Artigo

Comparao Entre a Contagem de Plaquetas pelos Mtodos Manual e Automatizado

Luiz Arthur Calheiros Leite1, Nilson Marques Silva Junior2, Mayara Soares Miranda2 1 - Professor da Disciplina de Hematologia do CESMAC. Mestre em Cincias, Disciplina de Hemtologia - UNIFESP 2 - Alunos de habilitao em Bioqumica CESMAC FEJAL

Resumo
A contagem de plaquetas extremamente importante para avaliar amostras de pacientes com plaquetopenia ou plaquetose. Os laboratrios utilizam os mtodos automatizados e manuais, estando este ltimo em desuso devido a argumentos relativos sua baixa preciso e exatido. Este trabalho se prope a comparar resultados de exames realizados pelo mtodo de Fonio com o mtodo automatizado. Foi realizado um estudo prospectivo e comparados os resultados encontrados quando do emprego de contagens de plaquetas de forma manual e automatizada, a partir de lminas de hematologia de um laboratrio de rotina. Dentre as 99 amostras avaliadas pelo mtodo manual de Fonio, 92 foram confirmadas pelo mtodo automatizado, seis apresentaram plaquetopenia pela automao, seis apresentaram plaquetopenia pelo mtodo manual e uma apresentou plaquetose pela automao. A anlise dos dados nos conduz a afirmar que as discordncias de alguns resultados no so significativas para garantir que os resultados obtidos pelo mtodo automatizado no confirmam os resultados encontrados quando se utiliza o mtodo indireto. Palavras-chave: Contagem de plaquetas, mtodo de Fonio, automao

Summary
Comparison between Counting of Platelet using Manual and Automatized Methods The counting of platelets is extremely important to evaluate patients with plaquetopenia or plaquetose. The laboratories used to automatized, or direct indirect method, being this last one more in disuse due its low precision and exactness. A bibliographical survey and comparison with the counting of platelets was made, from blades of hematology of an archive of blades, analyzing the values gotten for the automation. Amongst the 99 samples evaluated for the automatized accountant, 93 had been confirmed by the manual method of Fonio, 2 had presented plaquetopenia for the automation, 2 had presented plaquetopenia for the manual method and 3 had presented plaquetose for the automation. This work considered to compare the indirect method (Fonio) with the automatized method. The values gotten had demonstrated that the indirect method does not confirm all the results with the automatized method, but show great correlation when the number of platelets is normal. Keywords: Counting of platelets, method of Fonio, automation

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Introduo

Tabela 1. Principais causas de plaquetopenias e plaquetoses Plaquetopenias Leucemias Agudas Anemia Aplsica Esplenomegalia Grandes hemorragias Viroses em geral AIDS Prpuras imunolgicas Quimioterapia e radioterapia antiblstica
Fonte: Renato Failace, Hemograma Manual de Interpretao, 2003.

s plaquetas so produzidas na medula ssea por

Plaquetoses Policitemia Vera Leucemia Mielide Crnica Perodo ps-hemorrgico Aps esplenectomia Doenas infecciosas crnicas Trombocitemia essencial

fragmentao do citoplasma dos megacaricitos. Em um estgio varivel do desenvolvimento, o citoplasma torna-se granuloso e as plaquetas so liberadas (HOFFBRAND, 2004). A maioria tem dimetro de 1,3 a 3,5 m, mas pode ser maior em certas doenas. Elas no contm ncleo e so cercadas por uma membrana de duas camadas lipdicas (LEWIS, 2006). A principal funo das plaquetas a formao de um tampo mecnico durante a resposta hemosttica normal leso vascular. Na ausncia de plaquetas pode ocorrer vazamento espontneo de sangue pelos pequenos e grandes vasos (HOFFBRAND, 2004). A contagem de plaquetas necessria para se determinar alguma alterao plaquetria (quantitativas e qualitativas anisocitose plaquetria). Existem mtodos manuais em que se utiliza a comparao de plaquetas com o nmero de eritrcitos por campo (mtodo de Fonio) e os mtodos automatizados. Esses mtodos no apresentam valores exatos e sim uma estimativa. Por serem trabalhosos esto ficando em desuso (FAILACE, 2003). A maneira mais satisfatria de contar plaquetas com a tcnica exigida pela prtica hematolgica atual atravs de contadores automatizados, os quais

procedem contagem de plaquetas por tecnologia de impedncia, de disperso de luz, ou com ambas (BAIN, 2004). Todas as amostras de sangue com baixa contagem de plaquetas devem ter as lminas examinadas ao microscpio para excluir agregao plaquetria e satelitismo (FAILACE, 2003). Quando se constata uma diminuio na quantidade de plaquetas diz-se que ocorre uma plaquetopenia ou trombocitopenia e no caso de aumento do quantitativo de plaquetas diz-se que ocorre plaquetose ou trombocitose. Segundo FAILACE, 2003, as principais causas de plaquetopenias e plaquetoses so as constantes da Tabela 1. Preferencialmente, as contagens de plaquetas automatizadas so feitas em sangue venoso anticoagulado com EDTA, obtido por uma venopuno limpa. Contagens com sangue obtido por picada digital tendem a ser mais baixas.

J as contagens de plaquetas por mtodo manual (Fonio) devem ser realizadas atravs de lminas sem EDTA (BAIN, 2004). Diversas fontes de erros influenciam em um plaquetograma, como: formao de cogulos no sangue, agregao plaquetria em raros casos de sangue colhidos com EDTA. O presente estudo tem por objetivo analisar e comparar verificando a existncia de correlao entre os dois mtodos, para que com exatido seja possvel liberar um plaquetograma de qualidade e confiabilidade.

Material e Mtodo
Foram coletadas 99 amostras para realizao de hemogramas atravs da puno venosa com EDTA para contagens automatizadas e confeccionadas lminas sem EDTA para contagem manual. As

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amostras foram selecionadas aleatoriamente e no houve critrios para escolha das amostras. As amostras de sangue venoso coletado com EDTA foram processadas em um contador Coulter JT. As lminas coradas (Corante Pantico) sem EDTA foram observadas ao microscpio Nikon Eclipse e, em seguida, comparadas com o resultado da automao. A avaliao iniciou-se analisando a distribuio dos eritrcitos, focalizando campos onde os mesmos tocavam-se sem se sobreporem. Em seguida foi observada a distribuio das plaquetas e contadas pelo mtodo de Fonio , onde as pla1

Clculo: Plaquetas por l de sangue = P a quantidade plaquetas e Hm a de hemcias.

, sendo

uma compreendendo os resultados encontrados pelo mtodo manual e a outra consistindo dos resultados encontrados pelo mtodo automatizado utilizando-se para tanto suas respectivas amostras. O procedimento foi utilizado para detectar se h diferena entre as mdias das populaes. Para tanto, foram utilizados para comparao das amostras o teste t e o valor de p, sendo significante p < 0,05. Como para usar o procedimento da comparao das mdias necessrio assumir que as populaes sejam distribudas normalmente, o que nem sempre ocorre, foi empregada tambm, para comparao das duas populaes, a tcnica conhecida como Teste de Postos de Wilcoxon.

restantes apresentaram valores maiores. Houve concordncia, no que diz respeito anlise comparativa com os valores de referncia com 93% das amostras. Das 85 amostras com valores normais de plaquetas (150.000 e 450.000/l) avaliadas pelo mtodo automatizado, 83 apresentaram concordncia com o mtodo manual de Fonio. Em relao s amostras analisadas houve discordncia entre 11 amostras, apresentando pelo mtodo automatizado trs plaquetoses e valores normais pelo mtodo manual, cinco amostras apresentaram valores normais pela automao e plaquetopenias pelo mtodo manual, trs amostras apresentaram plaquetopenia pela automao e valores normais pelo mtodo manual. Houve concordn-

quetas foram contadas em campos de aproximadamente 200 hemcias cada e o clculo estimado de plaquetas foi realizado em relao ao nmero de eritrcitos por microlitro (CARVALHO, 2002). O clculo (ao lado e acima) realizado contando-se mil hemcias e ao mesmo tempo as plaquetas, anotando o valor. A contagem feita em vrios campos sucessivos seguindo linhas longitudinais em relao lmina (CARVALHO, 2002). Por ter uma mdia de 200 hemcias por campo, utilizou-se a contagem de cinco campos com distribuio uniforme de plaquetas.

Resultados
Dentre as 99 amostras comparadas, 60 (59%) contadas pelo mtodo manual apresentaram valores menores do que a contagem de plaquetas automatizadas e as

cia em 88 amostras. Quanto plaquetopenia, foram identificadas em 11 amostras pela automao e nove (81,8%) foram confirmadas pelo mtodo manual. A avaliao das plaquetoses encontrada pelo aparelho (trs

Tabela 2. Valores de referncias Homem Mulher Hemcias/L 4,4 a 5,4x106 4 a 5 x106 Hemoglobinas g/dL 13,3 a 16,6 12 a 15,3 Plaquetas/L 150.000 a 450.000 150.000 a 450.000

Anlise Estatstica
A anlise estatstica foi procedida atravs da comparao das mdias de duas diferentes populaes;
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Fonte: CARVALHO, William de Freitas. Tcnicas Mdicas de Hematologia e Imuno-Hematologia, 2002.

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amostras), no foi confirmada, apresentando valores normais pelo mtodo manual. O Grfico 1 apresenta o diagrama de disperso dos resultados das contagens de plaquetas das amostras. As duas linhas paralelas ao eixo das amostras representam o intervalo fechado no qual o resultado considerado normal. Abaixo da linha inferior indicam casos de plaquetopenia e acima da linha superior encontram-se os casos de plaquetose. A Tabela 2 apresenta os valores de referncias utilizados na maioria das referncias bibliogrficas para ensaios de hemcias, hemoglobina e plaquetas. O fato constatado anteriormente de que alguns exames efetuados por ambos os mtodos conduzem a anlises clnicas distintas, no argumento suficiente para sustentar que os resultados no so consistentes. Os resultados estatsticos da comparao entre os resultados constam da Tabela 3. Usando-se a estatstica p, chega-se a concluso que o valor de p maior do que 0,05 significa que no existe diferena significante entre os valores mdios das contagens manual e automatizada. Mdia Varincia Observaes Varincia agrupada Hiptese da diferena de mdia Gl Stat t P(T<=t) uni-caudal t crtico uni-caudal P(T<=t) bi-caudal t crtico bi-caudal Nvel de significncia Tabela 3. Estatstica para comparao entre os resultados dos dois procedimentos de ensaios* PLT Automtico 254.020,202 6.507.877.138,73 99 6.354.490.746,73 0 196 0,74546 0,22844 1,65267 0,45688 1,97214 0,05000 No Rejeitar No Rejeitar PLT Manual 245.573,939 6.201.104.354,73 99 Grfico 1. Diagrama de Disperso do resultado da contagem de plaquetas

Discusso
A literatura mostra a eficincia e sensibilidade dos aparelhos

Deciso usado t Deciso usando p

*Tabela desenvolvida em Excel usando a ferramenta anlise de dados.

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automatizados. Em nosso estudo 92 lminas apresentaram concordncia pela contagem automatizada e manual no apresentando variao de plaquetas. Coelho E. et al, 1981, demonstraram que as amostras contadas pelo mtodo manual esto sujeitas a variveis, podendo ser devido m distribuio de plaquetas nos campos focalizados. Segundo Failace R., 2003, as contagens automatizadas apresentam um coeficiente de variao menor que 10% em contagens entre 40.000 e 500.000/L, mas insatisfatria nas contagens mais baixas. Quando a contagem est abaixo de 20.000/L o coeficiente de variao de aproximadamente de 50%. Ficou evidente que a contagem de plaqueta manual varia, ficando a maioria abaixo das contagens

automatizadas. Em relao s plaquetoses, pelo mtodo manual todas apresentaram valores normais, no sendo analisados os agregados plaquetrios devido dificuldade de contagem. Em casos onde as plaquetas que deram valores abaixo de 130.000/ L sem indicao que justificasse a plaquetopenia, recomendamos que seja colhida amostra sem garrote, pois pode haver aumento significativo de plaquetas. A presente pesquisa mostrou boa correlao de resultados quanto contagem de plaquetas automatizada e o mtodo Fonio. Finalmente, os estudos estatsticos apontam que os resultados podem ser considerados satisfatrios por ambos os mtodos. Portanto, os laboratrios que no tenham demandas para viabilizar a aquisio de equipamentos automatizados podem

continuar a realizar a contagem de plaquetas pelo mtodo de Fonio, levando em conta que seu uso requer experincia e cuidados especiais.

Concluso
O presente trabalho mostra que a contagem automatizada de plaquetas de grande eficincia e preciso. Em laboratrios de pequeno porte que no tm acesso a esses aparelhos e sua demanda no os tornam necessrios, a contagem manual de plaquetas pode ser utilizada sem prejuzos para o diagnstico do exame, porm o mtodo de Fonio deve ser usado com cautela, pois requer experincia do microscopista.

Correspondncia para:
Luiz Arthur Calheiros Leite lahemato@hotmail.com

Referncias Bibliogrficas
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