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MINISTRIO DA EDUCAO E CULTURA MEC

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU UFPI PR-REITORIA DE PESQUISA E PS-GRADUAO PRPPG


Coordenadoria Geral de Pesquisa CGP Programa de Iniciao Cientfica Voluntria - ICV
Campus Universitrio Ministro Petrnio Portela, Bloco 06 Bairro Ininga

Cep: 64049-550 Teresina-PI Brasil Fone (86) 215-5564 Fone/Fax (86) 215-5560 E-mail: pesquisa@ufpi.br; pesquisa@ufpi.edu.br

Dados do Projeto e do Proponente


Ttulo do Projeto: AVALIAO DE PARAMETROS INFLAMATRIOS NO CURSO DA DOENA INFLAMATRIA INTESTINAL UMA ABORDAGEM EXPERIMENTAL. Coordenador do Projeto: (Centro, Departamento) Co-Orientador (Centro, Departamento) Colaboradores: (Centro, Departamento) Orientandos: (Curso) Andre Luiz dos Reis Barbosa

Marcellus Henrique Loiola Ponte de Souza (Centro de Cincias da Sade, Departamento de Farmacologia, UFC) Adriano Bezerra Sales (Biomedicina, UFPI - CMRV) Francisco das Chagas Vieira Jnior (Biomedicina, UFPI - CMRV)

Palavras Chave: - Doenas inflamatrias intestinais, Citocinas, Mediadores inflamatrios, Colite.

Obs. Mantenha a formatao original (fonte arial, tamanho 10).

1. Caracterizao do Problema (mximo de 1 pgina) Doena Inflamatria Intestinal (DII) uma terminologia aplicada para um grupo de doenas inflamatrias agudas ou crnicas recorrente no trato gastrintestinal (BAUDITZ et al., 2002). A doena de Crohn (DC) e a colite ulcerativa (RU) so as formas mais comuns das doenas inflamatrias intestinais (DII), que se caracterizam por inflamao crnica do intestino, de etiologia ainda no esclarecida. As DII ocorrem em todo o mundo e representam um srio problema de sade, pois atingem preferencialmente pessoas jovens, cursam com recindivas freqentes e admitem formas clnicas de altas gravidades (KORNBLUTH et al, 1998). Diversos mecanismos tm sido descritos como causador da doena Inflamatria Intestinal (DII). Estes fatores vo desde fatores psicognicos at os imunolgicos, sem ainda haver consenso entre os autores. O tratamento e controle ainda constituem um desafio para os pesquisadores. A necessidade de se esclarecer os mecanismos fisiopatognicos e as formas de tratamento eficaz contra as DII fez surgir modelos experimentais de doena de crohn e de colite ulcerativa em animais (ELSON, 2005). Neste contexto, os modelos experimentais contribuem para a avaliao dos fatores imunolgicos envolvidos e tentativos de elucidao dos possveis mecanismos. Os modelos animais freqentemente utilizados, so induzidos por enemas de cidos ou substncias corrosivas diludas e durante a sua evoluo, por um perodo de tempo determinado, apresentam-se histologicamente similares s DII humanas, sendo estas leses posteriormente auto-limitadas (ELSON, 2005). Em modelos experimentais de colite em ratos, trabalhos publicados mostraram que administrao retal de iodoacetamina induz a colite pelo bloqueio dos grupos sulfidricos gerando mediadores inflamatrios. Morris e colaboradores propuseram um modelo de colite difusa por acido trinitrobenzeno sulfnico (TNBS), diludo em etanol a 50%, administrado por via retal e pode ser reproduzido em 100% dos casos. A leso inicialmente produzida pela ao do lcool, um potente prinflamatrio, que quebra a barreira do colo e altera a permeabilidade. O TNBS metabolizado pelas enzimas do clon produzindo uma reao imunomediada por citocinas pr-inflamatrias e substncias citotxicas. Nesse modelo a leso pode ser aguda ou crnica dependendo da dose de TNBS a ser administrada (YAMADA et al., 1993; BOBIN-DUBIGEON et al., 2001). Por outro lado, recentemente Marks e colaboradores mostraram que pacientes com Doena de Crohn apresentavam uma diminuio da resposta inflamatria aguda quando avaliada a atividade de mieloperoxidase (MPO) e da interleucina 8 (IL-8) comparados aos pacientes normais e com colite ulcerativa que tiveram aumento de MPO e IL-8. Possivelmente, a diminuio da resposta de IL-8 (uma potente citocina quimioatraente) pode ter papel relevante na migrao de clulas contribuindo em parte para imunosupresso observada na Doena de Crohn. Alm dessa citocina outros mediadores podem participar desse mecanismo de imunosupresso da Doena de Crohn. Assim, a falha na resposta inicial do processo inflamatria da Doena de Crohn, pode determinar o desenvolvimento da inflamao crnica secundria a secreo de citocinas pr-inflamatrias (MARKS et al., 2006).

Objetivos e Metas (mximo de 1 pgina) Explicitar os objetivos e metas a serem desenvolvidas no projeto.

Objetivos: JUSTIFICATIVA E OBJETIVO Sabendo que as Doenas Inflamatrias Intestinais como Doena de Crohn e Colite Ulcerativa podem envolver eventos inflamatrio agudo e crnico em diferentes localizaes do trato gastrintestinal, e sendo essas patologias de difcil diagnstico e de etiologia desconhecida, alm de estudos na literatura mostrarem que a Doena de Crohn pode levar a diminuio da resposta inflamatria aguda (Marks et al., 2006), props-se as seguintes hipteses: Doena de Crohn diminui a resposta inflamatria aguda por falha no recrutamento de neutrfilos e na produo de citocinas em modelos animais e essa atividade no observada na colite ulcerativa nesses mesmos modelos animais. Com o propsito de responder essas hipteses foram propostos os seguintes objetivos: Geral Avaliar se o desenvolvimento experimental da doena de Crohn induzida por TNBS e da colite ulcerativa induzida por iodoacetamida altera o processo inflamatrio agudo em ratos. Especficos: Avaliar no desenvolvimento experimental da doena de Crohn e da colite ulcerativa o edema de pata induzido por carragenina e dextrana. o Estudar o efeito do desenvolvimento experimental da doena de Crohn e da colite ulcerativa na migrao de neutrfilos induzida por carragenina. o Investigar se o desenvolvimento experimental da doena de Crohn e da colite ulcerativa altera a capacidade de produzir citocinas (TNF- , IL-1 e IL-10). Metas:

De acordo com o objetivo do trabalho, esperamos elucidar a fisiopatologia das doenas inflamatrias intestinais, respondendo se existe ou no um papel da inibio da resposta inflamatria aguda na gnese destas doenas. Esperamos elucidar o possvel mecanismo de ao pelo a qual a colite induzida por TNBS (modelo e Crohn), leva a uma inibio do processo inflamatrio agudo, que poder propor nova abordagem teraputica para o tratamento das doenas inflamatrias intestinais (DII). Formao de recursos humanos no CMRV.

Metodologia e Estratgia de Ao (mximo de 1 pgina) ANIMAIS Sero utilizados ratos Wistar, machos, pesando 180 - 220 gramas, provenientes do Biotrio Central do Campus Ministro Petronio Portela da Universidade Federal do Piaui (UFPI). Os animais sero mantidos com gua e alimentao ad libitum. Dezoito a vinte e quatro horas antes, em todos os experimentos, os animais sero colocados em jejum, mas com livre acesso gua. Todos os tratamentos e procedimentos cirrgicos realizados estaro de acordo com o Guia de cuidados em uso de animais de laboratrio do National Institutes of Heath (Bethesda, MD, USA) e o projeto ser encaminhado para o Comit de tica em pesquisa animal da UFPI. As colites sero induzidas nesses animais por iodoacetamida 3% ou TNBS por via transanal com o auxilio de um cateter n 6. EFEITO DA COLITE ULCERATIVA INDUZIDA POR IODOACETIMIDA OU DOENA DE CROHN INDUZIDA POR CIDO TRINITROBENZENO SULFNICO (TNBS) SOBRE O EDEMA DE PATA INDUZIDO POR CARRAGENINA (500g/pata) OU DEXTRAN (500 g/pata). Carragenina (Cg) ou dextran (DXT) sero administrados intraplantarmente (ipl.) na dose de 500 g/pata no volume de 0,1 ml.O volume da pata traseira direita de cada rato ser medido usando pletismmetro (UGO BASILI) antes da injeo do estmulo inflamatrio (tempo zero) e aps o estimulo O volume da pata ser avaliado 1, 2, 3 e 4 horas aps a injeo da Cg e 30,1 ,2, 3 e 4 horas aps a injeo do DXT. O edema ser calculado como a variao de volume, isto , a diferena entre o volume em um determinado tempo aps o estmulo e o volume da pata antes do estmulo inflamatrio (tempo zero). MIGRAO DE NEUTRFILOS PARA A CAVIDADE PERITONEAL DE RATOS INDUZIDA POR CARRAGENINA. Com o objetivo de se avaliar a migrao de neutrfilos, sero injetados intraperitonealmente, por cavidade de cada animal, 500 g de carragenina diludos em 1 mL de salina estril ou apenas 1 mL de salina estril. Aps quatro horas, a cavidade peritoneal ser lavada com 10 mL da soluo de PBS heparinizado. As contagens total e diferencial sero feitas de acordo com o mtodo descrito por Souza & Ferreira (1985). DOSAGEM DE TNF- , IL-1 E IL-10. Fragmentos das peles das patas onde se induziu o edema de pata por carragenina sero retirados rapidamente para dosagem de TNF- , IL-1 e IL-10. Os fragmentos sero adicionados em um tampo inibidor de protease (500 L de tampo para cada 100 mg de tecido) e depois processado em um homogenizador de tecido e centrifugado a 3000 rpm a 4 C por 10 minutos. A dosagem das citocinas ser medida por espectrofotometria 490 nm de absorbancia e os resultados sero expressos como mdia EPM da quantidade de TNF , IL - 1 e IL-10 em pg/ml (TAVARES-MURTA, et al., 1998).

Resultados e Impactos Esperados (mximo de 1 pgina)

De acordo com o objetivo do trabalho, esperamos elucidar a fisiopatologia das doenas inflamatrias intestinais, respondendo se existe ou no um papel da inibio da resposta inflamatria aguda na gnese destas doenas. Propor teraputica para as doenas inflamatrias intestinais, otimizando a polifarmacia e uso indiscriminado de medicamento durante o protocolo de tratamento dessas doenas. Propor o possvel mecanismo de ao pelo a qual a colite induzida por TNBS (modelo e Crohn), leva a uma inibio do processo inflamatrio agudo, levando a uma cronicidade das doenas inflamatrias intestinais (DII). Formao de recursos humanos no CMRV. E por ltimo esperamos ainda a publicao de pelo menos 1 (um) manuscrito em revistas indexadas QUALIS A.

A maioria das pesquisas pr-clnicas e clnicas em inflamao do trato intestinal focam nos mecanismos/mediadores envolvidos e como agentes farmacolgicos podem resolver este processo. Uma das dificuldades enfrentadas pelos grupos de pesquisadores a descoberta de mecanismos fisiopatolgicos especficos que levem ao aparecimento das doenas. O alvo teraputico especifico diminui o risco aos efeitos colaterais e assim promove uma teraputica eficaz e com menos efeitos colaterais aos pacientes. Alem de diminuir o risco aos efeitos colaterais, a terapia especifica reduz custos dos servios de sade minimizando os gastos do governo e aumentando a utilizao de recursos que seriam gastos por terapias inespecficas. Nesse projeto buscaremos delinear os possveis mecanismos fisiopatolgicos dessas doenas com o objetivo de propor uma teraputica eficaz e que gere menos custos para a sade publica e principalmente para os pacientes acometidos por essas patologias.

Riscos e Dificuldades (mximo de 1 pgina) A principal dificuldade para realizao do presente projeto, ser a utilizao dos animais e de

alguns equipamentos para a execuo dos experimentos. Uma provvel alternativa para esse problema ser a manuteno e auxlio das colaboraes que j existem com os laboratrios do CMRV e laboratorios de outras instituies, como o Laboratrio de Farmacologia da Inflamao e do Cncer (LAFICA) da Universidade Federal do Cear, na qual estou concluindo o Doutorado.

Melhores prticas do grupo no tema ou rea proposta (mximo de 1 pgina) O projeto fruto da parceria com o grupo de farmacologia da inflamao e do cncer do

departamento de Fisiologia e Farmacologia da UFC, na pessoa do professor Marcellus Henrique Loiola Ponte de Souza, que meu orientador no doutorado em Farmacologia e do professor Ronaldo de Albuquerque Ribeiro que pesquisador 1A do CnPQ. Esse grupo um dos maiores e mais produtivos do Brasil na rea de farmacologia da inflamao do trato gastrintestinal. Essa parceria garantir parte do suporte tcnico necessrio para a realizao do projeto, alm de possveis intercmbios aos alunos de graduao do Campus Ministro Reis Velloso, possibilitando um crescimento tcnico-cientfico de ambas as instituies. No campus Ministro Reis Velloso estamos firmando parceria com o Laboratrio de Clulas e Molculas, um grupo de pesquisa em Farmacologia das Doenas do tubo digestivo, na qual dispomos da infra-estrutura bsica para iniciarmos o projeto. Este projeto, ento, ajudar a ampliao de um grupo bastante produtivo do Norte e Nordeste, e a formao de novos recursos humanos e produtos voltados para uma rea de notvel importncia e carncia no Brasil, a farmacologia do trato gastrointestinal. Alm disso, no edital de Ao Transversal CAMPI REGIONAIS 03/2007, junto a FINEP foi aprovado a criao do Laboratrio de Biotecnologia do Ncleo de Pesquisa do Baixo Parnaba, o qual dar suporte na matriz de expresso gnica, uma vez que foram aprovados equipamentos como HPLC e Real TimePCR.

Plano (s) de trabalho do (s) bolsista (s)

Ttulo do Projeto AVALIAO DE PARAMETROS INFLAMATRIOS NO CURSO DA DOENA INFLAMATRIA INTESTINAL UMA ABORDAGEM EXPERIMENTAL. Aluno: Adriano Bezerra Sales Orientador: Andre Luiz dos Reis Barbosa O bolsista ser responsvel, junto com o orientador, pela realizao dos experimentos e coleta de dados referente as colites induzidas por Iodoacetamida ou TNBS em ratos. Assim, este bolsista ser responsvel pela avaliao macroscpica e microscpica dos tecidos lesionados. Sero confeccionadas laminas, onde a partir da cofeco dessas laminas o aluno ir avaliar os escores microscpicos de leso. Alem de toda a analise histolgica o aluno tambm contribuir com os experimentos iniciais, como por exemplo, os edemas de pata induzidos por carragenina e dextran. O bolsista Adriano ir participar ativamente na realizao do projeto, com posterior discusso com o orientador e demais pesquisadores. Alm disso, ser orientado nos mais diversos aspectos favorveis ao seu crescimento profissional e cientfico. O aluno ser orientado para a execuo das seguintes etapas: ESTUDOS TERICOS O bolsista ir realizar estudos tericos que iro fundamentar a pesquisa e aumentar seu conhecimento cientfico. A reviso bibliogrfica ser realizada, principalmente, a partir de manuscritos em revistas especializadas. Atividades: a) levantamento da bibliografia sobre o objeto de pesquisa; b) identificao dos fundamentos tericos que daro suporte pesquisa, atravs de discusses com o orientador e leituras individualizadas e coletivas; c) redao do suporte terico a partir da leitura e das discusses com o orientador e demais especialistas na rea. REALIZAO DE EXPERIMENTOS O bolsista ser responsvel, junto com o orientador, pela realizao dos experimentos e coleta de dados, conforme prev o Projeto de pesquisa. Atividades: a) elaborao de experimentos e coleta de dados conjuntamente com o orientador, tendo como suporte os objetivos e as questes de pesquisa; ANLISE DOS DADOS Tem por objetivo a anlise dos dados coletados. Atividades: a) de posse dos dados coletados pelo bolsista, se proceder anlise dos mesmos confrontando as informaes obtidas e sistematizando-as. ELABORAO DO RELATRIO FINAL Nesta ltima etapa ser elaborado e redigido o Relatrio final que ser apresentado no Seminrio de Iniciao Cientfica. Atividades: a) elaborao do Relatrio final, tendo como referenciais os objetivos do projeto, as questes de pesquisa, o referencial bibliogrfico e os dados coletados e analisados; b) elaborao de artigo para publicao; c) elaborao de material e apresentao dos resultados no Seminrio de Iniciao Cientfica.

CRONOGRAMA DE TRABALHO INDIVIDUALIZADO Ms 01 e 02 (agosto e setembro)/2009 - Encontro com orientador; - Reviso Bibliogrfica; - Estabelecimento e padronizao das tcnicas de histologia; Ms 03 e 04 (outubro e novembro)/2009 - Estudo do efeito das colites no processo inflamatrio agudo; - Reviso Bibliogrfica; Ms 05 e 06 (dezembro e janeiro)/2009-2010 - Determinao dos escores macroscpicos e microscpicos de leso. - Anlise e discusso dos dados com orientador. Ms 07 e 08 (fevereiro e maro)/2010 - Avaliao da resposta edematognica induzida por carragenina em animais com ou sem colite; - Reviso Bibliogrfica; - Anlise e discusso dos dados com orientador. Ms 09 e 10 (abril e maio)/2010 - Avaliao da resposta edematogenica induzida por dextran em animais com ou sem colite. - Reviso Bibliogrfica; - Anlise e discusso dos dados com orientador. - Resumo para seminrios, congressos etc. - Elaborao de artigo para publicao. Ms 11 e 12 (junho e julho)/2010 - Reviso Bibliogrfica; - Organizar pster para apresentao em Encontros, Jornadas e Congressos. - Divulgao em Congressos, Jornadas e Seminrios de Iniciao Cientfica. - Discusso dos resultados e elaborao do relatrio final

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Ttulo do Projeto AVALIAO DE PARAMETROS INFLAMATRIOS NO CURSO DA DOENA INFLAMATRIA INTESTINAL UMA ABORDAGEM EXPERIMENTAL. Aluno: Francisco das Chagas Vieira Jnior Orientador: Andre Luiz dos Reis Barbosa A bolsista ser responsvel, junto com o orientador, pela realizao dos experimentos e coleta de dados referente a migrao de clulas e dosagem de citocinas pr e pr-inflamatorias. Alm disso, os dois bolsistas atuaro em conjunto, ampliando seus conhecimentos. A bolsista ir participar ativamente na realizao do projeto, com posterior discusso com o orientador e demais pesquisadores. Alm disso, ser orientado nos mais diversos aspectos favorveis ao seu crescimento profissional e cientfico. O aluno ser treinado para a realizao e execuo das seguintes etapas: ESTUDOS TERICOS O bolsista ir realizar estudos tericos que iro fundamentar a pesquisa e aumentar seu conhecimento cientfico. A reviso bibliogrfica ser realizada, principalmente, a partir de manuscritos em revistas especializadas. Atividades: a) levantamento da bibliografia sobre o objeto de pesquisa; b) identificao dos fundamentos tericos que daro suporte pesquisa, atravs de discusses com o orientador e leituras individualizadas e coletivas; c) redao do suporte terico a partir da leitura e das discusses com o orientador e demais especialistas na rea. REALIZAO DE EXPERIMENTOS O bolsista ser responsvel, junto com o orientador, pela realizao dos experimentos e coleta de dados, conforme prev o Projeto de pesquisa. Atividades: a) Elaborao de experimentos de migrao de clulas para o peritnio, com posterior elaborao dos dados e construo de grficos quantitativos. b) Elaborao e padronizao da tcnica de dosagem das citocinas em estudo ANLISE DOS DADOS Tem por objetivo a anlise dos dados coletados. Atividades: a) de posse dos dados coletados pelo bolsista, se proceder anlise dos mesmos confrontando as informaes obtidas e sistematizando-as. ELABORAO DO RELATRIO FINAL Nesta ltima etapa ser elaborado e redigido o Relatrio final que ser apresentado no Seminrio de Iniciao Cientfica. Atividades: c) elaborao do Relatrio final, tendo como referenciais os objetivos do projeto, as questes de pesquisa, o referencial bibliogrfico e os dados coletados e analisados; d) elaborao de artigo para publicao; e) elaborao de material e apresentao dos resultados no Seminrio de Iniciao Cientfica.

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CRONOGRAMA DE TRABALHO INDIVIDUALIZADO Ms 01 e 02 (agosto e setembro)/2009 - Encontro com orientador; - Reviso Bibliogrfica; - Estabelecimento e padronizao das tcnicas experimentais a serem executadas pelo bolsista ICV; Ms 03 e 04 (outubro e novembro)/2009 - Estudo do efeito das doenas inflamatrias intestinais sobre a migrao de clulas para o peritnio de ratos com ou sem colite. - Reviso Bibliogrfica; Ms 05 e 06 (dezembro e janeiro)/2009-2010 - Estudo do efeito das colites sobre a produo da IL-1; - Anlise e discusso dos dados com orientador. Ms 07 e 08 (fevereiro e maro)/2010 - Estudo do efeito das colites sobre a produo e efeito do TNF-; - Anlise e discusso dos dados com orientador. Ms 09 e 10 (abril e maio)/2010 - Estudo do efeito das colites sobre a produo e efeito da IL-10; - Reviso Bibliogrfica; - Anlise e discusso dos dados com orientador. - Elaborao de artigo para publicao. Ms 11 e 12 (junho e julho)/2010 - Organizar pster para apresentao em Congressos. - Discusso dos resultados e elaborao do relatrio final - Elaborao de artigo para publicao.

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Cronograma de Execuo

Ano: 2009 Jan Padronizao das tcnicas e validao dos escores de leso Avaliao dos escores microscpicos e macroscpicos de leso Realizao dos experimentos de edema de pata Ano: 2010 Jan Contagem total e diferencial de leuccitos para a cavidade peritoneal de ratos Validao e padronizao do mtodo de dosagem de citocinas Dosagem de citocinas (IL-1, IL-10 e TNF- Escrita de Artigos Relatrio Final e Apresentao dos Resultados Fev Mar Abril Mai Jun Jul Ago Set Out Nov Dez Fev Mar Abril Mai Jun Jul Ago Set Out Nov Dez

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Referncias Bibliogrficas Relacionar as obras da literatura citadas, de acordo com as normas da ABNT.

BAUDITZ, J.; WEDEL, S.; LOCHS, H. Thalidomide reduces tumour necrosis factor alpha and interleukin 12 production in patients with chronic active Crohn's disease. Gut. 50(2):196-200, 2002.

BOBIN-DUBIGEON, C. ; COLLIN, X. ; GRIMAUD, N. ROBERT, J.M. ; LE BAUT, G. ; PETIT, J.Y. Effects of tumour necrosis factor-alpha synthesis inhibitors on rat trinitrobenzene sulphonic acid-induced chronic colitis. Eur J Pharmacol. Nov 9;431(1):103-10, 2001.

ELSON, C.O.; CONG, Y.; MCCRACKEN, V.J.; DIMMITT, R.A.; LORENZ, R.G.; WEAVER, C.T. Experimental models of inflammatory bowel disease reveal innate, adaptive, and regulatory mechanisms of host dialogue with the microbiota. Immunol Rev. 206(1):260-76, 2005.

MARKS, D. J. B.; HARBORD, M. W. N.; MACALLISTER, R.; RAHMAN, F. Z.; YOUNG, J.; AL-LAZIKANI, B.; LEES, W.; NOVELLI, M. S. B.; SEGAl, A. W. Lancet, v. 367, p. 66878, 2006. KORNBLUTH, A. Cyclosporine in inflammatory bowel disease. Curr Gastroenterol Rep. 1(6):486-90, 1999.

TAVARES-MURTA, B.M.; CUNHA, F.Q.; FERREIRA, S.H.

The intravenous administration of tumor

necrosis factor alpha, interleukin 8 and macrophage-derived neutrophil chemotactic factor inhibits neutrophil migration by stimulating nitric oxide production. Br J Pharmacol. 124(7):1369-74, 1998.

SOUZA, G.E.P.; FERREIRA, S. H. Blockade by antimacrophage serum of the migration of PMN neutrophils into the inflamed peritoneal cavity. Agents Actions, v. 17, p.97103, 1985. SOUZA, G.E.P.; CUNHA, F Q.; MELO, R.; FERREIRA, S.H. Neutrophil migration induced by inflammation stimuli is reduced by macrophage depletion. Agents and Actions. v. 24 (3/4), p. 377, 1988.

YAMADA, T.; SARTOR, R.B.; MARSHALL, S.; SPECIAN, R.D.; GRISHAM, M.B. Mucosal injury and inflammation in a model of chronic granulomatous colitis in rats. Gastroenterology. 104(3):759-71,1993.

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Justificativa de renovao da orientao em continuidade ao projeto.

Tendo em vista a continuidade desse projeto que foi iniciado em Julho de 2009, irei submet-lo a ICV 2010/2011. Posteriormente ao envio do relatrio parcial que foi submetido em Maro de 2010, iniciaram-se vrios experimentos ainda na rea de dor com intuito de confirmar se a modulao da via analgsica depende da via NO/cGMP/K+ATP/PKG, da via dos endocanabinides (receptores CB1 e CB2) ou da via opiide tanto na hipernocicepo induzida por carragenina quanto por PGE2. Devido a necessidade de mais tempo para a realizao desses experimentos e a limitao encontrada na aquisio de animais que so cedidos pela Universidade Federal do Cear pretendo dar continuidade aos trabalhos. Atravs dos achados at o momento, foram escritos e submetidos trs resumos ao congresso brasileiro de biomedicina que vai ser realizado em Recife. Segue em anexo o novo cronograma de execuo dos bolsistas Adriano Bezerra Sales e Francisco das Chagas Vieira Junior assim como a metodologia dos protocolos experimentais.

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Cronograma de execuo 2010/2011 Adriano Bezerra Sales


Ano: 2010 Jan Padronizao dos experimentos de hiperalgesia (PGE) cGMP/K+ATP Padronizao dos experimentos de hiperalgesia (PGE)-via dos endocanabinoides Padronizao dos experimentos de hiperalgesia (PGE)-via dos opioides endogenos Ano: 2011 Jan Realizao dos experimentos de hiperalgesia (PGE) cGMP/K+ATP Realizao dos experimentos de Hiperalgesia (PGE)-via dos endocanabinoides Realizao dos experimentos de Hiperalgesia (PGE)-via dos opioides endogenos Escrita de Artigos Relatrio Final e Apresentao dos Resultados Cronograma de execuo 2010/2011 Francisco das Chagas Vieira Junior. Ano: 2010 Jan Padronizao dos experimentos de hiperalgesia (Carragenina) -cGMP/K+ATP Padronizao dos experimentos de hiperalgesia (Carragenina)via dos endocanabinoides Padronizao dos experimentos de hiperalgesia (Carragenina)via dos opioides endogenos Fev Mar Abril Mai Jun Jul Ago Set Out Nov Dez Fev Mar Abril Mai Jun Jul Ago Set Out Nov Dez Fev Mar Abril Mai Jun Jul Ago Set Out Nov Dez

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Ano: 2011 Jan Realizao dos experimentos de hiperalgesia (Carragenina) -cGMP/K+ATP Realizao dos experimentos de Hiperalgesia (Carragenina)via dos endocanabinoides Realizao dos experimentos de Hiperalgesia (Carragenina)via dos opioides endogenos Escrita de Artigos Relatrio Final e Apresentao dos Resultados Fev Mar Abril Mai Jun Jul Ago Set Out Nov Dez

MATERIAIS E METODOS (COMPLEMENTO DO PROJETO INICIAL) AVALIAO DO POTENCIAL ANTINOCICEPTIVO DAS COLITES INDUZIDA POR TNBS NA HIPERNOCICEPO INDUZIDA POR PGE2 OU CARRAGENINA VIA DO NO/cGMP/PKG. Trs dias aps a induo das colites ser feito a avaliao da hipernocicepo induzida por carragenina (500g/pata; 100l) ou PGE2 (400ng/pata; 50l) em animais com ou sem colite. Para isso, ser utilizado o analgesmetro digital (Von Frei. Insight). Nesse teste ser feita a medida basal (antes do estmulo) 3 e 4 horas posteriormente o estmulo lgico. Com o objetivo de verificar a participao da via NO/cGMP na antinocicepo da colite o ODQ (8g/pata; 50l) ou KT5823(1.5g/pata) sero administrados 30 minutos antes da injeo da PGE2 ou da Carragenina na pata direita de animais com ou sem colite. O resultado ser expresso como o delta da fora em gramas, isto , a diferena entre a fora-grama antes do estmulo inflamatrio (basal) e posteriormente esse estmulo (3 e 4hs). AVALIAO DO POTENCIAL ANTINOCICEPTIVO DAS COLITES INDUZIDA POR TNBS NA HIPERNOCICEPO INDUZIDA POR PGE2 OU CARRAGENINA VIA DOS CANAIS DE POTASSIO ATP DEPENDENTES. Trs dias aps a induo das colites ser feito a avaliao da hipernocicepo induzida por carragenina (500g/pata; 100l) ou PGE2 (400ng/pata; 50l) em animais com ou sem colite. Para isso, ser utilizado o analgesmetro digital (Von Frei. Insight). Nesse teste ser a medida basal (antes do estmulo) 3 e 4 horas posteriormente o estmulo lgico. Com o objetivo de verificar a participao dos canais de potssio na antinocicepo da colite a Glibenclamida

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(160g/pata; 50l) ser administrada 30 minutos antes da injeo da PGE2 ou da Carragenina na pata direita de animais com ou sem colite. O resultado ser expresso como o delta da fora em gramas, isto , a diferena entre a fora-grama antes do estmulo inflamatrio (basal) e posteriormente esse estmulo (3 e 4hs).

AVALIAO DO POTENCIAL ANTINOCICEPTIVO DAS COLITES INDUZIDA POR TNBS NA HIPERNOCICEPO INDUZIDA POR PGE2 OU CARRAGENINA VIA DOS OPIOIDES. Trs dias aps a induo das colites ser feito a avaliao da hipernocicepo induzida por carragenina (500g/pata; 100l) ou PGE2 (400ng/pata; 50l) em animais com ou sem colite. Para isso, ser utilizado o analgesmetro digital (Von Frei. Insight). Nesse teste ser a medida basal (antes do estmulo) 3 e 4 horas posteriormente o estmulo lgico. Com o objetivo de verificar a participao dos opioides na antinocicepo da colite, Naloxano (1g/pata) ser administrado 30 minutos antes da injeo da PGE2 ou da Carragenina na pata direita de animais com ou sem colite. O resultado ser expresso como o delta da fora em gramas, isto , a diferena entre a fora-grama antes do estmulo inflamatrio (basal) e posteriormente esse estmulo (3 e 4hs). AVALIAO DO POTENCIAL ANTINOCICEPTIVO DAS COLITES INDUZIDA POR TNBS NA HIPERNOCICEPO INDUZIDA POR PGE2 OU CARRAGENINA VIA DOS ENDOCANABINIDES. Trs dias aps a induo das colites ser feito a avaliao da hipernocicepo induzida por carragenina (500g/pata; 100l) ou PGE2 (400ng/pata; 50l) em animais com ou sem colite. Para isso, ser utilizado o analgesmetro digital (Von Frei. Insight). Nesse teste ser a medida basal (antes do estmulo) 3 e 4 horas posteriormente o estmulo lgico. Como objetivo de verificar a participao da via dos endocanabinoides na antinocicepo da colite, os animais com ou sem colites foram pr-tratados com os antagonistas seletivos dos receptores CB1 e CB2, respectivamente, AM251 e AM630, 30 minutos antes da injeo da PGE2 ou da Carragenina na pata direita de animais com ou sem colite. O resultado ser expresso como o delta da fora em gramas, isto , a diferena entre a fora-grama antes do estmulo inflamatrio (basal) e posteriormente esse estmulo (3 e 4hs).

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