina epitelial persista, y, al mismo tiempo, 2. Impedir que por los espacios intercelulares circule libremente material desde el medio luminal al medio basolateral, obligando a que el paso se haga a travs de la clula. 7

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Organizacin del citoesqueleto en clulas epiteliales polarizada:

Las clulas epiteliales logran mantener la forma debido a la existencia del citoesqueleto, formado por (Fig. 12): 1. Microtbulos: 25nm de dimetro. 2. Microfilamentos: 7-8nm de dimetro. 3. Filamentos intermedios: 10nm de dimetro.

Fig. 12 (izquierda) - Esquema de la organizacin del citoesqueleto. Fig. 13 (derecha) - Esquema de un tejido epitelial monoestratificado.

Tejidos epiteliales:
Formados por clulas polarizadas, que se asocian entre s, formando lminas (Fig. 13). Su resistencia mecnica depende del citoesqueleto cuyos filamentos intermedios y microfilamentos de actina se anclan en la membrana celular y Poseen uniones de adhesin entre las clulas y con la membrana basal. Los complejos de unin entre las clulas impiden el paso de agua y solutos desde un compartimiento al otro. Las clulas tienen una superficie luminal expuesta hacia el medio externo, y una superficie basal al medio interno. La base de las clulas epiteliales se asocia a la matriz extracelular propia de la lmina basal.

Clulas caliciformes:
Cumplen la funcin de sintetizar y secretar glicoprotenas hacia el lumen epitelial (Fig. 14 y Fig.15). En el epitelio del intestino delgado, entre las clulas de absorcin, hay clulas caliciformes que sintetizan y secretan mucus.

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Estas clulas tienen una distribucin polarizada de sus organelos, de manera que: 1. El retculo endoplsmico rugoso se ubica en la zona perinuclear y da origen a las vesculas de transferencia hacia 2. El aparato de Golgi ubicado en el citoplasma supranuclear y 3. Las vesculas de condensacin se forman hacia el polo apical donde se acumulan los granos de secrecin.

Fig. 14 (izquierda) - Vista al microscopio ptico de clulas caliciformes en un tejido de intestino. Fig. 15 (derecha) - Esquema de una clula caliciforme llena de y de otra vaca.

Epitelio seudoestratificado ciliado:

En este tipo de epitelio, si bien todas las clulas estn en contacto con la lmina basal, slo algunas clulas llegan a la superficie (Fig. 16, izquierda). Las clulas que llegan a la superficie presentan una diferenciacin, que corresponde a prolongaciones muy largas de su superficie celular, llamadas cilios (Fig. 16, derecha).

Fig. 16 - (Izquierda) Vista al microscopio ptico de un epitelio seudoestratificado de las vas respiratorias. (Derecha) Mismo tejido, visto con un microscopio electrnico de barrido (MEB).

Gracias a la gran cantidad de estos cilios, el tejido es capaz de desplazar material que se encuentra sobre l.

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Estructura de los cilios:

El citoesqueleto que mantiene y permite el movimiento de los cilios est formado por microtbulos (Fig. 17, izquierda). Estos microtbulos se organizan en nueve pares ms dos centrales, en una organizacin 9+2 (Fig. 17, derecha). De uno de los microtbulos salen dos molculas de dinena que, gracias a su capacidad de interaccionar con otro microtbulo del par vecino, permiten a los cilios generar movimiento.

Fig. 17 - (Izquierda) Esquema de corte longitudinal de un cilio. (Derecha) Esquema de corte transversal de un cilio.

El movimiento de los cilios, a lo que ms se parece es a un latigazo. En el batido de cada cilio se distingue desplazamiento hacia delante: termina con el cilio rgido y extendido, perpendicular a la superficie celular, con su extremo en la capa de mucus, seguido por ondulacin hacia abajo y atrs: en ella el extremo del cilio laxo se acerca a la superficie celular (Fig. 18). Normalmente, al generarse este movimiento, los cilios de un epitelio ciliado estn muy sincronizados entre ellos. Al observar el epitelio en movimiento, se ve una onda similar al viento moviendo el pasto.

Fig. 18 - Movimiento del cilio.

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Microtbulos, doblete de microtbulos y dinena:

Los microtbulos estn formados por la polimerizacin de unas protenas globulares llamadas tubulinas, que existen de dos tipos: y tubulinas (Fig. 19, izquierda). Al ser dos tipos de tubulina los extremos de los microtbulos son distintos entre s, se distinguen el extremo (+) y el extremo (-).

Fig. 18 - (Izquierda) Esquema de un microtbulo. (Centro) Vista al microscopio electrnico de un corte transversal de cilio. (Derecha) Esquema de la asociacin de la dinena al microtbulo A del doblete.

Las dinenas pertenecen a una familia de protenas conocida como las protenas motor. Para que las dinenas puedan operar tienen que asociarse a ATP, entonces la forma de la protena cambia, y se activa la actividad enzimtica que hidroliza el ATP. Al hidrolizar el ATP la energa liberada se traduce en un nuevo cambio de forma, y libera una molcula de ADP. La protena queda con la misma forma original, pero se ha producido un desplazamiento (Fig. 20).

Fig. 20 (izquierda) - Esquema del movimiento producido por una dinena. Fig. 21 - (Izquierda) Esquema del movimiento de un doblete de microtbulos libres. (Derecha) Esquema similar, pero del movimiento de un doblete de microtbulos anclados.

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Cuando tenemos un doblete de microtbulos que aun no han formado el cilio y se agrega ATP, se produce un desplazamiento de una molcula sobre la otra (Fig. 21, izquierda). Cuando el doblete se ha anclado con los otros componentes del cilio y se agrega ATP, al no poder desplazarse una molcula sobre la otra, lo que se logra es que el doblete se curve (Fig. 21, derecha). Esta capacidad de curvatura es lo que va generando el movimiento.

Distribucin polarizada de las protenas de la membrana en clulas epiteliales:

Las protenas propias de la membrana celular presentes en la membrana luminal (o apical) son totalmente distintas a las que poseen las membranas lateral y basal (Fig. 22). Por ejemplo, la ATPasa se ubica slo en la membrana de las caras laterales de estas clulas (Fig. 23). Este tipo de ubicacin permite comprender la capacidad de los epitelios de transportar iones con arrastre osmtico de agua.

Fig. 22 (izquierda) - Esquema de la distribucin polarizada de las protenas de membrana en clulas epiteliales. Fig. 23 (Derecha) - Vista al microscopio electrnico de transmisin (MET) de las ATPasas ubicadas en la membrana de las caras laterales de las clulas epiteliales.

Epitelio de vescula biliar. Transporte de iones y arrastre de agua:

La bilis que llega a la vescula biliar desde el hgado es ms diluida que la finalmente se vaca hacia el duodeno. Cuando se observa este epitelio en un animal que estaba activamente transportando (o sea, reabsorbiendo) agua y electrolitos, la estructura era como el de la (Fig. 24, derecha). Los ncleos, los espacios intercelulares y los citoplasmas se ven en orden. Si no estaba transportando (porque estaba a temperatura baja, porque no haba oxgeno o porque se haba inhibido la ATPasa) el epitelio se pona como en la (Fig. 24, izquierda). Desaparecan totalmente los espacios intercelulares, lo que estaba indicando que la localizacin de esta enzima en las caras laterales era fundamental para que las clulas pudieran vaciar hacia los espacios intercelulares un volumen de lquido que las expanda.

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Fig. 24 - (Izquierda) Vista al MET de epitelio de vescula biliar en reposo, por inhibicin de la bomba Na/K-ATPasa. (Derecha) Vista al MET de epitelio de vescula biliar transportando activamente NaCl con arrastre osmtico de H2O. Fig. 25 (Derecha) - Esquema del mecanismo probable de concentracin de la bilis.

Las clulas se caracterizan por su membrana plasmtica luminal permeable a H2O, Na+ y ClLa membrana plasmtica lateral es permeable a Cl- y H2O y contiene la Na/K-ATPasa que transporta activamente Na+ desde el citoplasma hacia el espacio intercelular, y K+ hacia el citoplasma. Las clulas poseen abundantes mitocondrias para realizar sntesis de ATP. Al activarse la ATPasa, aumenta la concentracin de Na+ y Cl- en el espacio intercelular crendose un microambiente hipertnico con respecto al citoplasma celular, esto genera salida de H2O desde el citoplasma. Esta solucin fluye hacia la zona basal del epitelio arrastrando agua hasta que su concentracin es isotnica con la solucin presente en el lumen epitelial (Fig. 25).

Epitelio intestinal. Absorcin de molculas a travs de la lmina epitelial:

En el epitelio del yeyuno las clulas tienen su borde apical microvellosidades que forman la chapa estriada. La presencia de microvellosidades produce un incremento del rea de la superficie celular expuesta al lquido luminal. El aumento en la superficie apical permite que en membrana plasmtica luminal se localicen los sistemas de transporte especfico para absorber monosacridos, aminocidos y otros, desde el lquido luminal. La estructura de las microvellosidades es mantenida por su citoesqueleto de microfilamentos de actina y protenas asociadas.

Microvellosidades en lumen de epitelio de vellosidades intestinales:

Cada microvellosidad tiene la forma de un dedo, con un dimetro que es varias veces superior al grosor de la membrana celular (10nm). Su citoesqueleto est formado por microfilamentos de actina, que se anclan en la membrana celular; penetran hacia el citoplasma y se anclan ah tambin con los filamentos intermedios (Fig. 26). 13

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Los filamentos de actina tambin estn formados por protenas globulares que polimerizan. Estn amarrados a la membrana celular de la punta con una protena especial, la formina. Y a la de los costados con miosina I. Los microfilamentos se unen entre s dentro de las microvellosidades por medio de dos protenas: la villina y la fimbrina.

Fig. 26 - (Izquierda) Esquema de un corte longitudinal de una microvellosidad. (Derecha) Vista al MET de la estructura de las microvellosidades, se ha usado la tcnica de criofractura.

Epiddimo. Epitelio seudoestratificado con estereocilios:

Los estereocilios son un tipo muy especial de microvellosidad, cuyo citoesqueleto tambin est hecho de manojos de filamentos de actina parecidos al de las microvellosidades. Se piensa que en el epiddimo la existencia de estos estereocilios cumple un rol en mecanismos de sensacin de flujo (Fig. 28). Microvellosidades largas y ramificadas cuyos microfilamentos de actina se unen lateralmente a la membrana celular mediante molculas de erzina.

Fig. 28 - Vista al microscopio ptico de un epitelio seudoestratificado con estereocilios.

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