Gua: Microscopio

ESCUELA SALUD

GUA MICROSCOPIO

Microscopio de Hooke (izquierda) y Microscopio de Leeuwenhoek (derecha), creadores de los primeros microscopios.

DIRIGIDO A ALUMNOS DE:

Tcnico de Laboratorio Clnico y Banco de Sangre Tcnico Superior de Enfermera Tcnico de radiodiagnstico y Radioterapia Informtico Biomdico

PRE-REQUISITO:
No tiene . Autor: BQ Cecilia Lpez Reyes EU. Eliana Escudero DuocUC

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INTRODUCCIN
La microscopa ptica es una de las herramientas ms utilizadas en el Laboratorio, tanto Clnico, como de otra ndole. Est ampliamente distribuido en las reas de la microbiologa y la hematologa. Tambin es posible encontrar microscopa ms compleja en los Laboratorios, en las reas de la inmunologa, de la histologa o de la biologa celular. Este tipo de microscopa se diferencian de la microscopa ptica no slo en lo que respecta al instrumento en s, mucho ms complejo y costoso, sino que tambin en sus fundamentos tericos.

OBJETIVOS
Al finalizar el taller el alumno ser capaz de: Reconocer las distintas partes principales de un microscopio ptico, sus nombres y funciones. Realizar correctamente la simulacin de observacin. Realizar la correcta limpieza de las superficies de un microscopio ptico. Realizar la correcta limpieza de los objetivos y oculares de un microscopio ptico. Manipular material delicado propio de un laboratorio.

REALIZADO POR:
Tecnlogo Mdico, Bioqumico, Qumico Farmacutico, Mdico Laboratorista, Bilogo.

DURACION:
90 minutos.

NUMERO DE ALUMNOS POR DOCENTE:

20 alumnos

Autor: BQ Cecilia Lpez Reyes EU. Eliana Escudero DuocUC

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MARCO TEORICO:
Los diversos elementos que existen en la naturaleza, presentan tamaos, formas y composiciones distintas, la mayora de ellas pueden verse, algunas a simple vista, y otras mediante instrumentos.

El microscopio ptico es un instrumento de precisin que permite ampliar la imagen de los objetos que no son visibles para el ojo humano. En el microscopio, la luz atraviesa de abajo a arriba el objeto a estudiar. Para ver con el microscopio un objeto, ste debe ser lo ms fino posible. Si no lo atraviesa la luz se ver slo un grumo deforme y opaco. Tiene un lmite resolucin de cerca de 200 nm (0.2 m), es decir la distancia mnima a la que se pueden ver dos objetos separados. Este microscopio utiliza luz visible. Las clulas observadas bajo el microscopio ptico pueden estar vivas o fijadas y teidas. Las muestras son depositadas en una lmina de vidrio denominada PORTAOBJETO, de unos 5 cm de largo por 2 cm de ancho. En el lugar del portaobjetos donde se puso la muestra puede, adems, ponerse una laminilla muy fina de vidrio llamada CUBREOBJETO. Los oculares proporcionan diez aumentos de la imagen, y viene expresado x10 en la carcasa del ocular. Tambin los hay x20. Los objetivos (generalmente cuatro), suelen tener aumentos de x4, x10, x40 y x100. La ampliacin de la imagen resultante al multiplicar los aumentos que proporciona el ocular y el objetivo sern de 40, 100, 400 y 1000 aumentos. Ejemplo: Ampliacin de 40 aumentos: Objetivo x4: aumenta 4 veces la imagen Ocular x10: aumenta 10 veces la imagen ya aumentada 4 veces por el objetivo Resultado: 4 aumentos x10 aumentos = 40 aumentos

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Lo objetivos x4, x10 y x40, se denominan objetivos secos, porque entre la lente y la preparacin a observar, la luz atraviesa el aire proporcionando una imagen ntida. El objetivo x100, se denomina objetivo de inmersin, porque para proveer imgenes ntidas, la lente debe estar inmersa en un lquido (aceite de cedro o similar), con un ndice de refraccin igual al vidrio, lo que permite evitar la dispersin de los rayos luminosos. Siempre que utilicemos el objetivo x100 debemos colocar una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin a observar.

Partes de un Microscopio ptico:

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a) Sistema ptico Ocular: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. Objetivo: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. Sus aumentos de menor a mayor son 4x, 10x, 40x, 100x. Si se utiliza el aumento 100x es necesario agregar a la preparacin aceite de inmersin. cuya funcin es evitar la dispersin de los rayos luminosos. Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Oculares y objetivos

b) Sistema mecnico Soporte: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. Platina: Lugar donde se deposita la preparacin. Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular. Revlver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. Tornillos de enfoque: El Tornillo Macromtrico que aproxima el enfoque y el Tornillo Micromtrico que consigue el enfoque correcto.

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Microscopio conectado a TV

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INSUMOS Y EQUIPOS REQUERIDOS

Sala de simulacin de Laboratorio clnico. Microscopios pticos binocular, 1 por cada 2 alumnos ( minimo) Portaobjetos: 1 por alumno Cubreobjetos: 1 caja por taller Pao o toalla de papel suave para limpiar: 1 por alumno Aceite de inmersin Solventes para limpieza de lentes: alcohol: acetona (7:3) o xilol (precaucin: muy txico) Frontis sanguneo teido ( preparados listos) Caja de bioseguridad para eliminacin de material cortopunzante Recipiente con solucin detergente para portaobjetos sucios.

DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO:

NOTA: Recuerde usar su delantal, pelo tomado, sin joyas en las manos, y realizar lavado de manos al ingresar al laboratorio Manejo y uso del microscopio ptico: 1. Colocar el objetivo de menor aumento (4x) en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones. 2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. 3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias. 4. Para realizar el enfoque seguir los siguientes pasos:

Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.

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1. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin. 6. Empleo del objetivo de inmersin: Bajar totalmente la platina. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.

Mantenimiento y precauciones: 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la Autor: BQ Cecilia Lpez Reyes EU. Eliana Escudero DuocUC

Gua: Microscopio platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o papel muy suave, que no deje pelusas. En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico Una vez finalizada la observacin, el cubreobjeto debe ser depositado en una caja para material cortopunzante (safe box) y el portaobjeto se deja en un bandeja con solucin de limpieza, dispuesta en el laboratorio.

2.

3. 4. 5.

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ACTIVIDADES
Actividad 1: El docente realiza el procedimiento de mantencin de las superficies y lentes del microscopio. Actividad 2: El docente realiza el procedimiento de simulacin de observacin, describiendo en detalle la forma correcta de poner la preparacin y enfocarla. Actividad 3: Cada alumno realiza, las veces que sea necesario las actividades 1 y 2. El docente observa y corrige las actividades de los alumnos.

Autor: BQ Cecilia Lpez Reyes EU. Eliana Escudero DuocUC

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BIBLIOGRAFIA
http://www.angelfire.com/bc2/biologia/microscopia.htm 28/12/2004) http://www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm (VISITA 28/12/2004 ) http://www.shimadzu.com.br/analitica/port/Produtos/Microscopio/images/ ss-550.jpg (visita 2/1/2005) http://www3.unileon.es/ins/insaiem/images/microscopio %20electronico.jpg (visita 2/1/2005) (VISITA

METODOLOGIA DE EVALUACION
El taller se evala a travs de una pauta de competencias logradas de acuerdo a los objetivos planteados:

Autor: BQ Cecilia Lpez Reyes EU. Eliana Escudero DuocUC