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Procedimento Operacional Padro DOSAGEM DA TGO

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TGO
FUNDAMENTO A TGO catalisa a transferncia do grupo amina da aspartato para o cetoglutarato com formao de glutamato e oxaloacetato. O oxaloacetato formado reage com a 2-4-dinitrofenilhidrazina formando a hidrazona que adquire colorao mxima pela adio de hidrxido de sdio. A intensidade de colorao proporcional atividade enzimtica da amostra. APLICAO CLNICA Juntamente com outras enzimas, a dosagem da TGO mais empregada para o diagnstico de doenas hepticas, cardacas. Valores elevados dessa enzima podem ser encontrados em diversas patologias, como: hepatites, cirrose heptica, necrose heptica, metstase heptica, drogas hepatotxicas, processo infiltrativo heptico (tumor), infarto do miocrdio, operaes cardacas, angioplastia e cateterizao cardaca, pancreatite aguda, trauma muscular esqueltico, queimaduras graves, anemia hemoltica aguda, distrofia muscular progressiva, mononucleose infecciosa com hepatite, doenas musculares primrias (miopatia, miosite), doena renal aguda e convulses recentes. AMOSTRA Preparo do Paciente Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas. Amostras utilizadas Soro, Plasma (EDTA, Heparina) e Lquor. Estabilidade e armazenamento da amostra A atividade enzimtica estvel por 4 dias entre 2-8C. Volume ideal utilizado para anlise (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise). Volume mnimo utilizado para anlise (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise). Critrios para rejeio da amostra No utilizar amostras hemolisadas. Fazer referncia ao manual ou POP de coleta, separao e distribuio de material. REAGENTE UTILIZADO TGO CAT. 352 MS 80022230149

GOLD ANALISA DIAGNSTICA LTDA CNPJ 03.142.794/0001-16 Av. Nossa Senhora de Ftima, 2363 Belo Horizonte MG Brasil Farmacutico Responsvel: Homero Jackson de Jesus Lopes

CRF MG - 2010

Componentes do kit 1- Padro Contm Piruvato de sdio 2 mmol/L. Conservar entre 2-8C. 2-TGO-Substrato - Contm tampo pH 7,4; cido L-asprtico 100 mmol/L; cido alfa-cetogutrico 2 mmol/L e azida sdica 15,4 mmol/L. Conservar entre 2-8C. 3- Reagente de Cor - Contm 2,4- dinitrofenilhidrazina 1 mmol/L e cido clordrico 1 mol/L. Conservar entre 2-8C. 4- NaOH-Estoque - Contm hidrxido de sdio 1,25 mol/L. Conservar na temperatura ambiente. Estabilidade Os reagentes so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo do produto e na caixa quando conservados na temperatura recomendada, bem vedados e se evite a contaminao durante o uso. O Padro (1), o TGO Substrato (2) e o Reagente de Cor (3) devem ser mantidos na temperatura ambiente. Conservar o NaOH Estoque (4) na temperatura ambiente.

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Precaues e Cuidados Especiais 1- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra biolgica. 2- Recomendamos o uso das Boas Prticas de Laboratrios Clnicos para a execuo do teste 3- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes. 4- O TGO-Substrato (2) contm azida sdica como conservante. No ingerir ou aspirar. Evitar contato com a pele e mucosa. Txico. 5- O Reagente de Cor (3) e o reagente NaOH-Estoque (4) so corrosivos. Manipular com cuidado para evitar queimaduras. 6- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais, estaduais e federais de preservao do meio ambiente. Preparo do NaOH de Uso Transferir quantitativamente o contedo do frasco de NaOH-Estoque (4) para um balo volumtrico de 500 mL e completar o volume com gua destilada ou deionizada livre de CO2. Homogeneizar bem e armazenar em frasco plstico na temperatura ambiente. Estvel 12 meses. EQUIPAMENTOS Procedimento Tcnico Manual Espectrofotmetro (leitura 490 - 540 nm); Banho Maria ou termostatizador na temperatura constante de 370C; Tubos e Pipetas; Cronmetro; Papel milimetrado ou Semi-log para traar curva de calibrao. Procedimento Tcnico Automatizado Citar nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento; Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento Tcnico Alternativo Citar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Indicar as possveis diferenas quando os procedimentos manuais substiturem os procedimentos automatizados. Procedimento em Analisadores Automticos Mencionar o manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. CLCULOS ATRAVS DA CURVA DE CALIBRAO A metodologia de Reitman-Frankel para a dosagem das transaminases (TGO E TGP) no obedece a Lei de Lambert-Beer, isto , as Unidades RF de TGO ou TGP/mL no so diretamente proporcionais atividade enzimtica. Portanto, no possvel usar o mtodo do fator para clculo das unidades, sendo obrigatrio a preparao da curva de calibrao. * Unidades Reitman-Frankel/mL = U RF/mL

Curva de Calibrao Tcnica: Tomar 5 tubos e seguir as instrues abaixo. * Volumes indicados nas tabelas = mL

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Tubo Padro (1) TGO Substrato (2) gua deionizada Reagente de cor

1 ----0,50 0,10 0,50

2 0,05 0,45 0,10 0,50

3 0,10 0,40 0,10 0,50

4 0,15 0,35 0,10 0,50

5 0,20 0,30 0,10 0,50

Misturar e deixar na temperatura ambiente por 20 minutos.


Tubo NaOH de Uso 1 5 2 5 3 5 4 5 5 5

Homogeneizar bem. Esperar 5 minutos na temperatura ambiente. Determinar as absorbncias (A) ou transmitncias (T%) em 505 nm ou filtro verde (490 a 540), acertando o zero com gua destilada. A cor estvel por 60 minutos. Traado da Curva de Calibrao Traar a curva de calibrao correlacionando as leituras obtidas com os valores em URF/mL, expressos na tabela abaixo. Para leituras fotomtricas em absorbncia usar papel linear (milimetrado) e para leituras em transmitncia (T%) usar papel monolog (semilog).
Tubo TGO (U/mL) 1 zero 2 24 3 61 4 114 5 190

PROCEDIMENTO Procedimento Manual DOSAGEM DO TESTE Tcnica: Tomar 1 tubo e seguir as tabelas:
Tubo TGO-Substrato Teste 0,25 mL

Incubar em banho-maria a 37 C por 2 minutos. O nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio.
Tubo Amostra Teste 0,1 mL

Misturar. Incubar em banho-maria a 37 C exatamente por 30 minutos.

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Tubo Reagente de Cor

Teste 0,25 mL

Misturar e esperar 20 minutos na temperatura ambiente.


Tubo NaOH de Uso Teste 2,5 mL

Homogeneizar. Esperar 5 minutos na temperatura ambiente. Fazer as leituras fotomtricas (Absorbncia ou Transmitncia %) em 505 nm ou filtro verde (490 a 540), acertando o Zero com gua destilada. A cor estvel por 60 minutos. CLCULOS Obter o valor de TGO usando a Curva de Calibrao (Ver Linearidade). RESULTADOS Converso de Unidades (U RF/mL para SI): U/L = U RF/mL x 0,482 CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de catlogo. Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados. Controle Interno Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits. Citar a utilizao de soros controles (nvel normal cdigo --------- e patolgico cdigo -------) nas anlises realizadas juntamente com a freqncia da utilizao dos mesmos. Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e reagentes. Citar POP para controle interno. Controle Externo Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade : PNCQ-SBAC e/ou PELM-SBPC Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. VALORES DE REFERNCIA Soro ou plasma: 4 a 36 URF/mL ou 1,9 a 17,3 U/L Estes valores devem ser usados como uma orientao. recomendado que cada laboratrio estabelea seus prprios valores de referncia. SIGNIFICADO CLNICO A aspartato aminotransferase (AST) ou transaminase glutmico-oxalactica (GOT ou TGO) uma enzima encontrada em concentrao muito alta no msculo cardaco, no fgado, msculos esquelticos e em menor concentrao nos rins e pncreas. Nas clulas hepticas, a AST localiza-se no citoplasma (40%) e na mitocndria (60%). Qualquer leso tissular ou doena afetando o parnquima heptico liberar uma maior quantidade da enzima para a corrente sangunea, elevando os nveis sricos da AST. Sempre que ocorrer uma leso hepatocelular de qualquer etiologia haver uma grande liberao da enzima AST para a corrente sangunea, elevando seus nveis sricos. Na hepatite virtica aguda, os nveis de AST encontram-se quase sempre elevados em mais de 10 vezes o limite superior da faixa de referncia e em alguns casos ultrapassam a 20 vezes esse limite superior de normalidade. Entretanto, dentro de uma a duas semanas, os valores de AST diminuem bastante podendo cair para a faixa normal ou apresentar ligeiro aumento. Nos casos de obstruo extra-heptica, as elevaes de AST no so comuns, mas podem ocorrer quando h leso parenquimatosa secundria aguda. Na cirrose, as alteraes da AST e seus respectivos

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nveis vo depender da ocorrncia e do grau de leso hepatocelular ativa presente. Geralmente, na cirrose inativa os valores de AST no se alteram. Na cirrose alcolica ativa, os valores de AST se elevam moderadamente. Na hepatite virtica crnica ativa, os nveis de AST tambm encontram-se elevados moderadamente. Vrias doenas comuns apresentam elevao pequena ou moderada de AST, e entre elas podemos citar: mononucleose infecciosa, hepatite aguda na fase de remisso ou recuperao, hepatite crnica, disfuno heptica induzida por drogas, tumor heptico metasttico, congesto heptica passiva, cirrose ativa ou hepatopatia alcolica, obstruo extra-heptica prolongada do ducto biliar, fgado gorduroso e citomegalovirus. Na maioria das vezes, a dosagem de AST realizada juntamente com a ALT e a relao AST/ALT pode ser determinada para auxiliar no diagnstico diferencial das doenas. Assim, a relao AST/ALT sempre maior do que 1 em pacientes com cirrose alcolica, hepatites crnicas, congesto heptica e tumor metasttico do fgado. Geralmente, essa relao menor do que 1 nos casos de hepatite virtica aguda e mononucleose infecciosa. Nos casos de leso do miocrdio, a AST juntamente com a dosagem da creatina quinase (CK) e da desidrogenase lctica (LDH) muito til para o diagnstico e acompanhamento do infarto do miocrdio (IM). Os nveis de AST aumentam dentro de 6 a 10 horas aps o infarto, atingindo um valor mximo em 12 a 48 horas, voltando aos nveis normais em 3 a 4 dias, se no ocorrer novo infarto. Portanto, as determinaes em srie da AST como da CK, so muito teis para a avaliao do infarto do miocrdio. No entanto, a AST muito menos especfica do que a CK-MB para o diagnstico do infarto do miocrdio. Nos casos de pericardite, angina e cardite reumtica no h aumento dos nveis de AST. Valores elevados Os valores elevados de AST so mais comumente encontrados nas seguintes patologias: hepatites, cirrose heptica, necrose heptica, metstase heptica, drogas hepatotxicas, processo infiltrativo heptico (tumor), infarto do miocrdio, operaes cardacas, angioplastia e cateterizao cardaca, pancreatite aguda, trauma muscular esqueltico, queimaduras graves, anemia hemoltica aguda, distrofia muscular progressiva, mononucleose infecciosa com hepatite, doenas musculares primrias (miopatia, miosite), doena renal aguda e convulses recentes. LINEARIDADE Linearidade A reao linear at o valor de 190 unidades/mL. Para valores maiores, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%) e realizar uma nova determinao. Multiplicar o valor obtido pelo fator de diluio empregado. Esta diluio deve ser tal que amostra diluda fornea valores de TGO entre 50 a 150 unidades/mL. LIMITAES DO MTODO Os resultados devero ser usados em conjunto com informaes disponveis da avaliao clnica e outros procedimentos diagnsticos. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Fundamento de Qumica Clnica, 4 Ed - Guanabara Koogan SA; 1998. 2. Cabaud, P.: Am. J. Clin. Path, 26, 1101, 1956. 3. Henry,R.J.: Clinical Chemistry - Principles and Technics, 2 Ed. Harper and Row, 1974. 4. Karmen A. J Clin Invest 1955;34:131. 5. Ladue, J.S.: Science 120, 497, 1954. 6. Lopes HJJ. Enzimas no Laboratrio Clnico-Aplicaes Diagnsticas. Belo Horizonte, Analisa Diagnstica, 1998. 7. Reitman S, Frankel S. Am J Clin Path 1957;28:56. 8. Wroblewski F, Cabaud P. Am J Clin Path 1957;27:235. 9. TGO, Instrues de Uso, Gold Analisa Diagnstica Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Assinatura Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___

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Reviso 04/11 Liberado Fernanda

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