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Curso: Enfermagem Disciplina: BIOQUMICA Prof FERNANDA COUTINHO RETONDARO BARBOSA AULA PRTICA 4:

A) ANLISE QUALITATIVA DE PROTENAS: MTODO DO BIURETO Fundamento: A reao do biureto caracterstica para identificao de protenas; para que a reao do biureto seja positiva h necessidade da presena de pelo menos duas ligaes peptdicas na molcula. Sendo assim, essa reao positiva para todas as protenas, devido s suas ligaes peptdicas. A positividade da reao verifica-se pelo aparecimento de uma colorao que varia do rseo ao violeta. Materiais: tubos de ensaio, esptula, pipetas 1 mL, vortex, banho-maria 100 C. Reagentes: gua destilada, glicose 0,1M, soluo de clara de ovo 5%, soluo de clara de ovo 20%, soluo de gelatina 2%, pedao de carne (1cm), soluo de BCAA 0,5% (aminocidos de cadeia ramificada), leite , reagente biureto. Procedimento: Preparo das solues: - Soluo de clara de ovo 5%: Em um tubo de ensaio, adicionar 1,9 mL de gua destilada e acrescentar 0,1 ml de clara de ovo. - Soluo de clara de ovo 20% : Em um tubo de ensaio, adicionar 1,6 mL de gua destilada e acrescentar 0,4 ml de clara de ovo. - Soluo de gelatina 2%: Em um tubo de ensaio, adicionar 5 mL de gua destilada. Incubar este tubo por 5 min. a 100C. Aps incubao, acrescentar 0,1 g de gelatina. A seguir, numerar 8 tubos de ensaio e adicionar: - Tubo 1, adicionar 1 mL de gua destilada - Tubo 2, adicionar 1mL de glicose 0,1M - Tubo 3, adicionar 1mL de soluo de clara de ovo 5% - Tubo 4, adicionar 1mL de soluo de clara de ovo 20% - Tubo 5, adicionar 1mL de soluo de gelatina 2% - Tubo 6,, adicionar 1 pedao (1 cm) de carne - Tubo 7, adicionar 1 mL de soluo de BCAA 0,5% - Tubo 8 adicionar 1 mL de leite Acrescentar 1 mL do reagente biureto em cada tubo e homogeneizar no vortex. Observar e anotar o que ocorreu. Perguntas: 1) Quais protenas so encontradas, respectivamente, na clara de ovo, gelatina, carne e leite? 2) Diferencie peptdeos de protenas.

B) DESNATURAO ENZIMTICA: Fundamento: A desnaturao protica a perda da atividade biolgica de uma protena devido ruptura das interaes intermoleculares, uma vez que estas interaes permitem o enovelamento da protena, mantendo-a na forma nativa. Os principais agentes desnaturantes so: temperatura elevada, alterao do pH e adio de solventes orgnicos. Material: tubos de ensaio, pipetas de 5mL, pipetas de 1 mL, banho-maria a 37C, banho-maria a 100C. Reagentes: gua destilada, soluo de amido 1%, saliva in natura, HCl 0,1M, reativo lugol (soluo de iodo).

Procedimento: Numerar 4 tubos de ensaio e adicionar em cada tubo: - Tubo 1: 0,5 mL de gua destilada; - Tubo 2: 0,5 ml de saliva in natura ( contendo a enzima amilase salivar); - Tubo 3: 0,5 mL de saliva in natura (contendo a enzima amilase salivar), e imediatamente aps pipetagem, incubar no banho-maria a 100C por 5 min. - Tubo 4: 0,5 mL de saliva in natura (contendo a enzima amilase salivar), e imediatamente aps pipetagem, acrescentar 0,5 mL de HCl 0,1M. Aps o tempo de incubao do tubo 3 no banho-maria a 100C, acrescentar em todos os 4 tubos, 0,5 mL de amido 1% e homogeneizar no vortex. Em seguida, incubar os tubos em banho-maria a 37C por 10 min. Aps o tempo de incubao, adicionar 2 gotas do reativo lugol em cada tubo. Observar e anotar o que ocorreu. Explicar!