Ministrio da Educao Universidade Tecnolgica Federal do Paran Campus Apucarana

Bioqumica Experimental CST Processos Qumicos Prof.: Patrcia S. Garcia Data: 26/04/2012

Experimento 2 Espectrofotometria A espectrofotometria uma medida de absoro ou transmisso da luz, sendo uma das tcnicas mais amplamente usada em laboratrio. Com esta tcnica, compostos desconhecidos podem ser identificados e concentraes de solues de compostos conhecidos tambm podem ser determinadas. Princpio do mtodo: Quando um feixe de luz monocromtica atravessa uma soluo, parte da luz absorvida pela soluo (absorbncia) e o restante transmitido (transmitncia). Assim, a absoro de luz tanto maior quanto mais concentrada for a soluo (Figura 1).

Figura 1. A absorbncia ao comprimento de onda escolhido diretamente proporcional concentrao da soluo.

Objetivos: Elaborar uma curva de calibrao; Estabelecer a sensibilidade de um mtodo espectrofotomtrico; Reagentes: Soluo padro de azul de metileno (100 mg/L) ou Soluo padro de permanganato de potssio (100 mg/L) Procedimento: Preparar uma bateria de 8 tubos de ensaio, numerados de 1 a 8. Adicionar os reagentes conforme a tabela:

Reagentes (mL) Soluo padro gua destilada

Tubo 1 0,0 8,0

Tubo 2 0,2 7,8

Tubo 3 0,4 7,6

Tubo 4 0,6 7,4

Tubo 5 0,8 7,2

Tubo Tubo Tubo 6 7 8 1,0 1,3 1,5 7,0 6,7 6,5

Agitar os tubos usando o agitador apropriado. Calibrar o espectrofotmetro em 540 nm. Efetuar a leitura e anotar todas as absorvncias. Construir um grfico de Absorvncia x Concentrao. Interpretar o grfico. Determine a concentrao da soluo problema. Concentrao mg/mL Soluo padro (mL) Absorbncia (540 nm)

Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 Problema

gua (mL)