Guas Didcticas para el desarrollo de experimentos

Servicio de Divulgacin Cientfica Estacin Experimental del Zaidn

1) Obtencin y cuantificacin de tu propio ADN

El cido desoxirribonucleico, abreviado como ADN, es un tipo de cido nucleico, una molcula que forma parte de todas las clulas. Contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus. Adems esta molcula es la responsable de la transmisin hereditaria de esa informacin. De una manera sencilla se puede obtener el ADN de las clulas de la boca y observarlo a simple vista. Incluso se puede cuantificar cuanto ADN hay en una muestra.

Material necesario
-Espectrofotometro NANO-DROP -Equipo informtico con impresora -Microfuga de mesa -Micropipetas -Gradilla -Rotuladores -Material plstico: puntas, eppendorfs y tubos Falcon -Palillos -Sal comn (NaCl) -Lavavajillas (Detergente) -Alcohol (Etanol) -Agua -Aparato de PCR Robocycler

Procedimiento
1) OBTENCIN DE ADN -Tomamos un muestra de la mucosa bucal, con ayuda de un palillo. -Echamos entre 100 y 200 litros de agua a un tubo Eppendorf. -Aadimos sal comn, aproximadamente de 100-200 gramos. -Echamos detergente cuya finalidad es romper las membranas de las clulas. -A continuacin, aadimos etanol fro. Aadimos entre 200-400 litros. Agitamos con mucha suavidad y dejamos reposar la muestra durante unos 5 minutos. YA PODEMOS OBSERVAR A SIMPLE VISTA LAS HEBRAS DE ADN DE LAS CLULAS DE LA BOCA!
UN MICROLITRO ES UN MILLN DE VECES MS PEQUEO QUE UN LITRO. Servicio de Divulgacin Cientfica Silvia Alguacil Martn Estacin Experimental del Zaidn C/Profesor Albareda, 1. Granada E-18008 Tlf.: 958 18 16 00

2) CUANTIFICACIN DE ADN -Introducimos el microcentrfuga. tubo con la muestra en una

-El ADN de la muestra precipita al fondo del tubo, as que eliminamos el sobrenadante y nos quedamos con el depsito que hay en el fondo del tubo Eppendorf. -Resuspendemos dicho sedimento con 20 litros de agua. -Tomamos una cantidad de 2 litros y la introducimos en el Espectrofotometro NANO-DROP ESTE APARATO ES CAPAZ DE DAR LA CANTIDAD DE MILIGRAMOS DE ADN QUE HAY EN UN LITRO DE SALIVA!

Para que aadimos detergente?

Al aadir detergente a la mezcla, se rompen las membranas celulares que envuelven a las clulas, as queda libre el contenido de las clulas. El ADN se encuentra dentro de una estructura, el ncleo celular, cuya membrana tambin se destruye con el detergente. As tenemos el ADN celular libre en el tubo Eppendorf.
ADN

u... Sabas q ntenido El ADN co na de en cada u s de las clula de uerpo mi nuestro c damente aproxima ros de dos met largo!.

MEMBRANA CELULAR

CONTENIDO CELULAR: CITOPLASMA

NCLEO

Cmo se guardan las molculas de ADN de gran tamao en el ncleo ?

El ADN se puede guardar en el ncleo de las clulas gracias a una perfecta organizacin de la compactacin de dicho ADN para que quepa dentro del ncleo. El ncleo mide tan slo 6 micrometros, en cambio el ADN sin compactar puede alcanzar los 2 metros. Esta extraordinaria manera de empaquetar el ADN para reducir su tamao es posible gracias a unas protenas llamadas histonas que son las encargadas de asociarse al ADN y llevar a cabo la compactacin del mismo.
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2) Medida de protenas y clorofila en muestras vegetales

En el ADN de las clulas es donde se encuentra toda la informacin para que funcionen correctamente las clulas. Pero esta informacin se ejecuta gracias a la produccin de protenas a partir del ADN. De forma simple se puede decir que las protenas son los obreros de los genes que hay en el ADN. Son las que llevan a cabo las instrucciones que determina el ADN. Pero, cmo medimos la cantidad de protenas que hay en una clula? Una forma simple de medir protenas en el laboratorio es mediante un colorante qumico que se une a las cadenas de polipptidos que conforman la estructura de la protena. As, cuanto ms color adquiera la muestra que estamos analizando, ms cantidad de protena posee.

Material necesario
- Material vegetal (hojas, races, tallos) - Mortero - Medio de extraccin ( Tris-HCl 50 mM, pH 8.0) - Centrifuga de mesa - Tubos de ensayo ependor f - Pipetas automticas/puntas amarilla y azules - Agua destilada - Colorante Protein-assay - Acetona - Espectrofotmetro - Cubetas de de espectrofotmetro - Hielo picado - Guantes EL ESPEC TROFOTMETRO ES UN APARATO QUE SIRVE PARA LA CUANTIFICACIN DE SUSTANCIAS Y MICROORGANISMOS
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Procedimiento
1) MEDIDA DE LA CANTIDAD DE PROTENAS Para comenzar a medir protenas en muestras biolgicas, se comienza preparando un extracto lquido del material. Una vez realizado ste, se mezcla con el colorante y se mide en un aparato (un espectrofotmetro) capaz de valorar la cantidad de color de las muestras. El procedimiento es el siguiente: - Se tritura el material vegetal (hojas, races, tallos) con una disolucin de una sustancia tamponante para que no se modifique el pH de la muestra, en una proporcin 1:4. - Se toman 10 microlitros de este extracto y se aaden 790 microlitros de agua. - A continuacin se adicionan 200 microlitros del colorante de protena y se mezcla. - Se mide en el espectrofotmetro a 595 nm pasados 5 minutos.

UN MICROLITRO ES UN MILLN DE VECES MS PEQUEO QUE UN LITRO.

2) MEDIDA DE LA CANTIDAD DE CLOROFILA La medida de clorofila se lleva a cabo por el siguiente mtodo: -Se toman de 10-50 microlitros del extracto vegetal preparado anteriormente. -Se aaden 150-190 microlitros de agua -Finalmente se adicionan 800 microlitros de acetona, con lo que este disolvente queda al 80% -Se agita y se centrifuga en una microfuga de mesa a 5000 rpm durante 3 min. -El sobrenadante se mide a 652 nm, y al resultado obtenido se aplica una frmula para que nos proporcione los mg de clorofila por ml de muestra.

Para que sirve la clorofila?

u... Sabas q etro es la El nanm d e longitu unidad d a vale a un que equi parte sima milmillon liza ro. Se uti e un met d itud ir la long para med cin e la radia e onda d d acin eta, radi ultraviol . a y la luz infrarroj

La clorofila es un pigmento verde que se encuentra en todos los organismos fotosintticos y que, por tanto, realizan la conversin de CO2 en hidratos de carbono. Es una molcula liposoluble, por lo que es soluble en disolventes orgnicos como la acetona, el etanol y otros. La cantidad de clorofila de un tejido verde nos indica la funcionalidad del mismo y, por tanto, el estado fisiolgico de la planta.

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3) Observacin de flores e identificacin de los rganos reproductores.

La flor es el rgano encargado de la reproduccin y es el lugar donde crecen las semillas. Una flor completa tiene las siguientes partes: cliz, corola, estambres y pistilo. El cliz y la corola protegen los rganos reproductores, que son la parte ms importante de la flor. La parte femenina de la flor es el gineceo o pistilo- y la parte masculina el androceo o estambres- (con filamento y antera). En los estambres se produce el polen o clula masculina y en el gineceo estn los vulos, que son las clulas

Material necesario
- Flores (de diferente tipo, en las que se puedan identificar claramente sus estructuras internas) - Pinzas - Bistur - Portaobjetos - Lupa

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Procedimiento
1) OBSERVACIN - Observar la flor exteriormente e identificar las estructuras que sean visibles. - Retirar delicadamente las estructuras ms externas y observar en la lupa el interior de la flor e identificar sus estructuras. - Retirar un estambre de la flor y espolvorear polen sobre un portaobjetos y observarlo a la lupa/ microscopio. - Cortar longitudinalmente, cuidadosamente con el bistur, el ovario y observar su interior con la lupa.

No es una flor es una inflorescencia!

Una inflorescencia es la disposicin de las flores sobre las ramas o la extremidad del tallo; su lmite est determinado por una hoja normal. La inflorescencia puede presentar una sola flor, como en el caso de la magnolia o el tulipn, o constar de dos o ms flores como en el gladiolo y el trigo. En el primer caso se denominan inflorescencias unifloras y en el segundo se las llama plurifloras.

u... Sabas q ophallus e Amorph ) La flor d cadver (flor de l mundo. titanum rande de g , 1 es la ms de altura ,5 metros Mide 2 y pesa 75 dimetro as metro de e las selv la Procede d kilos. s de la is s asitica lo vive tropicale s a. La flor e Sumatr d olinizada ara ser p de carne 3 das y p r, mezcla olo emite un tos, que s excremen ra alguno podrida y istible pa res resulta ir insectos.

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4) Observacin de la germinacin in vitro de granos de polen.

El olivo, como casi todas las plantas superiores, posee estructuras reproductivas (FLORES). Aunque estas flores sean muy pequeas, encierran todo un mundo microscpico. Las clulas madre del polen se dividen para producir muchos granos de polen. Estos granos de polen adems de producir alergias, tienen otra funcin: permitir la reproduccin de la planta, y que podamos tener abundantes y jugosos frutos. Para realizar esa funcin el grano de polen germina y emite un tubo polnico que dirigir a los gametos hacia la fecundacin del vulo, permitiendo que tengamos una buena cosecha. Para estudiarlos, podemos hacer que los granos de polen germinen artificialmente. Para ello ponemos el polen en un medio con agua y muchos nutrientes. Es lo que llamamos germinacin in vitro.

Material necesario
Polen Medio de cultivo Placas de Petri Discos de papel de filtro Papel de aluminio Agitador orbital Microscopio Lupa Estufa a 30 C Cmara de crecimiento a 25 C

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Procedimiento
1) HIDRATACIN DEL POLEN. - Se pesan 0.002 g de polen utilizando las bandejitas hechas con papel de aluminio. - Las bandejitas con el polen se ponen en placas de Petri con discos de papel de filtro hmedos. - Esta cmara hmeda se mantiene durante una hora a 30 C en oscuridad. 2) GERMINACIN DEL POLEN. - Se pasa el polen a una placa con medio de cultivo (AGUA, SACAROSA Y SALES MINERALES) - Se pone en agitacin suave durante un mnimo de 4 horas a 25C en oscuridad.
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Granos de polen invisibles!

Gracias al uso de las lupas y los microscopios podemos conseguir una imagen aumentada de las muestras. Despus de procesar las muestras veremos en el microscopio como emergen los tubos polnicos de los granos de polen al pasar el tiempo.

ti e n e n in s c u lo s : p o le n s o n m . Es de e d i m e tr o L o s g ra n o s ra s ( m ) d 5 0 m ic n m il l n e n tr e 1 0 a e 1 0 .0 0 0 a u h a b e r e n tr e il e r. d e c ir, p u e d a d e u n a lf e n la c a b e z d e g ra n o s muy r ta n to s, es po d ia rl o p ti c o s P a ra e s tu tr u m e n to s ll o s u ti li z a r in s o s . E n tr e e im p o rt a n te n o b s e rv a rl e rm it a upas) y que nos p s c o p io s (l s te re o m ic ro e ti c o s , c o p io s ( p fi g u ra n lo s d e m ic ro s pos d iv e rs o s ti s ). s , c o n fo c a le e le c tr n ic o

u... Sabas q

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