CAPACIDAD ANTIOXIDANTE in vitro DE LOS FLAVONOIDES TOTALES OBTENIDOS DE LAS HOJAS DE Sambucus peruviana H.B.K.

(SAUCO) PROVENIENTE DE LA CIUDAD DE HUAMACHUCO Dr. Ruiz Reyes Segundo Guillermo Mg. Venegas Casanova Edmundo Q.F. Ruidas Romero David Br. Horna Acevedo Lissette Gioanna Br. Lpez Cenizario Carlos Wilfredo

RESUMEN

En el presente trabajo de investigacin se prepar un extracto fluido con las hojas de Sambucus peruviana H.B.K., al cual se le realiz el tamizaje fitoqumico, comprobando la presencia de flavonoides. As mismo se purific y cuantific los flavonoides totales obtenidos del extracto fluido mediante el mtodo descrito por Kostennikova Z. adaptado por la Ctedra de Farmacognosia y Farmacobotnica , a 248 nm, encontrndose un porcentaje de 0.4775%

expresados como quercetina. Posteriormente se determin la capacidad antioxidante in vitro de los flavonoides totales obtenidos de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. expresado en porcentaje de captura de radicales, mediante el mtodo descrito por Brand-Williams, et;. Por cada concentracin y tiempo (1, 15, 30, 45 minutos) se determin los porcentajes de captura del radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH*). Donde se observ que mientras mayor es la concentracin, y el tiempo, mayor es este porcentaje.

Palabras claves: Sambucus peruviana, Extracto fluido, Flavonoides totales, Cuantificacin de flavonoides totales, Capacidad antioxidante in vitro

SUMMARY

This work was prepared a fluid extract from the leaves of Sambucus peruviana HBK, which was performed phytochemical screening, was verified the presence of flavonoids. So it purified and quantified the total flavonoids obtained fluid extract by the method described by Z. Kostennikova adapted by the Department of Pharmacognosy and Pharmacobotany Faculty of Pharmacy and Biochemistry at the UNT at 248 nm, was found in a amount of 0.4775% calculated as quercetin. Also determined antioxidant capacity in vitro of total flavonoids from leaves of Sambucus peruviana HBK expressed as a percentage of radical trapping by the method described by Brand-Williams, et, adapted by the Department of Pharmacognosy and Pharmacobotany, Faculty of Pharmacy and Biochemistry at the UNT. For each concentration and time (1, 15, 30, 45 minutes) were determined the percentage of capture of the free radical 2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl (DPPH *). Where it was found that the higher the concentration, and time, the greater this percentage.

Keywords: Sambucus peruviana, fluid extract, total flavonoids, Quantification of total flavonoids, antioxidant capacity in vitro

I.

INTRODUCCIN

Las enfermedades crnico-degenerativas son las principales causas de muerte en el mundo. Estos son padecimientos que se asocian regularmente con la edad, el envejecimiento y con la alimentacin entre otros factores. Dentro de este grupo de enfermedades cabe resaltar las que son un problema de salud pblica como la diabetes mellitus, hipertensin arterial, enfermedades cardiovasculares y distintos tipos de cncer. Muchas de estas enfermedades estn asociadas a procesos oxidativos, que pueden llevar a la muerte celular 1. Los procesos metablicos normales de todos los organismos que utilizan oxgeno pueden producir especies reactivas del oxgeno (EROS), se estima que cerca del 2 al 5% del oxgeno total consumido se convierte en EROS (O2 , OH , H2O2, entre otros). Quiz la fuente endgena ms importante generadora de EROS es la cadena respiratoria mitocondrial, aunque tambin pueden incluirse algunas reacciones del metabolismo de los prostanoides, la autoxidacin de las catecolaminas, la actividad de la xantina oxidasa y la activacin de fagocitos y clulas endoteliales2 En situacin patolgica se incrementan sustancialmente estas especies qumicas, provocando una alteracin orgnica conocida como estrs oxidativo caracterizado por el dao a biomolculas, vindose implicadas en la gnesis o exacerbacin de numerosos procesos en el aparato cardiovascular (aterosclerosis, cardiopata alcohlica), sistema neurolgico (enfermedad de Parkinson, Alzheimer, traumatismos craneales), aparato ocular (catarata, fibroplasia), aparato respiratorio (cncer de pulmn), rin (nefrotoxicidad por metales), artritis reumatoidea 3,4
-

Si bien los organismos vivos soportan multitudinarios factores endgenos y exgenos de estrs oxidativo, tambin poseen numerosos sistemas de defensa antioxidantes regulables, enzimticos (superxido dismutasa, la catalasa, la GSHperoxidasa, las quinonas reductasas y hemoxigenasa) y no enzimticos (Se, Zn, vitaminas C y E y carotenoides) que conforman la defensa antioxidante frente a las EROS, pero que no siempre resultan ser una barrera efectiva 5. Desde tiempos inmemorables las plantas medicinales han sido usadas por el hombre como fuente de preparados medicinales, debido a la presencia de principios activos y/o fitoconstituyentes con accin teraputica. A lo largo de la historia sus beneficios y las distintas modalidades para su empleo, se han transmitido de generacin en generacin hasta nuestros das, lo que constituye un importante recurso teraputico 6. Una alternativa vlida son los vegetales, quienes contienen amplia variedad de compuestos con capacidad de atrapar EROS: vitaminas, carotenoides, compuestos nitrogenados (alcaloides, aminas, betalanas) e incluso ciertos terpenoides; quiz los metabolitos ms reconocidos por su actividad antioxidante son los de naturaleza fenlica: cidos fenlicos, flavonoides, quinonas, cumarinas, lignanos, estilbenos y taninos5,6 Entre las innumerables plantas con estas propiedades se encuentra Sambucus peruviana (sauco), una especie arbrea que se cultiva en las partes altas de los Andes (Per, Bolivia y Norte de Argentina)7, 8 El sauco es un rbol de unos 12 metros de alto, con ramas glabras y flores blancas perfumadas, ornamental por sus flores y frutos y que crece entre los 40

3900 m.s.n.m. prefiere suelos profundos, e textura variable; tolera peligrosidad baja a media y requiere buen nivel de humedad8. El cocimiento de las flores se emplea como sudorfico y contra la viruela, as como tambin en las inflamaciones de la vejiga y la prstata. El cocimiento de las hojas se emplea como galactgeno y antisptico bucal y el de las flores es usado como antirreumtico, antisptico, depurativo y sudorfico. La infusin de la raz en hidropesa, el cocimiento de los frutos como colutorios, en las afecciones de la boca y el cocimiento de las ramas floridas contra el alcoholismo8,9,10 Los frutos son bayas esfricas o globosas, negras, de 5 6 mm. De dimetro; semillas pequeas, en nmero de 3 6 por fruto. Los frutos son jugosos, de sabor agradable y sabor agridulce; se consumen al estado fresco; sirviendo tambin para hacer mermeladas. Sus flores en infusin se utilizan contra la tos asma. Se propaga vegetativamente. Estudios fitoqumicos revelan la presencia de flavonoides que tienen propiedades antiinflamatorias8, 9. Los antioxidantes son compuestos que luchan con los radicales libres y ha sido demostrado que inhiben la oxidacin del DNA, lo cual produce algunos canceres. Los antioxidantes en general son sustancias que pueden inhibir o retardar el proceso oxidativo, interfiriendo con la iniciacin o propagacin de las reacciones en cadena de la auto-oxidacin. Por eso investigaciones recientes han puesto de manifiesto la gran importancia de las sustancias con actividad antioxidante, como los flavonoides11,12. Los flavonoides pertenecen a un grupo de compuestos naturales arreglados bajo un sistema C6-C3-C6, en el cual dos anillos aromticos llamados A y B estn unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo, que

en caso de existir es llamado anillo C. Se conoce como 10 clases de flavonoides (Chalconas, flavonas, flavonoles, flavanonas, flavanonoles, antocianidinas,

catequinas, epicatequinas, auronas, isoflavonoides, pterocarpanos, rotenoides, etc) los cuales pueden encontrarse como aglicona o bajo la forma de glicsidos con una o tres unidades de azcar, generalmente en los carbonos 3 y/o 7, siendo los azucares ms comunes la glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y arabinosa 11, 12, 13 En su relacin con el hombre, los flavonoides actan como antioxidantes naturales, es decir, tienen la capacidad de secuestrar y neutralizar los radicales libres, especies qumicas muy reactivas que fcilmente conducen a reacciones incontroladas, resultando en diversas formas de daos oxidativos sobre las molculas, organelas y diversas clulas y tejidos; causando su degeneracin, envejecimiento, prdida de su funcin y otras formas importantes de dao celular. Por lo tanto los flavonoides juegan un papel importante en la prevencin de varios procesos fisiopatolgicos asociados con el estrs oxidativo y a la presencia de radicales libres, tales como el cncer y diversas enfermedades neurodegenerativas y cardiovasculares 11, 14, 15. Existen trabajos realizados en la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo sobre la capacidad antioxidante de diversos

extractos de drogas vegetales: Rojas y Rumay. 2009 (Piper aduncum Cajamarca); Bartolo y Chvez. 2010 (Zea mays L. - Cajabamba); Daz y Rodrguez. 2010 (Glycine max L. Jan); Snchez y Vallejos. 2011 (Propleos Trujillo), donde se comprueba la capacidad antioxidante de los diferentes compuestos fenolicos.

Por todo lo expuesto anteriormente, el presente trabajo no solo pretende demostrar la actividad antioxidante in vitro de los flavonoides totales obtenidos de la hoja de Sambucus peruviana H.B.K, sino canalizar la posibilidad de su utilizacin en la prevencin de enfermedades producidas por radicales libres, contribuyendo de esta manera a fomentar estudios cientficos que demuestran su actividad antioxidante in vivo. Para el presente trabajo se plante el siguiente problema: Cul es la Capacidad Antioxidante in vitro de los Flavonoides Totales obtenidos de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) proveniente de la ciudad de Huamachuco? Objetivos: Objetivo General Determinar la capacidad antioxidante in vitro de los flavonoides totales obtenidos de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) Objetivos Especficos: Cuantificar flavonoides totales de la hoja de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) proveniente de la ciudad de Huamachuco. Determinar la capacidad antioxidante in vitro de los flavonoides totales obtenidos de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) proveniente de la ciudad de Huamachuco.

II.

MATERIAL Y MTODO

2.1. MATERIAL DE ESTUDIO Hojas de Sambucus peruviana H.B.K (sauco) proveniente del distrito de Huamachuco de la provincia de Snchez Carrin. Departamento de la Libertad. 2.2. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS 2.2.1. Materiales de Laboratorio De uso comn en el laboratorio de Farmacognosia 2.2.2. Equipos De uso comn en el laboratorio de Farmacognosia 2.2.3. Reactivos y solventes 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH*) Lab. Sigma Acido sulfrico 98% de pureza. Calidad Merck Alcohol etlico de 96 GL.

METODOLOGIA 2.2.4. Recoleccin Se recolect hojas maduras de Sambucus peruviana H.B.K (sauco) de la ciudad de Huamachuco. Provincia de Snchez Carrin. Departamento de la Libertad (7.8 sur latitud, 78.07 Oeste longitud y 3072 m.s.n.m.), de una misma poblacin, de la parte area de la planta con el fin de preservar la especie. 2.2.5. Seleccin Una vez realizada la recoleccin de la muestra se procedi a la seleccin de la materia vegetal con el objetivo de realizar una separacin de las partes deterioradas y evitar la mezcla con otra especie.

2.2.6. Identificacin taxonmica La planta medicinal seleccionada, fue llevada al Herbario Truxillensis de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificacin Taxonmica. Cdigo N 52790 (HUT). 2.2.7. Clasificacin Taxonmica La especie Sambucus peruviana, nativa de nuestro pas, de acuerdo al sistema de clasificacin filogentica de Adolph Engler publicada en la XII Edicin del Syllabus DER PFLANZENFAMILIEN del ao 1954 1964. 2.2.8. Desecacin Para evitar cualquier tipo de alteracin que pudiera afectar a la composicin de la planta, la droga debe ser convenientemente desecada. Las hojas seleccionadas se colocaron sobre papel kraft en un lugar fresco y seco durante 24 horas. Luego fueron pasadas a bolsas hechas de papel kraft y se llev a estufa a una temperatura de 40 C, durante 48 horas. 2.2.9. Molienda y Tamizacin Una vez desecado el material vegetal, se procedi a su molienda en mortero de acero hasta tamao de partcula adecuado. El material as pulverizado, se tamiz (tamao partcula 2 mm), y se almacen

adecuadamente en frascos mbar en un lugar sin humedad y luz directa, hasta su posterior utilizacin. 2.2.10. Preparacin del extracto fluido de sauco 16 Procedimiento:

Pesar 250 g de droga

y proceder a humectar, separar porciones

equivalentes a 125 g, 75 g y 50 g de droga. Colocar la porcin de 125 g previamente humectada en el percolador, macerar con alcohol de 70GL por 48 horas. Se prosigue a percolar y recoger 50 mL de extracto fluido, los cuales se separan y guardan en un frasco mbar. Se sigue recibiendo 5 porciones sucesivas de percolado de 75 mL cada una enumerndola segn el orden que se recibe. Colocar la porcin equivalente a 75 g de extracto fluido en un percolador y macerar con las porciones de 75 mL del lote anterior por 48 horas. Se percola hasta obtener 75 mL y se guarda en el frasco mbar. Se prosigue percolando 5 porciones de 50 mL de extracto fluido, cada uno enumerado. Se coloca la tercera porcin equivalente a 50 g y se macera por 48 horas con las porciones de extracto del lote anterior. Proceder a percolar hasta obtener 125 mL de extracto, los cuales se pasan al frasco mbar. La cantidad final de extracto fluido debe ser de 250 mL. 2.2.11. Tamizaje Fitoqumico del extracto fluido: Prueba de la Gota17 Procedimiento: Evaporar el solvente del extracto fluido, y el residuo redisolver en los solventes necesarios (diclorometano, etanol, agua, agua cida) para la realizacin de los ensayos. Extracto diclorometnico: Identifica compuestos de muy baja polaridad como: Esteroles, Quinonas. Extracto etanlico: Identifica compuestos de polaridad muy variada, como: Esteroides, Alcaloides, Flavonoides y Taninos.

Extracto acuoso - cido: Identifica compuestos bsicos, como: Alcaloides. Extracto acuoso: Identifica compuestos de alta polaridad, como: Flavonoides, Leucoantocianidinas, Saponinas, Taninos. 2.2.12. Cuantificacin de flavonoides totales del extracto fluido de Sambucus peruviana H.B.K. mediante espectrofotometra UVvisible 18,19 Procedimiento: Preparacin de la Solucin Patrn: Pesar 80 mg de quercetina patrn y disolver con c.s.p.100 mL de etanol a 96 GL; para obtener una concentracin de 800 p.p.m.

80 mg quercetina x Preparacin de la Solucin Blanco:

= 100 mL

Utilizar etanol a 96 GL como solucin blanco, tomar una alcuota de 3 mL aproximadamente para la calibracin del espectrofotmetro THERMO modelo GENESYS 10 UV. Preparacin de la muestra: Hidrlisis de Flavonoides Medir 20 mL del extracto fluido a un baln y llevar a reflujo con 20 mL de cido sulfrico al 10 % durante dos horas. Preparacin de la solucin problema - Pesar los cristales purificados equivalentes a 0.2g de droga y aforar a 100 mL con etanol al 96GL; de ste aforo tomar dos alcuotas de

3 mL aproximadamente, y de cada alcuota obtener 3 lecturas en el espectrofotmetro THERMO modelo GENESYS 10 UV. 2.2.13. Determinacin de la capacidad antioxidante in vitro de los flavonoides totales obtenidos de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. 20, 21,22,23,24,25 Fundamento del mtodo: El fundamento del mtodo descrito por Brand Williams et al, consiste en que el radical libre estable 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH*) tiene un electrn desapareado y es de color azul-violeta, decolorndose hacia amarillo plido por reaccin con una sustancia capturadora de radicales libres; la absorbancia es medida espectrofotomtricamente a 517 nm. La diferencia de absorbancias, permite obtener el porcentaje de captacin de radicales libres. Determinacin de los porcentajes de captura del radical DPPH* Procedimiento - En un set de 10 fiolas (problema), adicionar en cada uno de ellos 10 mL de la solucin de DPPH 0,1 mM. - Tomar alcuotas de 1 mL de cada concentracin de solucin etanlica de flavonoides totales y enfrentar a la solucin de DPPH* 0,1 Mm. - Realizar tres lecturas de cada sistema a una absorbancia de 519 nm, al minuto 1, 15, 30 y 45. - Preparar un control (que consiste en 10 mL de solucin de DPPH* 0,1 mM) y leer la absorbancia a 519 nm en el espectrofotmetro. - Como blanco se utiliza etanol de 96GL.

- Posteriormente, utilizar los valores de absorbancia de los tubos problema y la absorbancia del tubo control, para calcular el porcentaje de radicales DPPH* que sern capturados. - Calcular el porcentaje de radicales DPPH* capturados, con la siguiente frmula: % de captura de radicales DPPH* = x 100

2.3. ANLISIS ESTADSTICO DE DATOS

Los datos fueron procesados en el programa Microsoft Office Excel 2007. Caracterizados mediante parmetros estadsticos descriptivos: Media

Aritmtica ( X )26,27.

III.

RESULTADOS

Tabla N 1: Tamizaje fitoqumico del extracto fluido de Sambucus peruviana H.B.K.

ENSAYOS Dragendorf Mayer Wagner Hager Ninhidrina Baljet Borntrger LiebermannBurchard Rosenhein Shinoda Kedde Espuma Cloruro frrico Gelatina

METABOLITOS Alcaloides Alcaloides Alcaloides Alcaloides Aminocidos Lactonas Quinonas Triterpenos/esteroles Antocianidinas Flavonoides Glicsidos cardiotnico Saponinas Polifenoles Taninos Leyenda: + : Positivo : Negativo

RESULTADO + + + + + + + + + + + -

Tabla N 2: Cuantificacin de flavonoides totales expresados como quercetina de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. mediante espectrofotometra UVvisible.

Gramos de droga

Contenido de flavonoides totales 0.48 g

100 g

expresados como quercetina

Tabla N 3: Porcentajes de captura del radical DPPH* de la solucin etanlica de flavonoides totales de las hojas de Thea sinensis L. (t verde- decocto). Volumen de Solucin etanolica de flavonoides totales (mL) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Concentracin de la solucin etanolica de flavonoides totales (ug/mL) 0.008 0.016 0.024 0.032 0.040 0.048 0.056 0.064 0.072 0.080 6.36 12.73 15.27 20.78 26.37 31.09 35.49 39.16 42.68 48.92 8.48 17.79 21.83 28.83 34.04 35.57 43.19 46.05 48.73 55.28 8.79 19.20 24.36 30.18 36.19 40.69 48.41 50.82 53.67 58.30 12.82 20.24 28.13 32.63 39.32 44.12 52.40 52.46 56.86 59.73 % de captura Minuto 1 % de captura Minuto 15 % de captura Minuto 30 % de captura Minuto 45

Volumen de Muestra solucin de DPPH 0,1 mM (mL)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

Grfico N 1: Porcentajes de captura del radical DPPH* de la solucin etanlica de flavonoides totales de las hojas de Thea sinensis L. vs tiempo (t verde- decocto).
70 Muestra 1 0.008 ug/mL 60 Muestra 2 0.016 ug/mL Muestra 3 0.024 ug/mL Muestra 4 0.032 ug/mL 40 Muestra 5 0.040 ug/mL Muestra 6 0.048 ug/mL Muestra 7 0.056 ug/mL Muestra 8 0.064 ug/mL 10 Muestra 9 0.072 ug/mL Muestra 10 0 1 15 30 45 0.080 ug/mL

% de captura de radicales DPPH*

50

30

20

Tiempo (min)

Tabla N 4: Concentracin del radical DPPH* capturado por la solucin etanlica de flavonoides totales de las hojas de Thea sinensis L. (t verde- decocto).

Volumen de Muestra solucin de DPPH 0,1 mM (mL)

Volumen de Solucin etanlica de flavonoides totales (mL) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Concentracin de la solucin etanlica de flavonoides totales (ug/mL) 0.008 0.016 0.024 0.032 0.040 0.048 0.056 0.064 0.072 0.080

Concentracin Concentracin Concentracin Concentracin DPPH* capturado (g/mL) Minuto 1 2.51 4.69 5.96 7.91 10.13 12.09 13.62 15.01 16.24 18.30 DPPH* capturado (g/mL) Minuto 15 3.35 6.81 8.10 10.75 13.04 13.55 16.64 17.62 18.33 21.15 DPPH* capturado (g/mL) Minuto 30 3.40 7.21 9.33 11.67 13.99 15.52 18.24 19.05 20.37 21.99 DPPH* capturado (g/mL) Minuto 45 4.65 7.66 10.65 12.26 14.87 16.75 19.72 19.94 21.48 22.50

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

IV.

DISCUSIN

En el presente trabajo de investigacin, se logr determinar la capacidad antioxidante in vitro de flavonoides totales obtenidos de extracto fluido de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. provenientes de la ciudad de Huamachuco, con el propsito de poder darle una aplicabilidad y contribuir con la sociedad. Los extractos fluidos son extractos lquidos de materias vegetales, de tal manera preparados, que la cantidad de extracto final en volumen es equivalente a la de la droga desecada al aire en peso, o sea, la relacin peso de droga/volumen final de extracto 1 es a 1 17. En otros trminos, los principios activos contenidos en 1 mL de extracto fluido equivalen a los principios activos contenidos en 1g de droga. Antes de empezar la valoracin de un principio activo, es necesario realizar un "Screening" fitoqumico, llamado tambin marcha fitoqumica o tamizaje fitoqumico, que permita determinar cualitativamente los principales grupos de constituyentes qumicos de la planta, a partir del cual, puede orientarse las extracciones y/o el fraccionamiento de los extractos eligiendo los grupos de mayor inters para el investigador. El tamizaje fitoqumico realizado al extracto fluido (Tabla N 1) evidenci la presencia de flavonoides, mediante la reaccin de shinoda, dato que sirvi como base para continuar con la valoracin de los flavonoides totales presentes en el extracto. En la Tabla N 2 se observa que 100 g de droga contienen 0.48 g de flavonoides totales. La cuantificacin se llev acabo mediante espectrofotometra UV/Visible a 248 nm (longitud de onda de mxima absorcin) la cual fue determinada con la solucin patrn de 8 ppm.

Inicialmente es necesario investigar in vitro las propiedades antioxidantes de cualquier frmaco o sustancia natural antes de considerarlo un antioxidante. La actividad antioxidante se evalu mediante mtodo indirecto que es lo mas utilizado para cuantificar capacidad captadora de radicales libres, utilizando radicales libres coloreados y estables, que presenten una fuerte absorcin en la regin visible23,24. Si bien es cierto existen diferentes mtodos para evaluar la actividad antioxidante, ya sea in vitro o in vivo, el mtodo del DPPH in vitro permite tener una idea aproximada de lo que ocurre en situaciones complejas in vivo. Este mtodo presenta una excelente estabilidad en ciertas condiciones por presentar un radical libre que puede obtenerse directamente sin una preparacin previa, mientras que otros tienen que ser generados tras una reaccin que puede ser qumica, enzimtica o electroqumica 24,25. En la tabla N 3 y Grfico N 1, se observa que a mayor concentracin de los flavonoides totales enfrentados con la solucin de DPPH*, mayor son los porcentajes de captura de radicales de DPPH*, as como que a mayor tiempo transcurrido, este porcentaje aumenta. Encontrndose el valor mximo a los 45 minutos para la solucin de mayor concentracin de flavonoides totales (30.960 ug/mL), el cual fue de 59.37% que equivale a una concentracin de 22.50 g/mL de DPPH* capturado (Tabla N 4). Lo mencionado anteriormente corrobora otros trabajos realizados sobre capacidad antioxidante con otras especies, Bartolo et al. (2010) demostraron que la capacidad antioxidante del decocto de Zea mays L. variedad morado procedente de Cajamarca aumenta a medida que aumenta la concentracin del extracto, obteniendo un valor mximo de porcentaje de inhibicin de DPPH de 87.02 %, correspondiente

a un tiempo de 60 minutos. Rojas et al. (2009) obtuvieron un valor mximo de porcentaje de inhibicin de DPPH para un extracto hidroalcohlico de la hoja de Piper aduncum procedente de Cajamarca de 49.98 %, correspondiente a un tiempo de 30 minutos. Chvez et al. estudiaron la capacidad antioxidante in vitro de las antocianinas totales de Zea mays L. variedad morado de 5 lugares distintos del Per obteniendo los valores ms altos de porcentaje de captacin de DPPH para los lugares de Cuzco y Caraz, 32.031% y 28.766% respectivamente. Por otra parte Diaz et al.. realizaron un estudio detallado sobre la capacidad antioxidante de las isoflavonas totales obtenidas de las semillas de Glycine mas L. procedentes de Jan, expresando los resultados en eficiencia antiradicalaria la cual fue igual a 0.00250 mL x ug-1 x min-1.

V.

CONCLUSIONES

1. Se demostr con el anlisis fitoqumico preliminar la presencia de metabolitos activos tales como alcaloides, aminocidos, lactonas, triterpernos y esteroides, antocianidinas, flavonoides, saponinas en el extracto fluido de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. proveniente de la ciudad de Huamachuco 2. En el extracto fluido de la especie estudiada se encuentran flavonoides expresados como quercetina en un porcentaje de 0.48 % 3. El porcentaje de captacin de DPPH* por los flavonoides totales es mayor a medida que se aumenta la concentracin de este ltimo. 4. El porcentaje de captacin del DPPH* por los flavonoides totales se va incrementando segn incrementa el tiempo.

VI.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Yacio M., Valdez M., Paredes O. Anlisis del potencial antioxidante de Huitlacoche cosechado en diferentes etapas de desarrollo. Mxico. Universidad Autnoma de Zacatecas. 2008. [Fecha de acceso 29 enero 2012]. Disponible en: http://www.coecytcoah.gob.mx/206%5C1%5C350%5C2009%5C2%5C24%5CU AZ%20Vacio%20Adame.pdf 2. Murillo E., Lombo O., Tipe M., Mendez J. Potencial Antioxidante de Bauhinia Kalbreyeri Harms (fabaceae). Universidad del Tolima. Vol. 18(6), 65-74 (2007). [Fecha de acceso 29 enero 2012]. Disponible en:

http://www.scielo.cl/pdf/infotec/v18n6/art09.pdf 3. Rodrguez J., Menndez Y., Trujillo M. Radicales libres en la biomedicina y estrs oxidativo. Rev. Cubana Med. Milit.: 30 (1), 15-20 (2001). 4. Elejalde J. Estrs oxidativo, enfermedades y tratamientos antioxidantes, An. Med. Interna: 18 (6), 145-152 (2001). 5. Kim K. Anti-oxidant activities of the extractsfrom the herbs of Artemisia apiacea, J. Ethnopharmacol.: 85 (1), 69-72 (2003). 6. Martinez A. Flavonoides. Colombia. 2005. [Fecha de acceso 29 enero 2012]. Disponible en: http://farmacia.udea.edu.co/~ff/flavonoides2001.pdf 7. Li Pereyra E. El Futuro de los Productos Andinos en la Regin Alta y los Valles Centrales de los Andes/Plantas Medicinales [Online] Ministerio de Produccin. [Citado el 25 de junio del 2011]. Disponible en:

http://www.unido.org/fileadmin/import/69934_PERU_Informe_final_plantas_me dicinales_2vf.pdf

8. Mostacero J. Taxonoma de las fanergamas tiles del Per. 1 ed. Ed. Concytec. Per. 2002. vol. I pgs. 852 854. 9. Ponessa G. Caracterizacin antomo foliar y aspectos etnobotnicos de Sambucus nigra L. subsp peruviana. [online]. Instituto de morfologa vegetal Miguel Lillo. Acta farmacutica bonaerense. 2001. vol.20 n3 [Citado el 20 de junio del 2011]. Disponible en:

http://www.latamjpharm.org/trabajos/20/3/LAJOP_20_3_1_2_JG4ZJPRNN5.pdf 10. Ortiz H. Industrializacin de la hoja de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) preparacin de formas medicamentosas: bolsitas filtrantes y cpsulas. [online]. Sciendo. 2006. vol.9 n1. [Citado el 25 de junio del 2011]. Disponible en: http://es.scribd.com/doc/46895725/Re-Vista-Sci-en-Do 11. Miranda M. Manual de prcticas de laboratorio. Universidad de la Habana. Cuba. 2002. pgs. 70-110. 12. Kuklinski C. Farmacognosia. Ed. Omega, S.A. Barcelona, Espaa. 2000. pgs. 120-130 13. De Pascuale A. (1984). Phramcognosy. The oldest modern science. Journal of ethnopharmacology; vol 11: 1-16. 14. Martinez A. Flavonoides. Curso de farmacognosia y fitoqumica. Universidad de Antioquia. Medellin, Setiembre 2006. pgs. 7 49. 15. Garca M. Cuantificacin de fenoles y flavonoides totales en extractos naturales. [online]. Universidad Autnoma de Quertaro. [Citado el 25 de junio del 2011]. Disponible en: http://www.uaq.mx/investigacion/difusion/veranos/memorias-

2007/56_1UAQGarciaNava.pdf

16. Miranda M. Manual de prcticas de laboratorio. Universidad de la Habana. Cuba. 2002. pgs. 70-110. 17. Lock O. Investigacin Fitoqumica. Pontifica Universidad catlica del Per. Fondo Editorial. 1994. pgs. 1-9, 114-121 18. Chvez M., Eustaquio C. Identificacin preliminar de los metabolitos secundarios de los extractos acuosos y etanlicos del fruto y hojas de Morinda citrifolia L. noni y cuantificacin espectrofotomtrica de los flavonoides totales. 2010. Disponible en la Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioqumica la Universidad Nacional de Trujillo. 19. Acevedo E, De la Cruz R. Cuantificacin de flavonoides totales y taninos presentes en el decocto e infuso de hojas de Thea sinensis L. te verde y negro. 2011. Disponible en la Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioqumica la Universidad Nacional de Trujillo. 20. Murillo E., Tique M., Ospina L., Lombo O. Evaluacion preliminar de la actividad hipoglicemiante en ratones diabticos por aloxano y capacidad antioxidante invitro de extractos de Bauhinia kalbreyeri Harms. Colombia: Rev. Col. Cienc. Quim. Farm Vol. 35 (1), 2006. pg 69 [Citado el 20 de junio del 2011] Disponible en: http://www.ciencias.unal.edu.co/publicaciones/art/122/35-

N1/V35N1-04.pdf 21. Rivero A, Betancort J. Evaluacin de la Actividad Antioxidante de Polifenoles de Algas Marinas. [Prctica de Laboratorio (Prctica VI.3)]. Espaa: Universidad de Las Palmas de Gran Canaria; 2006. pg. 3. [Citada 2009 Octubre 13]. Disponible en: http://old.iupac.org/publications/cd/medicinal_chemistry/Practica-VI-3.pdf

22. Murillo E. Actividad Antioxidante de Bebidas de Frutas y de T Comercializadas en Costa Rica. Panam: Universidad de Panam. Instituto de Alimentacin y Nutricin (IANUT), 2002. pg. 8, 9. [Citada 2009 Octubre 14]. Disponible en: http://www.florida.co.cr/productos_es/estudio_antioxidantes.pdf 23. Diaz H., Rodriguez I. Capacidad Antioxidante in vitro de las Isoflavonas Totales Obtenidas de Semillas de Glycine max L. (Soya) Provenientes de la Provincia de Jan-Cajamarca. 2010. Disponible en la Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioqumica la Universidad Nacional de Trujillo. 24. Rojas M., Rumay A. Determinacin de la actividad antioxidante in vitro del extracto hidroalcoholico de las hojas de Piper aduncum procendente de la provincia de San Marcos. Departamento de Cajamarca. 2009. Disponible en la Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioqumica la Universidad Nacional de Trujillo. 25. Bartolo R., Chvez C. Determinacin de la capacidad antioxidante in vitro del decocto de la coronta de Zea mays L. (variedad morado) del Distrito de

Cajabamba, departamento de Cajamarca 2010. Disponible en la Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioqumica la Universidad Nacional de Trujillo. 26. Domenech J. Bioestadstica. Mtodos Estadsticos Para Investigadores. 1 ed. Espaa: Ed. Herder S.A.; 1980. pgs. 315-320, 617. 27. Glantz S. Bioestadstica. 6 ed. Mxico: Ed. Mc. Graw-Hill/Interamericana Editores, S.A de C.V.; 2005. pgs. 73-81.