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ENZIMAS: Dentro do citoplasma celular, existem centenas de substncias que devem ser transformadas, a fim de permitir ao organismo realizar suas funes normais ENZIMAS. Nenhuma reao importante, em qualquer ser vivo, ocorre sem a participao das enzimas.

DEFINIO: Enzimas so um grupo de substncias orgnicas de natureza protica, com atividade celular, que tm funo catalisadora, catalisando reaes qumicas que, sem a sua presena, dificilmente aconteceriam. Isto conseguido atravs do aumento da velocidade das reaes qumicas, possibilitando o metabolismo dos seres vivos. A+B C+D Se a reao for reversvel, a enzima faz a acelerao nos 2 sentidos! O ramo da Bioqumica que trata do estudo das reaes enzimticas a Enzimologia. HISTRIA Era j sabido, entre o final do sculo XVII e incio do sculo XVIII, que secrees estomacais eram capazes de digerir a carne; era tambm conhecida a converso de amido a acares pela saliva e extratos vegetais. O mecanismo envolvido nessas transformaes no era, no entanto, conhecido. As enzimas foram descobertas no sculo XIX, aparentemente por Pasteur, que concluiu que a fermentao do acar em lcool pela levedura era catalisada por fermentos. Ele postulou que esses fermentos (as enzimas) eram inseparveis da estrutura das clulas vivas do levedo. Pasteur declarou que "a fermentao alcolica um ato correlacionado com a vida e com a organizao das clulas do fermento, e no com a sua morte ou putrefao". Em 1878, Wilhelm Khne empregou pela primeira vez o termo "enzima" para descrever este fermento, usando a palavra grega , que significa "levedar". O termo passou a ser mais tarde usado apenas para as protenas com capacidade cataltica, enquanto que o termo "fermento" se refere atividade exercida por organismos vivos. Em 1897, Eduard Buchner descobriu que os extratos de levedo podiam fermentar o acar at lcool e provou que as enzimas envolvidas na fermentao continuavam funcionando mesmo quando removidas das clulas vivas. Esta descoberta valeu-lhe o Prmio Nobel de Qumica em 1907. Em 1926, James Sumner isolou e cristalisou a urease, demonstrou que os cristais de urease consistiam inteiramente de protena e postulou que todas as enzimas so protenas, mas esta idia permaneceu controversa por algum tempo. Na dcada de 1930, John Northrop e seus colegas cristalisaram a pepsina e a tripsina bovinas e descobriram que essas molculas tambm eram protenas. J.B.S. Haldane escreveu um tratado intitulado Enzimas, onde continha a notvel sugesto de que as interaes por ligaes fracas entre a enzima e seu substrato, poderiam ser usadas para distorcer a molcula do substrato e catalisar a reao. CARACTERSTICAS GERAIS: Tm alto grau de especificidade para manter a ordem fisiolgica uma enzima deve agir somente sobre um substrato especfico isso garante a possibilidade da ocorrncia simultnea, no meio celular, de centenas de reaes qumicas diferentes, sem que uma interfira no andamento da outra; So produtos naturais biolgicos; Reaes baratas e seguras; 8 11 Altamente eficientes acelerando a velocidade das reaes (10 a 10 + rpida);

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So econmicas reduzem a energia de ativao; No so txicas. NOMENCLATURA E CLASSIFICAO: A determinao do nome das enzimas normatizada por um comit especializado, o Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (NC-IUBMB). Cada enzima cdigo com 4 dgitos que caracteriza o tipo de reao catalisada: 1 dgito - classe 2 dgito - subclasse 3 dgito - sub-subclasse 4 dgito - indica o substrato Como norma geral, tm seu nome determinado pelo SUFIXO ASE, precedido pelo nome do substrato sobre o qual atuam. Ex: amido - amilase, carboidrato - carboidrase, lipdio - lipase, sacarose - sacarase (tipo de carboidrase), protena - protease, lactose - lactase, maltose - maltase

Ex. Hidrlise do ATP catalisada pela ATPase, a que catalisa uma ligao peptdica a Peptidase, uma ligao glicosdica, glicosidase. CLASSES DE ENZIMAS A classificao explicita o nome da classe a que cada enzima pertence, seu nmero de cdigo e a reao que catalisa. Quadro com resumo da classificao. CLASSE EC1 oxirredutases EC2 transferases EC3 hidrolases EC4 liases EC5 isomerases EC6 - ligases FUNO Reaes de oxirreduo Transferncia de grupamentos qumicos Reaes de hidrlise Adio a ligaes duplas Reaes de isomerizao Reaes de agregao, c/ energia do ATP EXEMPLO Isocitrato-desidrogenase fosfofrutoquinase Glicosidases Citrato-liase Fosfotriose-isomerase Acil Co A - sintetase

FUNO: Catalisam as centenas de reaes que ocorrem nas vias metablicas. Atuam na degradao das molculas dos nutrientes, onde a energia qumica liberada conservada na forma de ATP. Atuam na sntese de macromolculas a partir de unidades precursoras simples. ESTRUTURA Todas enzimas so protenas, mas nem toda protena uma enzima.

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Poucas so as enzimas formadas por uma s molcula protica, estas so chamadas ENZIMAS MONOMRICAS e tm peso molecular baixo. Atuam em nvel tercirio. As ENZIMAS OLIGOMRICAS so formadas pela associao de mais de duas cadeias polipeptdicas (em geral, o n. par). Estas cadeias podem ser iguais ou no e possuem estrutura quaternria. Muitas vezes, para que a enzima tenha funo, precisa se associar a uma estrutura no formada por AA um grupo prosttico formam a maioria das enzimas. MECANISMO DE AO ENZIMTICA - catalisadores: Aceleram reaes qumicas No so consumidas na reao Atuam em pequenas concentraes No alteram o estado de equilbrio As enzimas convertem uma substncia, chamada de substrato (grande variedade de natureza qumica), noutra denominada produto, e so extremamente especficas para a reao que catalisam. Isto significa que, em geral, uma enzima catalisa um nico tipo de reao qumica. Conseqentemente, o tipo de enzima encontrada numa clula determina o tipo de metabolismo que a clula efetua. E + S ES E + produtos Complexo em que enzima e substrato esto unidos. Aps a formao do complexo ativado (ES), a enzima se regenera, liberando os produtos. A velocidade da reao catalisada por uma enzima aumentada devido ao abaixamento da energia das reaes qumicas da qual participa (energia de ativao) necessria para converter o substrato no produto. O aceleramento da reao pode ser da ordem dos milhes de vezes. Como so catalistas, as enzimas no so consumidas na reao e no alteram o equilbrio qumico da mesma. A atividade enzimtica pode depender da presena de determinadas molculas, genericamente chamadas cofatores. A natureza qumica dos cofatores muito varivel, podendo ser por exemplo um ou mais ons metlicos (como o ferro), ou uma molcula orgnica (como a vitamina B12). Estes cofatores podem participar ou no diretamente na reao enzimtica. Cofatores, Coenzimas e Grupos prostticos: Quando um grupo no-protico se liga fortemente cadeia de AA, chamado GRUPO PROSTTICO. Se ele est preso fracamente, chama-se COENZIMA. Tanto um quanto o outro so indispensveis correta atividade enzimtica. Ex. Vitamina B2 faz parte de um grupo prosttico. Vitamina B5 faz parte de uma coenzima. Aqui a vitamina aparece servindo como auxiliar de uma enzima. Os COFATORES so ons metlicos (microelementos) com cargas opostas que fazem a aproximao importante quando a enzima tem um saldo geral negativo de cargas e o composto que ela deve transformar ria ria tambm intermedeiam a interao do substrato com a enzima. Em outros casos ajudam a estrutura 3 /4 das enzimas a cumprir seu papel. Ex. MICROELEMENTO Ca ++ Mg Cl
++

ENZIMA Desmolase Hexoquinase -amilase

FUNO Sntese de hormnios Oxidao da glicose Hidrlise do amido

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K ++ Cu
+

Fosfofrutoquinase Citocromo-oxidase

Gliclise Sntese de ATP

Uma enzima muitas vezes maior que o substrato sobre o qual ela atua. Baseados nisso Michaelis & Menten estabeleceram a clssica imagem da CHAVE E DA FECHADURA. A fechadura tem seu centro ativo e a chave o substrato. Deduz-se que o substrato envolvido pelo centro ativo e o envolvimento origina reaes entre enzimas e substrato. Essas interaes afrouxam o substrato que depois se estabiliza na formao dos produtos. Centro ativo e centro alostrico: Uma enzima usa somente uma parte da sua estrutura para se ligar ao seu substrato esta parte chamada CENTRO ATIVO (ex. uma pessoa que usa a mo, como centro ativo, para escrever a lpis no quer dizer que s esta parte do corpo seja importante!!). Uma regio da enzima, que no faz parte do centro ativo, mas que, ao se modificar, modifica tambm a forma do centro ativo o CENTRO ALOSTRICO (no exemplo, seria o cotovelo). Os compostos que atuam sobre o centro alostrico, melhorando a atuao do centro ativo so os EFETORES ALOSTRICOS POSITIVOS. Os que fazem o contrrio so os NEGATIVOS efetores agem diretamente sobre a enzima, aumentando ou diminuindo sua atividade. Centro alostrico no existe em todas as enzimas enzimas alostricas ou no-alostricas. As alostricas controlam a transformao de um substrato e, quando ele precisa ser gasto, elas atuam bem. Quando o objetivo foi alcanado (gastar o substrato) aparece um efetor negativo que freia o processo (em 1 ou outro ponto da linha metablica). As enzimas no-alostricas funcionam sempre com a mesma eficincia, dependendo da concentrao do substrato (S) ou do produto (P), quer dizer, obedecem as leis do equilbrio dinmico quanto mais substrato existe, mais eficientemente ele transformado em produto, quanto mais produto existe, menos a enzima gasta o substrato para gerar o mesmo produto. ATIVIDADE ENZIMTICA: A rapidez com que uma enzima efetua a reao que lhe cabe que justifica sua existncia num certo organismo a capacidade que a enzima tem de transformar o substrato em produto dentro de certo tempo chamada de atividade enzimtica maior atividade mais rapidamente ocorre a reao. Como se mede a velocidade de uma reao enzimtica? Pela quantidade de desaparecimento do substrato ou pela quantidade de aparecimento do produto em uma unidade de tempo mais enzima atuando maior a velocidade da reao. Fatores que alteram a velocidade das reaes enzimticas: - efeito de sais e solventes: a concentrao de sais como NaCl, MgSO4 ... Pode influir na conformao final de uma enzima. Num meio aquoso gua, sais e enzimas interagem. Essa interao resulta na forma final da enzima, quando ela est pronta para atuar sobre o substrato. Se alterar a [sais] o equilbrio entre os constituintes alterado e vai alterar a conformao da enzima. - pH: como os resduos de AA ionizveis situados no stio ativo se comportam como cidos e bases, o pH do meio influencia na ao enzimtica; - temperatura: para que a transformao qumica ocorra imprescindvel que a enzima e o substrato se encontrem a probabilidade aumenta com o aumento da temperatura. Se o meio aquecido este absorver calor e aumentar a energia cintica do conjunto molculas presentes comeam a se movimentar

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mais e os choques entre uma enzima e seu substrato vo ser cada vez mais provveis. Mas temperaturas acima dos 40C podem provocar desnaturao das enzimas. atividade

temperatura Temperatura tima da enzima - concentrao da enzima: quanto mais enzima, mais rapidamente ela se encontra com seu respectivo substrato e mais rapidamente o transforma em produto; Desvios da linearidade ocorrem: Presena de inibidores na soluo de enzima; Presena de substncias txicas; Presena de um ativador que dissocia a enzima; Limitaes impostas pelo mtodo de anlise. Recomenda-se: Enzimas com alto grau de pureza; Substratos puros; Mtodos de anlise confivel. atividade

[enzima]

- concentrao do substrato: varia durante o curso da reao medida que S convertido em P. - presena de inibidores: CINTICA ENZIMTICA: 1. 2. 3. 4. Determinar as constantes de afinidade do substrato e dos inibidores; Conhecer as condies timas da catlise; Ajuda a elucidar os mecanismos de reao; Determinar a funo de uma determinada enzima em uma rota metablica.

INIBIO ENZIMTICA: Determinadas substncias, como algumas drogas, toxinas e outros venenos, podem inibir a atividade de algumas enzimas, diminuindo-a ou eliminando-a totalmente. Um exemplo encontra-se na intoxicao de mamferos por monxido de carbono: o CO liga-se fortemente ao ferro da hemoglobina, formando carboxihemoglobina e impedindo a ligao do oxignio molecular. A este tipo de substncias chama-se inibidor enzimtico.

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Da mesma forma, no combate s plantas daninhas ou parasitas de animais e plantas, possvel inibir temporria ou definitivamente a atividade de uma ou mais enzimas dos agentes deletrios, inviabilizando a vida desses agressores. CONCEITO: inibidor enzimtico qualquer substncia que possa diminuir a velocidade de uma reao catalisada por enzima. TIPOS: - competitiva: inibidor (I) e substrato (S) tm analogia estrutural, disputando o mesmo centro ativo. Mas, quando I se coloca no centro ativo, no forma produto. E + S ES E + produtos E + I EI zero A velocidade da reao vai depender das concentraes de I e de S. Aumentando a concentrao de S, aumenta a velocidade da formao de P e, aumentando a de I, a velocidade diminui. A ocupao do centro ativo vai depender da quantidade maior de substrato ou de inibidor, cada vez que o centro ativo ficar disponvel. Quer dizer a inibio competitiva pode ser revertida pelo acrscimo de mais substrato. - no-competitiva: se caracteriza pela ausncia de analogia estrutural e pela irreversibilidade da unio entre a enzima e o inibidor. Desse modo, um mesmo inibidor pode afetar vrias enzimas diferentes. E + S ES E + P E + I EI zero E + I + S E-S-I zero A intensidade de inibio vai depender s da concentrao do inibidor: quando a reao do complexo E-S vem para a esquerda, o centro ativo ficar livre e se combinar com o inibidor na proporo da sua quantidade no meio e da no sair. APLICAES Alm de serem utilizadas em investigao laboratorial, as enzimas so usadas comercialmente. Uma aplicao industrial a produo de antibiticos em larga escala. Encontram-se tambm determinados tipos de enzimas em produtos de limpeza, para ajudar a digerir gorduras e protenas presentes.