FBN

Com o aumento populacional crescente e a necessidade da produo sempre maior de alimentos, torna-se cada vez mais necessrio o aumento da produtividade das culturas aliado a uma maior economia e sustentabilidade dos sistemas agrcolas. A fixao do nitrognio pela associao entre rizbios e leguminosas preenche esses requisitos. A fixao biolgica do nitrognio (FBN) um processo bioqumico em que o nitrognio atmosfrico incorporado diretamente s plantas, aps ser transformado em amnia. Essa reao ocorre em estruturas facilmente destacveis das razes das plantas, os ndulos, formadas por bactrias da famlia Rhizobiaceae, denominadas comumente de rizbios, e plantas da famlia das Leguminosas. Na Microbiologia do Solo a FBN a rea que tem recebido maior ateno da pesquisa no mundo todo, devido ao fato de a aplicao prtica do processo estar ao alcance de importantes leguminosas cultivadas e aos benefcios econmicos, ambientais e ao retorno sociedade. O exemplo geralmente citado como benefcio econmico a soja, em que a inoculao das sementes com a bactria especfica substitui totalmente a adubao nitrogenada, trazendo para o Brasil uma economia de divisas em torno de 1bilho de dlares. Outras leguminosas, como o feijo, amendoim, ervilha, lentilha, leguminosas adubos verdes, forrageiras e arbreas, tambm podem receber inoculantes, mas no existem estatsticas de ordem econmica semelhantes s realizadas para a soja. Outra vantagem econmica refere-se ao total aproveitamento do nitrognio fixado, no existindo perdas como as que podem ocorrer quando se utilizam fertilizantes. No que diz respeito aos aspectos ambientais, a FBN preenche os requisitos exigidos para uma agricultura sustentvel. Considerando a sustentabilidade da agricultura como sendo o manejo correto dos recursos que satisfaam as mudanas necessrias ao homem, aliado manuteno ou melhora da qualidade ambiental, nota-se que a FBN faz parte de um dos principais componentes dessa sustentabilidade: o processo no despende energia, no polui e enriquece o solo com nitrognio, o qual ser aproveitado pela cultura seguinte. Como se beneficiar do processo? Por meio da inoculao das sementes com as bactrias apropriadas, denominadas de estirpes selecionadas que a planta entra em contato com o microrganismo para formar a simbiose. Simbiose o nome tcnico da associao ntima que se forma entre as bactrias e a planta. Embora existam estirpes selecionadas para produo de inoculantes para muitas leguminosas de importncia econmica, a ocorrncia de rizbios nativos, j presentes no solo, capazes de associar-se a essas culturas, faz com que a maioria dos agricultores no pratique a inoculao. Estirpes so populaes diferentes de bactrias. Inoculao vem a ser, portanto, a maneira de pr as sementes em contato com os rizbios. Inoculante o veculo que contm as bactrias. No Brasil o veculo mais utilizado a turfa, mas esto sendo estudadas outras formas de inoculantes. Os inoculantes so produzidos por firmas registradas pelo Ministrio da Agricultura. Existem atualmente no pas cinco firmas, sendo duas no Estado de So Paulo, duas no Paran e uma no Rio Grande do Sul. Em 1997 o Brasil comercializou 10.550.778 doses de inoculantes e importou 1.094.400.

As estirpes que compem o inoculante so especficas para a cultura e so recomendadas por uma rede oficial de laboratrios (RELARE). Os pesquisadores envolvidos com a seleo de novas estirpes renem-se bienalmente para discutir, indicar as diretrizes para novas pesquisas e recomendar novas estirpes para a fabricao dos inoculantes. Inoculao: como fazer? A inoculao das sementes, embora simples, requer alguns cuidados que, se no obedecidos, podem levar ao insucesso e ao descrdito do processo. Atualmente recomenda-se a dose de 500g de inoculante para 50 kg de sementes. O inoculante deve ser bem misturado em uma soluo contendo 15% de acar, adicionado s sementes e novamente bem misturado. Deve se tomar cuidado com sementes no tratadas, pois o acar pode favorecer o desenvolvimento de microrganismos que causam danos s sementes ou s plntulas. A inoculao pode ser realizada em tambores giratrios ou em mquinas apropriadas. A inoculao deve ser feita sombra, como tambm a secagem das sementes inoculadas. Se possvel plantar no mesmo dia e cobrir logo em seguida o sulco para evitar a incidncia de raios solares, os quais podem comprometer a sobrevivncia dos rizbios e a formao da simbiose. Fatores que influenciam o sucesso da FBN. A eficincia da associao vai depender, alm dos cuidados na inoculao, das condies do solo, do estado nutricional da planta e do controle de doenas e pragas. As condies do solo devem considerar a correo da acidez para que no haja disponibilidade de elementos txicos, como alumnio e mangans. A calagem com calcrio dolomtico deve ser preferida, pois alm de corrigir a reao do solo, permite bom suprimento de clcio e magnsio. As adubaes com fsforo, potssio e micronutrientes, conforme as recomendadas por meio da anlise do solo, garantem bom desenvolvimento s plantas, favorecendo a simbiose. O cobalto essencial para a fixao do nitrognio e o molibdnio, para a planta e para a fixao do nitrognio. Os micronutrientes so geralmente fornecidos por ocasio da inoculao das sementes. No se recomenda a adubao nitrogenada em leguminosas. O agricultor deve observar se as razes das plantas esto bem noduladas e se os ndulos esto ativos, o que pode ser feito cortando o ndulo: o ndulo ativo possui a cor vermelha. Deve tambm ficar atento ao desenvolvimento das plantas, observando a colorao das folhas velhas que se tornam amarelecidas em caso de deficincia do nitrognio. Nesse caso, procede-se a uma adubao de cobertura. O controle de doenas e pragas deve ser realizado para assegurar um desenvolvimento saudvel das plantas. melhor que a inoculao seja feita em cada plantio, pois assim h maior probabilidade de a planta ser nodulada pela estirpe do inoculante e no as j estabelecidas no solo, que podem sofrer modificaes que interfiram na eficincia da fixao do nitrognio. Cuidados com o inoculante. Atualmente a legislao brasileira exige um controle rigoroso na qualidade dos inoculantes, sendo obrigatria a utilizao de turfa desinfestada. A desinfestao inibe o desenvolvimento de outros microrganismos prejudiciais sobrevivncia dos rizbios. Na compra do inoculante, o agricultor deve observar a data de validade e no comprar inoculante com prazo de validade vencido. Armazenar em local fresco e, se possvel, em geladeira mas no no congelador. Perspectivas futuras e estudos no IAC. Sendo a FBN dependente de fatores

relacionados planta, ao microrganismo e ao solo, muito deve ser feito para que os benefcios do processo sejam otimizados. Por meio do melhoramento de leguminosas em condies de baixas doses de nitrognio, com a finalidade de se obterem leguminosas com alto potencial de fixao do N2 , do maior conhecimento da biodiversidade dos rizbios nativos com o objetivo de se encontrar estirpes eficientes, competitivas e com estabilidade gentica e de um maior entendimento de fatores ecolgicos que controlam o processo, possvel alcanar os objetivos abordados acima. O Instituto Agronmico, em seu Centro de Solos e Recursos Agroambientais, vem estudando consistentemente a fixao biolgica do nitrognio desde 1971. Atualmente as pesquisas esto voltadas para a busca de estirpes mais eficientes e com maior estabilidade gentica dentro da biodiversidade dos rizbios nativos, provenientes de reas cultivadas e sob vegetao natural. Comunidades de rizbios relativas cultura do feijo, soja e leguminosas adubos verdes tm merecido maior ateno. O IAC mantm um banco de germoplasma que conta com aproximadamente 800 estirpes provenientes de diversas leguminosas.

FBN 2
A fixao biolgica de nitrognio consiste na principal fonte de nitrognio para a cultura da soja. As bactrias do gnero Bradyrhizobium quando em contato com as razes de soja infectam as mesmas, via plos radiculares formando os ndulos. Dentro dos ndulos, as bactrias por intermdio de uma enzima denominada dinitrogenase, presente em apenas alguns organismos procariontes, conseguem quebrar a tripla ligao do nitrognio atmosfrico e provocar a sua reduo at amnia (NH3), ou seja, a mesma forma obtida no processo industrial. Deste modo, a esta mesma amnia so incorporados ons H+, abundantes nas clulas das bactrias, ocorrendo transformao em ons NH4+, que sero distribudos para a planta de soja e incorporados na forma de nitrognio orgnico (HUNGRIA et al., 1997). Alguns fatores que podem limitar a fixao de nitrognio e conseqentemente a produtividade em Glycine max. (L.) Merrill., relacionam-se a competio por stios nodulares entre estirpes utilizadas nos inoculantes e os rizbios do solo, quando estas so de menor eficincia. A aplicao de nitrognio, concomitantemente com a inoculao pode diminuir a eficincia da inoculao, pois a planta responde ao estmulo da absoro, limitando o processo simbitico, o que poder resultar na diminuio dos benefcios posteriores ao processo. A necessidade de inoculao de uma cultura de grande importncia econmica como a soja, est diretamente relacionada ao centro de origem fitogeogrfico da espcie vegetal, sendo para a soja, o continente asitico, em especial a China. Condies como baixa fertilidade do solo e elevadas doses de nitrognio combinado, (GRAHAN e TEMPLE, 1984), o efeito da rizosfera, tenso da gua, pH do solo, salinidade, temperatura, toxinas e predadores podem tambm afetar a nodulao e/ou a fixao do nitrognio de leguminosas junto s vastas variedades de estirpes de rhizobium (KAMICKER e BRILL, 1986). Na soja, por se constituir numa leguminosa introduzida e uma das poucas espcies que se associam com Bradyrhizobium japonicum, pouco provvel a ocorrncia natural dessa bactria em solos brasileiros, havendo, entretanto, possibilidades de que algumas das estirpes introduzidas no solo, juntamente com as sementes ou atravs de inoculao artificial, sobrevivam e se "naturalizem" (LIMA et al., 1998). Em condies de campo, a formao de ndulos, poder ser visualizada a partir da emergncia (VE), entretanto somente nos estdios de desenvolvimento V2 e V3 que a fixao de

nitrognio torna-se mais ativa. Aps isso, o nmero de ndulos formados e a quantidade de nitrognio fixada aumenta aproximadamente at o estdio R5.5, quando diminui bruscamente. Para verificao se os ndulos esto fixando nitrognio ativamente para a planta, deve-se observar se internamente os mesmos apresentam colorao rosa ou vermelha, porm, quando se encontram brancos, marrons ou verdes provavelmente a fixao de nitrognio no est ocorrendo (POTAFOS, 2006). As possibilidades para a cultura do milho Considerando a cultivo do milho, sabe-se que o rendimento o resultado do potencial gentico da semente, das condies edafoclimticas, do local de semeadura e do manejo adotado na lavoura. Deste modo, na moderna agricultura, para se alcanar rendimentos mximos nos cultivos de cereais, como o milho, so necessrias abundantes quantidades de fertilizantes, especialmente tambm os nitrogenados. O grande interesse na fixao biolgica em gramneas devido maior facilidade de aproveitamento de gua das mesmas em relao s leguminosas, pela maior efetividade fotossinttica. As gramneas apresentam um sistema radicular fasciculado, tendo vantagens sobre o sistema pivotante das leguminosas para extrair gua e nutrientes do solo; e por serem as gramneas largamente utilizadas como alimento pelo homem. Por isso, mesmo que apenas uma parte do nitrognio pudesse ser fornecida pela associao com bactrias fixadoras, a economia em adubos nitrogenados seria igual ou superior quela verificada com as leguminosas que podem ser auto-suficientes em nitrognio (DBEREINER, 1992). Nos ltimos 20 anos foram feitas descobertas sobre o potencial das bactrias diazotrficas microaerbias, do gnero Azospirillum, fixadoras de nitrognio atmosfrico, quando em vida livre (BODDEY e DBEREINER, 1995) as quais, quando associadas rizosfera das plantas podem, contribuir com a nutrio nitrogenada dessas plantas, tornando-se alvo de estudo por parte de pesquisadores em biologia e fertilidade do solo. Assim sendo, o manejo correto dessa possvel associao Azospirillum spp - Milho poder resultar em incrementos de produtividade e em diminuio dos custos de produo, principalmente da aquisio de fertilizantes nitrogenados (OKON e VANDERLEYDEN, 1997) que so de uso intensivo na cultura do milho. Essas bactrias, em regies tropicais e subtropicais, ocorrem em nmeros entre 103 a 106 por grama de solo, e em nmeros ainda maiores na superfcie de razes de cereais e gramneas forrageiras (DBEREINER et al., 1990). O efeito da bactria Azospirillum spp. no desenvolvimento do milho e em outras gramneas, tem sido pesquisado, no somente quanto ao rendimento das culturas mas, tambm, com relao s causas fisiolgicas que, possivelmente, aumentam esse rendimento. De acordo com MuozGarcia et al. (1991) a inoculao das sementes de milho com Azospirillum brasiliense cepa UAP 77, promoveu aumento na matria seca de razes, da ordem de 54 a 86% e de 23 a 64% na matria seca da parte area. Por sua vez, Salomone e Dbereiner (1996) avaliando a resposta de vrios gentipos de milho inoculao de quatro estirpes de Azospirillum spp. isoladas na Argentina e trs de razes de sorgo e milho isoladas no Brasil, constataram aumento de peso de gros, variando em diferentes gentipos, da ordem de 1.700 a 7.300 kg/ha; contudo, tais resultados so bastante influenciados pelas condies de solo, ambiente e gentipos de planta. Didonet et al. (1996) mencionam que so muitas as evidncias de que a inoculao das sementes de milho com Azospirillum brasilense seja responsvel pelo aumento da taxa de acmulo de matria seca, principalmente na presena de elevadas doses de nitrognio, o que parece estar relacionado com o aumento da atividade das enzimas fotossintticas e de assimilao de nitrognio. Okon e Vanderleyden (1997) baseando-se em dados acumulados durante 22 anos de pesquisa com experimentos de inoculao a campo, concluem que o gnero Azospirillum spp. promove ganhos em rendimento em importantes culturas nas mais variadas condies de clima e solo;

contudo, salientam que o ganho com Azospirillum spp. vai mais alm do que simplesmente auxiliar na fixao biolgica do nitrognio, interferindo tambm no aumento da superfcie de absoro das razes da planta e, conseqentemente, no aumento do volume de substrato do solo explorado. Tal constatao justificada pelo fato da inoculao modificar a morfologia do sistema radicular, aumentando no apenas o nmero de radicelas, mas, tambm, o dimetro mdio das razes laterais e adventcias. Pelo menos parte, ou talvez muitos desses efeitos de Azospirillum spp. nas plantas, possam ser atribudos produo, pela bactria, de substncias promotoras de crescimento, entre elas auxinas, giberilinas e citocininas, e no somente a fixao biolgica de nitrognio. Consideraes finais Em resumo, para outras plantas no-leguminosas, a exemplo do milho) estudos tambm mostraram associaes com bactrias fixadoras de nitrognio, embora, no havendo a formao de ndulos como acontece nas leguminosas, entretanto, o interessante direcionar estudos relativos melhor assimilao do nitrognio. Nestas plantas, ocorre a colonizao da superfcie e/ou interior das razes e interior da parte area por bactrias do solo que fixam nitrognio do ar e disponibilizam as plantas. Neste campo, os resultados de seleo de estirpes inoculantes ainda no atingiram nveis to elevados quanto simbiose em leguminosas. Ainda assim, existem pacotes tecnolgicos, utilizando variedades de plantas e estirpes bacterianas eficientes, que podem suprir mais de 50% do nitrognio necessrio planta, devido maior facilidade de assimilao do nitrognio. Entre os aspectos que devem merecer ateno dos pesquisadores, ressalte-se a seleo de estirpes adaptadas s condies locais e s culturas e cultivares usadas em cada regio, sendo necessrio testar-se as estirpes de Azospirillum, selecionando-se aquelas mais adaptadas s situaes de clima e do manejo de culturas, para possvel recomendao em um produto comercial.

Foto da implantao de experimento com Azospirillum em milho (CEC-Campinas/SP).

Foto da avaliao (sistema radicular) de experimento com Azospirillum em milho (Plo Regional de Desenvolvimento Tecnolgico dos Agronegcios da Alta Mogiana, Colina/SP).

Foto de avaliao (sistema radicular) de experimento com Bradyrhizobium em soja (Plo Regional de Desenvolvimento Tecnolgico Alta Mogiana Colina/SP).

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1 Artigo elaborado pelos pesquisadores cientficos Dra Ivana Marino Brbaro e Msc. Marcelo Ticelli da Agncia Paulista de Tecnologia dos Agronegcios - APTA - Plo Regional da Alta Mogiana, Colina/SP E-mail: imarino@apta.sp.gov.br e mticelli @apta.sp.gov.br e Dr Sandro Roberto Brancalio do Instituto Agronmico de Campinas (Centro de Solos e Recursos Ambientais) IAC, Campinas/SP. E-mail: brancaliao@iac.sp.gov.br