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UNIVERSIDADE PRESBITERIANA MACKENZIE

CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS E DA SADE

BRUNA PASCARELLI PEDRICO DO NASCIMENTO CCERA PIMENTA MARCELINO GABRIEL PAEZ DE CASTRO OLIVEIRA LOREDANNA CAVALHEIRO AURORA RENATA LOBATO CATARINACHO

RELATRIO DE AULAS PRTICAS DE BIOQUMICA I 6

SO PAULO 2009 BRUNA PASCARELLI PEDRICO DO NASCIMENTO CCERA PIMENTA MARCELINO GABRIEL PAEZ DE CASTRO OLIVEIRA LOREDANNA CAVALHEIRO AURORA RENATA LOBATO CATARINACHO
RELATRIO DE AULAS PRTICAS DE BIOQUMICA I Trabalho apresentado disciplina de Bioqumica I, do Curso de Cincias Biolgicas, da Universidade Presbiteriana Mackenzie. Profa. Dra. Daniela de Oliveira Toyama

SO PAULO 2009 7

1. INTRODUO Dentre as diversas molculas constituintes de uma clula, sabe-se que a gua seu componente de maior importncia e o mais abundante, sendo que esta representa cerca de 70% da constituio da maioria dos organismos e participa basicamente de todas as reaes qumicas das clulas. sabido que a gua uma molcula assimtrica e que sua importncia est em sua natureza dipolar, onde temos sua tendncia a se combinar com ons negativos e positivos maior que a tendncia desses ons se combinarem entre si. A presena de carga parcial positiva em seus tomos de hidrognio e de carga parcial negativa no tomo de oxignio, o qual possui dois pares de eltrons no-compartilhados, permite que a gua se associe com outras quatro molculas atravs de pontes de hidrognio. Graas a capacidade que a gua tem de formar pontes de hidrognio ela possui propriedades nicas como altos pontos de fuso e ebulio, alto calor especfico e elevado calor de vaporizao. O que determina as propriedades solventes da gua, em grande parte, a sua natureza polar. Compostos inicos com cargas inteiras e compostos polares com cargas parciais tendem a dissolver-se em gua, pois estes conseguem interagir com a gua atravs das pontes de hidrognio, fato que no observado quando se trata de compostos apolares, que no se dissolvem em gua, pois no conseguem interagir com esta por pontes de hidrognio e na presena destes compostos h um ordenamento energeticamente desfavorvel das molculas de gua em sua superfcie. As substncias que tendem a dissolver-se em gua so chamadas hidroflicas e as substncias que no se dissolvem em gua so chamadas hidrofbicas. Em uma mesma molcula possvel a presena de pores tanto polares (hidroflicas) quando apolares (hidrofbicas), nessa situao a molcula chamada anfiptica. graas a esta funo fundamental da gua como solvente que ela desempenha um papel fundamental nos processos biolgicos devido as suas propriedades cido-bsicas. Por definio, cidos so substncias com capacidade de ceder/doar prtons em uma reao e bases so substncias com capacidade de receber prtons em uma reao. Existe um valor numrico conhecido como constante de dissociao ou Ka, que indica a quantidade de ons hidrognio que um cido libera, 8

quando dissolvida certa quantidade desse cido em gua, portanto a partir desse valor expressa a fora do cido. conhecida ainda, uma outra constante que determina a tendncia que a gua tem de dissociar-se e formar os ons hidrognio e hidrxido, essa constante chamada de Kw ou constante do produto inico da gua. Graas a esta definio, na gua pura a concentrao de ons hidrognio igual concentrao dos ons hidroxila, portanto dito que a soluo est em um pH neutro. O pH a medida da concentrao de ons hidrognio em uma soluo, sendo que esta medida pode ser obtida em valores aproximados, com a utilizao de corantes indicadores, e em valores precisos com a utilizao de um pHmetro. Existe uma equao, conhecida como equao de Herdenson-Hasselbalch, que relaciona o pH com o Ka e com as concentraes de cido e base conjugados. Esta a equao de dissoluo de um cido fraco, que utilizada para adiantar as propriedades de um tipo de soluo que utilizada para manter o pH de misturas de reao. Esse tipo de soluo conhecido como soluo-tampo, que constituda pela a mistura de cidos fracos suas bases conjugadas. Como citado anteriormente, uma soluo-tampo capaz de impedir mudanas drsticas/acentuadas de pH diante da adio de pequenas quantidades de cido ou de base fortes. Existem certos fatores que determinam a eficincia de um tampo, sendo que esta restrita a uma faixa de pH na qual as concentraes de cido e base conjugada so capazes de compensar adies de cido e base fortes. A partir da equao de Herderson-Hasselbalch observa-se, que quando h quantidades iguais nas concentraes de cido e base conjugados o pH dessa soluo igual ao valor do pKa do cido fraco, sendo que a melhor a atuao de um tampo se d nessas condies. Portanto, a zona de maior eficincia de um tampo aquela na qual existem, simultaneamente, 50% de cido conjugado e 50% de base conjugada. Essa regio de maior eficincia pode ser determinada a partir de uma curva de titulao, que representada a partir de um grfico de pH x os valores equivalentes de base adicionados durante a titulao de um cido qualquer. De modo que, a eficincia de um tampo se encontra relacionada com a sua concentrao. A existncia de um sistema-tampo se faz necessria pelo fato de que muitas reaes biolgicas so extremamente sensveis a variaes de pH, e estas no 9

ocorrem se este estiver um pouco fora de seu valor timo. Alm disso, a estrutura e a atividade de macromolculas biolgicas importantes, como por exemplo as protenas, so alteradas havendo perda de suas atividades em extremos de pH. Os aminocidos so compostos orgnicos constitudos por nitrognio, oxignio, hidrognio e carbono (podendo haver enxofre). Em um aminocido podese evidenciar um grupamento amina (NH2), um grupamento carboxila (COOH), o carbono alfa, o hidrognio e o grupo R, chamado radical, que caracteriza os aminocidos, ou seja, determina suas propriedades e os classifica. A classificao dos aminocidos dse principalmente pela sua polaridade/apolaridade e sua interao com a gua hidrofila/hidrofobia, formando assim duas classes principais de aminocidos: os apolares (hidrofbicos) e os polares (hidroflicos). Os aminocidos formam as protenas a partir das ligaes peptdicas que ocorrem entre o grupamento amina de um aminocido e o grupamento carboxila de um outro aminocido, havendo nesta ligao a perda de uma molcula de gua. As protenas so polmeros de alfa-aminocidos de forma L, podendo ter uma ou mais cadeias polipeptdicas. Uma boa parte das protenas so sintetizadas no citosol da clula pela traduo de RNA, tendo importante funo estrutural, informacional e funcional para os organismos. Essas macromolculas so extremamente sensveis a mudanas de pH, altas temperaturas, compostos que formam pontes de hidrognio e solues polares, sendo que sob essas condies as protenas podem sofrer mudanas em sua conformao, ocasionando a perda de funes. Uma maneira prtica de separar aminocidos a cromatografia em papel ascendente, este mtodo consiste na separao dos componentes de uma mistura, tendo por base a distribuio destes em duas fases, uma estacionria e outra mvel, que esto em contato, dessa forma pode-se classificar os aminocidos de acordo com suas propriedades. H formas experimentais para se caracterizar aminocidos. A interao destes com algumas substncias adicionadas podem causar mudanas muito particulares, evidenciando assim, algumas de suas propriedades a partir da colorao assumida. A reao de Millon, evidencia a presena de tirosina, a reao de Hopkins-Cole , o triptofano; na reao de Sakagushi, a arginina e na reao de ninidrina so 10

evidenciados os compostos com grupos amino livres, portanto esse tipo de reao muito importante para anlise qualitativa de aminocidos e protenas. As protenas podem ser caracterizadas a partir de algumas de suas propriedades, como por exemplo, a carga eltrica, a solubilidade, massa molar ou por colorao e precipitao, que pode ocorrer por sais neutros, em que h a solubilizao por salificao (salting in) ou a precipitao por salificao (salting out). H tambm a precipitao por sais de metais pesados ou por cidos fortes; essas duas formas relacionam o pH e o PI dos compostos formados a partir da adio de alguma substncia amostra de protena, no caso, solues que contenham ons positivos de metais (Hg++; Pb++; Fe++, entre outros) e solues de cidos fortes. Um exemplo de determinao quantitativa das protenas pode ser o teste do biureto, em que possvel obter absorbncia de um composto desconhecido a partir de sua colorao e assim, determinar a sua concentrao. A partir do estudo e da realizao das experincias a seguir descritas pdese reconhecer as propriedades e caractersticas de aminocidos e protenas, alm da influncia que alteraes fsicas e qumicas no meio podem causar a esses compostos orgnicos de to importante funo biolgica. BIBLIOGRAFIA CAMPBELL, M. K. Bioqumica. 3.ed. Porto Alegre: Artmed Editora, 2000. MARZZOCO, A. & TORRES, B. B. Bioqumica Bsica. 3.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007. NELSON, D. L. & COX, M. M. Lehninger Princpios de Bioqumica. 4.ed. So Paulo: Sarvier, 2006. SARDELLA, A & MATEUS, E. Curso de Qumica: Qumica Geral. 21.ed. So Paulo: Editora tica, 1995 11

2. MATERIAL E MTODOS TAMPES E pH 2.1 - EXPERIMENTO 1 - FUNCIONAMENTO DOS TAMPES Inicialmente deveria ser construda uma escala padro de pH. Para a construo desta escala foram necessrios 7 tubos de ensaio, numerados de 4 a 10, nos quais foram adicionados 2 mL de soluo tampo com pH 4, 5, 6, 7, 8, 9 e 10 em seus respectivos tubos. Deveriam ter sido adicionadas 3 gotas de indicador universal em cada um dos tubos, contudo, foram adicionadas cerca de 6 gotas do mesmo em cada um dos tubos para que estes adquirissem uma colorao mais intensa. Aps a adio do indicador universal os tubos foram agitados para a homogeneizao e colocados em uma estante. A colorao de cada um dos tubos foi observada e correlacionada com o valor de pH. Aps a construo da escala padro de pH, foram necessrios mais 4 tubos de ensaio, que foram numerados de 1 a 4. Foram adicionados 2 mL de gua destilada nos tubos 1 e 3. J nos tubos 2 e 4 foram adicionados 2 mL de soluo tampo fosfato 0,2M pH 7,7. Foram adicionadas 3 gotas de indicador universal nos 4 tubos. Aps a adio do indicador, os tubos foram agitados para a homogeneizao das solues e foi anotado o valor de pH de cada um dos tubos. Aps a medio do pH, foram adicionadas 3 gotas de soluo cida (HCL 0,1M) nos tubos 3 e 4, e 3 gotas de soluo bsica (NaOH 0,1 M) nos tubos 1 e 2. Aps a adio de ambas as solues os tubos foram agitados e foi anotado o valor do pH de cada um deles. 2.2 EXPERIMENTO 2 CAPACIDADE DE TAMPONAMENTO DA SALIVA Em um copo descartvel foi coletada a saliva de um integrante do grupo. Aps a coleta, a ponta de uma tira de papel indicador de pH foi mergulhada na saliva, para a medio de seu pH. Logo em seguida, foram ingeridos quatro goles de suco de limo, e o procedimento inicial de coleta de saliva e medio do pH foi repetido. Passados 20 12

minutos, a saliva foi novamente coletada e da mesma maneira que nos procedimentos anteriores teve seu pH medido. 2.3 - EXPERIMENTO 3 - FORA INICA DOS TAMPES Para a realizao deste experimento foram necessrios dois tubos de ensaio que foram numerados em 1 e 2. No tubo 1, foram colocados 10,0 mL de soluo tampo fosfato 0,2 M, ph 7,7 e 7 gotas de indicador universal. No tubo 2, foram colocados 2,5 mL da mesma soluo tampo, 7,5 mL de gua destilada e 7 gotas de indicador universal. O pH de ambos os tubos foi medido com o auxlio do pHmetro e anotado. Os tubos deste experimento no foram descartados, pois foram necessrios para a realizao do experimento 4. 2.4 - EXPERIMENTO 4 - CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORES SAL/CIDO CONSTANTES Para a realizao deste experimento, foram necessrias as solues do experimento anterior, portanto, foram utilizados os mesmos dois tubos de ensaio. Em ambos os tubos foi adicionado 1,0 mL de soluo cido sulfrico e foi realizada a medio do pH com o auxlio do pHmetro. O mesmo procedimento foi realizado mais duas vezes, lembrando que em todas elas os resultados da medio do pH foi registrado. 2.5 EXPERIMENTO 5 CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORES SAL/CIDO VARIVEIS Para a realizao deste experimento foram necessrios 4 tubos de ensaio, que foram numerados de 1 a 4. No tubo 1 foram adicionados 3,5 mL de soluo de Acetato de sdio (CH3COONa 0,1M) e 3,5 mL de soluo de cido actico (CH3COOH 0,1M). No tubo 2 foram adicionados 5,0 mL de soluo de Acetato de sdio (CH3COONa 0,1M) e 2,0 mL de soluo de cido actico (CH3COOH 0,1M). No tubo 3 foram 13

adicionados 6,0 mL de soluo de Acetato de sdio (CH3COONa 0,1M) e 1,0 mL de soluo de cido actico (CH3COOH 0,1M). No tubo 4 foram adicionados 6,5 mL de soluo de Acetato de sdio (CH3COONa 0,1M) e 0,5 mL de soluo de cido actico (CH3COOH 0,1M). Aps a adio das solues, todos os tubos foram agitados para a homogeneizao da soluo e, com o auxlio do pHmetro, foi verificado o pH de cada um dos tubos de ensaio. A partir da equao de Henderson-Hasselbalch foi calculado o pH terico de cada um dos 4 tubos. Deveria ser indicado o tubo que apresentasse o maior poder de tamponamento com justificativa. Para que fosse testada a indicao do tubo com maior poder de tamponamento, o contedo de cada um dos 4 tubos foi dividido pela metade, sendo necessrios mais 4 tubos de ensaio, totalizando 8 tubos de ensaio nesta etapa do experimento, sendo estes identificados com 1A e 1B, 2A e 2B, 3A e 3B, 4A e 4B. Nos tubos 1A, 2A, 3A e 4A foi adicionado 1,0 mL de soluo de cido Clordrico (HCL 0,1M). J nos tubos 1B, 2B, 3B e 4B foi adicionado 1,0 mL de soluo de Hidrxido de Sdio (NaOH 0,1M). Aps a adio das solues, todos os tubos foram agitados para a homogeneizao da soluo e, com o auxlio do pHmetro, foi verificado o pH de cada um deles. SEPARAO DE AMINOCIDOS: CROMATOGRAFIA DE PAPEL ASCENDENTE 2.6 EXPERIMENTO 1 - CROMATOGRAFIA DE PAPEL ASCENDENTE Utilizando papel cromatogrfico (Whatman n1), foram realizados cortes na direo e orientao das fibras de celulose, afim e formar trs tiras de papel de aproximadamente 17,0 cm de comprimento e 2,0 cm de largura. Aps isso, foi traada uma linha a 2,0 cm da ponta inferior de cada tira de papel, essa linha foi denominada Linha de Base. Na primeira tira de papel cromatogrfico, aplicou - se uma gota da 14

soluo de glicina (0,1 M), na segunda, uma gota da soluo de leucina (0,1M) e na terceira tira uma gota de cada uma das solues (glicina e leucina). Adicionou-se 20 mL de solvente (butanol, cido actico e gua) em trs tubos calibrosos, estes foram fechados com rolha (para ocorrer a saturao com a atmosfera) e presos com garras de metal um suporte para facilitar o experimento. Cada tira de papel cromatogrfico, j seca ao ar, foi colocada em cada um dos tubos, presas pela rolha, de forma que apenas a ponta inferior do papel entrasse em contato com o solvente. Aps 40 minutos de espera, as tiras foram retiradas e, novamente, secas ao ar, com o uso de um lpis comum a Linha de Frente (parte do papel cromatogrfico em que cessou a subida do solvente) foi traada e a Ninidrina (0,1%) pulverizada sobre cada uma das tiras. Para auxiliar na secagem, as tiras de papel cromatogrfico foram colocadas em uma estufa a 60C permanecendo sob essas condies por aproximadamente 15 minutos. Realizada a secagem, verificou - se as manchas que se formaram e localizou - se o centro destas (parte em que apresentam - se mais concentradas).Finalizando o experimento, calculou - se a Relao com a Frente, que d - se pela frmula Rf = d/D, onde Rf (Relao com a Frente), d a distncia percorrida pela mancha e D a distncia percorrida pelo solvente. Os dados obtidos foram anotados para a concluso do experimento. Observao: Todo o experimento foi realizado com o uso de luvas, no deve haver contato direto com o papel cromatogrfico, pois a qualidade do experimento seria comprometida j que o papel usado para evidenciar aminocidos. REAES DE CARACTERIZAO DE AMINOCIDOS E PRECIPITAO DE PROTENAS 2.7 EXPERIMENTO 1 EXISTNCIA DE AMINOCIDOS SULFORADOS Em dois tubos de ensaio, foram colocados 1,0 mL de soluo de protena (Albumina) 10 mg/mL e 1,0 mL de gua destilada, respectivamente. Em seguida, foi adicionado lentamente 1 mL de NaOH 6M em ambos os tubos. Ento, os dois tubos foram aquecidos em chama direta do bico de Bunsen com o auxlio de pinas de 15

madeira. Aps o aquecimento, foram adicionadas 3 gotas de cido actico concentrado e 3 gotas de Acetato de chumbo 10% em cada um dos tubos. Realizado todo esse procedimento, as reaes foram observadas e os resultados foram anotados. 2.8 EXPERIMENTO 2 REAO DE MILLON Em dois tubos de ensaio, identificados como 1 e 2, foram adicionados 2 mL de soluo de protena 10 mg/mL e 2 mL de gua destilada, respectivamente. Logo em seguida, foi acrescentado 1 mL do reativo de Millon em ambos os tubos. Ento, os tubos foram aquecidos em chama direta do bico de Bunsen, por cerca de 30 segundos, com o auxlio de pinas de madeira. As reaes foram observadas e seus resultados foram anotados. 2.9 EXPERIMENTO 3 REAO DE HOPKINS-COLE Em dois tubos de ensaio, foram colocados 1 mL de soluo de protena 10 mg/mL e 1 mL de gua destilada, respectivamente. Em seguida, foram adicionados 3 mL do reativo de Hopkins-Cole em ambos os tubos. Ento, com os tubos inclinados, foram adicionados lentamente 2 mL de cido sulfrico concentrado pelas paredes de cada um dos tubos. Passados alguns minutos, observou-se as reaes e os resultados foram anotados. 2.10 EXPERIMENTO 4 REAO DE SAKAGUSHI Em dois tubos de ensaio, identificados como 1 e 2, foram adicionados 1,0 mL de soluo de protena 10 mg/mL, no tubo 1, e 1,0 mL de gua destilada, no tubo 2. Em seguida foram adicionados, em ambos os tubos, 1,0 mL de NaOH 2,5M, 0,5 mL de -naftol (0,4% em etanol) e 1,0 mL de Hipoclorito de sdio (6-7%). Observadas as reaes os resultados foram anotados. 16

2.11 EXPERIMENTO 5 REAO DA NINIDRINA Em dois tubos de ensaio (numerados 1 e 2) foram colocados 1 mL da soluo de protena (albumina) 10mg/mL e 1mL de gua destilada, respectivamente. Aps isso acrescentou - se aos tubos 3 mL da soluo de Ninidrina 0,1% (em tampo fosfato pH 7,0). Os tubos foram fervidos por aproximadamente 2 minutos em banho maria. Os resultados obtidos foram interpretados e anotados. 2.12 EXPERIMENTO 6 PRECIPITAO POR SAIS NEUTROS Em um primeiro momento, foram colocados 2 mL de soluo protica 10 mg/mL em um tubo de ensaio e logo em seguida foram adicionados lentamente pela parede do tubo 2 mL de soluo saturada de cloreto de magnsio (MgCl2), observou-se a reao e o resultado foi anotado. Aps esse primeiro procedimento a soluo foi misturada e o resultado foi novamente anotado. Em um segundo momento foram adicionados 2 mL de gua destilada soluo, que foi misturada e teve seus resultados anotados. 2.13 EXPERIMENTO 7 PRECIPITAO POR SAIS DE METAIS PESADOS Em um tubo de ensaio foi colocado 1mL da soluo de protena (albumina) 10mg/mL, este tubo adicionou-se 0,5 mL da soluo de cloreto frrico (FeCl3) 40%. As modificaes apresentadas foram observadas e, para finalizar o experimento adicionou-se soluo 5 mL de gua destilada, novamente o ocorrido foi observado, interpretado e anotado. 2.14 EXPERIMENTO 8 PRECIPITAO POR CIDOS FORTES Em um tubo de ensaio foi colocado 1,0 mL de soluo protica 10 mg/mL. A essa soluo, foi adicionado 0,5 mL de cido pcrico 10%. A reao foi observada e o resultado foi anotado. Aps o registro do resultado foram adicionados 5 mL de gua 17

destilada soluo, novamente a reao foi observada e seus resultados foram registrados. DETERMINAO FOTOCOLORIMTRICA DE PROTENAS 2.15 EXPERIMENTO 1 TESTE DE BIURETO Inicialmente, 6 tubos de ensaio foram numerados do seguinte modo: B (branco), 1, 2, 3, 4 e A. No tubo B, foram colocados 2 mL de gua destilada e 5,0 mL do reativo de Biureto. No tubo 1, foram colocados 1,5 mL de gua destilada, 0,5 mL de soluo padro de protena (Albumina) 5 mg/mL e 5,0 mL do reativo de Biureto. No tubo 2, foram colocados 1,0 mL de gua destilada, 1,0 mL de soluo padro de protena (Albumina) 5 mg/mL e 5,0 mL do reativo de Biureto. No tubo 3, foram colocados 0,5 mL de gua destilada, 1,5 mL de soluo padro de protena (Albumina) 5 mg/mL e 5,0 mL do reativo de Biureto. No tubo 4, foram colocados 2,0 mL de soluo padro de protena (Albumina) 5 mg/mL e 5,0 mL do reativo de Biureto. E, finalmente, no tubo A, foram colocados 2,0 mL de soluo desconhecida e 5,0 mL do reativo de Biureto. Aps a distribuio dos reagentes, todos os tubos foram incubados em banho-maria em temperatura entre 20-32C durante 10 minutos. Em seguida, foram medidos os valores de Absorbncia em 545 nm contra o tubo B (branco) e os valores obtidos foram registrados. Por ltimo, foi utilizada a frmula C/A=F, para encontrar o fator (F). E a partir desse fator foi calculada a concentrao da amostra desconhecida, utilizando-se a frmula FxA (Absorbncia), sendo a concentrao dessa amostra expressa em mg/mL. 18

3. RESULTADOS TAMPES E pH 3.1 - EXPERIMENTO 1 FUNCIONAMENTO DOS TAMPES Ao se relacionar os resultados obtidos com a construo da escala padro de pH com as informaes da tabela presente na apostila, foi observado que no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 4 a soluo apresentou colorao vermelha; no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 5 a soluo apresentou colorao alaranjada; no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 6 a soluo apresentou colorao amarela; no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 7 a soluo apresentou colorao verde; no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 8 a soluo apresentou colorao azul; no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 9 a soluo apresentou colorao anil e no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 10 a soluo apresentou colorao violeta. Ao se medir o pH dos tubos de ensaio 1 e 3, nos quais foram adicionados gua destilada e indicador universal, verificou-se um pH igual a 7, o qual considerado neutro. Ao se medir o pH dos tubos de ensaio 2 e 4, nos quais foram adicionados soluo tampo e indicador universal, verificou-se um pH igual a 8. Aps a adio da soluo bsica nos tubos 1 e 2, a medio do pH indicou, no tubo 1, um pH igual a 10. J no tubo 2, a mesma medio indicou um pH igual a 7. E aps a adio da soluo cida nos tubos 3 e 4, a medio do pH indicou, no tubo 3, um pH entre 4 e 5, e no tubo 4, a mesma medio indicou um pH entre 6 e 7. 3.2 EXPERIMENTO 2 CAPACIDADE DE TAMPONAMENTO DA SALIVA 19

Na primeira medio, o pH ficou em torno de 8. Aps o suco de limo ter sido ingerido, o valor do pH mudou para 5. J na terceira medio, o pH retornou ao seu valor inicial, indicando novamente um pH igual a 8. 3.3 - EXPERIMENTO 3 - FORA INICA DOS TAMPES No tubo 1, com o auxlio do pHmetro, chegou-se a um valor de pH igual a 8,30, sendo que a colorao da soluo neste tubo era azulada. J no tubo 2, ao se adicionar gua destilada a soluo tampo, o pHmetro indicou praticamente o mesmo valor de pH, sendo este igual a 8,25. 3.4 - EXPERIMENTO 4 - CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORES SAL/CIDO CONSTANTES No tubo 1, com as adies graduais da soluo de cido sulfrico, o pH foi diminuindo levemente, obtendo-se um valor de 7,79 na primeira medio, 7,17 na segunda medio e 6,59 na terceira medio, sendo que a soluo foi ganhando uma colorao amarelo-esverdeada. J no tubo 2, com as mesmas adies graduais da soluo de cido sulfrico, o pH foi diminuindo bruscamente, obtendose um valor de 6,87 na primeira medio, 4,61 na segunda medio e 1,70 na terceira medio, sendo que a soluo foi ganhando uma colorao avermelhada. 3.5 EXPERIMENTO 5 CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORES SAL/CIDO VARIVEIS Com o auxlio do pHmetro foram verificados no tubo 1 um pH igual a 4,56, no tubo 2 um pH igual a 4,95, no tubo 3 um pH igual a 5,40 e no tubo 4 um pH igual a 5,39. A partir da equao de Henderson-Hasselbalch foi calculado o pH terico de cada um dos 4 tubos. Obtendo-se um valor de 4,76 para o tubo 1; 5,76 para o tubo 2; 5,54 para o tubo 3 e 5,87 para o tubo 4. Aps a adio de cido clordrico o tubo 1A indicava um pH de 3,85, o tubo 2A um pH de 4,54, o tubo 3A um pH de 4,47 e o tubo 4A um pH de 4,93. J nos tubos 1B, 20

2B, 3B e 4B aps a adio de Hidrxido de sdio foram verificados valores de pH 5,74 no tubo 1B, 13,21 no tubo 2B, 12,91 no tubo 3B e 13,48 no tubo 4B. SEPARAO DE AMINOCIDOS: CROMATOGRAFIA DE PAPEL ASCENDENTE 3.6 EXPERIMENTO 1 CROMATOGRAFIA DE PAPEL ASCENDENTE Na tira de papel cromatogrfico em que foi aplicada Glicina houve a formao de pequenas manchas de colorao lils, a distncia percorrida pelo solvente foi de 5,5 cm e a distncia percorrida pela mancha foi de 0,5 cm, atravs da frmula obteve se Rf = 0,5/5,5 e, portanto a Relao com a Frente foi de 0,09 cm. Na tira em que foi aplicada Leucina houve a formao de uma grande mancha lils, a distncia percorrida pelo solvente foi de 8,0 cm e a distncia percorrida pela mancha foi de 2,0 cm, pela frmula obteve se Rf = 2,0/8,0 e, portanto a Relao com a Frente foi de 0,25 cm. Na tira de papel em que foram aplicadas as duas solues (Glicina e Leucina), houve a formao de uma mancha lils clara e no contnua, a distncia percorrida pelo solvente neste caso foi de 6,0 cm e a parte percorrida pela mancha foi de aproximadamente 1,0 cm, obtendo se atravs dos clculos Rf = 1,0/6,0 Relao com a Frente igual a 0,16 cm. REAES DE CARACTERIZAO DE AMINOCIDOS E PRECIPITAO DE PROTENAS 3.7 EXPERIMENTO 1 EXISTNCIA DE AMINOCIDOS SULFORADOS Realizados todos os procedimentos no tubo 1, observou-se uma mudana na colorao da substncia, que passou de amarelo para um tom castanho escuro. J no tubo 2, aps a realizao de todos os procedimentos, nenhuma mudana foi observada, a colorao da substncia permaneceu incolor assim como no incio. 21

3.8 EXPERIMENTO 2 REAO DE MILLON No tubo 1, no qual havia a soluo protica, aps o aquecimento foi observada uma colorao alaranjada/salmo. J no tubo 2, no qual havia gua destilada, mesmo aps o aquecimento a soluo manteve-se incolor. 3.9 EXPERIMENTO 3 REAO DE HOPKINS-COLE Observou-se, no tubo 1, a formao de bolhas e uma mudana na colorao da substncia, que passou para um tom violeta com uma formao de anel. J no tubo 2, no foi observada a formao de anel e a substncia apresentava uma colorao amarela. 3.10 EXPERIMENTO 4 REAO DE SAKAGUSHI No tubo 1, no qual havia a soluo protica, aps a adio dos reagentes foi notada uma mudana na colorao da substncia para um tom avermelhado. J no tubo 2, no qual havia gua destilada, observou-se uma colorao mais amarelada. 3.11 EXPERIMENTO 5 REAO DA NINIDRINA No tubo 1, em que foi adicionado Ninidrina protena e levado fervura, a colorao da soluo tornou-se violeta/roxo. No tubo 2, em que a Ninidrina foi adicionada gua destilada a colorao tornou-se amarelada. 3.12 EXPERIMENTO 6 PRECIPITAO POR SAIS NEUTROS 22

Observou-se que aps a adio do Cloreto de magnsio (MgCl2), houve precipitao de protena, que se apresentou na forma de pequenos filamentos esbranquiados, sendo que a soluo tinha aspecto gelatinoso. Com a adio de gua observou-se o desaparecimento dos filamentos. 3.13 EXPERIMENTO 7 PRECIPITAO POR SAIS DE METAIS PESADOS Aps adicionar-se a soluo de FeCl3 40% protena, houve formao de precipitado, mas ao adicionar gua destilada soluo, houve a dissoluo do precipitado formado. 3.14 EXPERIMENTO 8 PRECIPITAO POR CIDOS FORTES A mistura da soluo de protena com o cido pcrico deu origem a uma substncia de colorao amarelo forte. Com a adio da gua destilada, a soluo permaneceu amarela, contudo, houve formao de precipitado. DETERMINAO FOTOCOLORIMTRICA DE PROTENAS 3.15 EXPERIMENTO 1 TESTE DE BIURETO Os valores de Concentrao de Absorbncia Absorbncia em 545 nm protena (mg/mL) contra o tubo B (branco) e os valores obtidos foram registrados na seguinte tabela: Tubos 1 1,25 0,113 2 2,50 0,320 0,305 3 3,75 0,385 4 5,0 0,171 A 1,903

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