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ENF 660 - QUMICA DA MADEIRA CAPTULO 5 - LIGNINA

1. INTRODUO A lignina foi originalmente descoberta por Anselm Payen em 1838 aps tratamento da madeira com cido sulfrico concentrado. O nome lignina vem do latim "lignum" que significa madeira. Em 1897, Peter Klason estudou a composio dos lignossulfonatos, provenientes da polpao sulfito da madeira, e lanou a idia de que a lignina quimicamente relacionada com o lcool coniferlico. Em 1907, ele props que a lignina era uma substncia macromolecular, e 10 anos mais tarde, que era composta por unidades de lcool coniferlico unidos por ligaes ter. Hoje em dia, sabe-se que a lignina basicamente um polmero aromtico constitudo de um sistema heterogneo e ramificado sem nenhuma unidade repetidora definida. O sistema totalmente amorfo e ligado quimicamente as hemiceluloses. A lignina ocorre na maioria das plantas mas sua composio no idntica em todas elas. De fato, as ligninas isoladas de madeira de fibra longa (MFL), madeira de fibra curta (MFC) e gramneas possuem estruturas bsicas muito diferentes entre elas. Portanto, as ligninas podem ser consideradas como uma classe de materiais relacionados, sendo conveniente identific-las em termos da espcie de origem e com referncia ao mtodo de isolamento utilizado. O papel biolgico da lignina nas plantas vivas formar, juntamente com a celulose e outros carboidratos da parede celular, um tecido de excelente resistncia e durabilidade. A lignina tambm reduz a permeabilidade da parede celular gua, o que facilita seu transporte longitudinal na planta. Acredita-se tambm que as paredes celulares lignificadas resistem ao ataque por micrbios porque a penetrao das enzimas destrutivas liberadas pelos organismos invasores nas mesmas reduzida. O estudo da lignina de importncia considervel porque uma maior compreenso de suas propriedades e reaes pode ser de grande assistncia na implementao de processos de polpao e de branqueamento de polpa, na determinao das propriedades da madeira e das fibras e no melhor aproveitamento dos subprodutos da lignina. Este ltimo de grande importncia se for considerado que dezenas de milhes de toneladas de lignina so anualmente queimadas ou perdidas no efluente de fbricas de polpa. Isto representa uma grande fonte potencial e renovvel de subprodutos orgnicos. 2. BIOSSNTESE DA LIGNINA 2.1. Introduo Acredita-se que a sntese da lignina foi uma adaptao bsica e uma etapa fundamental na evoluo das plantas terrestres superiores. As plantas primitivas tais como fungos e algas no possuem lignina, aparentemente porque seus aglomerados de clulas no diferenciadas no requerem a ao protetora e de suporte que oferecida pela lignina. Especula-se que a lignina originou como 112

agente antimicrobial e que ao longo da evoluo a lignina comeou a desempenhar um papel no suporte mecnico e no transporte de gua na planta. Ela permitiu que as plantas aumentassem em dimetro e altura uma vez que os tecidos lignificados eram capazes de resistir s foras de compresso e curvatura. 2.2. Biossntese da Lignina e Metabolismo Secundrio na Planta A lignina compartilha rotas biossintticas comuns com uma variedade de metablitos secundrios, tais como os flavonides, a suberina, os coumaranos, os estilbenos e as lignanas (Figura 1). Todos estes compostos so derivados da fenilalanina, o precursor de todas as rotas biossintticas que partem da estrutura fenilpropanide (C9). possvel que as rotas biossintticas que partem dos intermedirios comuns lignina possam afetar a biossntese da lignina, mas no se sabe como estas rotas competidoras so reguladas, nem a extenso da especificidade por um dado tecido de vegetal das principais rotas metablicas. So necessrios mais estudos direcionados ao esclarecimento do desenvolvimento especfico dessas rotas biossintticas relacionadas na planta. cidos fenilacticos fenilalanina coumaranos cidos benzicos cidos cinmicos steres cinamlicos amidas steres cinamlicos CoA flavonoides estilbenos

lcoois cinamlicos lignanas lignina Figura 1. Rotas metablicas relacionadas sntese da lignina. 2.3. Biossntese dos Precursores da Lignina

Nas Figuras 2 a 4 mostrado um breve sumrio das rotas metablicas que conduzem formao dos precursores da lignina. A maioria dessas rotas biossintticas foram determinadas utilizando a tcnica do marcador 14C. Como a maioria dos constituintes aromticos das plantas, os precursores da lignina so formados via a rota do cido shiqumico (Figura 2). O cido shiqumico formado pela fuso do cido fosfoenolpirvico com a eritrose-4-fosfato, sendo estes intermedirios formados a partir da glicose, o produto da fotossntese na planta. O cido shiqumico se torna a pedra fundamental na sntese dos aminocidos Ltirosina e L-fenilalanina, que so formados por aminao redutiva via o cido prefnico. Os aminocidos so o ponto de partida do metabolismo enzimtico fenilpropanide (a rota do cido cinmico, Figura 3). As enzimas de desaminao (desaminases) subseqentemente convertem os dois aminocidos em seus respectivos cidos cinmicos (Figura 4). Hidroxilao passo a passo por hidroxilases e eventual metilao por 4-0-metiltransferases transformam os cidos 113

cinmicos em trs lcoois p-hidroxicinamlicos que so considerados os precursores da lignina . So eles os lcoois p-coumarlico, coniferlico e sinaplico.
CH O C OH C H C OH C OH C H2 O H

H HO H H

0H HO 0H COOH

GLUCOSE

CIDO SHIQUMICO
HO

NH 2 CH2 CHCOOH

HO

CH 2 COCOOH COOH

TIROSINA
NH 2 CH 2 CHCOOH

CIDO PREFNICO

FENILALANINA

Figura 2. Rota do cido shiqumico

CH2 NH -CHCOOH 2 FENILALANINA


FENILALANINA AMNIA LIASE

-CH=CHCOOH

CIDO CINMICO
FENOLASES

HO

CH NH -CHCOOH 2 TIROSINA 2 AMNIA TIROSINA


LIASE

HO

-CH=CHCOOH

CIDO p-COUMRICO

Figura 3. Rota do cido cinmico

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COOH CH CH
1. Fenolases 2. Metiltransferases

COOH CH CH
1. Fenolases 2. Metiltransferases

COOH CH CH

OCH3 OH OH

H3 CO OH

OCH3

CIDO p-COUMRICO

CIDO FERLICO

CIDO SINPICO

1. Ligase Co A 2. Redutase 3. Desidrogenase

1. Ligase Co A 2. Redutase 3. Desidrogenase

1. Ligase Co A 2. Redutase 3. Desidrogenase

CH 2 OH CH CH

CH 2 OH CH CH

CH 2 OH CH CH

OCH3 OH OH

H3 CO OH

OCH3

LCOOL p-COUMARLICO

LCOOL CONIFERLICO

LCOOL SINAPLICO

Figura 4. Desaminao, hidroxilao e metilao dos cidos cinmicos para formar os precursores da lignina, os lcoois p-coumarlico, coniferlico e sinaplico. A extenso da hidroxilao e metilao dos cidos cinmicos tem um impacto significativo na estrutura da lignina porque ela determina se uma lignina vai ser do tipo guaiacil ou guaiacil-siringil. O lcool conferlico a base da lignina guaiacil, enquanto o lcool sinaplico a base da lignina siringil. Higuchi e colaboradores fizeram estudos extensivos sobre a extenso da substituio dos precursores da lignina por grupos de metoxila. Eles determinaram que uma das razes para a maior proporo de unidades siringil na MFC do que na MFL a maior afinidade das 4-0-metiltransferases da MFC para com o cido ferlico, o precursor do lcool sinaplico. Portanto, se torna aparente que a especificidade e atividade de enzimas so os fatores decisivos para determinar se a planta vai ser lignificada com guaiacil (lignina de MFL) ou guaiacil-siringil (lignina de MFC). Os lcoois p-hidroxicinamlicos diferem grandemente dos precursores sacardicos com respeito a composio elementar, solubilidade em meio aquoso e 115

reatividade qumica com relao a sistemas de enzimas oxidantes. A baixa solubilidade e a alta reatividade em relao a oxidantes faz com que seja crucial para a clula estabilizar os lcoois p-hidroxicinamlicos contra a polimerizao prematura e o trmino de suas atividades de sustentao da vida. Esta estabilizao conseguida atravs da formao de glicosdeos entre monmeros fenlicos e unidades de acar. A primeira elucidao estrutural do glicosdeo coniferina, o glicosdeo formado por -D-glicose e lcool coniferlico, mostrado na Figura 5, creditado a Tiemann e Mandelsohn. A coniferina caracterizada pela sua alta solubilidade em meio aquoso. Ela tambm possui uma alta estabilidade contra agentes oxidantes porque o grupo sensvel oxidao, a hidroxila fenlica, est protegida por uma ligao glicosdica. Este glicosdeo pode ser livremente armazenado e transportado pela planta sem o risco de uma polimerizao prematura da metade fenlica.

CH2OH O O OH OH OH OCH3 CH CHCH2 OH

Figura 5. Estrutura da coniferina, o glicosdeo do lcool coniferlico. Do ponto de vista da bioqumica, importante que todas as enzimas que participam da formao dos lcoois p-hidroxicinamlicos sejam tecido-especficos e localizados predominante ou exclusivamente nas clulas do xilema em processo de lignificao. Acredita-se que os glicosdeos encontrados na seiva do cmbio das MFL servem, portanto, como reservatrio dos cidos p-hidroxicinamlicos que so translocados at os stios de deposio da lignina nesta sua forma solvel. A liberao do lcool p-hidroxicinamlico feita pela clula em processo de lignificao atravs da enzima -glicosidase. Foi comprovada histoquimicamente pela reao colorimtrica indicadora da presena de -glicosidase presa na parede celular de clulas em processo de lignificao e sua ausncia nas clulas do cmbio. No se tem certeza ainda como os glicosdeos so transportados atravs da membrana celular para entrar em contato com a -glicosidase na parede celular, mas estudos recentes apontam para uma participao das vesculas de Golgi.

2.4. Biossntese da Lignina - Polimerizao Desidrogenativa


A biossntese da lignina a partir das unidades monomricas de fenilpropano pode ser geralmente descrita como uma polimerizao desidrogenativa dos lcoois p-hidroxicinamlicos. A lignina de MFL formada pela polimerizao do lcool coniferlico e a lignina de MFC pela copolimerizao dos lcoois coniferlico e sinaplico. As unidades do lcool p-coumarlico esto geralmente presentes em pequenas quantidades em ambas as MFL e MFC e nas gramneas. O contato entre os precursores fenlicos da lignina e enzimas desidrogenativas (peroxidases) conduz a uma abstrao inicial do tomo de 116

hidrognio do fenol e d partida a todo o processo de polimerizao. Os principais mecanismos da polimerizao foram elaborados por Freudenberg e seus colaboradores que produziram uma lignina in vitro, chamado de polmero de desidrogenao (DHP), por tratamento do lcool coniferlico com uma lacase fngica e com uma peroxidase de rbano e perxido de hidrognio. Embora a ao cataltica da lacase na presena de ar ou outras substncias oxidantes possa levar formao de radicais de fenxido a partir dos lcoois phidroxicinamlicos, geralmente aceito que os catalisadores responsveis pela iniciao das reaes de polimerizao in vivo so as peroxidases. Acredita-se que as peroxidases esto envolvidas na gerao de H2O2 e na polimerizao oxidativa dos lcoois p-hidroxicinamlicos. possvel que os dois mecanismos sejam controlados por peroxidases diferentes. A complexidade da estrutura da lignina resulta da existncia de vrias formas mesomricas de um radical de fenxido gerado a partir do lcool phidroxicinamlico. Estas so mostradas na Figura 6 para o lcool coniferlico. A polimerizao ocorre pela unio no-enzimtica dos radicais de fenxido nas vrias formas mesomricas. Se for assumida a existncia de 5 formas mesomricas para cada radical de fenxido, refletindo cinco stios de alta densidade de eltrons, o nmero terico de estruturas dimricas ou ligaes interunitrias entre monmeros 25. Contudo, apenas 4 radicais de fenxido participam do processo de polimerizao, uma vez que o V (Figura 6) est impedido estericamente ou desfavorecido termodinamicamente. Os principais modos de acoplamento entre radicais so apresentados na Tabela 1.
CH 2 OH HC CH

OCH OH

- (e - + H+ )

CH 2 OH HC CH

CH 2 OH HC CH

CH2 OH HC CH

CH 2 OH HC CH

CH 2 OH HC CH

OCH O

OCH 3 O

H O

OCH

3 O

OCH

O CH O

II

III

IV

Figura 6. Desidrogenao enzimtica do lcool coniferlico levando formao de 5 radicais mesomricos de fenxido.

117

Tabela 1. Modos de acoplamento de radicais de fenxido dos lcois hidroxicinamlicos mostrados na Figura 6. I I perxido instvel II -O-4 III 4-O-5 IV 1-O-4* * Outras opes possveis II -O-4 - -5 -1* III 4-O-5 -5 5-5 1-5* IV 1-O-4* -1* 1-5* 1-1*

p-

A freqncia relativa com a qual stios individuais estaro envolvidos numa reao de acoplamento fenlico depende das suas relativas densidades de eltrons . Clculos de mecnica quntica da densidade de eltrons nos radicais fenxido relacionados com a lignina so apresentados na Tabela 2. Vrias observaes podem ser feitas a partir desses dados. (1) Os radicais de fenxido tm (em todos os modelos calculados) a mais alta densidade de eltrons nos seus oxignios fenlicos. Isto resulta uma maior probabilidade de se formar ligaes ter-arila nestes tomos pelo acoplamento de radicais durante a lignificao do que qualquer outro tipo de ligao interunitria. (2) A presena de substituintes de alcoxila, aroxila e arila na posio orto ao grupo OH fenlico parece desativar as posies meta respectivas, resultando em reduzida densidade de eltrons naqueles stios em favor de uma alta densidade de eltrons nos pontos onde esto os substituintes. Entretanto nas reaes de acoplamento de fenis, essas posies de alta densidade de eltrons (orto) parecem ser relativamente no reativas. Isto pode ser explicado por impedimento estrico ou pela relativa instabilidade de produtos de acoplamentos primrios (razes termodinmicas). Connors et al. demonstraram que as configuraes dimricas termodinamicamente desfavorveis no so inteiramente imunes a rotas alternativas de estabilizao atravs do isolamento de estruturas tipo catecol. Os acoplamentos de radicais que levam a formao de dmeros so mostrados para 3 tipos importantes de ligaes interunitrias na Figura 7. Todos trs mecanismos so caracterizados pela existncia de estruturas intermedirias e transitrias de quinonametdeos que se estabilizam atravs da adio intramolecular ou externa de metades contendo grupos de hidroxila. No caso das ligaes -0-4, essas adies podem ser na forma de gua ou grupos de hidroxila. Grupos de hidroxilas fenlicas foram mostrados adicionar a uma taxa maior que grupos de hidroxilas alifticas e gua. A adio de substncias contendo grupos de hidroxila aos quinonametdeos envolve um mecanismo de polimerizao que no baseado em desidrogenao. um mecanismo que torna possvel a incorporao de compostos no fenlicos sem que eles tenham que passar pela formao de radicais. O contato ntimo entre intermedirios quinonides dimricos e oligomricos, com substncias celulsicas e hemicelulsicas na parede celular torna provvel que um certo nmero de grupos de carboxila de hidroxila primrios e secundrios provenientes dos carboidratos se tornem ligados covalentemente lignina da madeira. Estas ligaes podem ser do tipo ter ou ster.

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Tabela 2. Distribuio de densidades dos eltrons nos radicais de fenxido relacionados a lignina.

1 6 5 4 2 3 6 5 4

O
6 5

O
1 2 3 6 5 2 3 4

O I

O II

O III

IV R = OCH 3 V R = Arila V R = O-Arila

Posio Oxignio fenlico 1 2 3 4 5 6 Oxignio de carbonila Oxignio de aroxila Oxignio de metoxila Carbono de metoxila

I 0,23 0,20 0,03 0,14 0,05 0,15 0,02 0,00 0,18 -

II 0,25 0,22 0,03 0,16 0,04 0,16 0,02 0,02 0,11 -

III 0,22 0,19 0,02 0,14 0,04 0,14 0,01 0,02 0,16 0,01 0,08 -

IV 0,30 0,19 0,02 0,14 0,07 0,19 0,00 0,05 0,00

V 0,21 0,17 0,05 0,11 0,05 0,15 0,01 -

VI 0,23 0,18 0,05 0,11 0,06 0,15 0,02 0,04 -

Em contraste s combinaes -0-4, que levam principalmente formao de ligaes ter guaiacil-glicerol--arila, a combinao -5 leva quase que inteiramente adio intramolecular interna de grupos de hidroxila fenlicas. Deste acoplamento resulta a estrutura tipo fenilcoumarano mostrada na Figura 7. Uma estabilizao intramolecular similar de intermedirios de quinonametdeo ocorre no caso das combinaes - que leva formao de pinoresinis (Figura 7). Uma certa complicao resulta da alta densidade de eltrons na posio 1 (Tabela 2) de anis aromticos de estruturas de fenilpropano no-vinlicas saturadas. Seguindo o acoplamento na posio 1, o intermedirio quinonide pode se estabilizar em duas rotas alternativas que esto demonstradas na Figura 8. O resultado desta estabilizao depende do substituinte na posio do composto que ir sofrer o ataque na posio 1. Se este substituinte for um grupo de hidroxila, a cadeia lateral ser deslocada. Se o substituinte for algo diferente de um hidroxila, ocorrer um rearranjo do tipo fenol-dienona evitando a fratura 119

da molcula C9; o resultado uma ligao -6. O deslocamento da cadeia lateral mais freqentemente conduzir a ligao -1 mostrada na Figura 8. Com relao desidrogenao enzimtica, interessante mencionar que nesse caso ela no leva polimerizao, mas antes leva fragmentao do polmero. Mesmo no caso de fragmentao, pouco provvel que qualquer parte da molcula seja perdida do sistema polimrico; mesmo as cadeias laterais deslocadas permanecem presas a outras molculas. Portanto, em resumo, pode se dizer que a desidrogenao pode levar polimerizao ou fragmentao do polmero durante a formao da lignina; existem polimerizaes que no so baseadas em desidrogenao mas sim na adio quinonametdeos intermedirios.
OH OC H 3

. CH
CH

C H 2 OH

. CH
CH

C H 2 OH O CH2 HC CH CH CH CH2 O [1]

+
OC H 3 O O C H 3O OC H 3

OH C H 2 OH CH C H 2 OH CH CH

. CH
CH

C H 2 OH

CH

C H 2 OH

OC H 3 O [2]

HC C H OR OC H 3 O

OC H 3

OH C H 2 OH CH C H 2 OH CH

. CH
CH

C H 2 OH CH CH C H 2 OH HC

OC H 3 O

[3]

.
OC H 3 O OH

HC OC H 3

OC H 3 OH

Figura 7. Formao de trs dilignis a partir do lcool coniferlico. (1) - Dilignol com ligao -, pinoresinol; (2) dilignol com ligao -O-4, ter arilglicerol -arila; (3) - dilignol com ligao -5, fenilcoumarano.

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HO CH2 CH C HR ' OC H 3 OH CH=O

C C

.CH
CH

C H 2 OH

C C OH B-1

OC H 3

.CHR
+
OC H 3 OC H 3 O

R' = OH O-acar O-arila O-alquila

R = OH R OH

C C CHR C H 2 OH CH CHR' C H 3O OH OH OC H 3 e /o u C H 3O

C C CH O CH2 CH CHR' OH OC H 3 OH

Figura 8. Exemplo de reaes de deslocamento da cadeia lateral e rearranjo fenoldienona

O mecanismo de polimerizao descrito acima se refere s reaes entre os monmeros precursores da lignina. A grande diferena no acoplamento entre monmeros e entre oligmeros que no ltimo caso existe um nmero menor de stios dentro da molcula de fenilpropano disponveis para a formao de ligaes interunitrias. Alm disso, os oligmeros possuem uma menor solubilidade e difusibilidade por causa do tamanho de suas molculas. Portanto, o acoplamento entre oligmeros parece ser muito pouco provvel. Se esse tipo de acoplamento ocorresse ("bulk polimerization") era de se esperar a existncia de um grande nmero de cadeias laterais insaturadas na lignina. Entretanto, a quantidade dessas cadeias na lignina bastante baixa. Acredita-se que a reao ocorre via deposio passo a passo ("endwise polimerization") de monmeros a extremidades de um polmero em crescimento em vez da combinao entre oligmeros. A polimerizao passo a passo se torna mais provvel ainda, quando se leva em conta que a concentrao de monmeros na zona de reao muito baixa. A combinao de radicais monomricos com os grupos terminais fenlicos somente atravs de acoplamentos -0-4 e -5 levaria formao de um polmero linear. Entretanto, a formao de ramificaes pode ocorrer atravs da formao de estruturas do tipo benzil-aril-ter. Adicionalmente, o acoplamento 5-5 que forma estruturas de bifenila e 5-0-4 que forma estruturas de ter-diarila produzem ramificaes adicionais. A formao de estruturas de bifenila e ter-diarila ocorre no acoplamento entre 2 radicais das extremidades do polmero em vez do acoplamento entre um radical monomrico e um radical da extremidade do polmero.

2.5. Controle da Lignificao no Desenvolvimento da Planta


Do ponto de vista morfolgico, as molculas crescentes de lignina so obrigadas a preencher os espaos existentes entre as fibrilas polissacardicas da 121

parede celular. A incorporao da lignina de natureza hidrofbica leva ao desinchao da parede celular. Resultados obtidos de estudos de microscopia ultravioleta, de flourescncia e eletrnica, tm confirmado que a lignina se deposita inicialmente nos cantos das clulas aps o trmino do alargamento da clula e antes do incio do espessamento da parede secundria (S1). A lignificao prossegue na lamela mdia (LM) e parede primria (P), comeando nas paredes tangenciais e se espalhando centripetalmente. A lignificao da lamela mdia composta (M+P) continua durante a diferenciao das camadas S1 e S2 e at a formao da parede secundria, o que indica que a lignificao um processo permanente durante a diferenciao da parede celular, com um atraso em relao sntese da celulose e das hemiceluloses. Hoje em dia considera-se a lignificao um processo controlado pelas clulas individuais do xilema, i.e. um processo intracelular, sem a participao das clulas do cmbio (exceto no papel de armazenamento dos precursores). Esta suposio pode explicar a descoberta de fibras e esclerdeos em processo de lignificao muito tempo depois destas clulas terem sido produzidas pelo cmbio. Outros fatos que sugerem um processo intracelular so a existncia de tipos diferentes de lignina em clulas diferentes do mesmo tecido vegetal e a existncia da enzima fenilalanina amnia liase (PAL), uma enzima da rota do cido shiqumico, na parede celular de uma clula de xilema em processo de lignificao mas sua ausncia no cmbio da mesma planta. No se sabe ainda como os precursores da lignina chegam at a LM e regies externas da parede celular. Aparentemente, os precursores so sintetizados e armazenados em vesculas derivadas principalmente das vesculas de Golgi, parcialmente do retculo endoplasmtico, e, finalmente, supridos parede celular. O mecanismo de transporte dentro da parede celular desconhecido.

3. CARACTERIZAO E ESTRUTURA DA LIGNINA 3.1. Caracterizao das Ligninas


Conforme foi discutido nas sees anteriores, a lignina um polmero ramificado polifenlico sem unidades repetidoras regulares e ordenadas como no caso da celulose. Foram necessrios muitos estudos analticos de compostos modelos, ligninas isoladas e lignina sinttica (DHP) at chegar ao atual conhecimento da estrutura de lignina. Os estudos realizados podem ser agrupados da seguinte maneira: 1) estudos de degradao, incluindo: etanlise, acidlise, hidrogenlise, hidrlise suave, tioacetlise e oxigenao, 2) anlise elementar, e 3) determinao de grupos funcionais.

3.1.1. Degradao da lignina


As principais reaes de degradao da lignina para sua caracterizao so discutidas a seguir. Exemplos das reaes que ajudaram a elucidar a estrutura fenilpropanide da lignina so mostrados na Figura 9.

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LIGNIN
o 1. KOH, 170 C 2. Metilao A 3. KMnO 4

COOH

COOH

COOH

COOH

OCH OCH 3 [1]

HOOC OCH [2] 3

OCH H CO 3 3

OCH 3 [3]

OCH 3

OCH 3

Nitrobenzeno OCH 3 OH [4] H CO 3 OH [5] OCH 3 OH [6]

H , cat. 2

CH OH [CH ] 2 3 CH 2 CH 2

[OH] OH [7]

CH 3 C=O D 2% HCl em EtOH HCOC H 2 5

CH 3 HCOC H 2 5 C=O

CH 3 C=O CH 2

CH 3 C=O C=O

OH [8]

OCH 3

OH [9]

OCH 3

OCH OH [10]

OH [11]

OCH 3

Figura 9.

Exemplos dos mtodos de qumica clssica que indicaram uma estrutura fenilpropanide para a lignina. (A): Oxidao com permanganato produz o cido vertrico (1) e quantidades dos cidos isohemipnico (2) e desidrovertrico (3). (B): Oxidao com nitrobenzeno em lcali leva formao de vanilina (4) nas MFL, siringaldedo (5) nas MFC e phidroxibenzaldedo (6) nas gramneas. (C): A hidrogenlise produz derivados do propilciclohexano (7). (D): A etanlise leva formao das cetonas de Hibbert (8-11).

123

3.1.1.1. Oxidao A degradao oxidativa da lignina deve preservar o anel aromtico para ser til na caracterizao estrutural das ligninas. Mtodos adequados so a oxidao com permanganato aps hidrlise e metilao, a oxidao com nitrobenzeno e a oxidao com xidos metlicos (principalmente CuO), todas em combinao com lcali. Os cidos carboxlicos mono e dimricos formados proporcionam informaes sobre a estrutura da lignina; por exemplo a existncia de grupos fenlicos livres e eterificados. Freudenberg aqueceu a lignina ou madeira de abeto com hidrxido de potssio 70% para hidrolisar ligaes ter e subseqentemente protegeu os grupos fenlicos liberados por metilao. A oxidao com permanganato do produto metilado em pH 6-7 produziu cido vertrico num rendimento de 8% base lignina e quantidades menores dos cidos isohemipnico e desidrovertico (Figura 9 - rota A). A formao do cido isohemipnico parecia suportar a existncia de estruturas condensadas -5 ou -5 mas o rendimento comparativamente alto de cido vertrico indicava a importncia de pontes no cclicas entre grupos de hidroxilas de cadeias laterais e grupos de hidroxilas fenlicas da unidade adjacente. A presena da estrutura de cido vertrico entre os produtos de degradao estava, no entanto, de acordo com o conceito de uma estrutura de guaiacilpropano. Informaes similares s anteriores foram obtidas a partir da degradao oxidativa da lignina com nitrobenzeno na presena de lcali quente (Figura 9 rota B). A lignina de abeto gerou 25% de vanilina, baseado no contedo de lignina Klason da madeira, enquanto misturas de vanilina e aldedo siringlico foram obtidos das MFC. Adicionalmente a esses dois aldedos, gramneas produziram tambm aldedo p-hidroxibenzlico. Mais tarde, foi encontrado pequenas quantidades do aldedo p-hidroxibenzlico tambm durante a oxidao de MFL e MFC e traos de aldedo siringlico durante a oxidao de MFL. A oxidao com nitrobenzeno e lcali produzindo vanilina, aldedo siringlico e aldedo phidroxibenzlico o meio mais efetivo para obteno de grandes quantidades de produtos de degradao da lignina. Conseqentemente, este mtodo tem sido usado extensivamente como um diagnstico. Os rendimentos combinados dos 3 aldedos pode chegar a 65% de algumas ligninas. Todas as unidades estruturais da lignina, exceto aquelas contendo ligaes carbono-carbono ou ligaes de ter acopladas s posies 5 e 6 so convertidas aos aldedos correspondentes, embora em rendimento diferente. Conseqentemente, tanto o rendimento total dos 3 aldedos quanto as suas quantidades relativas fornecem informaes importantes para a caracterizao de derivados da lignina. Como um teste diagnstico para a presena de lignina, a identificao de qualquer um dos trs aldedos aromticos derivados da oxidao com nitrobenzeno no to conveniente como o isolamento das cetonas de Hibbert (veja 3.1.1.3.). Por exemplo, a presena de vanilina e aldedo p-hidroxibenzlico pode no ser prova conclusiva da existncia de lignina uma vez que steres do cido ferlico e p-coumrico, nem sempre associados com a lignina, podem resultar naqueles compostos, quando oxidados com nitrobenzeno. 3.1.1.2. Hidrogenlise O primeiro isolamento de produtos de degradao da lignina que continha o esqueleto C3-C6 completo foi relatado por Harris e Adkins (1938). Esses autores 124

obtiveram rendimentos razoveis de derivados de propilciclohexano quando submeteram uma lignina-metanol de aspen hidrogenao cataltica em condies drsticas (Figura 9 - rota C). Hibbert, Pepper e Schuerch obtiveram mais tarde derivados de guaiacil e siringilpropano por hidrogenlise em uma variedade de condies. 3.1.1.3. Etanlise As "cetonas de Hibbert" (Figura 9 - rota D) que so produzidas de madeira de fibra longa e HCl 2% em etanol em refluxo, foram os primeiros produtos de degradao com uma estrutura de guaiacilpropano. Embora os rendimentos desses compostos tenham sido menos de 10% da lignina, o isolamento deles fortaleceu a hiptese que a unidade fundamental da lignina era do tipo C3-C6. Maiores quantidades de cetonas de Hibbert foram obtidas das MFC, incluindo os anlogos de siringil. As fontes exclusivas dessas cetonas so as estruturas de arilglicerol--aril-ter da lignina. Elas so formadas atravs de um processo complexo de despolimerizao. Cada estrutura guaiacil, siringil e p-hidroxifenilglicerol -ter produz um grupo distinto de cetonas Hibbert que so comumente convertidas para compostos e dicarbonilas, atravs de oxidao com perxidos, para serem identificadas. As cetonas de Hibbert podem ser utilizadas tambm para determinar a participao das unidades de guaiacil, siringil e p-hidroxifenilpropano na construo do esqueleto da lignina. Em adio etanlise clssica, a acidlise foi utilizada para degradar a lignina, aplicando misturas acidificadas de dioxano:H2O (9:1) a compostos modelos e ligninas isoladas. Alm das cetonas de Hibbert, diversos outros produtos de degradao mono e dimricos (principalmente hidroxiguaiacilacetona), foram isolados e caracterizados. Essas preparaes aparentam ser razoavelmente livres de impurezas. O rendimento depende largamente das condies e tempo da hidrlise. Durante a hidrlise sabe-se que ocorre tanto reaes de despolimerizao quanto de condensao da lignina. 3.1.1.4. Tioacetlise Uma tcnica especial de degradao da lignina foi elaborada por Nimz. O tratamento da madeira com cido tioactico na presena de trifluoreto de boro e a subseqente hidrlise alcalina rendeu misturas de produtos de degradao mono a tetramricos. A maior vantagem desta degradao sua seletividade na ruptura das ligaes ter - e -arila (Figura 10).

125

CH2OH HC O OCH3 BF3 CH3COSH CHOH

HC2 O COCH 3 HC2 O HC2 S COCH3 CH2OH OCH3 NaOH OCH3 OH HO OCH3 O
-

CH2OH CH2 Ni [H] CH2

CH CH

OCH3 OH

OCH3 OH

OCH3

Figura 10. Reaes de degradao de lignina com cido tioactico A maioria dos mtodos de caracterizao da lignina discutidos nos pargrafos anteriores so comumente aplicados madeira livre de extrativos em vez da lignina isolada e pura. Normalmente, evita-se utilizar a lignina isolada porque esta no possui as mesmas caractersticas qumicas da lignina original e, alm disso, representa somente uma parte da lignina total. De fato, a disponibilidade de amostras representativas de lignina tem sempre sido um dos grandes bloqueios aos progressos no seu estudo.

3.1.2. Anlise Elementar


Uma caracterizao preliminar da lignina feita pela determinao da composio elementar e do contedo de grupos de metoxila. Valores para a composio elementar e contedo de metoxilas em diversas ligninas so dados na Tabela 3. Pode-se verificar pelos dados mostrados que o contedo de carbono nas MFL geralmente mais alto do que nas MFC. Isto se deve ao mais alto contedo de oxignio nas MFC, devido ao maior contedo de grupos de metoxila na lignina das MFC comparado com as ligninas das MFL. Tabela 3. Composio elementar e contedo de grupos de metoxila em ligninas de madeira moda (MWL) das MFL e MFC Espcie MFL Picea abies Araucaria angustifolia Pinus taeda Tsuga heterophylla MFC Eucalyptus regnans Populus tremuloides Gmelina arborea Fagus silvatica Betula verrucosa %C 63,8 59,1 61,6 63,4 59,2 60,0 58,7 60,2 58,8 %O 6,0 5,6 5,9 6,3 6,3 6,1 5,8 5,9 6,5 %H 29,7 35,3 32,5 29,8 33,6 33,9 35,5 33,9 34,0 % OCH3 15,8 17,8 14,0 15,7 22,9 21,5 19,3 21,7 21,4

126

A anlise da composio elementar da lignina Bjorkman, de madeira de abeto Noruegus sugere a seguinte frmula elementar baseada no C9: C9H7,92O2,40(OCH3)0,92 Considerando-se que o material de origem, o lcool coniferlico, tem 2 tomos de oxignio, o excesso de oxignio pode ser escrito como pertencente s molculas de gua adicionadas durante a polimerizao: C9H7,12O2(H2O)0,40(OCH3)0,92 (Frmula A) O fato do contedo de grupos de metoxila ser menor que 1,0 pode ser atribudo copolimerizao do lcool coniferlico com quantidades menores de lcool p-coumarlico que no possui grupos de metoxila. Adicionalmente, uma pequena frao de lcool sinaplico com 2 Grupos Metoxilcos (CH3O-) pode tambm ser incorporada. Freudenberg assumiu que a relao entre esses lcoois na formao da lignina de abeto era de 80:14:6, que corresponde a 0,8 + 2(0,06) = 0,92 OCH3. O contedo de hidrognio para tal mistura seria 10 - 0,92 = 9,08 e a composio ficaria ento: C9H9,08O2(OCH3)0,92 (Frmula B) A subtrao entre B e A indica que ocorre uma perda de 1,96 H e a adio de 0,40 molculas de gua durante a formao da lignina de abeto. Estes resultados esto em acordo com a j consagrada teoria de que a lignina formada por uma polimerizao desidrogenativa de uma mistura de 3 lcoois p-hidroxicinamlicos e que uma certa quantidade de gua adicionada durante o processo. Para a lignina Bjorkman de uma madeira de folhosa (Fagus silvatica) foi determinada a frmula mnima C9H6,43O2(H2O)0,53(OCH3)1,39 que corresponde perda de 2,18 tomos de hidrognio durante a polimerizao. Para uma gramnea (Medicago sativum, alfalfa) a frmula molecular foi determinada ser C9H7,22O2(H2O)0,41(OCH3)0,84, indicando uma perda de 1,94 H durante a polimerizao desidrogenativa.

3.1.3. Anlise de grupos funcionais


Os principais grupos funcionais da lignina so os grupos de hidroxila aliftica e fenlica, lcool e ter benzilcos, carbonila e metoxila. A frequncia desses grupos pode variar de acordo com a localizao morfolgica das ligninas e com a espcie vegetal. Alguns valores tpicos so apresentados na Tabela 4.

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Tabela 4. Grupos funcionais da lignina por 100 unidades C9 Grupo Funcional Metoxila Hidroxila fenlica livre Hidroxila benzlica Hidroxila aliftica Hidroxila + ter benzlicos ter fenlico Oxignio fenlico Carbonila Aldedo coniferlico Lignina de Abeto 90 20 20 90 40 80 100 20 5

A determinao dos grupos funcionais pode ser feita por uma variedade de mtodos qumicos e fsicos ou uma combinao dos dois. Uma descrio dos principais grupos funcionais e mtodos para identific-los apresentada a seguir. 3.1.3.1. Grupos fenlicos livres e eterificados

OCH3 OR ETERIFICADO

OH LIVRE

OCH 3

Esses grupos so separados pelas diferenas que eles apresentam no espectro ultravioleta. Todos os grupos fenlicos so cidos. Quando eles so tratados com bases, o comprimento de onda de mxima absoro dos grupos fenlicos livres modificado:
NaOH OCH -+ 3 O Na +H2 O

OH

OCH 3

tambm possvel identificar os grupos livres atravs da metilao com diazometano (CH2N2):
+CH2 N 2 OCH3 OH OCH3 + N2 OCH3

Outros mtodos de identificao dos grupos fenlicos livres incluem as titulaes potenciomtrica e condutomtrica e a oxidao com periodato (HIO4).

+HIO4 OH OCH3 O

+CH3OH O

+HIO 3

Ortoquinona colorida facilm ente indentificvel 128

3.1.3.2. Unidades condensadas e no-condensadas Para as ligninas do tipo guaiacil, uma estrutura dita condensada quando o C5 possui qualquer tipo de ligao. Normalmente, as estruturas condensadas tm o C5 ligado a outro C5, ao C4-O ou ao C de outra unidade guaiacil. Se o C5 estiver livre a lignina dita no-condensada.

C5 C4-O C

O-

OCH 3

Somente 50% da lignina condensada, o que indica que ela no completamente polimerizada. Se a lignina fosse completamente polimerizada ela seria muito rgida. A lignina de madeira de compresso mais condensada que a de madeira normal e por isso esse tipo de madeira mais rgido. O mtodo para a identificao de estruturas condensadas e nocondensadas atravs da reao da lignina com o sal de Fremy, nitrodissulfonato de potssio [ON(SO3K)2]. A presena da ortoquinona indica que a estrutura da lignina apresenta alguns grupos C5 livres.

+ ON(SO K) 3 2 OCH3 OH O O

OCH3

Ortoquinona de cor verm e lha

3.1.3.3. Grupos de carbonila Os principais grupos de carbonila na lignina so:


CH OH 2 HC OR C O HC CH HC O CH OH 2 C O HC OR

OR

OCH3 OR

OCH3

OR

OCH3

alfa

aldedo

beta

O aldedo coniferlico fortemente colorido e por isso forma a base para os testes de cor da lignina tais como fluoroglucinol e safranina. Estes grupos so determinados pela reao da lignina com boroidreto de sdio. Nesta determinao, reage-se a lignina com o NaBH4 para reduzir os grupos de carbonila a lcoois. Depois de um determinado tempo, adiciona-se cido sulfrico para liberar hidrognio do boroidreto que no foi consumido. O hidrognio medido volumetricamente e a quantidade de grupos de carbonila indiretamente quantificada.

129

Outro mtodo para se determinar grupos de carbonila emprega a espectrofotometria ultravioleta diferencial. Espectros de amostras de lignina reduzidas com borohidreto so subtrados dos espectros de solues das amostras originais. Atravs da comparao desses espectros de diferena com aquelas de compostos modelos, pode-se calcular a quantidade de grupos de carbonilas conjugadas e no-conjugadas. 3.1.3.4. Grupos alcolicos
O OCH 3 C C CH OH 2

3.1.3.5. Grupos de hidroxila e ter benzlicos Existem quatro tipos de grupos de hidroxila e ter benzlicos:
C C C OH C C C OH C C C O C C C C O C

O C

OCH 3

OH

OCH 3

OH

OCH 3

O C

OCH 3

-OH/4-O-C

-OH/4-OH

-O-C/4-OH

-O-C/4-O-C

A ordem de reatividade dos diferentes grupos : -OH/4-OH > -O-C/4-OH > -OH/4-O-C > -O-C/4-O-C Um mtodo para determinar grupos de hidroxila benzlica se baseia no fato de que esses lcoois so facilmente oxidados por 2,3-dicloro-5,6-dicianobenzoquinona aos compostos -carbonila correspondentes, que so determinados por cromatografia gasosa.

3.2 Principais Subestruturas da Lignina


Os resultados das reaes de degradao e anlise dos grupos funcionais de ligninas elucidaram as principais subestruturas da lignina, mostradas na Figura 11. Deve-se mencionar que as ligninas tambm contm uma grande variedade de subestruturas secundrias. Mais de dois teros das unidades de fenilpropano da lignina so unidas por ligaes ter e o restante por ligaes carbono-carbono. As propores de cada uma das ligaes so apresentadas nas Tabelas 5 e 6 para uma MFL e uma MFC, respectivamente. Pode se verificar que a mais importante ligao interunitria na lignina do tipo ter arilglicerol--arila.

130

C C C C C O C O C O C C C C O C

ter arilglicerol--arila
C C C O

ter gliceraldedo-2-arila
C C C C C C C

ter benzil-arila
C C C

Fenilcoumarano Estruturas condensadas nos C2-C6


C C C C O O O C C C C C O

Bifenila

C C C

C C C

ter diarila

1-2 diaril propano

2-2 diarill propano

Figura 11. Principais subestruturas da lignina. (Veja Tabela 5 para uma descrio das estruturas).

Tabela 5. Percentagem dos diferentes tipos de ligaes em lignina isolada (MWL) de abeto (Picea abies)a Percentagem Tipo de ligaob A 48 ter arilglicerol--arila B ter gliceraldedo-2-arila 2 C ter benzil-arila cclico 6-8 D Fenilcoumarano 9-12 E Estruturas condensadas nas posies 2 e 6 2,5-3 F Bifenila 9,5-11 G ter diarila 3,5-4 H 1,2-diarilpropano 7 I 2 Estruturas -
a Fonte: Adler, 1977 bLetras de A at I so definidas na Figura 11

131

Tabela 6. Percentagens dos diferentes tipos de ligaes com lignina isolada (MWL) de btula (Betula verrucosa)a Tipos de ligaesb A B C D E F G H I Guaiacil 22-28 Siringil 34-39 Total 60 2 6-8 6 1,5-2,5 4,5 6,5 7 3

1-1,5 4,5 1

0,5-1 5,5

aExtrado do trabalho de Adler, 1977. bLetras de A at I esto definidas na Figura 11 e Tabela 5.

3.3. Estrutura Qumica da Lignina


A polimerizao continua dos precursores da lignina, de acordo com os mecanismos apresentados nas sees anteriores, leva formao da lignina, um polmero polifenlico, ramificado e tridimensional. Quando se desenha uma estrutura para a lignina, o modelo deve ser construdo com base em: 1) mecanismos de polimerizao j comprovados e aceitos e 2) todas as observaes experimentais primrias feitas durante o isolamento, a anlise e as reaes da lignina. Desde que nenhum modelo estrutural disponvel at o presente satisfaz completamente a todos esses requisitos, a qualidade de um modelo estrutural da lignina tem de ser julgado com base na sua aproximao ao modelo ideal. Tem sido proposto um nmero substancial de estruturas de lignina que so fundamentadas na teoria da polimerizao desidrogenativa dos lcoois phidroxicinamlicos. Estes modelos tm sido revistos, modificados e revisados muitas vezes mas os seus conceitos principais permanecem inalterados. Um modelo baseado em 81 unidades de fenilpropano com um peso molecular total de cerca de 15000 daltons mostrado na Figura 12. Este modelo foi desenvolvido por Glasser seguindo os critrios mencionados anteriormente, atravs de simulao por computador. Desde sua publicao em 1974, vrias melhorias e revises tm sido sugeridas para explicar mais acuradamente vrios fenmenos analticos. O mais recente modelo proposto por Glasser e Glasser contm 94 unidades de fenilpropano e um peso molecular acima de 17000 daltons. Os mtodos comuns de se avaliar os mritos de um modelo para a lignina incluem: 1) a listagem dos tipos e freqncias das ligaes interunitrias que conectam unidades individuais de fenilpropano e 2) a aplicao de diagramas como os de Rydholm que sumariam qualitativamente e quantitativamente os substituintes em cada uma das posies crticas da unidade fundamental de fenilpropano. O mtodo das freqncias de ligaes interunitrias foi utilizado para comparar 3 tipos de modelos de lignina: 1) a estrutura da lignina mostrada na Figura 12, 2) dados similares propostos por Miksche baseado em degradaes oxidativas acetolticas de lignina de MFL e 3) um modelo da lignina de faia europia (MFC), proposta por Nimz, baseado em estudos de despolimerizao
132

com cido tioactico. Os resultados dessa comparao so apresentados na Tabela 7. bvio que existem diferenas entre os trs grupos de dados; entretanto, difcil avaliar o significado dessas diferenas sem dados adicionais que mostrem o quanto cada modelo representa melhor os comportamentos analtico e de reao de cada uma das ligninas. Deve ser mencionado que a razo entre o nmero total de ligaes e o nmero total de unidades sempre ser maior que um devido a presena de configuraes macrocclicas no modelo de lignina alm do nmero de ligaes interunitrias que do origem a fratura do esqueleto C9. Por isso, o nmero mdio de ligaes por C9 deve exceder a 1,0 a despeito do fato de que o grau de desidrogenao por unidade de C9 pouco menor que 2,0.

Tabela 7. Freqncia de ligaes interunitrias em ligninas contendo 100 unidades de fenilpropano Ligaes interunitrias -0-4 -0-4 -5 -1 Todas -, exceto THFa Dibenzil-THFa 5-5 4-0-5 - -6 1-5,6-5,1-0-4 Total Lignina de MFL (Glasser) 41 14 11 11 16 12 4 5 119 Lignina de MFL (Mikshe) 49-51 6-8 9-15 2 2 9,5 3,5 4,5-5 85,-5-96 Lignina de MFC (Nimz) 65 6 15 5,5 2 2,3 1,5 2,5 99,8

aTHF significa estruturas de tetraidrofurano.

133

Figura 12. Um modelo de lignina de abeto, proposto por Glasser [

134

A avaliao estrutural da lignina baseada no mtodo Rydholm mostrada na Tabela 8. Este mtodo baseia-se nos tipos e freqncias das ligaes interunitrias bem como na concentrao dos grupos funcionais. Algumas estatsticas vitais a respeito das estruturas podem ser facilmente detectadas, tais como o nmero de grupos de hidroxila fenlica, grupos de carbonila, teres totais, unidades condensadas versus no-condensadas, etc. Outras caractersticas estruturais importantes so, entretanto, ignoradas nesse tipo de avaliao, incluindo a concentrao de radicais livres e o nmero de unidades de arilglicerol. Tabela 8. Estrutura de um modelo de lignina de acordo com o mtodo de avaliao de Rydholm Posio C- Configurao CH2OH CHO CH2OH CH2OR CO CH2 CH CH CH CH CH CHO CHOH CH CH CHO-aril CHO-acares CO CHO CHO C C C C CH C-O-CH3 CH C C CH C C Descrio lcool coniferlico aldedo coniferlico hidroxilas primrias pinoresinis lactonas condensao -6 teres condensao -6 fenilcoumaranos pinoresinis condensao -1 grupos terminais lcool benzlico pinoresinis fenilcoumaranos -aril-ter ligao liginina-CH2O -carbonila aldedo glicrico grupos terminais condensao 5-1 condensao -1 condensao bifenil-ter cadeias laterais grupos de metoxila Contedo 0,06 0,02 0,69 0,17 0,04 0,01 0,41 0,04 0,14 0,22 0,11 0,09 0,29 0,21 0,10 0,05 0,06 0,06 0,15 0,09 0,01 0,11 0,02 0,85 1,00 0,85 0,10 0,05 1,00 0,38 0,28 0,12

C-

C-

1-Anel aromtico

2-Anel aromtico 3-Anel aromtico

4-Anel aromtico 5-Anel aromtico

unidades no- Condensadas bifenilas bifenil-teres


135

Posio

6-Anel aromtico

Hidroxila fenlica

Configurao C C C C-O-CH3 CH C C O O CHO-aril O O OH

Descrio coumaranos condensao 5-1 condensao 5-6 unidades de siringil unidades no- condensadas condensao 6-5 condensao -6 condensao bifenil-ter ter--arila ter--arila bifenil-teres fenilcoumaranos hidroxilas fenlicas

Contedo 0,14 0,01 0,01 0,06 0,95 0,01 0,04 0,02 0,41 0,05 0,12 0,10 0,30

3.4. Ligaes entre a Lignina e os Polissacardeos


geralmente aceito que a lignina no simplesmente depositada entre os polissacardeos da parede secundria mais que ela est intimamente associada frao polissacardica da parede celular. A associao ntima entre as fraes polissacardicas e de lignina na parede celular tem sido denominada de complexo lignina-carboidrato (CLC) ou complexo lignina-polissacardeo (LPC). Essas expresses foram propostas para descrever o fato de que impossvel isolar uma lignina sem haver algum resduo polissacardico no preparo. Acredita-se hoje em dia que existem ligaes qumicas covalentes entre a lignina e os polissacardeos nos CLC. Os fragmentos polissacardicos nos CLC podem ser derivados de xilanas ou mananas. Complexos de lignina-xilana foram isolados das MFC enquanto ambos os complexos de lignina-xilana e lignina-manana foram isolados das MFL. Tem-se preparado compostos modelos dos CLC no laboratrio pela reao entre quinonametdeos (intermedirios da biossntese de lignina) e acares levando formao de teres p-hidroxibenzlicos. A reao ocorre em qualquer grupo de hidroxila livre do acar (com preferncia para o C6-OH). Porm, resultados de experimentos que tentam simular a sntese enzimtica de ligaes entre a lignina e os polissacardeos dependem das condies de reao utilizadas e portanto no se tem ainda uma idia clara das ligaes existentes entre a lignina e os polissacardeos na parede celular in situ. Nosso conhecimento dos provveis tipos de ligaes entre a lignina e os polissacardeos tem sido obtido atravs de estudos de degradao, geralmente hidrlises alcalinas, cidas ou enzimticas de madeira, hemiceluloses e lignina. As ligaes mais freqentemente propostas so ligaes de ter (estvel em lcali), de ster (instvel em lcali) e glicosdica. provvel que mais de um tipo de ligao exista nos CLC. Considera-se as cadeias laterais de arabinose, galactose e cido 4-0-metilglucurnico das hemiceluloses os mais provveis locais de ligao com a lignina, devido a suas posies estericamente favorveis e ao fato do que a concentrao destes acares em preparos de CLC so maiores que a normal. Foi comprovado tambm que estes acares possuem alta
136

estabilidade contra ruptura oxidativa. As provveis ligaes entre ligninas e polissacardeos nos CLC so ilustradas na Figura 13. Alm das ligaes covalentes, existem pontes de hidrognio formadas entre os grupos de hidroxila e de carboxila das hemiceluloses e os grupos alcolico, de hidroxila fenlica, de carbonila e de oxignio eterificado da lignina.
O CH OH 2 CH HC O C=O O OH OH Xyl-Xyl-Xyl O H CO 3 O

CH OH 2 CH HC O H 2 C OH OH O O O Xyl-Xyl-Xyl

H CO 3

H CO 3 O

I
O CH OH 2 CH HCOH CH OH 2 O O O Man-Glu-Man OH OH

II

OCH 3

III
Figura 13. Possveis ligaes nos complexos lignina-carboidratos. I - ligao de ster benzlico; II - ligao de ter benzlico; III - ligao de fenilglicosdeo.

4. ISOLAMENTO DAS LIGNINAS


Na Tabela 9 apresenta-se um resumo dos principais mtodos elaborados para isolar a lignina. Os mtodos podem ser divididos em dois grupos principais: 1) mtodos que geram a lignina como um resduo e 2) mtodos em que a lignina dissolvida, ou sem reagi-la com o solvente utilizado na extrao, ou pela formao de derivados solveis. Devido s propriedades da lignina resultantes de sua estrutura molecular e sua localizao na parede celular, ainda no tem sido possvel isolar a lignina sem modific-la durante o processo. Todos os mtodos de isolamento sofrem de algumas desvantagens, ou por modificar fundamentalmente a estrutura nativa da lignina ou por liberar apenas alguns fragmentos relativamente intactos. Antes de prosseguir com o isolamento da lignina, deve-se remover os extrativos da amostra de madeira para evitar a formao de produtos de

137

condensao com a lignina durante o procedimento. Pela mesma razo, deve-se remover completamente solventes orgnicos da madeira extrada. Tabela 9 - Mtodos de isolamento de lignina e os preparos resultantes CONCEITO TRATAMENTO Lignina como resduo H2SO4 H2SO4/HBr HCl HCl/H2SO4 HF CF3COOH Na3H2IO6 NaOH/H2SO4/Cu(NH3)4(OH)2 PREPARO Lignina Klason Lignina Runkel Lignina Willstatter Lignina Halse Lignina de cido hidroflurico Lignina de cido trifluoroactico Lignina periodato Lignina cuoxam Lignina cuproxam Lignina cupramoniacal

Hidrlise cida dos polissacardeos

Oxidao dos polissacardeos Hidrlise/dissoluo dos polissacardeos

Nenhuma reao entre a lignina e o solvente

Reaes entre a lignina e o solvente

Geralmente processos de polpao

Lignina Brauns (lignina nativa) Moagem em moinho vibratrio - Lignina Bjorkman/ Lignina de extrao em dioxano/H2O Madeira Moda (MWL) Moagem em moinho de bolasLignina de Madeira Moda extrao-dissoluo em H2Oem Moinho de Bolas (BMWL) NaSCNC6H5CH2OH-DMF Tratamento por fungos de Lignina liberada podrido marrom enzimaticamente (ELL, EIL) Moagem, tratamento Lignina de enzimas enzimtico-extrao em celulolticas (CEL) solvente Ligninas Organosolv lcool/HCl Lignina alcolica Dioxano/HCl Lignina de acidlise/dioxano CH3COOH/MgCl2 Lignina de cido actico HSCH2COOH/HCl Lignina de cido tiogliclico Fenol/HCl Lignina fenlica Hidrogenao suave Lignina de hidrogenlise Solvente hidrotrpico Lignina hidrotrpica Derivados de reagentes inorgnicos Sulfito/bissulfito Lignossulfonatos NaOH Lignina alcalina Na2S/NaSH Tiolignina NaOH/Na2S Lignina kraft/sulfato

Lignina por dissoluo Extrao por lcool

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Todos os preparos de lignina obtidos por hidrlise cida so modificados estruturalmente, devido predominantemente s reaes de condensao. A degradao oxidativa evita a condensao mas leva a alguma modificao oxidativa da lignina. Outra maneira de se evitar reaes de condensao pela preparao de lignina por dissoluo. Embora a lignina ainda apresente algumas modificaes estruturais, considera-se a lignina de moagem de madeira (MWL) o melhor mtodo de isolamento para subseqentes estudos estruturais da lignina.

5. CLASSIFICAO E HETEROGENEIDADE DAS LIGNINAS


Sabe-se h muito tempo que a lignina das gimnospermas e angiospermas mono- e dicotiledneas diferem com respeito ao contedo de unidades guaiacil, siringil e p-hidroxifenilpropano. Originalmente, as ligininas foram classificadas em trs prinicipais grupos: ligninas das MFL (gimnospermas), das MFC (angiospermas dicotiledneas) e gramneas (angiospermas monocotiledneas). Porm, esta classificao exclui as ligninas das samambaias (Pteridophyta), e incompatvel com as caratersticas qumicas de algumas das muitas ligninas j analisadas. Uma classificao mais moderna divide as ligninas em dois grupos principais: 1) a lignina guaiacil (tipo G) e 2) a lignina guaiacil-siringil (tipo G-S) com as ligninas 4-hidroxifenil-guaiacil (tipo H-G) e 4-hidroxifenil-guaiacil-siringil (tipo HG-S) sendo subgrupos dos dois primeiros. Os mtodos de anlise utilizados para caracterizar as ligninas incluem oxidao por nitrobenzeno ou permanganato, acidlise e determinao de grupos de metoxila (descritos na seo 3.1.1.). Uma desvantagem desses mtodos de degradao da lignina que os produtos das degradaes provm apenas de unidades de C9 no-condensadas e portanto as unidades condensadas (principalmente unidades do tipo p-hidroxifenila) so sub-representadas. Mtodos fsicos para determinar as unidades de guaiacil, siringil e p-hidroxifenilpropano incluem: a espectroscopia ultravioleta (UV), infravermelha (IR) e de ressonncia magntica nuclear (RMN).

5.1. Lignina Guaiacil


As ligninas tipo G incluem: 1). ligninas das conferas (MFL) exceto as conferas chamadas excepcionais (os gneros Tetraclinus, Podicarpus, Welwitschia, Ephedra e Gentum), assim designadas porque possuem ligninas compostas de unidades de ambos o guaiacil e siringilpropano, 2) as ligninas da ordem Cycadales (Gymnospermae) e da diviso Pteridophyta, exceto alguns gneros excepcionais. A lignina tipo G basicamente um polmero de unidades de guiaicilpropano produzido in vivo pela polimerizao desidrogenativa enzimtica do lcool coniferlico. As ligninas de MFL so bastantes uniformes mas no se pode citar uma razo geral entre as unidades G,S e H. Foram relatadas razes apenas para a lignina de abeto (Picea abies; G:S:H = 94:1:5) e do pinho (Pinus taeda; G:S:H: = 86:2:13).

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5.2. Lignina Guaiacil-Siringil


As ligninas tipo G-S incluem: 1) as ligninas das madeiras de MFC normais e anormais (angiospermas dicotiledneas), 2) as ligninas das angiospermas monocotiledneas, gramneas, 3) as ligninas das conferas excepcionais, e 4) as ligninas nos tecidos lenhosos dos gneros excepcionais de Pteridophyta. As ligninas tipo G-S so polmeros constitudos principalmente de unidades de guaiacil e siringilpropano, produzidos pela polimerizao desidrogenativa enzimtica dos lcoois coniferlico e sinaplico. A razo molar entre unidades de guaiacil e siringilpropano depende da espcie, podendo variar de 4:1 a 1:2.

5.3. Lignina 4-Hidroxifenil-Guaiacil-Siringil


As ligninas tipo H-G-S ocorrem nos tecidos lenhosos das gramneas (angiospermas monocotiledneas). As ligninas so compostas de ncleos de lignina tipo G-S, com grupos perifricos de unidades dos cidos 4-hidroxicinmico e ferlico, sendo o cido 4-hidroxicinmico mais comum. Os grupos perifricos so ligados aos grupos de hidroxila do ncleo nas posies C- e C- das cadeias laterais, e com menor freqncia atravs ligaes -aril-ter. A razo molar entre as unidades dos cidos 4-hidroxicinmico e ferlico e dos guaiacil e siringilpropanos depende da espcie.

5.4. Lignina 4-Hidroxifenil-Guaiacil


As ligninas do tipo H-G so encontradas na madeira de compresso das MFL. Elas so polmeros de unidades de 4-hidroxifenil e guaiacilpropano produzidos pela polimerizao desidrogenativa enzimtica dos lcoois 4hidroxicinamlico e coniferlico. A formao da lignina H-G se deve a modificaes na fisiologia da rvore em resposta a estresse e/ou ferimentos. Para se proteger do estresse/ferimento, a rvore estimula a biossntese de lignina, o que leva a uma deficincia na funo do sistema das 4-O-metiltransferases do lcool coniferlico. Dessa deficincia resulta a biossntese do lcool 4-hidroxicinamlico em adio ao lcool coniferlico. A razo molar entre as unidades do lcool 4-hidroxicinamlico e guaiacilpropano pode chegar a 2.3:1.

5.5. Heterogeneidade das Ligninas


Parece existir pouca variao na lignina de diferentes espcies de MFL mas existem grandes diferenas entre espcies das MFC. Essas diferenas so mais pronunciadas no que diz respeito relao guaiacil/siringil, relao esta que tem uma influncia marcante na taxa de deslignificao pelo processo kraft. O contedo de unidades de siringil numa lignina tpica das MFC tipo G-S varia entre 20 e 60%. A variao nas angiospermas herbceas ainda maior (de 10 at 65%). Foi verificado que a estrutura da lignina pode variar com relao sua localizao no tronco da rvore. Foi comprovado, por exemplo, que a lignina das partes mais velha do tronco da madeira de Arundo donax mais rica em unidades siringil que a lignina total. A lignina do cerne das MFC possui mais siringil do que a do alburno. A lignina das razes de uma espcie de MFC (Fagus
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silvatica) foi demonstrada possuir mais unidades guaiacil que a do xilema da mesma rvore. As ligninas da casca das MFL so basicamente do tipo guaiacil mas elas contm maior proporo de unidades p-hidroxifenil que a lignina da madeira correspondente. As ligninas da casca das MFC so basicamente do tipo guaiacilsiringil mas o contedo de siringil muito mais baixo que aquele encontrado na madeira correspondente. Um aspecto importante da heterogeneidade da lignina foi elaborado por Fergus e Goring que foram os primeiros a mostrar que a lignina de btula difere com sua posio na clula. Estudos de microscopia ultravioleta em sees ultrafinas de madeira revelaram que a lignina nas paredes secundrias dos vasos e da lamela mdia principalmente lignina tipo G. A lignina da parede secundria das fibras e dos raios de parnquima, composta principalmente de unidades de siringilpropano. A lignina da lamela mdia e cantos de clulas de fibras e clulas de raio uma mistura tpica de lignina tipo G-S (Tabela 10). O mtodo proposto por Whiting e Goring para se fazer a separao das ligninas das lamela mdia e parede secundria o seguinte: 1) transformar a madeira em finas partculas, 2) suspender a serragem em soluo de CCl4dioxano, 3) centrifugar a mistura em 10000 rpm, 4) a lignina da lamela mdia flutua e a da parede secundria submerge no solvente. O princpio desse mtodo baseia-se na menor densidade da lignina comparado com a dos carboidratos. A parede celular submerge porque ela contm muitos carboidratos e baixa concentrao de lignina (20-25%). Usando a tcnica de separao de camadas da parede celular elaborada por Whiting e Goring, fizeram as seguintes observaes: 1) a lignina da parede secundria possui duas vezes mais grupos fenlicos que a da lamela mdia composta (M+P), 2) a lignina da M+P tem mais alto contedo de p-hidroxifenilpropano e, conseqentemente, mais condensada e menos reativa, 3) a lignina da M+P reage mais devagar durante a polpao e branqueamento do que a lignina da parede secundria.

Tabela 10. Tipo de lignina de acordo com o tipo de clula numa MFC Tipo de clula Parede celular . Fibras, clulas do raio . Vasos M+P . Entre fibras e raios . Entre vasos Tipo de lignina S G G-S G

Os resultados experimentais parecem deixar pouca dvida a respeito da heterogeneidade da lignina, o que leva a crer que a ao enzimtica durante o processo de lignificao se estende alm da gerao de radicais de fenxido por desidrogenao. As comprovadas diferenas de composio da lignina de certas clulas e camadas de paredes celulares tambm sustentam a idia de uma biossntese intracelular da lignina.

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6. DISTRIBUIO DAS LIGNINAS 6.1. Mtodos para a Identificao de Ligninas em Tecidos Vegetais
A identificao da lignina em tecidos vegetais no muito difcil, exceto quando o tecido contm certos polifenis insolveis, freqentemente relacionados com os taninos e flavonides. Esses constituintes tm certas caractersticas semelhantes s ligninas e, conseqentemente, so confundidos com ela. Tais materiais fenlicos so encontrados, por exemplo, nas cascas das rvores (chamados cidos fenlicos das rvores), na madeira de espcies do gnero Eucalyptus (Kino), em espcies de plantas primitivas tais como musgos, e no crtex de plantas tropicais.

6.1.1. Reaes de tingimento do tecido lenhoso


Em estudo microscpicos de sees do tecido, a lignina pode ser reconhecida pela sua fluorescncia azul anil ou verde-azulada na luz ultravioleta. Entretanto, muito freqentemente so utilizadas reaes especficas de tingimento, das quais as seguintes so as mais importantes. 6.1.1.1. Reao de Wiesner A reao baseada no tratamento do tecido com fluoroglucinol em meio cido (HCl) que reage com os grupos de aldedo coniferlico na lignina, formando um cromforo catinico de cor prpura. A reao tem aplicao universal para todas as ligninas, embora ela possa ser fraca ou mesmo ausente nas ligninas contendo altas quantidades de siringil. 6.1.1.2. Colorao com safranina - verde rpido Esse teste menos especfico para a lignina, por que ele produz uma reao positiva na presena de grupos hidroxila fenlica em geral. Paredes celulares lignificadas so coloridas com vermelho na presena de safranina enquanto que o verde rpido, produz cor verde nos tecidos no-lignificados. O corante Azure B reage de maneira anloga a safranina colorindo as regies lignificadas com colorao verde-azulada. 6.1.1.3. Reao de Maule Essa reao s positiva para as ligninas que contm quantidades significativas de unidades de siringil. A reao baseada em tratamentos sucessivos com solues aquosas de permanganato, cido hidroclrico e amnia, produzindo uma colorao vermelho-rosada bastante profunda quando o teste for positivo. Um mtodo alternativo para as ligninas contendo unidades siringil consiste do tratamento da madeira com gua de cloro seguida de bissulfito de sdio, produzindo uma colorao vermelha. Para ambos os mtodos, no se sabe ainda o mecanismo da formao de cor.

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6.1.2. Espectroscopia e microscopia ultravioleta


A anlise dos espectros ultravioletas de ligninas aplicada principalmente na comparao entre ligninas diferentes, na avaliao da presena de certos grupos funcionais (ex. fenlicos livres e eterificados por espectros de diferena) e na determinao de modificaes estruturais severas (ex. perda de natureza aromtica) devido a tratamentos qumicos (ex. polpao e branqueamento). O espectro ultravioleta da lignina das MFL apresenta um mximo na regio de 280nm (Figura 14) enquanto os polissacardeos so totalmente transparentes nessa regio. As ligninas das MFC apresentam um deslocamento do mximo de absoro para a regio de 275 a 277 cm-1 devido ao maior nmero de unidades de siringilpropano que essas contm. Adicionalmente as absortividades das ligninas de MFC so geralmente mais fracas do que as das ligninas de MFL, com valores que decrescem com o aumento da proporo de grupos de metoxila por unidade C9.

Figura 14. Espectro ultravioleta de lignina MWL (A) e lcool coniferlico (B) O mtodo de microscopia ultravioleta, originalmente idealizado por Fergus e aperfeioado por Goring, talvez um dos mais eficientes para se identificar a lignina guaiacil e siringil pela intensidade e localizao da absoro mxima no espectro. Essa tcnica envolve a medio da luz ultravioleta transmitida atravs de sees ultrafinas de madeira na faixa de comprimento de onda onde a lignina absorve luz (240-320nm). Conhecendo-se as dimenses da parede celular e as absorvncias, possvel determinar a concentrao de lignina nas diferentes regies da clula. A separao entre ligninas guaiacil e guaiacil-siringil por essa tcnica feita com base nas diferenas de absortividade do guaiacil e do siringil. O composto modelo do tipo guaiacilpropano (4-propilguaiacil) apresenta mxima absoro de luz, mx., na faixa de 280-282 nm com coeficiente de extino

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(absortividade) = 19 cm-1.L. g-1 enquanto o composto modelo do tipo siringilpropano (2,6-dimetoxi-4-propilfenol) apresenta mx de 270-273 nm com = 6 cm-1.L.g-1. Portanto, de se esperar que uma lignina do tipo siringil pura apresente mx em comprimentos de onda mais baixos e com absoro 3 vezes mais fracas que a lignina do tipo guaiacil.

6.1.3. Espectroscopia infravermelha


O espectro infravermelho da lignina tambm muito caracterstico, e a absoro dos carboidratos suficientemente fraca na regio de 1200 a 1680 cm1, que permite observar a absoro mxima devido lignina nessa regio. As faixas de absoro mais caractersticas da lignina so encontradas a 1510 e 1600 cm-1 (vibraes do anel aromtico) e entre 1470 e 1460 cm-1 (deformaes das ligaes de C-H e vibraes do anel aromtico) (Figura 15). As diferentes razes entre as intensidades das absores a 1510 e 1600 cm-1 podem ser usadas para diferenciar as MFL das MFC. Nos compostos modelos de siringil no-conjugados e ligninas de MFC, as intensidades so quase iguais, enquanto que nos compostos guaiacil no-conjugados e ligninas de MFL a intensidade da absoro em 1510 cm-1 muito maior. pertinente notar que o espectro de polifenis diferentes da lignina so bastante diferentes, apresentando fraca absoro na regio de 1500 cm-1.

Figura 15. Espectro infravermelho de lignina do hemlock do oeste. indicam as regies de absoro da lignina.

As cetas

A espectroscopia infravermelha tem sido usada principalmente para caracterizar ligninas isoladas e verificar modificaes produzidas em ligninas aps diversos tratamentos qumicos da madeira.
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6.1.4. Eletromicroscopia
Nesse mtodo a madeira tratada com permanganato com conseqente gerao de dixido de mangans como resultado da oxidao da lignina. O MnO2 fica depositado nas regies onde havia lignina e identificado nas eletromicrografias.

6.1.5. Electromicroscopia com EDXA (Energy Dispersive X-ray analysis)


A lignina tratada com bromo para emitir sinais tpicos no raio-x. A lignina da LM tem comportamento diferente durante o tratamento com bromo e por isso apresentar tambm um raio-x diferente quando comparada com a lignina da parede celular.

6.1.6. Autoradiografia
Administra-se planta um precursor de lignina tratado com tritio. A lignina tritiada (lignina-H) posteriormente identificada.

6.2. Distribuio das Ligninas nos Tecidos Vegetais e Nas Paredes Celulares
A quantidade de lignina nas MFL pode ser determinada gravimetricamente pelo mtodo de Klason. A chamada "lignina Klason" obtida depois da remoo dos polissacardeos da madeira livre de extrativos pela hidrlise com cido sulfrico 72%. Outros cidos tais como HCl 36% e H3PO4 80% podem tambm ser utilizados para a hidrlise. O grande defeito do mtodo de Klason que a lignina extensivamente modificada durante a hidrlise, tornando-a imprpria para anlises qualitativas. Do ponto de vista quantitativo, o mtodo de Klason muito adequado para MFL. A lignina altamente condensada das MFL quantificada quase que em sua totalidade por esse mtodo. Maiores perdas de lignina por solubilizao (10-20%) so observadas quando o mtodo aplicado para MFC. No caso de plantas anuais, as protenas tendem a condensar com a lignina se no forem removidas previamente por hidrlise. Constituintes polifenlicos tambm so includos como lignina Klason se no removidas previamente por extrao. Nesse caso a lignina Klason chamada de "lignina Klason aparente". As MFL normais contm de 26-32% de lignina enquanto as madeiras de compresso possuem teores de lignina variando entre 35-40%. As ligninas presentes nas MFC so parcialmente dissolvidas durante a hidrlise cida e por isso, os valores gravimtricos devem ser corrigidos para a lignina solvel em cido usando mtodos de espectrofotometria de ultravioleta. As MFC normais contm 20-28% de lignina, embora MFC tropicais possam ter contedos de lignina acima de 30%. A madeira de tenso das MFC contm somente 20-25% de lignina. A concentrao da lignina alta na lamela mdia e baixa na parede secundria. Por causa da sua espessura, pelo menos 70% da lignina nas MFL , entretanto, localizada na parede secundria como foi mostrado por microscopia de ultravioleta quantitativa (Fig. 16 e Tabela 11). De acordo com Goring et al. a
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parede secundria das madeiras de compresso das conferas pode apresentar concentrao de lignina entre 55 e 58%. Os resultados so bastante similares para as MFC (Tabela 12) embora neste caso exista maiores incertezas analticas por causa da natureza mais heterognea da madeira e da presena de unidades guaiacil e siringil na lignina. Muitos pesquisadores acreditam que a lignina isolada pelo mtodo de Bjorkman (MWL) origina principalmente da lamela mdia. De acordo com os estudos de Musha e Goring, a lignina da lamela mdia de MFC principalmente do tipo guaiacil. Esses autores demonstram tambm que a relao guaiacil:siringil na lignina das MFC somente um pouco maior que a relao encontrada na MWL, sugerindo que esse tipo de separao da lignina na verdade contm tambm larga proporo da lignina da parede secundria das fibras. Tabela 11. Distribuio da lignina no traquedeo da madeira de abeto preto (Picea mariana). Madeira Regio Volume do Lignina Concentrao a morfolgica tecido, % (% do total) da lignina, % Lenho de S 87 72 23 Incio de ML 9 16 50 Estao CC 4 12 85 Lenho de Fim de Estao S ML CC 94 4 2 82 10 9 22 60 100

a Para explicaes veja Figura 16.

Figura 16. Seo transversal de um traquedeo de abeto fotografado na luz ultravioleta. A medio do densitmetro foi feita atravs da parede do traqudeo na linha tracejada. (S=parede secundria; ML=lamela mdia; CC=canto de clula)

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Tabela 12. Distribuio da lignina no xilema de btula branca (Betula papyrifera) Clula Fibra Vaso Clula do Raio Regio Morfolgicaa S ML CC S ML CC Tipo de lignina S G-S G-S G G S Volume do tecido 73 5 2 8 1 11 Lignina (% do total) 60 9 9 9 2 11 Concentrao da lignina, % 19 40 85 27 42 27

a Para explicaes veja Figura 16

Kirk et al. demonstraram que na fase inicial de decomposio da madeira inteira por fungos de podrido branca, so removidas preferencialmente as unidades de lignina siringil enquanto que no caso de madeira moda a remoo ocorre de maneira similar. Os autores concluram que, no caso da madeira inteira, os fungos atacam a partir do lmen da clula e encontra primeiro a lignina rica em siringil. Esse tipo de ocorrncia pode ser previsto pelos resultados de Goring e Musha.

7. PROPRIEDADES FSICAS DA LIGNINA


Em contraste com a abundncia de estudos existentes a respeito da biossntese e da estrutura qumica da lignina, muito pouca informao existe a respeito de suas propriedades fsicas. Um dos fatores crticos que influencia as propriedades fsicas de um polmero o seu peso molecular. Embora tenha-se feito uma grande quantidade de estudos com relao distribuio de peso molecular da lignina, acredita-se que ela possa existir como uma nica molcula em seu ambiente nativo. Desde que a lignina formada por desidrogenao enzimtica seguida presumivelmente de acoplamentos oxidativos de fenis monomricos e, em alguns casos, oligomricos, e desde que a lignina nunca existe completamente desprovida de grupos de hidroxila, a estrutura da lignina pode nunca cessar de crescer. No possvel citar um valor tpico ou mdio para o peso molecular da lignina, devido aos seguintes fatos: - a multiplicidade de mtodos de isolamento de lignina - a degradao das macromolculas de lignina durante os processos de isolamento - efeitos de condensao, principalmente sob condies cidos - a polidispersidade de todas as ligninas solveis - a falta de mtodos adequados para a determinao da polidispersidade de ligninas isoladas, e - incertezas sobre o comportamento de ligninas em soluo dificultando sistemas de calibrao.

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Devido aos fatos acima mencionados, uma comparao de dados de peso molecular na literatura se torna difcil e at de valor duvidoso. A polidispersidade uma propriedade apresentada por todas as ligninas isoladas. A explicao mais provvel deste fenmeno a degradao ao acaso da lignina nativa na parede celular pelo ataque qumico durante o isolamento, que leva formao de fragmentos de tamanhos diferentes, mas de composio qumica uniforme. Do ponto de vista experimental, a polidispersidade faz com que seja necessrio considerar ambos o peso molecular ponderal e numrico (Mw e Mn), sendo a razo Mw/Mn uma expresso do grau de polidispersidade. Valores de Mw e Mw/Mn para ligninas de madeira moda (MWL) so dados na Tabela 13. Comparado com a celulose e seus derivados, a polidispersidade da lignina alta, chegando a 2,5 para MWL de MFL. Tem sido observado que a polidispersidade de polmeros obtidos por desidrogenao do lcool coniferlico (DHP) aumenta com o aumento do peso molecular e da mesma magnitude (3,0) que aquela da MWL de MFL no peso molecular ponderal de 20000. Tabela 13. Peso molecular e polidispersidade de preparaes de MWL e polmeros de desidrogenao do lcool coniferlico (DHP) Polmeros Abeto do Leste Hemlock do Oeste DHP1 DHP2 Mw 20 600 22 700 11 000 31 400 Mw/Mn 2,6 2,4 2,2 3,7

Vrios estudos realizados com preparaes de lignina tais como Bjorkman, lignina kraft ou lignossulfonato demonstram que o peso molecular da lignina pode variar desde 20.000 at 1.000.000. Comparado com a celulose, a lignina produz solues de baixas viscosidades, sugerindo uma estrutura compacta e esfrica para as molculas de lignina dissolvidas. Como pode ser visto na Tabela 14, a viscosidade da lignina apenas 1/40 daquela dos polissacardeos e 1/4 daquela de polmeros sintticos lineares. Tabela 14. Exemplos de viscosidades intrnsecas correspondentes a um peso molecular (Mw) de 50 000 para vrias macromolculas. Macromolcula Lignina dioxano-HCl Lignossulfonato Lignina kraft Lignina alcalina Polimetacrilato Polimetilestireno Xilana Celulose Solvente piridina NaCl 0,1M dioxano tampo 0,1M benzeno tolueno CED CED
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[n] (dm3)/kg) 8 5 6 4 23 24 216 181

importante ter uma noo da solubilidade da lignina em diferentes solventes porque determinaes do peso molecular e estudos de espectrometria ultravioleta dependem de amostras de lignina totalmente dissolvidas. Devido ao grande nmero de tipos de ligninas isoladas, se pode fazer apenas algumas colocaes gerais sobre a solubilidade da lignina. Solventes adequados para ligninas analticas e isoladas com solventes orgnicos so: o dioxano, dimetilsulfoxido (DMSO), formamida, dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF), piridina, dicloroetano e etilenoglicol-monometilter. Outros solventes adequados so brometo de acetila em cido actico e hexafloropropanol. A escolha do solvente restringida nos estudos de espectrometria ultravioleta devido absoro da maioria dos solventes nos comprimentos de onda mais baixos.

8. REAES DE LIGNINA
A reatividade da lignina tem sido intensivamente estudada por dois motivos: elucidar sua estrutura qumica e descobrir as suas reaes nos processos de polpao e branqueamento. A degradao da lignina atravs de reaes solvolticas suaves a melhor ferramenta analtica disponvel para estudos estruturais das ligninas. Os procedimentos mais importantes so: a hidrlise suave, a acidlise, a etanlise e a tioacetlise, conforme foi discutido na seo 3.1. Nesta seo ser apresentado um breve sumrio das reaes de deslignificao de importncia comercial (i.e. na polpao e no branqueamento) baseado no conceito de Gierer.

8.1. Reaes de Deslignificao


As reaes de deslignificao podem ser classificadas entre reaes que ocorrem nos tomos de carbono da cadeia lateral (posies , e ), no ncleo aromtico (C1 at C6), na metoxila, ou menos frequentemente, na hidroxila fenlica (Figura 17). De acordo com o conceito proposto por Gierer, a lignina ou fragmentos de lignina so unidades de fenilpropano com eltrons desemparelhados no oxignio fenlico, o que leva criao de stios de alta densidade de eltrons (-) atravs do sistema de ressonncia aromtica dos eltrons . Nas unidades de fenilpropano no-conjugadas, estes stios de alta densidade esto nas posies orto e para ao oxignio fenlico, enquanto que nas unidades que tm uma ligao dupla aliftica conjugada ao anel aromtico existe mais um stio de alta densidade de eltrons , no C da cadeia lateral. Os stios com deficincia de eltrons (+) so formados pela transio das unidades de fenilpropano aos quinonametdeos intermedirios pela eliminao dos substituintes nos carbonos e (Figura 18).

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C C C 1 6 5 4 [OH] O 2 3

OCH

Figura 17. Principais stios de reao em unidades de fenilpropano

H C R 2 HC HC :

H C R 2 HC HC +H+ , - RH

H C + 2 HC HC + + +

OCH O R'

3 O R'

OCH 3 O R'

OCH

Figura 18. Stios de alta e baixa densidade de eltrons nas unidades de fenilpropano da lignina

As posies com alta densidade de eltrons (-) sofrem ataques por eletrfilos enquanto as posies com baixa densidade de eltrons (+) sofrem ataques por nuclefilos. As reaes de deslignificao durante a polpao se devem exclusivamente a reaes nucleoflicas (Tabela 15) enquanto a deslignificao durante o branqueamento se inicia por reaes eletroflicas (Tabela 16) que podem ser seguidas de reaes nucleoflicas (Tabela 17).

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Tabela 15. Reaes Que Ocorrem Durante a Polpao


Reagente (Nuclefilo) HOTipo(s) de Reao abstrao do prton adio nucleoflica Stios de Ataque hidroxilas fenlicas e alifticas C+ nos quinonametdeos intermedirios outras enonas intermedirias C+ nos quinonametdeos intermedirios outras enonas intermedirias C da metoxila C nos teres -arila C nos teres -arila C+ nos quinonametdeos intermedirios outras enonas intermedirias C+ nos quinonametdeos intermedirios outras enonas intermedirias C nas estruturas de -aril-ter-cido-sulfnico Carbnion (C-) R-ArO-* SO2.H2O adio do conjugado C da metoxila C+ nos quinonametdeos intermedirios formaldedo C nos -aril-teres C+ nos quinonametdeos intermedirios do on oxnio Intermedirios ou Produtos fenolatos e alcoolatos lcoois benzlicos e cinamlicos hidroxi-enis tiis benzlicos e cinamlicos mercapto-enis metil-mercaptanas oxiranas tiiranos cidos sulfnicos benzlicos e cinamlicos enis-cidos sulfnicos cidos sulfnicos benzlicos e cinamlicos enis-cidos sulfnicos cidos - e - disulfnicos cido metanosulfnico 1,1- e 1,3-diarilpropano hidroximetil-ciclohexadienonas Ciclohexadienonas e aril-coumaranos cidos - e - sulfnicos

HS-

adio nucleoflica deslocamento nucleoflico

R-O-* R-S-* HSO3SO3=

deslocamento nucleoflico deslocamento nucleoflico adio nucleoflica

adio nucleoflica deslocamento nucleoflico

deslocamento nucleoflico adio nucleoflica

R representa uma estrutura de ter -arila ligada a O-, S- ou resduo fenolato na posio (ou )
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Tabela 16. Reaes iniciais do branqueamento


Reagente (Eletrfilo) Ctions Cl+ (do Cl2 ou HOCl protonado Tipo(s) de Reao substituio eletroflica em aromticos adio eletroflica a ligaes duplas conjugadas adio eletroflica a outras ligaes duplas em olefinas adio eletroflica adio 1,3-dipolar adio 1,1 insero HO+ (do H2O2 ou CH3COOOH protonados) substituio eletroflica em aromticos adio eletroflica a ligaes duplas conjugadas adio eletroflica a outras ligaes duplas em olefinas Stios de Ataque C- em fenlicos livres e eterificados C- em estruturas conjugadas (C) Intermedirios ou Produtos ons de ciclohexadienonila substitudos com Cl ons benzilhosoxnios substitudos na posio com Cl ou ons clornios cclicos carboctions substitudos com Cl ou ons clornios cclicos trixidos ozondeos epxidos hidrotrixidos ons de ciclohexadienonila substitudos com HO ons benzilhosoxnios substitudos com HO carboctions substitudos com HO

C- em olefinas C- em fenlicos livres e eterificados ligaes duplas em aromticos e olefinas ligaes duplas em olefinas ligaes C-H em lcoois , teres e aldedos C- em fenlicos livres e eterificados C- em estruturas conjugadas (C) C- em olefinas

-O-O-O+ (ozone)

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Radicais Cl (do Cl2, HClO ou ClO-) O2

abstrao do hidrognio abstrao do eltron adio eletroflica abstrao do hidrognio abstrao do eltron adio eletroflica

hidroxilas fenlicas ons de fenolato C- em radicais fenxidos e ciclohexadienonlicos mesomricos hidroxilas fenlicas ons de fenolato C- em radicais fenxidos e ciclohexadienonilas mesomricas hidroxilas fenlicas ons de fenolato C- em radicais fenxidos e de ciclohexadienonilas mesomricas radicais

radicais fenoxi- e ciclohexadienonila mesomricos ciclohexadienonas substitudas com Cl

radicais fenoxi- e ciclohexadienonila mesomricos radicais fenoxi- e ciclohexadienonila mesomricos ciclohexadienonas e quinonametdeos substitudos com OOH radicais fenoxi- e ciclohexadienonila mesomricos radicais fenoxi- e ciclohexadienonila mesomricos ciclohexadienonas substitudas com OOH ou OH quinonametdeos substitudos na posio com OH ou OOH Intermedirios ou Produtos radicais fenoxi- e ciclohexadienonila mesomricos steres - e -quinol do cido cloroso

HO e HOO abstrao do hidrognio (do H2O2) abstrao do eltron adio eletroflica

Reagente (Eletrfilo)
ClO2

Tipo(s) de Reao
abstrao do hidrognio adio eletroflica

Stios de Ataque
hidroxilas fenlicas C- em radicais fenxidos e de ciclohexadienonilas mesomricas

153

Tabela 17. Branqueamento - Reaes subseqentes


Reagente (Nuclefilo) HOTipo(s) de Reao adio nucleoflica deslocament o nucleoflico adio nucleoflica Stios de Ataque C+ em intermedirios quinonides quinonides substitudos com Cl C+ em intermedirios quinonides outras enonas intermedirias carboctions substitudos com Cl C+ em intermedirios quinonides outras enonas intermedirias C+ em intermedirios quinonides outras enonas intermedirias Intermedirios ou Produtos ciclohexadienonas substitudas com OH carboxi- e hidroxiciclopentadienos ciclohexadienonas substitudas com OH e Cl ciclohexadienonas substitudas com Cl enis substitudos com Cl estruturas 1,2-dicloro

Cl-

ClO-

adio nucleoflica

steres - e -quinol e benzlicos do cido hipocloroso enis substitudos com ClO

HOO-

adio nucleoflica

hidroperxidos de ciclohexadienonila e benzila enis substitudos com OOH

154

8.2. Reaes Conduzindo a Compostos Coloridos


A lignina na madeira incolor ou de colorao bege claro. Devido a sua reatividade e tendncia a formar grupos cromforos, a lignina responsvel por grande parte da cor desenvolvida nas celuloses. As reaes que conduzem a cor devido a grupos cromforos na lignina podem ser observados nas seguintes situaes: - no amarelecimento da pasta mecnica e papel jornal; - no avermelhamento da celulose sulfito quando armazenada; - no escurecimento de rejeitos armazenados; - no escurecimento de pastas ricas em taninos (reaes de condensao com a lignina); - no escurecimento das celuloses "queimadas", obtidas em condies anormais de cozimento; - na cor mais escura de celuloses sulfito base amnia, em relao a outras bases. - na cor escura de celuloses alcalinas, principalmente kraft; - no amarelecimento da celulose durante clorao cida e subseqente escurecimento na extrao alcalina; - no amarelecimento de celuloses branqueadas com o tempo ou por ao do calor. Os principais grupos cromforos resultantes de reaes da lignina so mostrados na Figura 19.

OH C C C R OCH 3 C C C OH OCH3 OR OH OCH 3 OCH 3 R H C C C O

OH

OCH3

Estruturas condensadas (leucocromforos)


C

Aldedo coniferlico
R

O H CO 3

O OCH3 O

OCH 3

O O

OCH3

Quinonas conjugadas

Quinonas no-condensadas

Figura 19. Grupos cromforos resultantes de reaes da lignina

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