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Qu es metologa?
Se refiere a los mtodos de investigacin que se siguen para alcanzar una gama de objetivos en una ciencia. Son el conjunto de mtodos que se rigen en una investigacin cientfica o en una exposicin doctrinal. Mtodo es el procedimiento para alcanzar los objetivos y la metodologa es el estudio del mtodo.
Lic. Walter Pinillos Llanos
Mtodo
Del griego metha (ms all) y odos (camino), significa literalmente camino o va para llegar ms lejos; hace referencia al medio para llegar a un fin. En su significado original esta palabra nos indica que el camino conduce a un lugar.
Mtodo = Tcnica
No, una tcnica es un procedimiento o conjunto de reglas, normas o protocolos, que tienen como objetivo obtener un resultado determinado, ya sea en el campo de la ciencia, de la tecnologa, del arte, de la educacin o en cualquier otra actividad.
Hablemos de Tcnicas
Para hablar de una tcnica a emplear, debemos determinar qu buscamos con esta tcnica. Buscamos evidenciar la presencia de un antgeno o de un anticuerpo va una reaccin Ag-Ac, que a simple vista no es visible.
Hablemos de Tcnicas
En resumen, para evidenciar estos Ag o Ac se aplican mtodos que involucran a determinadas tcnicas desarrolladas en muchos casos para su uso comercial, con el fin de poder determinar la probabilidad de que una persona se encuentre sana o enferma, o que sea portador o no de una enfermedad.
Lic. Walter Pinillos Llanos
Qu tcnicas existen para determinar la presencia de VHB o HCV? Se puede hablar de muchas tcnicas, pero las agruparemos de esta manera:
Pruebas Rpidas Pruebas de Screening Pruebas de Diagnstico y Seguimiento Pruebas confirmatorias (?)
Pruebas Rpidas
Entindase como Prueba Rpida aquella tcnica que nos permita evidenciar en el menor tiempo de trabajo la presencia de un determinado Ag o Ac. Existen muchos formatos en el mercado mundial que se ajustan a esta descripcin.
Pruebas Rpidas
Pruebas de Screening
Son aquellas pruebas que nos permite separar dentro de un grupo de muestras, aquellas que no tienen presencia de estos Ag o Ac, de aquellos que si tienen probablemente estos Ag o Ac.
Pruebas de Screening
Podemos considerar a aquellas pruebas que nos permite ayudar a diagnosticar una determinada enfermedad a travs de la identificacin de la presencia de Ag o de Ac y finalmente nos permita realizar seguimiento del tratamiento de las mismas cuando estas las permitan.
Virus de la Hepatitis B
El virus de la hepatitis B (VHB), es un virus pequeo (42 nm) de dimetro, de la familia Hepadnaviridae, causante de la Hepatitis B. El virus tiene cuatro serotipos principales (adr, adw, ayr, ayw) basado en los eptopes antignicos de las protenas de su envoltura. En total, existen ocho genotipos del virus (A-H) de acuerdo a la variacin en la secuencia de nucletidos del genoma viral. Los genotipos tienen una distribucin geogrfica distinta y son tiles para rastrear la evolucin y la transmisin del virus. Las diferencias entre los genotipos afectan la severidad y el curso de la enfermedad, as como la probabilidad de complicaciones, la respuesta al tratamiento y las posibles vacunas que se produzcan.
Lic. Walter Pinillos Llanos
HBc Ag
HBs Ag
DNA
Virus de la Hepatitis C
El virus de la hepatitis C (VHC, HCV en ingls) es un virus pequeo (50 nm), con envoltura y con una sola cadena de ARN(+). Pertenece a la familia Flaviviridae. Se replica principalmente en los hepatocitos del hgado causando la hepatitis C, aunque hay controversia de si pueden tambin hacerlo en linfocitos o monocitos. Genotipo: 6 genotipos principales y ms de 50 subtipos La distribucin geogrfica de estos tipos y subtipos d vara considerablemente. Hay que tener en cuenta que esta nomenclatura no puede ser reconocido en ningn CIRCUNSTANCIAS como definitivas.
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Virus de la Hepatitis C
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Desventajas: Semicuantitativo a menos que se modifique cambiando el sistema de reaccin de portaobjetos a cubeta (turbidimetra, nefelometra).
Lic. Walter Pinillos Llanos
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Pruebas Rpidas:Tiras
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Pruebas Rpidas
Pruebas Rpidas
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Partcula magn
Muestra con TSH
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Streptavidina
ELECTRODO
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Se aplican las mismas tcnicas que las asociadas como Pruebas de Screening. En qu se diferencian? Sensibilidad y Especificidad
Infection
15
20
10
40
50 60
70 Days
ElPeriodo de Ventana est en funsin de la Sensibilidad del ensayo a usar para la deteccin del HBs Ag
Lic. Walter Pinillos Llanos
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Semsibilidad Analtica
Lmite de Sensibilidad en un panel EFS: EFS HB Lote 01080222GB : mezclas de HBs Ag y subtipos ad y ay
Producto A Producto B Producto C Producto D Producto E Producto F Producto G Producto H
*Lmite de deteccin de Sensivilidad en ng/ml despus de una regresin lineal con 5 diluciones de 0 a 0.45 ng/ml
Producto
4.5 days
A 2.1 days
Producto F
7.6 days
7
Producto E
8 Days
7.4 days
Ranking en promedio de dias para la deteccion tomando como referencia la prueba HBV NAT.
Producto D Producto C
5.9 days
5.0 days
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0,0
10,0
20,0
30,0
40,0
50,0
60,0
70,0
Cul es el algoritmo actual para el diagnstico de la infeccin por VHC en laboratorios de diagnstico
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La primera seleccin se lleva a cabo hasta ahora con ensayo que permitan la deteccin de los anticuerpos del VHC como se especifica en la Conferencia de Consenso de la Asociacin Europea para el Estudio del Hgado (EASL) y en la Declaracin de Consenso del Instituto Nacional de Salud (NIH Consensus Statement) para el VHC.
Lic. Walter Pinillos Llanos
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STOP
OR
Negative
Positive
STOP
Additional Laboratory Evaluation (e.g. PCR, ALT) Negative PCR, Normal ALT Positive PCR, Abnormal ALT
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Patrn serolgico de infeccin aguda por el VHC Con la progresin de la infeccin crnica
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Corriente Terica sobre el Periodo de Ventana para el HCV, HVB y el HIV. Jackson y SLBush. Transfusin, Junio 2003
70 Das
45 Das
7 Das
20 Das
16 Das
7 Das
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Porqu reducirlo ?
Para evitar resultados falsos negativos y de diagnstico errneo Para tener un diagnstico temprano a fin de tener un tratamiento ms eficaz Para evitar la contaminacin por sangre
Lic. Walter Pinillos Llanos
HCV RNA3
Infection
HCV Core Ag4
12
13/14
70
80
150
Das
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Pruebas Confirmatorias?
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Tcnicas de Amplificacin de Acidos Nucleicos (NAT) Cul es el efecto del tamao del pool sobre la sensibilidad? Ejemplo
Test con sensibilidad de 30 UI/ml
Muestra Directa (SDNAT): Detecta a partir de 30 UI/ml Deteccin en el Suero ser a partir de 30 UI/ml
Lic. Walter Pinillos Llanos
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En resumen
Hagmonos las siguientes preguntas: Qu tipo de muestras y/o pacientes tenemos? Que tipo de Laboratorio tenemos y/o necesitamos? Cules son las implicancias sobre la sensibilidad y especificidad que necesitamos? Cul es el costo-beneficio?
Lic. Walter Pinillos Llanos
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Bayer Immuno 1 ACS: 180SE Advia Centaur 1993 1997 1998 Particulas Magnticas Particulas Magnticas Particulas Magnticas EIA, Turbidimetria Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia
Beckman Coulter Acces Acces 2 Synchrom Lxi 1993 2001 2002 Particulas Magnticas Particulas Magnticas Particulas Magnticas Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia
DPC Inmulite Inmulite 2000 1993 2000 Perla, Centrifugacin Perla, Centrifugacin Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia
Nichols CL Systems Advantage 1993 1997 Perlas Particulas Magnticas Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia
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Tosho AIA-Nex AIA-600 1997 2000 Perlas Perlas EIA de Fluorescencia EIA de Fluorescencia
EIA: Enzimoinmunoanalisis; FPIA: Inmunoanalisis por Fluorescencia Polarizada; MEIA: Enzimoinmunoanalisis Microparticulado.
Muchas Gracias
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