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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO TECNOLGICO PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA DE ALIMENTOS

EXTRAO DE ORIZANOL DA BORRA DE NEUTRALIZAO DO LEO DE FARELO DE ARROZ

MAURCIO NEVES CALHEIROS Engenheiro de Alimentos

Florianpolis SC 2007

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO TECNOLGICO PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA DE ALIMENTOS

EXTRAO DE ORIZANOL DA BORRA DE NEUTRALIZAO DO LEO DE FARELO DE ARROZ

MAURCIO NEVES CALHEIROS Engenheiro de Alimentos

Orientador: Prof Dr. Haiko Hense

Florianpolis SC 2007

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO TECNOLGICO PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA DE ALIMENTOS

EXTRAO DE ORIZANOL DA BORRA DE NEUTRALIZAO DO LEO DE FARELO DE ARROZ

Dissertao apresentada ao Curso de PsGraduao em Engenharia de Alimentos do Centro Tecnolgico da Universidade Federal de Santa Catarina, como requisito parcial obteno do ttulo de Mestre em Engenharia de Alimentos.

rea de concentrao: Desenvolvimento de Processos na Indstria de Alimentos.

Orientador: Prof Dr. Haiko Hense

MAURCIO NEVES CALHEIROS Engenheiro de Alimentos

Florianpolis SC 2007

SUMRIO

LISTA DE FIGURAS ......................................................................................................i LISTA DE TABELAS ....................................................................................................iii RESUMO........................................................................................................................vi ABSTRACT...................................................................................................................vii 1 INTRODUO ............................................................................................................1 2 OBJETIVOS ................................................................................................................3 2.1 Objetivos Especficos ......................................................................................... 3 3 REVISO BIBLIOGRFICA .....................................................................................4 3.1 Arroz ...................................................................................................................... 4 3.2 Farelo de arroz .................................................................................................... 7 3.3 leo de farelo de arroz..................................................................................... 11 3.3.1 Produo do leo de farelo de arroz ...................................................... 12 3.3.2 Borra de neutralizao do leo de farelo de arroz (RBOS) ................ 16 3.4 Antioxidandes .................................................................................................... 16 3.5 Orizanol............................................................................................................... 18 3.6 Extrao supercrtica........................................................................................ 21 3.6.1 CO2 supercrtico ......................................................................................... 26 3.6.2 Curva de extrao ..................................................................................... 27 3.6.3 Rendimento................................................................................................. 29 3.6.4 Modelagem ................................................................................................. 30 3.7 Produo de orizanol........................................................................................ 32 3.7.1 Complexidades na extrao do orizanol................................................ 32 3.7.2 Impurezas que interferem na extrao do orizanol.............................. 33 3.7.3 Tecnologias de extrao de orizanol ...................................................... 35 3.7.4 Mtodos patenteados de produo de orizanol.................................... 36 4 MATERIAL E MTODOS........................................................................................38 4.1 Matria-prima..................................................................................................... 38 4.2 Determinao do teor de umidade da RBOS ............................................... 38 4.3 Tratamento da matria-prima.......................................................................... 39 4.3.1 Saponificao ............................................................................................. 39 4.3.2 Secagem ..................................................................................................... 40 4.3.3 Moagem e Anlise Granulomtrica......................................................... 41 4.3.4 Determinao do teor de umidade do saponificado da RBOS........... 41 4.4 Extrao dos insaponificveis da RBOS....................................................... 41 4.5 Tratamento com soluo metanol-acetato de etila (1:1) ............................ 44 4.6 Coluna cromatogrfica ..................................................................................... 44 4.7 Cristalizao com soluo de metanol: acetona.......................................... 46 4.8 Extrao supercrtica........................................................................................ 46 4.8.1 Unidade de ESC ........................................................................................ 47 4.8.2 Verificao da influncia da temperatura e presso no rendimento da extrao do orizanol do saponificado da RBOS e da frao insaponificvel da RBOS. .............................................................................................................. 49 4.8.3 Determinao do rendimento global....................................................... 50

4.8.4 Experimentos Cinticos Curvas de Extrao..................................... 50 4.8.5 Modelagem matemtica ........................................................................... 51 4.9 Avaliao do teor de orizanol .......................................................................... 51 4.10 Fluxograma das atividades desenvolvidas para extrao e purificao do orizanol presente na RBOS.............................................................................. 52 5 RESULTADOS E DISCUSSO .............................................................................53 5.1 Umidade da materia-prima .............................................................................. 53 5.2 Teor de orizanol na matria-prima ................................................................. 53 5.3 Saponificao da RBOS .................................................................................. 54 5.4 Extrao dos insaponificveis presentes na RBOS .................................... 57 5.5 Tratamento da matria insaponificvel com soluo metanol-acetato de etila............................................................................................................................. 60 5.6 Separao do orizanol por coluna cromatogrfica ...................................... 62 5.7 Cristalizao do orizanol .................................................................................. 63 5.8 Extrao supercrtica da RBOS para obteno de uma frao enriquecida em orizanol ............................................................................................................... 64 5.8.1 Extrao supercrtica utilizando a RBOS saponificada ....................... 64 5.8.2 Extrao supercrtica utilizando a frao insaponificvel extrada da RBOS..................................................................................................................... 69 5.8.3 Inverso das isotermas de rendimento para ESC utilizando o saponificado da RBOS e do material insaponificvel extrado da RBOS .. 74 5.8.4 Cintica e modelagem matemtica da ESC utilizando o saponificado da RBOS e o material insaponificvel extrado da RBOS ............................ 77 6. CONCLUSES........................................................................................................82 7. SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS .................................................84 8. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.....................................................................85

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Desenho esquemtico da constituio do gro de arroz. ....................... 6 Figura 2 Ranking estadual da produo (em 1.000 t) de arroz em 2004/05. ...... 7 Figura 3 Ranking mundial de produo (em milhes de toneladas) de arroz em 2002. ................................................................................................................................ 7 Figura 4 Fluxograma do processamento do leo de arroz. .................................. 15 Figura 5 Principais compostos constituintes do -orizanol. .................................. 19 Figura 6 Fluxograma de extrao supercrtica de matrizes slidas. ................... 24 Figura 7 Curva tpica de extrao. ............................................................................ 28 Figura 8 Aparato de Soxhlet para extrao de leos vegetais em escala laboratorial. ................................................................................................................... 43 Figura 9 Aparato utilizado para extrao e evaporao do solvente na etapa de extrao dos insaponificveis presentes no segundo saponificado da RBOS.. 43 Figura 10 Ilustrao do funcionamento da coluna cromatogrfica...................... 44 Figura 11 Foto da coluna cromatogrfica utilizada nos experimentos................ 45 Figura 12 Ilustrao da unidade ESC. ..................................................................... 48 Figura 13 Esquema da unidade ESC. ...................................................................... 48 Figura 14 Fluxograma das atividades desenvolvidas na recuperao do orizanol presente na RBOS. ...................................................................................... 52 Figura 15 Foto do processo de saponificao da RBOS. ..................................... 56 Figura 16 Foto do saponificado obtido da RBOS (esquerda) e da matria-prima (RBOS, direita).......................................................................................................... 57 Figura 17 Mdia e anlise da diferena estatstica dos tempos de extrao da frao insaponificvel da RBOS utilizando teste de Tukey, onde letras iguais significam a ausncia de diferena significativa entre os tempos. ...................... 59 Figura 18 Foto da frao insaponificvel obtida ps-tratamento com soluo metanol-acetato de etila (1:1). ................................................................................... 62 Figura 21 Grfico da inverso das isotermas de rendimento para a ESC da RBOS saponificada. .................................................................................................... 75 Figura 22 Grfico da inverso das isotermas de rendimento para a ESC do material insaponificvel extrado da RBOS............................................................. 75 Figura 23 Curva de extrao utilizando RBOS saponificada, nas condies de 300 bar, 60 C e 0,6 kg/h............................................................................................ 77

Figura 24 Curva de extrao utilizando o material insaponificvel extrado da RBOS nas condies de 300 bar, 60 C e 0,6 kg/h. .............................................. 78 Figura 25 Curva experimental e modelada para a ESC da RBOS saponificada na vazo de CO2 de 0,6 kg/h presso de 300 bar e temperatura de 60 C. ..... 80

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Comparao das composies qumicas dos gros de arroz, milho, trigo e aveia. ................................................................................................................... 5 Tabela 2 Aminocidos contidos no padro de protena de alta qualidade e no farelo de arroz, comparados s recomendaes de referncia, expressos em mg/g de protena.......................................................................................................... 10 Tabela 3 Composio centesimal do farelo de arroz. ........................................... 11 Tabela 4 Solubilidade do -orizanol. ....................................................................... 21 Tabela 5 ndice de polaridade de solventes utilizados nos processos de extrao com solvente orgnico................................................................................ 42 Tabela 6 Planejamento experimental fatorial completo 32, com as variveis temperatura e presso, variando em 3 nveis......................................................... 49 Tabela 7 Teor de umidade da RBOS. ...................................................................... 53 Tabela 8 Quantidade de orizanol presente na RBOS. .......................................... 54 Tabela 9 Tabela da influncia da umidade nas etapas de extrao para purificao do orizanol. ............................................................................................... 55 Tabela 10 Rendimento, mdia e desvio padro da etapa de saponificao da RBOS............................................................................................................................. 56 Tabela 11 Rendimento mdio da etapa de extrao dos insaponificveis da RBOS saponificada e seus respectivos desvios padres..................................... 58 Tabela 12 Rendimento, mdia e desvio padro da etapa de tratamento do material insaponificvel extrado da RBOS com soluo de metanolacetato de etila (1:1). ...................................................................................................................... 60 Tabela 13 Mdia do rendimento obtido usando clorofrmio e hexano como eluente em coluna cromatogrfica, utilizando a frao insaponificvel da RBOS como material de alimentao na coluna. ............................................................... 62 Tabela 14 Valores de densidade do CO2 e do rendimento de extrato obtido nas condies de presso de 100 bar, 200 bar e 300 bar, temperatura de 30 C, 45 C e 60 C e vazo de CO2 de 0,6 kg/h, utilizando a RBOS como matria-prima. ........................................................................................................................................ 65 Tabela 15 Valores de densidade do CO2, do teor de orizanol e da recuperao de orizanol da RBOS obtido nas condies de presso e temperatura do planejamento experimental da ESC da RBOS. ...................................................... 67

Tabela 16 Valores do rendimento de extrato obtido nas condies de presso de 100 bar, 200 bar e 300 bar, temperatura de 30 C, 45 C e 60 C e vazo de CO2 de 0,6 kg/h, utilizando o material insaponificvel como matria-prima...... 70 Tabela 17 Valores de densidade do CO2, do teor de orizanol e da recuperao de orizanol da RBOS obtido nas condies de presso e temperatura do planejamento experimental da ESC da frao insaponificvel da RBOS. ......... 73 Tabela 18 Tempo de durao das etapas CER e FER e taxa de extrao na etapa CER. ................................................................................................................... 79 Figura 26 Curva experimental e modelada para ESC da frao insaponificvel extrada da RBOS na vazo de CO2 de 0,6 kg/h, presso de 300 bar e temperatura de 60 C.................................................................................................. 80 Tabela 19 Coeficientes, parmetros ajustveis e o erro mdio quadrtico (EMQ) obtidos atravs de modelagem das curvas de ESC utilizando a RBOS saponificada e o insaponificvel extrado da RBOS. ............................................. 81

NOMENCLATURA

b B Dm F h H mext m0 MCER n N P T t tCER tFER tm X0 X0 X W Y YCER Y* Z

Parmetro ajustvel do modelo LM (min-1) Parmetro ajustvel do modelo de Esquvel et al. (1999)(s) Difusividade na matriz slida - modelo SSP (m2/min) Massa de matria-prima (kg) Coordenada axial (m)

Comprimento total do leito de extrao (m)


Massa de extrato (g) Massa total inicial de soluto na coluna de extrao (g) Taxa de extrao na etapa CER (kg/s) Nmero inteiro Perda de peso (g) Massa inicial de amostra (g) Temperatura de extrao (C) Tempo de extrao (s) Durao da etapa de taxa constante de extrao - CER (s) Durao da etapa de taxa decrescente de extrao - FER (s) Parmetro ajustvel do modelo LM (min-1) Razo mssica inicial de soluto na fase slida (kg/kg) Rendimento global (%) Razo mssica de soluto na fase slida (gleo/gslido) Parmetro para o perodo de taxa de extrao lenta Razo mssica de soluto na fase fluida (gleo/gsolvente) Razo mssica do soluto na fase supercrtica na sada da coluna na etapa CER (kgextrato/kgCO2) Concentrao de equilbrio (solubilidade) (gleo/gsolvente) Parmetro do perodo CER Espessura das partculas (m)

RESUMO

O -orizanol definido como uma mistura de steres do cido ferlico com esterol ou lcoois triterpnicos. Sendo um composto antioxidante natural, possui grande importncia para indstria de alimentos e farmacutica. O contedo de -orizanol no leo de farelo de arroz bruto est na faixa de 1 % - 2 %. Este composto tem sido utilizado no Japo para conservar leos, alimentos e bebidas e tambm em frmulas medicinais e cosmticas. O objetivo deste trabalho foi recuperar o -orizanol presente na borra da neutralizao do leo de farelo de arroz (RBOS). A matria-prima utilizada na realizao deste trabalho foi a borra proveniente da neutralizao do leo bruto de farelo de arroz (RBOS), da indstria IRGOVEL S.A., localizada no municpio de Pelotas, Rio Grande do Sul. A borra de neutralizao foi inicialmente tratada com lcali para sua saponificao e posteriormente foi seca durante 2 h ao ar livre e 4 h em estufa. A matria insaponificvel contida na RBOS foi extrada e tratada com solvente orgnico, posteriormente este material foi permeado por coluna cromatogrfica e o resduo foi cristalizado para purificao do orizanol. A RBOS saponificada e o insaponificvel extrado da RBOS foram submetidos extrao supercrtica (ESC), sendo testadas diversas condies de temperatura e presso. Os extratos obtidos foram analisados quanto ao teor de orizanol, por HPLC-UV. O teor de orizanol presente na RBOS foi de 1,45 %, dentro da faixa citada na literatura. O rendimento da ESC utilizando a RBOS saponificada variou desde 0,22 % 0,04 % at 12,51 % 0,52 %, sendo que tanto presso como temperatura apresentaram efeitos significativos no rendimento, com o maior valor obtido em 300 bar e 60 C. Nestas condies se obteve, tambm, o maior teor de orizanol extrado, 16 %, e a maior recuperao de orizanol, que foi de 75 % do orizanol presente na RBOS. Os valores de rendimento obtidos para o insaponificvel extrado da RBOS variaram de 0,90 % 0,04 % at 6,31 % 0,38 %, sendo que a maior recuperao e teor de orizanol, 6,26 % e 9,9 %, respectivamente, foram obtidos a 300 bar e 45 C. Os modelos de transferncia de massa utilizados para descrever as curvas de ESC foram: Esquvel et al., (1999), Gaspar et al., (2003) e Martnez et al., (2003). O modelo Martnez et al., (2003) apresentou o melhor ajuste para as curvas de ESC da RBOS saponificada e da frao insaponificvel extrada da RBOS.

ABSTRACT

The gamma-oryzanol is defined as a mixture of ferulic acid esthers with sterol ore triterpenic alcohols. It is considered a natural antioxidant compound with increasing importance in the food and pharmaceutical industry. The -orizanol in raw rice bran oil is in the range of 1 % - 2 %, and is been used in Japan to preserve oils, foods and soft drinks and in medicals and cosmetics. The objective of this study is to recuperate orizanol from the rice bran oil soap stock (RBOS). The raw material utilized in this study was provided by IRGOVEL S.A., located in Pelotas, Rio Grande do Sul. The neutralization sludge was initially prepared with alkali for the saponification and in sequence dried during 2 h at air and 4 h in oven-drying. The unsaponificable material from the RBOS was extracted and treated with organic solvent, in sequence it was permeated trough a chromatographic column and the residual crystallized to purificate the oryzanol. The saponificated RBOS and the unsaponificated extract from RBOS were extracted with supercrtical solvent (ESC) under different pressure and temperature conditions. The obtained extracts were analyzed to quantify the -orizanol via HPLC-UV. The -orizanol content in the RBOS was 1.45%, in between the literature data. The ESC yield utilizing saponificated RBOS varied from 0.22 % 0.04 % to 12.51 % 0.52 %. The temperature and pressure presented important effects over the yield with the best value been obtained at 300 bar and 60 C. At these conditions the highest -orizanol amount was extracted, 16%, and the major -orizanol recovery of 75% from the -orizanol present in the RBOS. The yield values obtained for the unsaponificable extracted from the RBOS varied from 0.90 % 0.04 % to 6.31 % 0.38 %. The higher -orizanol recovery (6,26 % and 9,9 %) was respectively from 300 bar and 45 C. The mass transfer models utilized to describe the supercrtical extraction curves were: Esquvel et al. (1999), Gaspar et al. and Martnez et al (2003). The Martnez et al. (2003) model presented the best fit to the saponificated RBOS and to the unsaponificated RBOS fraction extraction ESC curves.

Introduo
1 INTRODUO

Atualmente existe um grande interesse em compostos naturais com atividades biolgicas, que possam substituir substncias sintticas as quais so utilizadas na indstria de alimentos e farmacutica. O orizanol um importante co-produto do arroz e do refino do leo de farelo de arroz devido a sua capacidade antioxidante e aos seus possveis usos farmacolgicos, como a acelerao do crescimento em animais, combate de doenas ceflicas e cervicais, coadjuvante no tratamento de doenas circulatrias (SEETHARAMAIAH; PRABHAKAR, 1986), sendo utilizado em alguns pases para conservar leos, alimentos e bebidas na forma de uma mistura sinrgica com a vitamina E e tambm em frmulas medicinais e cosmticas (TSUNO, 1995). Uma das caractersticas do orizanol que ele pode ser usado em associao com outros antioxidantes naturais, obtendo misturas capazes de superar os estabilizantes sintticos mais comumente usados. Essa caracterstica muito interessante, visto que o mesmo possui outras atividades biolgicas, podendo ser usado, assim, como um ingrediente multifuncional para formulaes farmacuticas, cosmticas e para alimentos (JULIANO et al., 2005). O orizanol foi inicialmente encontrado no leo de farelo de arroz em 1954. Como foi isolado do leo obtido a partir do arroz (Oryza Sativa) e continha um grupo hidroxila em sua estrutura, foi convenientemente chamado de orizanol. Estudos posteriores revelaram que o orizanol no um composto simples e sim uma mistura de steres do cido ferlico (GRAF, 1992). O isolamento do orizanol da borra de neutralizao do leo de farelo de arroz (RBOS), um subproduto da produo do leo de farelo de arroz, tem recebido muita ateno, particularmente em pases produtores de arroz, sendo que a produo, que envolve isolamento e purificao de orizanol, apresenta alguns problemas, que so raramente discutidos, devido quantidade de compostos que interferem durante sua lixiviao, extrao e cristalizao (NARAYAN et al., 2006). A extrao supercrtica (ESC) envolve duas etapas: a extrao e a separao. A extrao baseada no contato de uma matriz slida com o solvente, de forma que este remove do slido as substncias solveis. A separao, que difere dos processos convencionais, obtida aps a extrao com a reduo da presso, obtendo-se o produto final. A extrao com fluido supercrtico pode ser operada sob uma ampla faixa de condies (temperatura e presso de operao). O ajuste conjunto destes parmetros de processo afeta a solubilidade de cada composto no solvente,

Introduo
possibilitando a extrao seletiva dos produtos desejados com

2
melhores

caractersticas funcionais e nutricionais (BRUNNER, 1994). A utilizao da tecnologia supercrtica para extrao do orizanol presente na RBOS uma excelente alternativa para recuperao deste orizanol. Os conceitos de eficincia e seletividade foram propulsores para o crescente interesse da comunidade cientfica e do setor industrial em relao aos processos de ESC, ou seja, uma tecnologia alternativa que visa resolver problemas de separao. Como principal justificativa, indica-se propriedades dos fludos supercrticos, que englobam as vantagens dos fluidos nos estados lquido e vapor, simultaneamente, quanto solubilidade (BRENNECKE; ECKERT, 1989).

Objetivos
2 OBJETIVOS

O objetivo deste trabalho foi obter e purificar o orizanol presente na borra da neutralizao do leo de farelo de arroz (RBOS), utilizando diversas metodologias, comparando o teor e o rendimento do orizanol obtido.

2.1 Objetivos Especficos

Determinar as melhores condies de saponificao e extrao dos insaponificveis da RBOS.

Utilizar coluna cromatogrfica, testando eluentes para obter o melhor rendimento e pureza do orizanol.

Avaliar os efeitos de temperatura e presso no rendimento e pureza do orizanol obtido por extrao com CO2 supercrtico.

Comparar e definir o melhor mtodo, dentre os estudados, para recuperao do orizanol da RBOS.

Modelagem das curvas de extrao de orizanol utilizando os seguintes modelos disponveis na literatura: Esquvel et al. (1999), Gaspar et al. (2003) e Martinez et al. (2003).

Reviso Bibliogrfica
3 REVISO BIBLIOGRFICA

3.1 Arroz

O arroz cultivado, Oriza sativa, so plantas monocotiledneas (classe Liliopsida) da famlia Poaceae (anteriormente Graminae). H 650 gneros e talvez 9.000 espcies de gramas. Estima-se que pastos e savanas compreendem 20 % da vegetao que cobre a terra. No Brasil, ocorrem cerca de 180 gneros e 1500 espcies. Esta famlia botnica a mais importante de todas as famlias de plantas para economia humana, incluindo gramas de forragem; os gros que so o principal alimento cultivado no mundo, e o bambu, usado extensamente para a construo em toda sia (WIKIPEDIA, 2007). Botanicamente o gro de arroz um fruto, denominado cariopse, em que o pericarpo est fundido com o tegumento da semente propriamente dita. Este est envolvido pela casca (lema e plea). Na Tabela 1 so comparadas as composies qumicas dos gros de arroz, milho, trigo e aveia. Destes cereais, o arroz possui a mais baixa percentagem de protena e a mais alta percentagem de carboidratos solveis (SINDARROZ - SC, 2007). Para poder ser cultivado com sucesso, o arroz necessita de gua em abundncia, para manter a temperatura ambiente dentro de intervalos adequados, e, nos sistemas tradicionais, de mo-de-obra intensiva. Desenvolve-se bem mesmo em terrenos muito inclinados e costume, nos pases do sudeste asitico encontrarem-se socalcos onde cultivado. Em qualquer dos casos, a gua mantm-se em constante movimento, embora circule a velocidade muito reduzida. a terceira maior cultura cerealfera do mundo, apenas ultrapassado pelo milho e trigo (IRGA, 2005).

Reviso Bibliogrfica
Tabela 1 Comparao das composies qumicas dos gros de arroz, milho, trigo e aveia.

Componente Umidade (%) Protena (%) Lipdios (%) Cinzas (%) Fibra (%) Carboidratos Solveis (%) Energia (cal/100 g) Tiamina (mg) Riboflavina (mg) Niacina (mg)

Arroz 12,0 7,2 0,6 0,5 0,6 79,7 364,0 0,08 0,03 1,6

Milho 10,6 9,4 4,3 1,3 1,8 74,4 361,0 0,43 0,10 1,9

Trigo 12,0 11,8 1,2 0,5 0,4 74,5 365,0 0,12 0,07 1,4

Aveia 8,3 14,2 7,4 1,9 1,2 68,2 390,0 0,60 0,14 1,0

Fonte: BRESANI, 1971, citado por SINDARROZ - SC, 2007.

Dentre os cereais de importncia no Brasil, destaca-se o arroz, que contm, aproximadamente, de 6 % a 8 % do seu peso em farelo. neste farelo que se encontra a maior parte da reserva lipdica do arroz, entre 15 % e 20 %. Alm disso, possui de 5 % a 8 % de protenas, 40 % a 50 % de carboidratos solveis e de 5 % a 8 % de fibras (MORETTO; FETT, 1998). O arroz representa alimento de primeira necessidade para grande parte da populao humana. Recomendado na dieta convalescente de quase todas as doenas, o arroz contm cerca de 12 % de gua e, em menor quantidade, celulose, matria graxa, cloreto de potssio, magnsio, mangans, sais de clcio, sais de potssio, enxofre, xido de ferro, cloro, cido fosfrico e demais vitaminas. O arroz fica abaixo do trigo e do milho, outros importantes cereais, em valor nutritivo. A sua quantidade limitada de protenas, lipdios, minerais e algumas vitaminas so compensados, no entanto, pela fcil digesto e pela possibilidade de combinaes do arroz com outros alimentos, que acabam preenchendo as necessidades nutritivas do ser humano (MORETTO; FETT, 1998).

Reviso Bibliogrfica

O gro de arroz in natura pode ser dividido em trs partes: gro, farelo e casca, durante o processamento. Atualmente a casca tem sido usada como combustvel em fornalhas e proteo do solo; o farelo, utilizado em rao animal e para obteno do leo de arroz. O gro a parte consumida como alimento (IRGA, 2005). A Figura 1 apresenta um desenho esquemtico de um gro de arroz e suas divises. Um aspecto interessante na produo do arroz que durante o processo de polimento retira-se o germe, causando uma diminuio no teor de gordura e tambm na possibilidade de oxidao, aumentando significativamente sua vida de prateleira.

Fonte: IRGA, 2005. Figura 1 Desenho esquemtico da constituio do gro de arroz.

Em geral, as culturas agrcolas, como o arroz, produzem uma quantidade de sobras muito maior do que a parte utilizada para fins alimentcios. Sales et al. (1988) cita que apenas cerca de 5 % da produo, ou seja, nutrientes em potencial, disponveis para a alimentao humana ou animal, so aproveitados. O restante constitudo de palhas ou resduo industrial. O Brasil ocupa a dcima colocao no ranking mundial de produo de arroz, sendo o maior produtor americano. Entre os estados, o Rio Grande do Sul o maior produtor brasileiro de arroz, seguido dos estados do Mato Grosso e Santa Catarina. A Figura 2 apresenta o grfico do ranking nacional de produo de arroz em casca, por estado, no ano de 2004/05 (CONAB, 2005). A Figura 3 apresenta o grfico do ranking mundial de produo de arroz no ano de 2002 (EMATER-RO, 2005).

Reviso Bibliogrfica

Produo de arroz 6000 5000 1000 toneladas 4000 3000 2000 1000 0 RS MT SC MA PA TO GO MG MS RO PI PR RR SP CE BA

Fonte: CONAB, 2005. Figura 2 Ranking estadual da produo (em 1.000 t) de arroz em 2004/05.

Produo Mundial de Arroz


180 160 140 120 100 80 60 40 20 0
hi na n di In a do Ba n s ia ng la de sh Vi et n Ta il nd ia M ya nm ar Fi l ip n as Ja p o Br as il C

milhes de toneladas

Fonte: EMATER-RO, 2005. Figura 3 Ranking mundial de produo (em milhes de toneladas) de arroz em 2002.

3.2 Farelo de arroz

At a dcada de 70 estava reservada ao farelo de arroz a viso nefasta de seus cidos orgnicos, como capazes de promover a quelao, seqestrando importantes minerais. Assim, a preocupao era mant-lo o mais longe possvel de crianas, devido sua fase de formao, e dos pertencentes terceira idade, mais

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precisamente das mulheres (osteoporose). O fundamento est na formao de fitatos, pela reao do cido ftico, seqestrando o clcio (IRGA, 2005). O farelo de arroz um subproduto da industrializao do arroz, obtido durante a etapa de brunimento, aps o processo de descascamento, onde retirada a pelcula presente entre o gro e a casca. O maior problema no aproveitamento do farelo de arroz tem sido sua forma de conservao, devido rpida oxidao que o mesmo sofre por possuir enzimas oxidativas livres presentes, sendo necessria a estabilizao quase que imediata aps sua produo (AZEREDO, 1992). O farelo de arroz representa em torno de 12 % do arroz com casca. constitudo por diversas fraes, portanto a composio depende da variedade do arroz e do seu processo de beneficiamento (COSTA; FRANA, 1993). Corresponde s camadas mais externas do gro (germe, pericarpo, camada de aleurona e pequenas pores de endosperma) e possui protenas em concentraes prximas s de outros alimentos que so boas fontes proticas, sendo tambm rico em fibras e sais minerais, como fsforo, ferro e magnsio (MASSARO, 2001). Vrias investigaes mostram que o farelo de arroz, considerado um subproduto do processamento do arroz, assim como seu leo, possuem propriedades hipocolesterolmicas, diminuindo o nvel de colesterol em animais e humanos (SCAVARIELLO et al., 1998). Em relao ao contedo de aminocidos, o farelo de arroz se encontra privilegiado quando comparado aos farelos de outros cereais, principalmente pelo contedo de lisina. Entretanto, possui baixa digestibilidade e PER (taxa de eficincia protica). As principais protenas encontradas no farelo so as albuminas, globulinas, glutelinas e prolaminas (SILVA et al., 2001). O teor de lipdios encontra-se entre 16 % e 22 %, mas o arroz parboilizado, devido ao tratamento diferenciado do gro, possui ndices maiores e teor de amido bem reduzido. O leo de arroz possui pouco cido linolnico e alta quantidade de tocoferis, o que garante mais estabilidade oxidativa. uma boa fonte de cidos graxos essenciais e possui orizanis e tocotrienis, que h muito so estudados por causarem benefcios sade (SILVA et al., 2001). O orizanol possui capacidade antioxidante e hipocolesterolmica; Costa e Frana (1993) verificaram que seu consumo apresenta fatores fisiolgicos positivos, como a diminuio no colesterol de baixa densidade (LDL) e de clculos renais, pois diminui a absoro de clcio pelo organismo.

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O contedo de acares livres, no farelo de arroz, varia entre 3 % e 8 % incluindo glicose, arabinose, xilose, manose e rafinose. As fibras totais variam de 20 % a 25 % no farelo integral e de 24 % a 28 % no farelo de arroz desengordurado (FAD). J as fibras solveis representam 1,8 % a 2,6 % no integral e 2 % a 2,4 % no FAD (SILVA et al., 2001). O farelo tambm uma boa fonte de vitaminas e minerais. Estas variam de acordo com vrios fatores, como sua viabilidade no solo durante o crescimento da planta. Os minerais mais encontrados no farelo so o potssio, magnsio, fsforo e silcio, mas a disponibilidade afetada pelo alto teor de fibras e pelos fitatos (SILVA et al., 2001). Os fitatos, assim como os inibidores de tripsina e as hemaglutininas, so fatores antinutricionais presentes no farelo de arroz, que interferem na biodisponibilidade de nutrientes e/ou apresentam efeitos txicos no organismo humano. Tanto os inibidores de tripsina, quanto as hemaglutininas no so grandes problemas no farelo, porque so facilmente inativadas pelo calor (SILVA et al., 2001). O cido ftico est presente nos vegetais e retm 70 % dos fosfatos, na forma de fitina (inositol + sais de magnsio, potssio e clcio) (SILVA et al., 2001). Trata-se de um composto muito problemtico, pois sua presena muito controversa. Muitos pesquisadores vem com maus olhos a presena de fitatos, devido ao quelante de ctions, enquanto outros, acreditam que esta presena acarretaria em efeitos positivos como a ao antioxidante. Estudos de Cneo (1999) mostram que a presena de fitatos protege os indivduos da ao de metais pesados no organismo, sendo outro aspecto positivo e muito discutido. Pesquisas indicam que o farelo de arroz integral uma excelente fonte de protenas (14,6 %), minerais (7 %), gordura insaturada (17 %) e fibra diettica (27 % no total, sendo 2 % solveis), enquanto que o farelo desengordurado apresenta 65 % de fibras (9 % solveis), 17 % de protenas e 18 % de minerais. Estes estudos confirmam que a fibra do farelo tem um bom potencial aplicativo na alimentao, especialmente no desenvolvimento de alimentos funcionais (ABDUL-HAMID; LUAN, 2000). A Tabela 2 apresenta a comparao entre o padro aminoacdico da protena de alta qualidade (FOOD AND NUTRITION BOARD, 1980) e os perfis de aminocidos do farelo de arroz torrado e da silagem integral de tilpia do Nilo, em relao aos requeridos pela FAO, para as diferentes faixas etrias.

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Tabela 2 Aminocidos contidos no padro de protena de alta qualidade e no farelo de arroz, comparados s recomendaes de referncia, expressos em mg/g de protena. Aminocidos Essenciais Histidina (mg/g) Isoleucina (mg/g) Leucina (mg/g) Lisina (mg/g) Metionina + Cistina (mg/g) Fenilalanina + Tirosina (mg/g) Treonina (mg/g) Triptofano (mg/g) Valina (mg/g) Recomendaes FAO / OMS Crianas ~2 anos 19 28 66 58 25 63 34 11 35 10-12 anos 19 28 44 44 22 22 28 9 25 11 13 19 16 17 19 9 5 13 Adultos Protena * de alta qualidade 17 42 70 51 26 73 35 11 48 Farelo ** de Arroz Torrado 36 35,4 72,2 37,4 24 31,4 46 16,1 74,5

Fonte: BENITES, 2003; * FOOD AND NUTRITION BOARD, 1980; ** SGARBIERI, 1996.

O farelo pode ser usado em misturas de cereais, multimisturas e vitaminas concentradas, por ser rico em niacina, tiamina, vitamina B6, ferro, fsforo, magnsio e potssio. Tambm muito utilizado em rao animal (PERRETI et al., 2002). A maior dificuldade do aproveitamento do farelo de arroz tem sido a sua forma de estabilizao, imediatamente depois de produzido. Alm disso, no tem sido fcil encontrar sistemas de estabilizao simples de baixo custo de operao, que permitam reunir e transportar o farelo de arroz at as plantas de extrao de seu leo. Em algumas regies tentou-se process-lo fresco desde os moinhos de onde se faz o polimento do arroz, at uma planta capaz de extrair seu leo, mas a coordenao da operao muito complexa e dificilmente se obtm resultados satisfatrios (MORETTO; ALVES, 1986). medida que aumenta a acidez, no s se reduz de maneira drstica os rendimentos como tambm se reduz a qualidade do leo refinado obtido. H uma

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regra utilizada por alguns processadores: os farelos com acidez inferior a 15 % se destinam produo de leo comestvel enquanto que os com acidez superior so utilizados em aplicaes industriais (ABOISSA, 2006). O farelo de arroz proveniente do beneficiamento do arroz parboilizado j est estabilizado termicamente pelo prprio processo, sendo, portanto, mais estvel e contendo maior teor lipdico quando comparado ao farelo resultante do arroz brunido (SILVA, 2001). A Tabela 3 apresenta a composio centesimal dos farelos de arroz polido e parboilizado.

Tabela 3 Composio centesimal do farelo de arroz. Teor Umidade (%) Protena (%) Lipdios (%) Carboidratos (%) Cinzas (%) Farelo polido 9,96 11,49 17,42 53,53 7,77 Fonte: SILVA, 2001. Farelo parboilizado 7,96 12,51 24,36 46,51 8,45

3.3 leo de farelo de arroz

O interesse pelo leo de arroz tem sido intensificado nos ltimos anos, devido a uma srie de resultados nutricionais positivos em animais e humanos, como a capacidade de reduo do colesterol sanguneo (ORTHOEFER, 1996). O leo de arroz constitui-se em cerca de 20 % do farelo e seus maiores constituintes so os cidos olico, linolico e steres de cido palmtico (IRGA, 2005). Investigaes tm demonstrado que a ingesto do leo de farelo de arroz causa uma reduo no colesterol de baixa densidade (LDL) e tambm do acmulo de gorduras nas artrias. Tem sido estudado que essa reduo deve-se no somente pela composio dos cidos graxos presentes no leo, mas tambm pela presena de outros componentes. Destacam-se os tocotrienis e o -orizanol, encontrados na frao insaponificvel do leo, apontados como possveis responsveis por esses efeitos (ROGERS et al., 1993).

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A matria insaponificvel do leo de arroz rica em esteris, tocoferis e tocotrienis, sendo que o principal componente presente o -orizanol, relatado como substncia com atividade antioxidante e hipocolesterolmica sendo utilizado industrialmente em alimentos, cosmticos e como agente farmacutico (SCARAVIELLO, 2002). O leo de farelo de arroz produzido atualmente em nveis bem inferiores ao seu potencial, devido a uma srie de dificuldades encontradas no processamento, ocasionadas principalmente pela presena de lipases que aumentam o teor de cidos graxos livres ps a extrao do farelo, podendo alcanar 70 % do peso do leo, reduzindo o rendimento do leo neutro e dificultando seu refinamento (SALUNKHE et al., 1991). Para fins comestveis, os cidos graxos livres se tornam um fator limitante no processo de extrao (Azeredo, 1992). Alm disso, uma quantidade significante de fitoesteris naturalmente presentes nos leos vegetais so perdidos nos subprodutos, durante o processo de refino. Produtos enriquecidos com fitoesteris so atualmente feitos com fitoesteris isolados desses subprodutos, sendo que os mtodos de isolamento e purificao dos mesmos envolvem operaes complexas e com gasto intenso de energia, como destilao molecular, extrao lquido-lquido e cristalizao (DUNFORD et al., 2002). O leo de arroz possui importantes micronutrientes que permanecem praticamente inalterados no leo at sua purificao final. Alm disso pode possuir baixa taxa de perxidos, resiste a oxidao ao cozinhar e possui timas propriedades nutricionais, sendo considerado um produto Premium (IRGA, 2005).

3.3.1 Produo do leo de farelo de arroz

Atualmente a maior parte da produo mundial de leo de farelo de arroz via extrao com solventes, podendo ser a frio ou a quente. Geralmente o solvente escolhido o hexano, por se enquadrar nas caractersticas necessrias para ser usado em produtos alimentcios, como baixa toxicidade. Aps a extrao do leo do farelo de arroz o leo bruto passa por vrias etapas chamadas de refino do leo (MORETTO; ALVES, 1998). O objetivo do refino melhorar a aparncia, odor e sabor pela remoo do leo bruto dos seguintes componentes (MORETTO; ALVES, 1986):

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Substncias coloidais, protenas, fosfatdios e produtos de sua decomposio; cidos graxos livres e seus sais, lactonas, acetais e polmeros; Corantes como clorofila, xantofila e carotenides; Volteis como hidrocarbonetos, lcoois, aldedos, cetonas e steres de baixo peso molecular;

Substncias inorgnicas como sais de clcio e de outros metais, silicatos, fosfatos e outros;

Umidade.

As

principais

etapas

do

processo

so:

degomagem,

neutralizao,

branqueamento e desodorizao.

- Degomagem Sua finalidade remover fosfatdios, protenas e colides e produzir leos crus capazes de serem refinados, por via qumica ou fsica com a mnima contaminao ambiental. A degomagem facilita o armazenamento e transporte do leo cru, produz fosfatdios como subproduto valioso, facilita o refino alcalino, aumentando o rendimento e a qualidade do leo final, diminui a poluio por gua cida depois do desdobramento da borra (MORETTO; ALVES, 1986). A degomagem com gua consiste na adio de 1 % a 3 % de gua ao leo aquecido a uma temperatura de 60 C a 70 C e agitao por 20 min a 30 min. Formase um precipitado que removido por centrifugao a 6000 rpm. As gomas (com 50 % de umidade) so secas sob vcuo a temperatura de 70 C a 80 C, obtendo-se a lecitina. J a superdegomagem baseia-se no principio de que a adio de cidos fortes facilita a hidratao completa, se fornecido tempo de reao suficiente.

- Neutralizao A adio de soluo aquosa de lcalis (NaOH ou Na2CO3) elimina do leo os cidos graxos livres e outros componentes definidos como impurezas. O processo acompanhado por branqueamento parcial do leo. A neutralizao ocorre na interface do leo e soluo alcalina. Sendo essas fases no intersolveis, a neutralizao exige

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uma disperso de soluo alcalina em leo. O uso de Na2CO3 reduz a saponificao do leo neutro ao mnimo, porm afeta a eliminao de fosfatdios, corantes e outras impurezas (MORETTO; ALVES, 1998). Da neutralizao forma-se um sabo, denominado borra (RBOS), que se separa por centrifugao. Pode haver arraste do leo neutro pela borra e saponificao do leo neutro pelo excesso de NaOH empregado.

- Branqueamento Os leos e gorduras devem ser quase incolores, sendo isso feito pela adsoro dos corantes com terras clarificantes, ativadas ou naturais, misturadas, s vezes, com carvo ativado (na proporo de 10:1 a 20:1). As terras ativadas so preparadas de silicatos de alumnio, por aquecimento com HCl ou cido sulfrico, que remove quase todo clcio e magnsio e parcialmente o ferro e o alumnio, seguido por lavagem com gua, secagem e moagem (MORETTO; ALVES, 1998).

- Desodorizao A desodorizao o processo de remoo de volteis responsveis pelos aromas e odores do leo. Os volteis que produzem odores indesejados so removidos por coluna de destilao, com vapor de gua em fluxo contracorrente. O leo que sai dessa etapa j est apto ao consumo, devendo somente ser embalado adequadamente e distribudo (MORETTO; ALVES, 1998). A Figura 4 apresenta o fluxograma industrial de produo do leo de farelo de arroz, utilizado pela indstria IRGOVEL S.A., no Rio Grande do Sul.

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Fonte: IRGOVEL. Figura 4 Fluxograma do processamento do leo de arroz.

A extrao do leo de farelo de arroz atualmente um processo essencial para recuperao de componentes importantes presentes no farelo, como por exemplo cidos graxos poliinsaturados, muito estudados por seus efeitos benficos ao organismo, como reduo dos nveis de colesterol do sangue e preveno de doenas como a arteriosclerose e infarto do miocrdio (SAITO et al., 1994). Devido perda de compostos importantes durante a extrao e refino do leo de arroz, vrios estudos vm surgindo, com o intuito de encontrar novas tecnologias capazes de diminuir as perdas nutricionais e gerar um leo de melhor qualidade. Pesquisas utilizando a extrao supercrtica (ESC) do leo de farelo de arroz esto sendo realizadas por diversos autores, devido s vantagens apresentadas, como a de no deixar resduo de solvente no leo extrado, no afetar compostos volteis e no provocar alteraes qumicas nos compostos, sendo at mesmo possvel separar os cidos graxos insaturados do leo, de acordo com o nmero de carbono, ao combinar a ESC com a cromatografia com fluido supercrtico (KIM et al., 1998). Kuk e Down (1998) obtiveram leo de arroz com excelente cor e alto teor de orizanol usando ESC, mostrando que o teor de esteris no leo extrado aumenta com a presso e a temperatura, sendo que o processo pode ser melhorado usando o fracionamento com fluido supercrtico, produzindo leo de farelo de arroz de alta qualidade.

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Perreti et al. (2002) reportaram que a ESC utilizando dixido de carbono como solvente supercrtico pode ser utilizada para produzir leo de farelo de arroz e recuperar antioxidantes dos subprodutos do processamento do arroz. Zhao et al. (1987) mostraram que as fraes de leo de arroz obtidas a altas presses contm menos cidos graxos livres, ceras e insaponificveis. Dunford et al. (2000) estudaram a desadicificao do leo bruto de farelo de arroz, usando fracionamento com fluido supercrtico, determinando as condies para mxima remoo de cidos graxos livres e minimizando a perda de fitoesteris e triglicerdios durante o processo, mostrando ser possvel desacidificar o leo bruto sem perder fitoesteris, sendo que o leo obtido teve um teor trs vezes maior de orizanol que o leo comercial de farelo de arroz.

3.3.2 Borra de neutralizao do leo de farelo de arroz (RBOS)

O refino qumico do leo de farelo de arroz produz a RBOS. A borra tpica contm cerca de 60 % a 70 % (p/p) de umidade, 20 % a 22 % (p/p) de sabo, 2 % a 2,5 % de glicerdeos e 7 % a 7,5 % de material insaponificvel. A frao insaponificvel contm aproximadamente 42 % de esteris, 24 % de lcoois graxos superiores, 20 % de orizanol, 10 % de hidrocarbonetos e 2 % de outros compostos. Atualmente o principal uso da borra para fabricao de sabo, em indstrias de detergentes e produtos de limpeza, sendo que pode ser usado para o isolamento de componentes terapeuticamente ativos como o orizanol e os tocoferis. Devido grande quantidade de orizanol presente na RBOS existe uma oportunidade comercial de produo de orizanol a partir desse subproduto, dado o grande interesse mundial no orizanol devido seus efeitos benficos sade humana (NARAYAN et al., 2006).

3.4 Antioxidandes

A deteriorao do alimento com o tempo em razo da sua natureza biolgica inevitvel. Durante a produo, processamento, distribuio e armazenamento, ocorrem vrias reaes de deteriorao envolvendo microrganismos e processos qumicos. Estes ltimos so representados pela oxidao enzimtica e no enzimtica de lipdios e de substncias fenlicas, promovendo alteraes indesejveis

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de odor, aparncia, caractersticas fsicas, valor nutritivo e na formao de compostos txicos (ARAJO, 2001). Os agentes antioxidantes so usados na indstria farmacutica e na formulao de cosmticos para a preveno de deterioraes autooxidativas dos lipdios presentes em materiais vivos; os antioxidantes so introduzidos como constituinte primrio em cosmticos utilizados na neutralizao de radicais livres produzidos pela luz ultravioleta e poluentes ambientais envolvidos nos processos de envelhecimento da pele (LUPO, 2001). Durante a oxidao de cidos graxos insaturados, via mecanismo de formao de radicais livres, os hidroperxidos so os primeiros produtos formados, os quais se degradam liberando novos radicais livres e promovendo a continuidade da oxidao do leo ou gordura, alm da formao de diferentes aldedos volteis. O efeito do antioxidante consiste na inativao dos radicais livres, na complexao de ons metlicos ou na reduo dos hidroperxidos para produtos incapazes de formarem radicais livres e produtos de decomposio ranosos (ARAJO, 2001). Um bom antioxidante deve ser seguro, no conferir cor, odor ou sabor ao produto, ser eficaz em pequena concentrao e de fcil incorporao, resistir ao processamento, ser estvel no produto acabado e disponvel em baixo custo (SHAHIDI; WANASUNDARA, 1986). Segundo a Food and Drugs Administration (FDA), antioxidantes so definidos como substncias utilizadas para preservar alimentos, retardar a deteriorao, rancidez ou a descolorao, devido o processo de oxidao (ADEGOKE et al., 1998). Dentre as substncias aprovadas como antioxidantes para alimentos o butilhidroxianisol (BHA) e o butilhidroxitolueno (BHT) esto entre os de uso mais amplo em inmeros produtos lipdicos, apresentando boa resistncia a processos de forneamento. O t-butilhidroquinona (TBHQ) efetivo na estabilizao de leos altamente insaturados e eficiente se submetido fritura (SARMENTO, 2002). Estudos realizados mostraram que a adio de 2 % a 5 % de leo de arroz, processado especialmente para reter -orizanol, ao leo de soja desodorizado, aumenta a estabilidade do leo, agindo como um sistema de multicomponentes de antioxidantes naturais, enquanto que a adio de 0,1 % do leo de arroz com alto teor de -orizanol ao leite em p diminui significativamente a oxidao do mesmo, comprovando o potencial antioxidante do -orizanol (NANUA et al., 2000).

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3.5 Orizanol

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O -orizanol foi inicialmente encontrado no leo de arroz em 1954. Como foi isolado do leo obtido a partir do arroz (Oryza sativa) e continha um grupo hidroxila em sua estrutura, foi convenientemente chamado de orizanol. Estudos posteriores revelaram que o orizanol no um composto simples e sim uma mistura de steres do cido ferlico (GRAF, 1992). O -orizanol caracterizado como um p branco ou levemente amarelo, cristalino, inspido, com pouco ou nenhum odor. Definido como uma mistura de steres do cido ferlico com esterol ou lcoois triterpnicos. Consiste principalmente de cicloartenil ferulato, 24-metileno-cicloartanil ferulato, campesteril ferulato, -sistoteril ferulato e cicloartanil ferulato (EVERSHED et al., 1988), cujas estruturas esto representadas na Figura 5, mas inclui tambm outros componentes menores como estigmastenil ferulato, campestenil ferulato e sitostanil ferulato (XU; GODBER, 1999), pois dependendo da tcnica cromatogrfica utilizada, diferentes componentes tm sido identificados.

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Fonte: JAHN, 2004. Figura 5 Principais compostos constituintes do -orizanol.

O contedo de -orizanol no leo de farelo de arroz bruto est na faixa de 1 % a 2 % (SCARAVIELLO, 2002). Componentes de -orizanol tambm foram isolados de gros de milho, trigo e cevada (SEITZ, 1989, MOUREAU et al., 1996), porm o leo de farelo de arroz a fonte natural mais acessvel para recuperao deste composto (DAS et al., 1998). A atividade antioxidante do -orizanol pode ser atribuda principalmente ao cido ferlico. Este esterificado com esteris de plantas, como o caso do -orizanol, aumenta o potencial antioxidante promovendo acesso molecular a componentes hidrofbicos que so mais susceptveis destruio celular oxidativa (GRAF, 1992), pois o potencial antioxidante aumenta com a extenso da hidroxilao dos anis aromticos.

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O -orizanol tem sido utilizado no Japo para conservar leos, alimentos e bebidas na forma de uma mistura sinrgica com a vitamina E e tambm em frmulas medicinais e cosmticas (TSUNO, 1995). Segundo IRGA (2005), o -orizanol possui diversos efeitos benficos sade podendo ser utilizado pelas indstrias de frmacos para formulaes de medicamentos capazes de prevenir e combater diversas doenas. Dentre os efeitos do -orizanol, esta fonte cita: Efeitos benficos no crescimento; Combate doenas ceflicas e cervicais; Minimiza sintomas da menopausa; Combate anemia; Tratamento de lceras do estresse; Coadjuvante no tratamento de doenas circulatrias; Usado como medicamento, em composio de cosmticos, como agente antienvelhecimento da pele e como filtro solar; Tendo efeito semelhante a hormnios (esterides) usado na alimentao de cavalos de corrida, por ser seguro e legalmente permitido. A solubilidade do -orizanol em metil-etil-cetona aproximadamente 20 %. O -orizanol praticamente insolvel em gua. A Tabela 4 apresenta a solubilidade do orizanol em diversos solventes.

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Tabela 4 Solubilidade do -orizanol. Solvente gua Etanol Metanol n-Hexano n-Heptano Benzeno Acetona Clorofrmio Metil-etil-cetona Fonte: TSUNO CO, 1995. Solubilidade (20 C) (g/L) 0,1 1,3 1,4 2,8 4 40 67 100 200

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Juliano et al. (2005) investigaram o poder antioxidante do -orizanol, comparando com antioxidantes sintticos, como BHA e BHT, confirmando seu potencial como antioxidante natural, estabilizando leos e gorduras. Embora o orizanol no tenha apresentado propriedades antioxidantes excepcionais, ele pode ser usado em associao com outros antioxidantes naturais, obtendo misturas capazes de superar os estabilizantes sintticos mais comumente usados. Essa caracterstica muito interessante, visto que o mesmo possui outras atividades biolgicas, podendo ser usado, assim, como um ingrediente multifuncional para formulaes farmacuticas, cosmticas e para alimentos (JULIANO et al., 2005).

3.6 Extrao supercrtica

A extrao supercrtica vem sendo utilizada com muito sucesso para obteno de produtos de grande interesse para os setores alimentcio, qumico e farmacutico. uma tecnologia que se destaca pela rapidez do seu processo de extrao e baixo custo de solvente (JAHN, 2004). A tcnica de extrao empregada na elaborao de derivados de plantas medicinais ou de compostos de alto valor agregado de diferentes produtos naturais fundamental para a definio da qualidade do produto. Os processos convencionais de

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extrao so hidrodestilao e extrao com solventes orgnicos, operaes possivelmente responsveis pela degradao trmica de componentes termolbeis presentes na matria-prima e pela contaminao do extrato com resduos de solvente, normalmente empregado em quantidades excessivas. Aliado a isto, a competitividade da rea de fitoterpicos, que tem como fatores fundamentais conquista de mercados, a qualidade, a disponibilidade e o preo, sinalizam para a importncia do emprego de tcnicas modernas de extrao (REVERCHON; DE MARCO, 2006). Como uma possvel alternativa, muitos estudos tm sido realizados com CO2, prximo ao ponto crtico, como um solvente para extrao de oleoresina de vrios componentes naturais (RODRIGUES et al., 1997). Estas tcnicas incluem processos como a ESC, utilizando fluidos em condies prximas ou acima de seu ponto crtico como solventes de extrao e seu emprego em processos industriais vem ganhando espao, principalmente devido aos fatores ambientais e de qualidade envolvidos. Trata-se de um processo livre de resduos txicos e no provoca a degradao trmica dos extratos, como ocorre em processos de destilao (BRUNNER, 1994; MARTNEZ et al., 2004). Os conceitos de eficincia e seletividade foram propulsores para o crescente interesse da comunidade cientfica e do setor industrial em relao aos processos de extrao supercrtica, ou seja, uma tecnologia alternativa que visa resolver problemas de separao. Como principal justificativa, indica-se propriedades dos fluidos supercrticos, que englobam as vantagens dos fluidos nos estados lquido e vapor, simultaneamente, quanto solubilidade e transporte (BRENNECKE; ECKERT, 1989). A extrao com fluidos supercrticos em escala industrial teve seu incio na Alemanha, no final da dcada de 70 (MOORE et al., 1994) com o processo de descafeinizao do caf. Isto foi resultado da evoluo tecnolgica, que exige um contnuo desenvolvimento dos processos de separao, muitas vezes provocando a substituio dos processos tradicionais. Os processos de extrao supercrtica classificam-se neste ciclo evolutivo, destacando-se as seguintes caractersticas: considerada uma tecnologia limpa que no deixa resduo, utiliza solventes no txicos, no altera as propriedades das matrias-primas e utilizada para extrao de produtos de alta qualidade. Porm, as vantagens apresentadas no significam que se tenha um domnio total desta tecnologia. Existem deficincias que devem ser analisadas com o objetivo de aprimorar e otimizar os processos. Dentre elas cita-se o investimento inicial e as condies de trabalho, ambos associados presso de operao do sistema (SUTTER et al., 1994).

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Alguns exemplos de processos que utilizam a extrao com fluido supercrtico so a remoo de nicotina do tabaco, da cafena do caf e chs, do lpulo para fabricao de cerveja, a extrao de leos de sementes oleaginosas, extrao de lipdios como colesterol, extrao de aromas e condimentos e a extrao de compostos volteis do carvo. Alm destas aplicaes, a ESC de leos volteis e oleoresinas, tm recebido muita ateno nas duas ltimas dcadas (CARVALHO JNIOR, 2004). Extrao de leos e gorduras com CO2 supercrtico de uma grande variedade de fontes naturais, como diferentes tipos de sementes, temperos, produtos crneos, produtos marinhos, entre outros, tem sido relatada amplamente na literatura (VAQUERO et al., 2006). A ESC o processo baseado no contato entre uma matria-prima e um solvente pressurizado, removendo os compostos de interesse da fase slida (FERREIRA et al., 1999; MARTNEZ et al., 2003). Uma vantagem da ESC a possibilidade de fcil recuperao do solvente aps o processo de extrao, apenas pelo ajuste de presso e/ou temperatura, podendo o mesmo ser continuamente reciclado. Isto elimina uma das etapas mais dispendiosas dos processos de extrao convencionais que a separao entre produto extrado e solvente orgnico (BRUNNER, 1994). Na prtica o estado supercrtico obtido com o aumento da temperatura e da presso de um gs ou lquido, de forma que se altere o estado de agregao e, como conseqncia, as propriedades da substncia de interesse (LANAS e RUGGIERO, 2000). A extrao com fluidos supercrticos emprega solvente acima ou prximos de suas temperatura e presso crtica (BRUNNER, 1994). As propriedades dos fluidos supercrticos com maior importncia para a extrao so a densidade, a viscosidade e o coeficiente de difuso que tomam valores que se aproximam dos valores de lquido, no caso da densidade e valores prximos das dos gases, no caso da viscosidade e do coeficiente de difuso. Estas propriedades, particularmente a densidade, podem ser alteradas com pequenas variaes de presso e temperatura, permitindo o fracionamento do extrato. Na zona prxima ao ponto crtico onde se produzem, com pequenas alteraes de presso e temperatura, as maiores variaes da densidade do fluido supercrtico, e por conseqncia do seu poder solvente (BERNARDO-GIL et al., 2002). O processo de extrao supercrtica de matrizes slidas consiste de duas etapas, conforme a Figura 6: a extrao e a separao do extrato do solvente. Na extrao, o solvente supercrtico atravessa um leito fixo de partculas slidas, de

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maneira contnua, dissolvendo os componentes solveis da matriz. O solvente alimentado no extrator e distribudo uniformemente no interior do leito fixo. A separao solvente/soluto obtida pela reduo de poder de solvatao do solvente, ou seja, por uma reduo de presso ou aumento de temperatura (BRUNNER, 1994).

Fonte: BRUNNER, 1994. Figura 6 Fluxograma de extrao supercrtica de matrizes slidas.

A extrao de solutos presentes em slidos, com o emprego de gases pressurizados, consiste na solubilizao e posterior separao da mistura soluto/solvente. Durante o processo de extrao o solvente supercrtico escoa atravs de um leito fixo, constitudo de partculas slidas, dissolvendo os componentes solveis. O esgotamento do slido ocorre na direo do escoamento, enquanto a massa de extrato na fase solvente aumenta na mesma direo. O solvente alimentado no extrator atravessa o leito fixo e carrega consigo o soluto, que na sada do extrator, precipitado atravs da simples expanso do solvente (BRUNNER, 1994). Brunner (1994) observou que, durante a extrao dos componentes solveis de um produto natural, ocorre: A matriz slida absorve o solvente supercrtico. Como conseqncia, a estrutura celular dilata-se, sendo que a resistncia ao transporte de massa diminui; Paralelamente, os componentes solveis presentes na matriz so dissolvidos pelo solvente. Nessa etapa podem ocorrer reaes qumicas;

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Os componentes solubilizados pelo solvente so ento transportados para a superfcie do slido. Nesta etapa a difuso o mecanismo de transporte mais importante. Estes componentes, agora dissolvidos, formam a fase fluida e escoam para a sada do extrator.

O pr-tratamento da matria-prima vegetal antes da formao do leito de extrao envolve, entre outros processos, a moagem da estrutura da qual o soluto ser retirado. Este procedimento visa, a princpio, reduzir o tamanho das partculas do slido, de forma que a rea de contato entre este e o solvente seja aumentada. No entanto, outra conseqncia da moagem o rompimento das estruturas celulares que contm o soluto, de forma que parte deste fica livre para o contato com o solvente (MARTNEZ, 2005). Brunner (1994) cita que a razo de solvente, definida como a razo entre a vazo mssica de solvente e a massa de slidos, um dos fatores mais relevantes para o processo de extrao. O aumento da vazo mssica de solvente para uma quantidade fixa de slidos pode resultar em uma reduo da carga do solvente, devido a um menor tempo de residncia. No entanto, devido maior vazo, a velocidade de extrao tende a aumentar at um valor mximo a partir do qual pode sofrer um declnio. A resistncia transferncia de massa no interior das partculas slidas na maioria das vezes dominante no processo. Para reduzi-la e, conseqentemente, aumentar o rendimento de extrao, deve-se reduzir o tamanho das partculas de modo a aumentar a rea de contato slido/solvente e diminuir a distncia que o soluto deve percorrer no interior da partcula porosa. Partculas grandes fornecem espaos para que o solvente flua entre as diferentes capas de partculas. Pequenas partculas so, aproximadamente, lminas achatadas, formando capas densas, as quais no permitem a formao de canais para o escoamento de fluidos. A reduo da granulometria do slido no pode ser realizada indefinidamente, pois partculas muito pequenas podem formar aglomerados e interromper a passagem do solvente pelo leito, formando caminhos preferenciais deste na matriz (BRUNNER, 1994).

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3.6.1 CO2 supercrtico

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O solvente utilizado na extrao com fluido supercrtico deve apresentar os seguintes requisitos: possuir bom poder de solvatao, ser inerte e facilmente separado do produto, relativamente barato, deve ter presso e temperatura crticas amenas por razes econmicas. O uso do dixido de carbono como solvente no processo de extrao supercrtica, alm de apresentar estes requisitos pode ser comumente empregado na indstria de alimentos e de aromas por ser no txico, no carcinognico e no inflamvel (BRUNNER, 1994; VAQUERO et al., 2006). Assim, o CO2 apresenta as seguintes vantagens (MICHIELIN, 2005; VAQUERO et al., 2006): Temperatura crtica de 31,04 C e presso crtica de 73,8 bar: fceis de obter e trabalhar em um processo de produo industrial com baixo custo de aquecimento e compresso; Inerte: no oferece riscos de reaes secundrias, como oxidaes, redues, hidrlises e degradaes qumicas; Seguro: um material no inflamvel, no corrosivo, no txico e no poluente, considerado um solvente verde; Barato e disponvel em alta pureza; Verstil: a seletividade da extrao pode ser modificada facilmente pela adio de pequenas quantidades de outros produtos, chamados de cosolventes e tambm pela seleo das condies de temperatura e presso especficas; essas opes adicionam flexibilidade e permitem a adequao de condies de extrao para as necessidades especficas dos produtos a serem extrados e ao produto final desejado.

O CO2 supercrtico essencialmente um solvente apolar, e seu poder de solvatao varia com a densidade. Permite extrair grande variedade de compostos lipoflicos, como hidrocarbonetos, teres, steres, cetonas, dependendo da presso aplicada (ARAJO, 1999). Seu principal inconveniente a apolaridade que o faz um solvente pobre para a extrao de solutos polares (VAQUERO et al., 2006). Um co-solvente lquido pode ser adicionado ao CO2 supercrtico para aumentar seu poder de solvatao para molculas polares. Vrios autores adicionaram

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quantidades pequenas de solventes lquidos (por exemplo, lcool etlico) que misturado com o CO2 supercrtico. Quando em soluo, os co-solventes modificam o poder de solvatao do CO2, permitindo extrair substncias polares, como acares, aminocidos, glicosdeos, e protenas. Esta estratgia tem a desvantagem que, um maior poder de solvatao tambm pode significar menor seletividade do processo, pois o co-solvente lquido a presso atmosfrica, sendo coletado no separador junto com o leo. Assim, um processo subseqente para eliminao de solvente requerido (REVERCHON; DE MARCO, 2006). Existem outros gases que tambm tm propriedades solventes interessantes no seu estado supercrtico. Por exemplo, hidrocarbonetos como hexano, pentano e butano, xido nitroso, hexafluorido de enxofre e hidrocarbonetos fluoretados. Entretanto, por razes de custo, perigo de exploso, toxicidade, inflamabilidade e propriedades fsicas adversas, poucos so usados comercialmente (REVERCHON; DE MARCO, 2006).

3.6.2 Curva de extrao

O estudo da curva de extrao para um determinado processo pode ajudar a definir o volume do extrator e a vazo requerida de solvente para a taxa de extrao desejada (CARVALHO JUNIOR, 2004). Isso se d atravs do conhecimento termodinmico do sistema (solubilidade e seletividade) bem como a cintica do processo (taxa de transferncia de massa) (FERREIRA; MEIRELES, 2002). As curvas de extrao so determinadas pela massa de extrato obtida em funo do tempo ou da massa de solvente utilizada (BRUNNER, 1994). A Figura 7 apresenta uma curva tpica de extrao.

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Fonte: BRUNNER, 1994. Figura 7 Curva tpica de extrao.

A tpica curva de extrao demonstrada na Figura 6 caracterizada por trs perodos (BRUNNER, 1994; SOVOV, 1994): a) Perodo de taxa constante de extrao (CER), onde a superfcie externa do slido est completamente recoberta de soluto; b) Perodo de taxa decrescente de extrao (FER), onde aparecem falhas nas camadas superficiais de soluto que recobrem o slido; c) Perodo difusional, caracterizado pela difuso da mistura soluto/solvente no slido.

A curva de extrao pode ser utilizada para determinar parmetros de processo como: tempo total de extrao, caracterizao das etapas da extrao, determinao da solubilidade experimental e modelagem da transferncia de massa do sistema (SILVA, 2004). As curvas de extrao so obtidas atravs da seguinte relao (CAMPOS et al., 2005), conforme a Equao (1):

m = QCO 2

tTOTAL

Y (t )dt
0

(1)

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Onde: m = massa de extrato obtida em kg; QCO2 = a vazo de solvente (kg.s-1); t = tempo (s); Y(t) = concentrao de soluto na fase solvente (kg de soluto/kg de solvente).

3.6.3 Rendimento

O rendimento de um processo de ESC pode ser expresso pela razo entre a massa de extrato obtida e a massa de matria-prima usada. Esta forma de definir o rendimento, no entanto, pode levar interpretaes erradas sobre um processo. De um modo geral, na ESC a partir de matrias-primas vegetais usando CO2 como solvente, a porcentagem de material extravel da ordem de 1 % a 10 % (MARTNEZ et al., 2005). Assim, o rendimento global de extrao (X0), definido como a quantidade total de leo extravel do material slido em condies pr-estabelecidas, principalmente de temperatura e presso utilizadas na extrao. A quantidade total de leo extravel composta pela soma do leo de fcil acesso, removido do slido a uma taxa constante de extrao e do leo de difcil acesso, que extrado numa segunda etapa da extrao, controlada pela resistncia interna transferncia de massa (SOVOV, 1994). O valor de X0 no depende apenas das caractersticas da matria-prima, mas tambm da forma com que os compostos nela presentes interagem com o solvente. Isto significa que as propriedades do solvente tambm influenciam no valor de X0. Entre estas propriedades est a densidade do solvente que afeta diretamente o seu poder de solvatao (RODRIGUES et al., 1996). O rendimento global, ou o valor de X0, pode ser definido termodinamicamente como uma propriedade intensiva, uma vez que, para um determinado sistema, depende apenas da temperatura e da presso, mas no da quantidade de matriaprima ou de solvente utilizado (MARTNEZ, 2005).

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3.6.4 Modelagem

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A modelagem matemtica de curvas de ESC empregada por vrios autores com o objetivo de reproduzir dados experimentais existentes, e a partir deles ajustar parmetros de processo que permitam a simulao das operaes de extrao em outras escalas e em outras condies operacionais (MARTNEZ, 2005). Existe um grande nmero de modelos matemticos presentes na literatura para a extrao de leos com CO2 pressurizado. O processo de extrao pode ser analisado e modelado de uma forma simples, considerando apenas valores mdios dos parmetros de extrao e ajustando o modelo dados experimentais para determinar os coeficientes desconhecidos. Para uma modelagem mais completa necessrio realizar uma anlise aprofundada do mecanismo de extrao, considerando fatores como difuso intraparticular, disperso axial e radial, transferncia de massa atravs da interface slido/fluido, resistncia transferncia de massa devido a reaes qumicas e transies de fase (BRUNNER, 1994). Um modelo no deve ser apenas um instrumento matemtico, mas deve refletir a viso fsica da estrutura slida e das observaes experimentais. Modelos matemticos, os quais no tm correspondncia fsica com o material e o processo estudado, so de validade limitada embora possam ser usados para ajustar alguns dados experimentais. Para a modelagem da extrao supercrtica tm sido propostas trs abordagens diferentes: (1) emprica, (2) baseada na analogia da transferncia de calor e massa, (3) integrao do balano de massa diferencial. A partir da integrao das equaes diferenciais de balano de massa os perfis de concentrao em funo do tempo so obtidos para as fases fluida e slida. A curva de extrao calculada a partir da concentrao na fase fluida na sada do extrator (REVERCHON; DE MARCO, 2006). Martnez et al. (2003) props um modelo matemtico que pode ser aplicado considerando o extrato como um nico pseudocomposto ou como uma mistura de substncias ou grupos de compostos de estrutura qumica similar. O acmulo e a disperso na fase fluida so negligenciados porque esses fenmenos no tm influncia significante no processo quando comparados aos efeitos de conveco. O modelo proposto foi aplicado para a extrao supercrtica de oleoresina de gengibre. Quando o soluto considerado como um pseudocomponente, a massa de soluto pode ser descrita conforme a Equao (2).

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m ext ( h = H , t ) =

m0 1 + exp( bt m ) 1 + exp[b ( t t ) ] 1 exp( bt m ) m

(2)

Sendo: m 0 = x 0 m t

Onde: mext a massa de extrato (g), m0 massa inicial total de soluto no leito de extrao(g), t o tempo de extrao (s), b e tm so parmetros ajustveis do modelo.

O modelo de placa (SSP), proposto por Gaspar et al. (2003),apresentado na Equao (3), tambm considera a transferncia de massa como uma analogia transferncia de calor como o modelo de difuso. A diferena entre estes dois modelos que no modelo SSP as partculas slidas so consideradas como placa enquanto que no modelo de difuso as partculas so consideradas esfricas.

mext

Dm (2n + 1)2 2 t 8 = m0 1 exp 2 (2n + 1)2 0

(3)

Onde: mext a massa de extrato (g), m0 o contedo inicial de soluto na fase slida (g), Dm representa a difusividade na matriz slida (m2/min), a espessura das partculas (placas) (m).

Esquvel et al., (1999) avaliaram trs modelos matemticos para a simulao das curvas de extrao de casca de azeitonas, dois deles baseados no balano diferencial de massa e um emprico baseado na equao da cintica de crescimento microbiano. A equao emprica que representa a curva de extrao aplicada para ajustar o leo de casca de azeitona est apresentada na Equao (4):

t m(t ) = X 0 F B+t

(4)

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Onde: m(t) a massa de extrato em funo do tempo (kg); t o tempo de extrao (s); F a massa de matria-prima (kg); X0 a razo mssica inicial de soluto na fase slida (kg/kg) e B um parmetro ajustvel (s).

3.7 Produo de orizanol

Durante o desenvolvimento de um processo de larga escala, fundamental considerar produtividade (tempo e requerimento de recursos humanos), problemas relacionados segurana e sade, e, o investimento em operaes (equipamentos e recuperao de solventes), confrontando com a eficincia de separao (pureza e rendimento do produto) (NARAYAN et al., 2006). Para isolar o orizanol deve-se levar em conta a complexidade de sua purificao devido a grande quantidade de compostos que interferem nas etapas de sua purificao (DAS, et al, 1998).

3.7.1 Complexidades na extrao do orizanol

A produo, que envolve isolamento e purificao de orizanol apresenta alguns problemas, que so raramente discutidos, devido quantidade de compostos que interferem durante sua lixiviao, extrao e cristalizao (NARAYAN et al., 2006). Os problemas encontrados durante a extrao do orizanol so geralmente devidos s variaes na composio da borra, que incluem impurezas com superfcie ativa como os sabes, fosfolipdios, ceras e glicolipdios. As condies do processamento usado durante o refino do leo e a variao sazonal na composio da semente, ditam o tipo e a quantidade de impurezas extradas com a RBOS. Assim, a quantidade de impurezas individuais que so removidas varia entre as RBOS. Portanto, nem sempre um procedimento desenvolvido para um determinado tipo de RBOS funcionar bem para outros tipos. As impurezas tambm afetam as condies do processo e dificultam o equilbrio das etapas do processo de separao, como a extrao, isolamento e purificao (NARAYAN et al., 2006). Durante o refino alcalino do leo de farelo de arroz, uma significante quantidade de leo retida com a RBOS. Quando o sabo centrifugado, o leo

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tambm centrifugado, sendo que uma quantidade significante de orizanol removida com o leo para a RBOS (NARAYAN et al., 2006).

3.7.2 Impurezas que interferem na extrao do orizanol

O conhecimento dos tipos de impurezas associadas com o orizanol na RBOS do leo de farelo de arroz essencial no desenvolvimento de um processo de larga escala para o isolamento de orizanol. As principais impurezas removidas incluem cidos graxos livres, sabo, glicerinas, fosfolipdios, ceras, esteris, glicolipdos, material resinoso, derivados do tocoferol e pigmentos (NARAYAN et al., 2006).

- Sabes A RBOS resultante do refino qumico do leo de farelo de arroz contm de 65 % a 70 % (p/p) de sais de sdio de cidos graxos livres. So solveis em metanol, mas insolveis em acetatos e acetona. Caracterstica contrria ao orizanol, o qual insolvel em solventes polares, como a gua, e solvel em solventes apolares, como o hexano. Essa diferena de solubilidade entre o orizanol e os sabes a base para a separao destes atravs de extrao (SASKA; ROSSITER, 1998).

- Glicerdeos Geralmente presentes na forma de trialcilgliceridios (TAG) so solveis na maioria dos solventes orgnicos, como hexano, lcool isoproplico, clorofrmio e acetato de etila. Uma estratgia para remover esses compostos saponificar a RBOS, em meio alcalino, tornando os TAG em sabes de sdio, removendo posteriormente o orizanol por lixiviao (SASKA; ROSSITER, 1998; SEETHARAMAIAH; PRABHAKAR, 1986).

- Fosfolipdios (gomas) A proporo de gomas presentes na RBOS dependem da eficincia do processo de degomagem, sendo um dos principais interferentes na separao entre o orizanol e a RBOS, devido, provavelmente, a sua alta atividade surfactante. Durante

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as extraes com solvente, as gomas estabilizam as microemulses entre o solvente e a RBOS, diminuindo a taxa de separao de fases (NARAYAN et al., 2006).

- Ceras No apresentam muitos problemas durante o isolamento do orizanol, porm formam emulses estveis durante o refino do leo diminuindo o seu rendimento. So insolveis em acetona, acetato de etila, hexano e cido isoproplico, porm so solveis em hexano aquecido, podendo assim dificultar a extrao do orizanol da RBOS (NARAYAN et al., 2006).

- Esteris Constituem a maior poro dos materiais insaponificveis da RBOS. Durante o refino alcalino, quantidades significantes de esteris provenientes do leo so extrados para a RBOS. As condies do processo de isolamento do orizanol promovem reaes qumicas dos esteris, como hidrlise, oxidao, desidrogenao e isomerizao. Temperatura, pH e tempo do processo contribuem na taxa de degradao do esterol (NARAYAN et al., 2006).

- Material resinoso So formados pela polimerizao das ceras. Este material pode ser saponificado a triacontanol e sabes. Estes interferem principalmente nos processos de purificao do orizanol por cromatografia, adsorvendo-se fortemente no suporte junto com o orizanol, e na cristalizao, interrompendo o crescimento dos cristais de orizanol (NARAYAN et al., 2006).

- Tocoferis e derivados Outras impurezas no leo do farelo de arroz carregadas para a RBOS so os derivados do tocoferol. Estes componentes so separados do orizanol geralmente por cromatografia de fase normal e HPLC (ROGERS et al., 1993).

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- Pigmentos

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O leo de farelo de arroz contm pigmentos como clorofila, carotenides e produtos da degradao protica. Se estas impurezas no forem removidas durante o branqueamento, elas sero carregadas para a RBOS durante o refino alcalino (GUHE; BHOWMICK, 1998).

3.7.3 Tecnologias de extrao de orizanol

3.7.3.1 Processos baseados na extrao A purificao do orizanol composta por duas etapas: lixiviao do orizanol da RBOS seca; e lixiviao das impurezas da frao enriquecida de orizanol (NARAYAN et al., 2006). Lixiviao a operao mais simples para separao e purificao do orizanol da RBOS. Consiste na extrao dos componentes solveis de uma fase slida insolvel e permevel, usando um solvente especfico. Outra forma de procedimento da lixiviao atravs da saponificao da RBOS, transformando-o num segundo sabo, removendo assim menos impurezas junto com o orizanol (SEETHARAMAIAH; PRABHAKAR, 1986).

3.7.3.2 Extrao Lquido-lquido (LLE) O desempenho dos processos baseados na extrao lquido-lquido depende principalmente do diferencial de diviso do orizanol e dos outros componentes da RBOS entre as fases de dois lquidos imiscveis. Os critrios para seleo das duas fases e as condies para a LLE se baseiam no diferencial de diviso entre o produto e as impurezas entre as fases e a rpida separao das fases aps a mistura dos lquidos (NARAYAN et al., 2006).

3.7.3.3 Extrao supercrtica (ESC) A extrao supercrtica do leo de farelo de arroz com CO2 possui certas vantagens, visto o baixo custo do CO2 e a segurana tanto em produtos alimentcios

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como ao ambiente (DUNFORD et al., 2000). Estudos recentes mostram que o rendimento de orizanol no leo usando ESC maior que os conseguido utilizando a extrao com solventes, usando diferentes solventes e condies de processo (XU; GODBER, 2000). No entanto no existem relatos utilizando o material insaponificvel do leo de farelo de arroz como material de alimentao para ESC (NARAYAN et al., 2006).

3.7.3.4 Mtodos baseados na cristalizao ou precipitao Durante a cristalizao, os parmetros considerados so a temperatura do solvente ou mistura de solventes e taxa de crescimento dos cristais, sendo o princpio baseado na diferena de solubilidade entre o orizanol e as impurezas contidas na RBOS nas misturas de solventes em diferentes temperaturas. A maioria das patentes relacionadas com a cristalizao do orizanol no deixa clara a pureza e o rendimento de orizanol obtido (NARAYAN et al., 2006).

3.7.4 Mtodos patenteados de produo de orizanol

Atualmente existem diversas patentes de produo de -orizanol, sendo que a maioria requer o uso de mltiplos processos para purificao do mesmo. Alguns mtodos utilizados so: utilizao de solventes orgnicos seletivos para extrair o orizanol, seguido de purificao cromatogrfica (NARAYAN et al., 2006); isolamento do orizanol do leo de arroz bruto por precipitao das estearinas com sulfato de alumnio seguido de cristalizao do orizanol; separao de -orizanol em alta concentrao do leo de farelo de arroz atravs de tratamento alcalino (NARAYAN et al., 2006); recuperao de orizanol do leo de farelo de arroz degomado e decerado com slica, em coluna cromatogrfica, seguido de cristalizao do orizanol com nheptano (SASKA; ROSSITER, 1998); isolamento do orizanol por transesterificao do leo de farelo de arroz com metanol e cido sulfrico seguido por purificao em coluna cromatogrfica preenchida com Amberlite IRA-401, usando mistura dos solventes metanol e ter como eluente (JP 8295942,1982 citado por RAO et al., 2002). Outro mtodo de purificao de orizanol consiste na utilizao da RBOS obtida na neutralizao do leo de farelo de arroz. Esse mtodo consiste na saponificao

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total da RBOS, seguido pelos processos de aerao e secagem da mesma para obter um sabo poroso. Este sabo submetido extrao com solvente orgnico para remoo da parte insaponificvel. Aps essa etapa utiliza-se uma soluo de solventes para remoo das ceras presentes e cristaliza-se o material insaponificvel para remoo de impurezas. Este material cristalizado submetido coluna cromatogrfica para obteno de uma frao rica em orizanol. Esta frao enriquecida recristalizada, utilizando solvente orgnico, para obteno de orizanol puro (RAO et al., 2002). Existem pesquisas sendo realizadas para obteno de leo de farelo de arroz com maior teor de orizanol e outros compostos nutricionalmente importantes, estes estudos visam diminuir a perda desses compostos, empregando novas tecnologias para extrao e refino do leo. Xu e Godber (2000) compararam diversos solventes orgnicos e extrao supercrtica para obteno de leo rico em orizanol. Sendo que a mistura de solventes isopropanol e hexano foi a que obteve maior rendimento de orizanol no extrato, porm essa concentrao foi quatro vezes menor que a encontrada quando o leo foi extrado supercrticamente do farelo, usando CO2 como solvente a 50 C e 680 bar. Dunford et al., 2002, utilizaram a tcnica de fracionamento supercrtico para desacidificar o leo de farelo de arroz bruto, em coluna de fracionamento com temperatura variando de 45 C a 80 C e presso entre 138 bar e 275 bar, sendo que o material refinado apresentou concentrao de orizanol trs vezes maior que o material alimentado, enquanto que na desacidificao qumica ocorre perda de orizanol, por arraste no material saponificado. Perreti et al. (2002) obtiveram leo de farelo de arroz com melhor qualidade que os mtodos tradicionais usando ESC, sendo que a 700 bar e 80 C obtiveram leo com 18 mg/g de orizanol, diminuindo as perdas de orizanol durante a extrao do leo de arroz. Atualmente no Brasil, no existe nenhuma planta de extrao, isolamento ou purificao de orizanol. Vrios estudos e tcnicas esto sendo estudas para melhorar a qualidade do leo de farelo de arroz pela minimizao das perdas de orizanol e outros micronutrientes importantes ou pela recuperao do orizanol perdido nas etapas do refino do leo de farelo de arroz.

Material e Mtodos
4 MATERIAL E MTODOS

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4.1 Matria-prima

A matria-prima utilizada foi a borra proveniente da neutralizao do leo bruto de farelo de arroz (RBOS), fornecida pela indstria IRGOVEL S.A., localizada no municpio de Pelotas, Rio Grande do Sul. A amostra foi enviada em um recipiente plstico, com capacidade de 50 kg. A matria-prima foi conservada, em temperatura ambiente, neste mesmo recipiente, fechado, evitando contato com o ar, luz e umidade.

4.2 Determinao do teor de umidade da RBOS

Para determinao do teor de umidade foi utilizado o mtodo de Perda por Dessecao (AOAC, 1990). Cinco gramas da amostra foram pesadas em cadinho tarado, previamente aquecido em estufa, sem circulao de ar, a 105 C, por 1 hora, resfriado em dessecador at temperatura ambiente e pesado. Os cadinhos com as amostras foram aquecidos em estufa a 105 C por 6 horas, resfriados em dessecador at a temperatura ambiente e pesados. Essa operao de aquecimento e resfriamento foi repetida at peso constante da amostra. Para o clculo do teor de umidade, a Equao (5) foi empregada:

Teor de umidade (m/m) (%) =

100 xN P

(5)

Onde:N = perda de peso (g); P = massa inicial de amostra (g).

Material e Mtodos
4.3 Tratamento da matria-prima

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A fim de padronizar a matria-prima utilizada e evitar algumas impurezas que pudessem interferir nos processos de extrao do orizanol, a RBOS foi submetida a uma srie de tratamentos e posteriormente conservadas em sacos de polietileno, identificadas e acondicionadas em refrigerador domstico marca Cnsul, a temperatura de -5 C. As etapas utilizadas foram: saponificao, formando o saponificado da RBOS, onde alguns materiais presentes na RBOS so saponificados e no interferem na etapa de extrao; secagem, a fim de diminuir o teor de gua presente na amostra e aumentar o rendimento de extrao; moagem, para diminuir o tamanho de partcula; anlise granulomtrica.

4.3.1 Saponificao

A RBOS foi inicialmente tratada com lcali para sua saponificao, a temperatura de 90 C, sob agitao constante, durante 1 h. O lcali usado foi NaOH, na proporo de 1:20 de matria seca da RBOS, a mesma utilizada por Rao et al., (2002). Utilizou-se um banho trmico (TC) (Microqumica, modelo MQBTZ99-20) para o aquecimento da RBOS, com controle de temperatura em 90 C, verificada atravs de termmetro (INCOTERM, -10 C a 110 C), no centro da amostra e controle do pH, utilizando tiras com indicadores coloridos de pH (MACHEREY NAGEL, pH-FIX 0 14). O pH foi ajustado sempre em 14 para garantir saponificao total dos compostos presentes na RBOS. O excesso de NaOH foi neutralizado com bicarbonato de sdio, controlando para que o pH final permanecesse entre 9 e 10, faixa tima para extrao do orizanol do saponificado do RBOS, segundo Seetharamaiah e Prabhakar (1986). Para evitar que alguns compostos fossem extrados junto com o orizanol nas etapas de extrao, optou-se por saponificar a RBOS, impedindo assim que alguns compostos atrapalhassem nas prximas etapas da obteno do orizanol. A saponificao foi feita seguindo o mtodo proposto por Rao et al (2002), sendo que foram feitas algumas modificaes para adaptar essa metodologia estrutura do laboratrio.

Material e Mtodos

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Inicialmente foram testados mtodos para o aquecimento da RBOS durante a saponificao, visto que a mesma devia encontrar-se a temperatura de 90 C. Os mtodos testados foram aquecimento direto em chapa trmica, aquecimento em banho-maria e adio de soluo de NaOH em aquecimento direto em chapa. O mtodo do aquecimento direito em chapa foi descartado por queimar a parte inferior da matria-prima, podendo ser por causa da falta de eficincia na agitao ou pela temperatura muita alta da chapa de aquecimento. O aquecimento direto com soluo de NaOH gerou uma grande quantidade de resduo lquido, no se mostrando eficiente, podendo haver perda de orizanol na gua alcalina, visto que o orizanol possui alguma solubilidade em meio alcalino. Optou-se assim por usar aquecimento em banho-maria, com agitao manual constante e controle de temperatura no centro da amostra. Uma modificao no mtodo proposto por Rao et al (2002) foi durante a etapa de neutralizao, onde a amostra era totalmente neutralizada. Porm estudos feitos por Seetharamaiah e Prabhakar (1986), mostram que o pH da RBOS saponificada tem papel importante durante as etapas de extrao do orizanol, sendo que a quantidade de orizanol extrado aumenta com o aumento do pH at um ponto onde forma-se uma emulso durante a extrao (acima de pH 9,5). Portanto o pH da RBOS saponificada foi ajustado para 9,5 utilizando bicarbonato de sdio.

4.3.2 Secagem

O sabo obtido foi colocado em repouso ao ar livre para secagem e formao de poros, durante 2 h. Posteriormente o sabo poroso foi seco em estufa, a 115 C por 4 h. A umidade final foi controlada para ficar abaixo de 3 %, evitando assim que a umidade prejudicasse o rendimento e os processos de extrao dos insaponificveis presentes na RBOS.

Material e Mtodos
4.3.3 Moagem e Anlise Granulomtrica

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O RBOS saponificado e seco foi modo manualmente, utilizando cadinho e pistilo, utilizando tempo de 3 min de moagem. O sabo modo foi separado quanto ao tamanho de partcula atravs de um agitador de peneiras, marca Bertel Indstria Metalrgica Ltda, com as seguintes peneiras: 6 Mesh (3360m), 16 Mesh (1000 m), 20 Mesh (850 m), 32 Mesh (500 m), 48 Mesh (300 m) e 65 Mesh (212 m). A massa de partculas retida em cada peneira foi pesada e posteriormente foi determinada a distribuio das partculas da amostra. As partculas com dimetro igual ou menor que 300 m e maiores e iguais a 3360 m, foram descartadas para que se tivesse um controle do tamanho das partculas no leito.

4.3.4 Determinao do teor de umidade do saponificado da RBOS

Para determinao do teor de umidade foi utilizado o mtodo de perda por dessecao (AOAC, 1990). Cinco gramas da amostra foram pesadas em cadinho tarado, previamente aquecido em estufa a 105 C, por 1 hora, resfriado em dessecador at temperatura ambiente e pesado. Os cadinhos com as amostras foram aquecidos em estufa a 105 C por 3 horas, resfriados em dessecador at a temperatura ambiente e pesados. Essa operao de aquecimento e resfriamento foi repetida at peso constante da amostra.

4.4 Extrao dos insaponificveis da RBOS

O sistema soxhlet consiste de um extrator que acoplado na extremidade inferior a um balo de 1000 mL e na extremidade superior a um condensador. Para cada extrao para acmulo de massa de insaponificvel, para utilizao nas etapas posteriores do trabalho, cerca de 50 g de amostra foram pesadas e envolvidas em papel filtro, formando um cartucho que foi inserido no extrator. Foram utilizados 600 mL do solvente selecionado, que foi acondicionado no balo e aquecido com manta de

Material e Mtodos

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aquecimento. Com o aquecimento o solvente evapora, sobe pelo brao do extrator, entra no condensador, volta forma lquida e goteja sobre o cartucho com a amostra. O solvente fica em contato com a amostra, extraindo os compostos solveis at que o extrator encha na altura do sifo e a mistura solvente/soluto retorne ao balo. O solvente novamente aquecido, evapora e deixa no balo os compostos extrados. Este processo de refluxo se repete at que todo o material solvel presente amostra seja extrado. A extrao usando Soxhlet para determinar o tempo de extrao foi feita utilizado 10 g de amostra e 150 ml de acetato de etila. Os tempos utilizados na extrao foram de 4 h, 5 h, 6 h e 8 h. O solvente foi removido usando um evaporador rotatrio com controle de vcuo (Fisatom, modelo 802). A massa de extrato foi medida em balana analtica (Ohaus, modelo AS200), e o rendimento calculado em termos de massa de matria-prima utilizada. A Tabela 5 apresenta o ndice de polaridade apresentado de alguns solventes utilizados nos processos de extrao com solvente orgnico. Tabela 5 ndice de polaridade de solventes utilizados nos processos de extrao com solvente orgnico. Solventes Hexano ter etlico Acetato de etila gua ndice de polaridade 0 2,8 4,4 9,0

O solvente utilizado foi escolhido baseando-se em sua polaridade, preo e na solubilidade do orizanol no mesmo, sendo o mesmo solvente utilizado por Rao et al (2002), em seu trabalho. A matria insaponificvel obtida foi acondicionada em saco de polietileno e guardada sob refrigerao, a -5 C. A Figura 8 apresenta um aparato de Soxhlet para extrao de leos vegetais com solvente orgnico em laboratrio.

Material e Mtodos

43

Matria-prima

Fonte: MARTNEZ, 2005 Figura 8 Aparato de Soxhlet para extrao de leos vegetais em escala laboratorial.

A Figura 9 apresenta o aparato utilizado para extrao e evaporao do solvente nesta etapa.

Figura 9 Aparato utilizado para extrao e evaporao do solvente na etapa de extrao dos insaponificveis presentes no segundo saponificado da RBOS.

Material e Mtodos
4.5 Tratamento com soluo metanol-acetato de etila (1:1)

44

O material insaponificvel obtido anteriormente foi deixado em repouso com soluo de metanol-acetato de etila (1:1) por 12 h. O resduo precipitado foi removido da soluo por filtrao, utilizando papel filtro Qualy 12,5 (J. Prolab, poros 14 m), e o material precipitado foi lavado com a soluo duas vezes, sendo posteriormente adicionado ao filtrado e rota evaporado (Fisatom, modelo 802) para eliminao do solvente.

4.6 Coluna cromatogrfica

Aps o tratamento com a soluo de metanol-acetato, utilizou-se coluna cromatogrfica para purificao do orizanol. Como fase estacionria utilizou-se slica gel ativada a 150 C por 2 h, em estufa. A coluna foi preparada misturando a slica ao hexano e acrescentando aos poucos a slica em uma bureta, a fim de se obter uma fase estacionria uniforme. Utilizou-se como lquido de suspenso o hexano. Pela Figura 10 pode-se visualizar o funcionamento da coluna cromatogrfica.

Fonte: SILVA (2003). Figura 10 Ilustrao do funcionamento da coluna cromatogrfica.

Material e Mtodos

45

Para a fase mvel foi testado a eluio com hexano (20 mL) seguido de clorofrmio (40 mL), sendo recolhidos em bales separados, e somente clorofrmio (40 mL). Foram utilizados 1 g do material insaponificvel obtido aps tratamento do mesmo com soluo de metanol e acetato, sendo esse material diludo no primeiro eluente a ser passado pela coluna. Os solventes foram recolhidos separadamente aps passarem pela coluna, rotaevaporados e o resduo obtido foi mantido sob refrigerao at ser analisado quanto ao teor de orizanol. A Figura 11 mostra a coluna cromatogrfica utilizada, sendo que foi utilizado algodo para evitar a passagem da slica para os bales de recolhimento do eluente.

Figura 11 Foto da coluna cromatogrfica utilizada nos experimentos.

Material e Mtodos
4.7 Cristalizao com soluo de metanol: acetona

46

Foram testados dois mtodos de cristalizao para obteno de orizanol com elevado grau de pureza. O primeiro mtodo consistiu na cristalizao do orizanol utilizando soluo de metanol-acetona (2:1) e refrigerao do mesmo a 0 C por 12 h. Aps isso os cristais foram separados por filtrao e pesados em balana analtica. Os cristais obtidos foram guardados sob refrigerao e posteriormente analisados para determinao da pureza e rendimento do orizanol. Outro mtodo de cristalizao empregado o uso de soluo de metanol-acetato (2:1), onde 5 g do material insaponificvel foram acrescidos na mistura de solventes colocados na temperatura de refluxo dos solventes at total dissoluo do material insaponificado. Aps isso a soluo foi resfriada at temperatura ambiente e filtrada. O material precipitado foi removido e lavado com a soluo, o lquido de lavagem foi adicionado novamente a soluo, que foi resfriada a 2 C, por 12 h e posteriormente foi filtrado novamente para reteno dos cristais no papel filtro.

4.8 Extrao supercrtica

Os experimentos de ESC foram realizados com dois tipos de amostras, com o objetivo de determinar as condies de temperatura e presso nas quais o maior rendimento global obtido. Para as extraes supercrticas foram utilizadas como amostra o saponificado da RBOS, proveniente da etapa 4.3.1 e tambm o material insaponificvel obtido do saponificado da RBOS, por extrao com solvente orgnico, conforme etapa 4.5. Uma vez conhecidas as condies e o rendimento global, foram feitos os experimentos cinticos visando obter as curvas de extrao. Os experimentos cinticos de ESC foram realizados no mesmo equipamento que os ensaios de determinao de rendimento global (x0). Foram utilizados 20 g de material e o experimento teve durao de 300 min. Vrios frascos foram utilizados na coleta dos extratos, sendo todos previamente pesados em balana analtica. A cada intervalo de 5 ou 10 min o frasco de coleta foi trocado, e o extrato pesado, de forma a determinar a massa de extrato obtida em funo do tempo de experimento.

Material e Mtodos

47

4.8.1 Unidade de ESC

A unidade de ESC constitui-se de um cilindro de CO2 com tubo pescador (White Martins Ltda, Joinville, SC, Brasil), que alimenta a linha de extrao. A linha passa imersa em um banho termosttico de resfriamento (Thermo Haake C10 - K10) programado para manter a temperatura inferior a 0 C, garantindo assim que o solvente siga no estado lquido bomba (Maximator M111 CO2), que trabalha suprida por uma linha de ar comprimido e filtrado. A presso de operao desejada regulada atravs da vlvula V1 (Tescom Cat N 26-1761-24-161). A bomba alimentada com o solvente, que ento pressurizado a uma presso pr-estabelecida em V1, e encaminhado linha de extrao, passando ao extrator, que se constitui de um cilindro encamisado de ao inox com extremidades rosqueadas de 33,5 cm de comprimento, 2,042 cm de dimetro interno e volume interno de 100 mL. A temperatura de operao do extrator mantida constante atravs de um banho termosttico de aquecimento (Thermo Haake DC30 B30). Toda a tubulao onde se encontram conectadas as vlvulas V1 a V6 mantida submersa em um banho termosttico de aquecimento (Microqumica, modelo MQBTZ99-20) a uma determinada temperatura, conforme necessrio. A tubulao da sada do extrator conectada V3 (Sitec Microvalve 710.3012) e em seguida V4 (Sitec Shutoff Valve 710.3010) por onde a vazo de CO2 regulada. Aps passar pela V4, o extrato coletado em tubos mbar, aos quais tambm conectado um rotmetro (ABB Automation Products 10 A 61) para medio da vazo de CO2, regulada na V4. Essa unidade de ESC foi completamente desenvolvida e construda na Alemanha, na Technische Universitt Hamburg-Harburg (TUHH), no Laboratrio Thermische Verfahrenstechnik. A ilustrao e o esquema da unidade de ESC-B esto apresentadas nas Figuras 12 e 13, respectivamente.

Material e Mtodos

48

Figura 12 Ilustrao da unidade ESC.

Figura 13 Esquema da unidade ESC.

Material e Mtodos

49

4.8.2 Verificao da influncia da temperatura e presso no rendimento da extrao do orizanol do saponificado da RBOS e da frao insaponificvel da RBOS.

A verificao da influncia da presso e da temperatura no rendimento global da ESC foi realizada atravs de um planejamento experimental com 3 nveis e 2 variveis. As variveis so: presso, nos nveis 100, 200 e 300 bar, e temperatura, nos nveis 30 C, 45 C e 60 C. Nesta etapa foram utilizados dois tipos de material de alimentao no extrator, separadamente, sendo eles o saponificado da RBOS (obtido conforme 4.3.1) e a frao insaponificvel obtida, por extrao com solvente orgnico, do saponificado da RBOS (conforme 4.5). O planejamento experimental utilizado foi o fatorial completo 32, totalizando 9 experimentos, para cada tipo de amostra usada, conforme apresentado na Tabela 6.

Tabela 6 Planejamento experimental fatorial completo 32, com as variveis temperatura e presso, variando em 3 nveis. Experimento Variveis codificadas de temperatura 1 2 3 4 5 6 7 8 9 -1 -1 -1 0 0 0 +1 +1 +1 Variveis codificadas de presso -1 0 +1 -1 0 +1 -1 0 +1 Variveis reais de temperatura (C) 30 30 30 45 45 45 60 60 60 Variveis reais de presso (bar) 100 200 300 100 200 300 100 200 300

Cada experimento foi realizado em duplicata, com vazo constante de solvente de 0,6 kg.h-1 e 30 g de matria-prima, quando se utilizou o saponificado da RBOS e 13 g quando foi utilizado o insaponificvel, mantendo a altura do leito constante para cada tipo de amostra utilizada.

Material e Mtodos

50

A condio que proporcionou o maior rendimento global foi determinada atravs de anlise estatstica dos resultados, usando o mtodo ANOVA, com o auxlio do software Statistica 6.0.

4.8.3 Determinao do rendimento global

O rendimento global X0 a razo entre a massa de material extravel e a massa de matria-prima no leito de ESC, conforme a Equao (6).

X 0 (%) =

Massa de material extravel Massa de matria - prima

(6)

O saponificado da RBOS e a frao insaponificvel extrada da RBOS com o uso de solvente orgnico foram utilizados para a determinao de X0, utilizando a Equao (6).

4.8.4 Experimentos Cinticos Curvas de Extrao

Os experimentos cinticos para a obteno das curvas de extrao consistiram na determinao da massa de extrato acumulado em funo do tempo de extrao. Para a determinao das curvas de extrao foram utilizados frascos de coleta previamente pesados em balana analtica e a coleta do soluto extrado foi realizada em intervalos em tempos pr-determinados de 5, 10, 15, 30 e 60 minutos. Aps a coleta os frascos so novamente pesados para se obter a massa de extrato em funo do tempo de extrao. As curvas de extrao podem ser construdas atravs da massa de extrato acumulado em funo do tempo de extrao ou da massa de CO2 consumido; ou ainda pela razo massa de extrato/ massa de slido versus a massa de CO2 consumida pela massa de slido. Os experimentos cinticos foram realizados utilizando CO2 puro na presso de 300 bar, temperatura de 60 C e vazo de 0,6kg/h para a ESC utilizando a RBOS

Material e Mtodos

51

saponificada e presso de 300 bar, temperatura de 60 C e vazo de 0,6 kg/h, quando foi utilizado a matria insaponificvel obtida na etapa 4.5 deste trabalho.

4.8.5 Modelagem matemtica

A modelagem das curvas de extrao foi realizada utilizando os modelos apresentados por Esquvel et al., (1999), Gaspar et al., (2003) e Martinez et al., (2003) atravs do programa Mass Transfer desenvolvido por Correia et al., (2006) disponvel no LATESC EQA - UFSC.

4.9 Avaliao do teor de orizanol

As avaliaes do teor de orizanol na RBOS e os teores obtidos nos extratos, e nas etapas de extrao do insaponificvel da RBOS, coluna cromatogrfica e cristalizao foram feitas utilizando cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC/UV). O equipamento utilizado foi HPLC Varian ProStar 230/310, detector de UV ajustado para 325 nm, coluna ChromSpher 5 C18 (250 x 4.6 mm), fase mvel Metanol, isopropanol e Acetonitrila:c. Actico 1% com fluxo constante de 0,8 mL min-1, segundo a programao 40:5:50 (3 min) a 45:5:50 em 1 min; a 70:5:25 em 10 min (8 min) a 95:5:0 em 8 min (2 min). Os dados foram adquiridos atravs de software Star Workstation 5.52

Material e Mtodos

52

4.10 Fluxograma das atividades desenvolvidas para extrao e purificao do orizanol presente na RBOS.

A Figura 14 apresenta um fluxograma com o resumo das atividades desenvolvidas na recuperao do orizanol presente na RBOS.

Saponificao Secagem Extrao dos insaponificveis Tratamento com soluo Metanol:Acetato Filtrao e rotaevaporao da soluo Coluna cromatogrfica Cristalizao Anlise do orizanol Extrao supercrtica

Figura 14 Fluxograma das atividades desenvolvidas na recuperao do orizanol presente na RBOS.

Resultados e Discusso
5 RESULTADOS E DISCUSSO

53

5.1 Umidade da materia-prima

Inicialmente foi feito o teor de umidade presente na matria-prima, para o clculo da quantidade de hidrxido de sdio a ser utilizada durante a etapa de saponificao da RBOS. A Tabela 7 mostra os valores de umidade, a mdia e o desvio padro encontrado para a RBOS, feito em triplicata com trs repeties.

Tabela 7 Teor de umidade da RBOS. Um1(%) 44,91 Um2(%) 43,19 Um3(%) 46,99 Mdia 45,03% DesvPad 0,67

Os valores de umidade encontrados ficaram abaixo de valores citados na literatura, Narayan et al (2006), reportam que a RBOS tpica do refino do leo de farelo de arroz possui aproximadamente 60 a 70 % de umidade. Porm o teor de umidade est relacionado com o processamento do leo de farelo de arroz, mais especificamente com as etapas de degomagem e centrifugao do leo degomado e neutralizao do leo, podendo haver variao do teor de umidade para cada indstria e at mesmo para cada batelada de leo refinado.

5.2 Teor de orizanol na matria-prima

O teor de orizanol presente na RBOS foi determinado por HPLC/UV. A quantidade inicial de orizanol presente na RBOS uma importante caracterstica para avaliar o rendimento de orizanol extrado e a eficincia do processo de extrao do orizanol da RBOS. A Tabela 8 apresenta a quantidade em porcentagem de orizanol presente na RBOS.

Resultados e Discusso
Tabela 8 Quantidade de orizanol presente na RBOS. Amostra RBOS IRGOVEL 1 RBOS IRGOVEL 2 Valor literatura Quantidade de orizanol (%) 1,4 1,45 1,5 1,3 3,1 0,071 Mdia

54

Desvio padro

Embora a RBOS da indstria IRGOVEL possua valores baixos de orizanol, comparando com outros RBOS, observa-se que o valor de orizanol encontra-se dentro da faixa citada na literatura por Seetharamaiah e Prabhakar (1986). O RBOS possui um grande potencial a ser explorado, sendo que o teor de orizanol pode variar com a produo do leo de farelo de arroz, onde pequenas modificaes no processo como quantidade de gua e lcali adicionado na etapa de neutralizao, o tempo de centrifugao nesta etapa e at mesmo a variao do farelo de arroz utilizada podem afetar a quantidade de orizanol retida na RBOS (NARAYAN et al, 2006).

5.3 Saponificao da RBOS

O teor de NaOH acrescido na RBOS para o processo de saponificao da mesma foi calculado utilizando a proporo de 20 partes da RBOS, em base seca, para 1 parte de NaOH, seguindo o mtodo proposto por Rao et al (2002). A secagem do saponificado da RBOS foi feito de acordo com o mtodo de Rao et al (2002), porm com um aumento no tempo de secagem a 115 C de 2 h para 4 h, a secagem ao ar livre anterior a secagem na estufa foi feito com o mesmo tempo proposto de 2 h. A modificao no tempo de secagem foi para garantir o baixo teor de umidade na amostra, que interfere nas etapas de extrao, podendo at gerar a solubilizao da RBOS saponificada durante a extrao. A eficincia da secagem foi acompanhada pela determinao do teor de umidade da RBOS saponificada, onde a matria saponificada com umidade abaixo de 5% no apresentou problemas durante a extrao do orizanol. A Tabela 9 mostra o teor de umidade da RBOS saponificada, os problemas apresentados e o tempo de secagem utilizado durante a etapa de secagem em estufa a 115 C.

Resultados e Discusso

55

Tabela 9 Tabela da influncia da umidade nas etapas de extrao para purificao do orizanol. Tempo de secagem (h) Teor de umidade (%) Problemas na extrao

6,15 0,48

Solubilizao da RBOS durante etapa de extrao com fluido supercrtico e solvente orgnico. Diminuio do rendimento da extrao com

4,18 0,98

solvente orgnico e solubilizao do saponificado da RBOS utilizando fluido supercrtico.

1,81 0,51

No ocorreram problemas aparentes.

A Figura 15 mostra a etapa de saponificao da RBOS, realizada no LATESCUFSC. Foi utilizado um banho trmico (TC) (Microqumica, modelo MQBTZ99-20) para o aquecimento da RBOS, contida em um becker, com agitao manual, feita utilizando basto de vidro e com uso de termmetro para medir a temperatura no centro da RBOS.

Resultados e Discusso

56

Figura 15 Foto do processo de saponificao da RBOS.

Na Tabela 10 pode-se observar o rendimento da etapa de saponificao, aps os processos de neutralizao e secagem, utilizando diversas quantidades iniciais de matria-prima.

Tabela 10 Rendimento, mdia e desvio padro da etapa de saponificao da RBOS. Saponific. M. inicial (g) M. saponificada (g) Rend.(%) Mdia Desvio Padro

1 2 3 4 5 6

338,97 429,14 910,48 968,00 746,55 796,30

201,03 216,72 472,48 447,51 414,32 394,28

45,50 41,21 36,52 41,06 35,90 44,00 43,23 4,34

Resultados e Discusso

57

Observa-se que h uma variao no rendimento de saponificao, causada pelas perdas durante as trocas de recipiente e manipulao do material, sendo que quando se utilizou massa acima de 900 g de matria-prima os rendimentos foram abaixo de 40 %, devido ao fato de aumentar a quantidade de massa perdida durante a manipulao da massa saponificada. A Figura 16 apresenta o saponificado obtido aps estas etapas, assim como a RBOS, em sua forma natural.

Figura 16 Foto do saponificado obtido da RBOS (esquerda) e da matria-prima (RBOS, direita).

5.4 Extrao dos insaponificveis presentes na RBOS

A Tabela 11 apresenta os valores mdios de rendimento, em porcentagem, obtido de matria insaponificvel para os diversos tempos de extrao e tambm o desvio padro das triplicadas realizadas para testar o tempo de extrao.

Resultados e Discusso

58

Tabela 11 Rendimento mdio da etapa de extrao dos insaponificveis da RBOS saponificada e seus respectivos desvios padres. Amostra sox4h sox5h sox6h sox8h Mdia (%) 10,74 10,69 11,23 11,69 Desvio padro 0,12 0,45 0,34 0,66

O rendimento obtido de matria insaponificvel ficou abaixo dos valores reportados por Rao et al (2002), utilizando o mesmo solvente e o mesmo tempo de extrao, sendo que o mesmo obteve rendimento de 14%. Essa diferena pode ser devido s caractersticas da RBOS, que variam conforme a tcnica utilizada de refino do leo de farelo de arroz, assim como as caractersticas do prprio farelo de arroz utilizado. Para verificar se houve diferena significativa entre os valores do rendimento de insaponificveis optou-se por fazer o teste de Tukey, utilizando para isso o software Statistica 6.0. A Figura 17 mostra as mdias dos rendimentos obtidos e a existncia, ou no, de diferena significativa entre os tempos de extrao.

Resultados e Discusso
12,5 b

59

12,0

Rendimento (%)

a,b 11,5 a,b a

11,0

10,5

10,0

sox4h

sox5h

sox6h

sox8h

Tempo de extrao
Figura 17 Mdia e anlise da diferena estatstica dos tempos de extrao da frao insaponificvel da RBOS utilizando teste de Tukey, onde letras iguais significam a ausncia de diferena significativa entre os tempos.

Observa-se pela Figura 17 que houve diferena significativa somente entre os tempos de 5 h e 8 h, sendo esta diferena provavelmente devido a um erro experimental. Como no houve diferena significativa entre os tempos de 4 h e 8 h, optou-se por utilizar o tempo de 4 h de extrao, sendo o mesmo tempo utilizado por Rao et al. (2002) em seu trabalho. Aps determinao do tempo de extrao, foram feitas diversas extraes, utilizando massa de 50 g de amostra e 4 h de extrao, para obter quantidade suficiente de matria insaponificvel para proceder com as demais etapas de purificao de orizanol, como a cristalizao, coluna cromatogrfica e extrao com fluido supercrtico.

Resultados e Discusso

60

5.5 Tratamento da matria insaponificvel com soluo metanol-acetato de etila O material insaponificvel obtido pela extrao (etapa 4.4) foi tratado com soluo de metanol e acetato de etila para remoo de impurezas e ceras presentes. Onde o insaponificvel foi dissolvido na soluo (1:1), segundo mtodo proposto por Rao et al (2002). Durante esta etapa parte das impurezas presentes so removidas dos insaponificveis, como algumas ceras, devida diferena de solubilidade na soluo, visto que o orizanol solvel nesta soluo pode-se separar o mesmo, aumentando assim sua pureza. A Tabela 12 mostra o rendimento desta etapa, em porcentagem de material insaponificvel filtrado pelo material insaponificvel inicial. Observa-se, na Tabela 12, que parte do material insaponificvel removido nesta etapa, como as ceras. Os valores de rendimento reportado por Rao et al (2002) foram de 86%, notando assim que houve uma maior quantidade de material retido na filtrao, podendo isto ser decorrente das caractersticas da matria-prima ou das perdas de orizanol nesta etapa, sendo que parte do mesmo pode ter ficado retido durante a filtrao.

Tabela 12 Rendimento, mdia e desvio padro da etapa de tratamento do material insaponificvel extrado da RBOS com soluo de metanolacetato de etila (1:1). Extrao 4h 4h 6h 6h 8h 8h Rendimento (%) 60,28 67,50a 74,73 75,30 74,21a 73,13 88,00 81,78a 75,57 8,78 1,53 10,21 Mdia* Desvio padro

* Letras iguais representam ausncia de diferena significativa entre as mdias (p < 0,05).

Nota-se tambm, observando a Tabela 12, uma variao muito grande entre os rendimentos obtidos para um mesmo tempo de extrao, mostrando a falta de uniformidade na matria insaponificvel obtida na etapa de extrao. Observa-se que no houve diferena estatstica entre os tempos de extrao por soxhlet. Essa

Resultados e Discusso

61

diferena no ocorre devido ao desvio padro, que teve um valor alto em razo da no uniformidade do extrato obtido na etapa 4.4 deste trabalho. O teor de orizanol determinado por HPLC-UV aps este tratamento, foi de 5,5 %. Utilizando o valor de orizanol presente na matria-prima possvel calcular a perda de orizanol ocorrida at esta etapa do trabalho, atravs da equao (7).

Perda de orizanol(%) = {(Morizanol inicial Morizanol final)/Morizanol inicial}*100

(7)

Onde: Morizanol inicial = massa de orizanol presente na matria-prima; Morizanol final = massa de orizanol aps o tratamento com a soluo.

O valor de orizanol inicialmente na matria-prima de 1,45 g/100 g de RBOS. Aps as etapas de saponificao, secagem, extrao e tratamento com soluo metanol acetato de etila a quantidade de orizanol presente na massa final foi de 5,5 g/100 g de insaponificado. Porm, 100 g da matria-prima possui apenas 8,25 g do material insaponificado, ps-tratamento com soluo metanol-acetato. Assim, calculase que a massa final de orizanol de 5,5 % de 8,25 g, ou seja, 0,454 g de orizanol. Utilizando a Equao (7) as perdas de orizanol chegam a 68 % at esta etapa. Isto pode ser explicado por uma baixa eficincia durante a etapa de extrao com solvente orgnico, visto a grande quantidade de impurezas e interferentes. Pode-se ter perdido orizanol, tambm, durante a etapa de secagem, por degradao trmica, ou at mesmo durante a etapa de tratamento com a soluo de metanol - acetato, por precipitao de parte do orizanol. Os valores encontrados, tanto de rendimento quanto de pureza do orizanol nesta etapa, encontram-se abaixo citados na literatura. Indira et al (2005), obteve orizanol com 45% de pureza e rendimento de 80%, utilizando a RBOS como matria-prima e acetato de etila como solvente, sendo que o mesmo reporta que o controle do pH e temperatura durante a etapa de extrao so importantes para minimizar a degradao do orizanol durante o processo. Na Figura 18, observa-se a frao insaponificvel presente na RBOS do leo de farelo de arroz, obtida aps extrao com acetato de etila e tratamento do extrato com soluo metanol-acetato (1:1).

Resultados e Discusso

62

Figura 18 Foto da frao insaponificvel obtida ps-tratamento com soluo metanolacetato de etila (1:1).

5.6 Separao do orizanol por coluna cromatogrfica

Aps tratamento com soluo metanol-acetato de etila (1:1), o insaponificvel foi permeado por uma coluna cromatogrfica, usando slica ativada como fase estacionria, e utilizando hexano e clorofrmio como fase mvel. A Tabela 13 apresenta os valores de rendimento utilizando somente o clorofrmio como eluente e utilizando o hexano seguido de clorofrmio.

Tabela 13 Mdia do rendimento obtido usando clorofrmio e hexano como eluente em coluna cromatogrfica, utilizando a frao insaponificvel da RBOS como material de alimentao na coluna. Eluente 1 Rendimento (%) Eluente 2 Rendimento (%) Total (%)

Hexano

11,34

Clorofrmio

50,47

61,81

Clorofrmio

50,17

50,17

Resultados e Discusso

63

Na Tabela 13, pode-se observar que o rendimento utilizando hexano seguido de clorofrmio foi superior ao rendimento utilizando somente clorofrmio, porm, notase que o hexano arrasta diferentes componentes, pois o rendimento utilizando s o clorofrmio e o rendimento utilizando clorofrmio aps a utilizao do hexano no diferiram. A anlise do teor de orizanol presente aps esta etapa mostra que a utilizao de coluna para separao do orizanol no foi eficiente, sendo que o teor de orizanol no resduo da coluna, aps evaporao do solvente foi de 2,73%. Provavelmente, por algum problema desconhecido, o orizanol acabou ficando retido na coluna, ao contrrio do que o trabalho de Rao et al (2002) reporta, sendo que o mesmo obteve uma frao com aproximadamente 60% de orizanol aps evaporar o eluente, utilizando a mesma fase mvel e estacionria na coluna e o clorofrmio como eluente.

5.7 Cristalizao do orizanol

Aps a passagem do insaponificvel pela coluna cromatogrfica, foi feita uma cristalizao do orizanol presente no resduo da coluna, utilizando duas metodologias. O primeiro mtodo foi feito dissolvendo o resduo da coluna diretamente em soluo de metanol-acetona (2:1) e refrigerando o mesmo a 0 C por 12 h, segundo mtodo proposto por Rao et al (2002). Devido pequena quantidade de resduo da coluna utilizado nessa etapa, foi difcil observar a formao de cristais e at mesmo quantifica-los. Porm conseguiu-se separar os cristais e os mesmos foram analisados quanto ao teor de orizanol. O teor de orizanol foi de 2,5%, mostrando que havia problemas na metodologia empregada. Optou-se assim por utilizar outro mtodo de cristalizao, proposto por Narayan et al (2005), onde se usou soluo de metanol-acetato (2:1), na temperatura de refluxo at dissoluo total do material insaponificvel obtido aps o tratamento com metanol-acetato de etila (1:1). Aps isso ocorrem dois resfriamentos da soluo para separao do orizanol. No primeiro resfriamento, at temperatura ambiente, algumas impurezas precipitam antes do orizanol e so separadas por filtrao. No segundo resfriamento, at 2 C, o orizanol precipita e retirado da soluo por filtrao. Novamente ocorreram problemas nessa etapa, sendo que no foram observadas formaes de cristais e nem reteno na segunda filtrao.

Resultados e Discusso

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Por no se obter cristais, no foi possvel analisar o teor de orizanol quando foi utilizado o mtodo de Narayan et al (2005) para cristalizao do orizanol. Em seu trabalho o mesmo relata conseguir orizanol com 65% de pureza e 70% de rendimento.

5.8 Extrao supercrtica da RBOS para obteno de uma frao enriquecida em orizanol

Nesta etapa do trabalho foi utilizada extrao com fludo supercrtico para recuperao do orizanol da RBOS e obteno de uma frao enriquecida de orizanol. Para isso foram utilizados dois diferentes materiais de alimentao no extrator, sendo que na primeira etapa do trabalho foi utilizada a RBOS saponificada e seca, obtida na etapa 4.3.3 e na segunda etapa foi utilizado o insaponificvel obtido por extrao com acetato de etila da RBOS saponificada, na etapa 4.5 deste trabalho.

5.8.1 Extrao supercrtica utilizando a RBOS saponificada

Primeiramente, para realizao dos experimentos, foram definidos os valores das variveis presso e temperatura. Foram definidos os valores de 100 bar, 200 bar e 300 bar para presso e 30 C, 45 C e 60 C para temperatura. Os experimentos foram realizados em duplicata para a determinao do rendimento de extrao, sendo feita uma nica coleta de amostra, efetuada aps o perodo de quatro horas, utilizando uma vazo fixa de 0,6 kgCO2/h. Os frascos com extrato eram pesados e o solvente utilizado era quantificado com o auxilio de um rotmetro. Para avaliar o efeito da temperatura e presso sobre o rendimento de extrato, foi elaborado um planejamento experimental 32, ou seja, duas variveis avaliadas em trs nveis. Na Tabela 14, observa-se os valores de densidade do CO2 determinados de acordo com ANGUS et al., (1976), caractersticos para as condies de temperatura e presso adotadas neste trabalho, assim como seus respectivos rendimentos de extrao e o desvio padro destes rendimentos.

Resultados e Discusso
Tabela 14 Valores de densidade do CO2 e do rendimento de extrato obtido nas

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condies de presso de 100 bar, 200 bar e 300 bar, temperatura de 30 C, 45 C e 60 C e vazo de CO2 de 0,6 kg/h, utilizando a RBOS como matria-prima. Experimentos 1 2 3 4 5 6 7 8 9
(a)

P (bar) 100 100 100 200 200 200 300 300 300

T (C) 30 45 60 30 45 60 30 45 60

CO2 (kg/m3) 772,16 499,66 290,11 891,18 813,52 724,51 948,59 891,09 830,44

Rendimento extrato (%) (a) 6,05a 0,26 2,21b 0,17 0,22c 0,04 10,39d, e 0,18 9,71d 0,09 5,34a 0,11 10,62d, e 0,89 11,12e 0,44 12,51f 0,52

Letras iguais indicam resultados que no diferem significativamente (p < 0,05).

Podemos observar na Tabela 14 que o rendimento de extrato aumentou com a presso do sistema. Observa-se, que o maior rendimento foi obtido a temperatura de 60 C. Nota-se, tambm, que na presso de 100 bar e temperaturas de 45 C e 60 C houveram os menores rendimentos de extrato, sendo que a 60 C o valor foi de 0,22 %. Observa-se que nas presses de 100 bar e 200 bar o aumento da temperatura diminui o rendimento da extrao, enquanto que nas presses de 300 bar observa-se o efeito contrrio, um aumento do rendimento de extrao com o aumento da temperatura. Nota-se, observando a Tabela 14, que o rendimento dos extratos do experimento 1 e 6 no diferiram significativamente, assim como os experimentos 4, 5 e 7 e 4, 7 e 8, sendo que ao observar a densidade do CO2 utilizado observa-se que para os grupos que no diferiram significativamente esses valores so prximos. Porm ao comparar o experimento 5 e 8, que possuem quase a mesma densidade de solvente,

Resultados e Discusso

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nota-se que ambos diferiram significativamente. Essa diferena pode ser devido ao efeito da presso de vapor do soluto. Os resultados de rendimento global para a ESC do RBOS obtidos nas condies de presso de 100 bar a 300 bar e temperaturas de 30 a 60 C foram submetidos ANOVA, utilizando o software Statistica 6.0 for Windows. Segundo a ANOVA tanto a temperatura (p=0,001715) quanto a presso (p=0,000001) tiveram efeito significativo no rendimento global da ESC com CO2 ao nvel de 5 % de significncia. O grfico de superfcie de resposta (Figura 19) apresenta o comportamento do rendimento global em funo da presso e temperatura de extrao, onde a regio mais escura representa a regio de maior rendimento.

Figura 19 Superfcie de resposta obtida para a RBOS saponificada.

Observa-se nesta superfcie de resposta que o aumento da presso e da temperatura utilizada na ESC aumenta o rendimento de extrato, sendo que o maior rendimento (zona vermelho escuro da superfcie) ocorreu na maior presso e temperatura, enquanto que os menores rendimentos de extrato (zona verde escuro da superfcie) ocorreram nas condies de menor presso e maior temperatura.

Resultados e Discusso
5.8.1.1 Rendimento de orizanol

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Aps os testes de rendimento do extrato, os mesmos foram analisados quanto ao teor de orizanol presente, para averiguar as condies de presso e temperatura em que se obteve o maior teor de orizanol. Foram verificados tanto o rendimento da extrao de orizanol, quanto a sua pureza. Na Tabela 15 apresenta-se os valores de presso e temperatura utilizados, assim como o teor de orizanol no extrato.

Tabela 15 Valores de densidade do CO2, do teor de orizanol e da recuperao de orizanol da RBOS obtido nas condies de presso e temperatura do planejamento experimental da ESC da RBOS. Experimentos P (bar) T (C) CO2 (kg/m3) Teor de orizanol (%) 0,50 0,30 0,03 3,40 2,80 2,40 11,80 13,50 16,00 Recuperao de orizanol (%) 1,05 0,23 0,00 12,18 9,37 4,43 43,21 51,77 69,00

1 2 3 4 5 6 7 8 9

100 100 100 200 200 200 300 300 300

30 45 60 30 45 60 30 45 60

772,16 499,66 290,11 891,18 813,52 724,51 948,59 891,09 830,44

Nota-se que o teor de orizanol no extrato aumenta com o aumento da presso e diminui com o aumento da temperatura, para presso de 100 bar e 200 bar e aumenta com o aumento da temperatura para presso de 300 bar. Os maiores teores foram obtidos a 300 bar e 60 C. O aumento na extrao de orizanol com o aumento da presso na ESC j havia sido reportada por Xu e Godber (2000), que trabalhou

Resultados e Discusso

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com farelo de arroz, na extrao de leo de farelo de arroz, onde nas condies de 680 bar e 50 C encontrou a maior concentrao de orizanol no leo. Jahn (2004) utilizando ESC, para extrao do leo do farelo de arroz, encontrou as maiores concentraes de orizanol na maior presso utilizada no trabalho, 300 bar e temperatura de 40 C. Nota-se que o aumento da presso no sistema aumenta a quantidade de orizanol extrada. Para o clculo do rendimento de extrao de orizanol foi utilizado o teor de orizanol na RBOS de 1,45%, onde foi assumido que em 100 g da RBOS existem 50 g de matria seca (utilizando os dados da umidade). Logo, se no h perdas de orizanol durante o processo de saponificao e secagem, em 50 g do saponificado da RBOS existem 1,45 g de orizanol. Atravs de regras de trs pode-se determinar a quantidade de orizanol que entrou no extrator, sendo a massa utilizada de 30 g de RBOS saponificada no extrator, contendo 0,87 g de orizanol. O rendimento de extrato foi de 12,51 % para a condio de melhor presso e temperatura (300 bar e 60 C) sendo que o rendimento em massa foi de 3,75 g de extrato, dessa massa tem-se que 16 % de orizanol, dando uma massa de 0,60 g de orizanol no extrato. Dividindo-se a quantidade de orizanol que entrou no extrato pela quantidade de orizanol extrada, tem-se o rendimento de orizanol que foi de 69,00 %. O mesmo foi feito para as outras condies de presso e temperatura e os resultados esto apresentados na Tabela 15. Observa-se com estes valores que o maior rendimento de extrato apresentou tambm o maior teor de orizanol e a maior recuperao do mesmo, sendo esta recuperao de aproximadamente 69,00 %. Trabalhos que utilizam outros mtodos para obteno de orizanol como Rao et al (2002), obtiveram valores de recuperao de 70 %. Indira et al. (2005) utilizando uma serie de etapas envolvendo saponificao da RBOS e extrao com solvente obteve uma recuperao de 80% do orizanol e pureza de 40 % a 45 % em peso. Das et al. (1998), desenvolveram um mtodo de isolamento do orizanol atravs da precipitao do mesmo utilizando ons de clcio para formao de agregado micelar aninico, onde obteve 96 % de pureza do orizanol e uma recuperao de 76 %.

Resultados e Discusso
5.8.2 Extrao supercrtica utilizando a frao insaponificvel extrada da RBOS

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Para a realizao dos experimentos, utilizando a frao insaponificvel extrada da RBOS, foram usados os mesmos valores das variveis presso e temperatura utilizadas anteriormente (definidos os valores de 100 bar, 200 bar e 300 bar para presso e 30 C, 45 C e 60 C para temperatura). Os experimentos foram realizados em duplicata para a determinao do rendimento de extrao, sendo feita uma nica coleta de amostra, efetuada aps o perodo de quatro horas, utilizando uma vazo fixa de 0,6 kgCO2/h. Os frascos com extrato eram pesados e o solvente utilizado era quantificado com o auxilio de um rotmetro. Para avaliar o efeito da temperatura e presso sobre o rendimento de extrato, foi elaborado um planejamento experimental 32, ou seja, duas variveis avaliadas em trs nveis. Na Tabela 16, observa-se os valores de densidade do CO2 determinados de acordo com ANGUS et al. (1976), caractersticos para as condies de temperatura e presso adotadas neste trabalho, assim como seus respectivos rendimentos de extrao e o desvio padro destes rendimentos.

Resultados e Discusso

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Tabela 16 Valores do rendimento de extrato obtido nas condies de presso de 100 bar, 200 bar e 300 bar, temperatura de 30 C, 45 C e 60 C e vazo de CO2 de 0,6 kg/h, utilizando o material insaponificvel como matria-prima. Experimentos 1 2 3 4 5 6 7 8 9
(a)

P (bar) 100 100 100 200 200 200 300 300 300

T (C) 30 45 60 30 45 60 30 45 60

CO2 (kg/m3) 772,16 499,66 290,11 891,18 813,52 724,51 948,59 891,09 830,44

Rendimento extrato (%)(a) 1,09a,b 0,11 1,51a, b 0,10 0,90a 0,04 1,58b 0,37 3,01c 0,08 4,85d 0,05 1,54a, b 0,18 6,11e 0,42 6,31e 0,38

Letras iguais indicam resultados que no diferem significativamente (p < 0,05).

Os rendimentos obtidos na extrao supercrtica da frao insaponificvel obtida do RBOS saponificado variaram de 0,9 % at 6,31 %, sendo que os maiores rendimentos de extrato foram obtidos em presses 300 bar em temperaturas de 45 C e 60 C. A temperatura de 30 C obteve os menores rendimentos de extratos para todas as presses. Observa-se, na Tabela 16, que os rendimentos obtidos a 100 bar no diferiram significativamente ao nvel de 5% (letras iguais representam ausncia de diferena significativa ao nvel de 5%). Isso foi devido ao baixo rendimento de extrao nessas condies. Os experimentos realizados a 30 C, em todas as presses, tambm no diferiram significativamente, observando tambm um baixo rendimento de extrato. Portanto, as condies de presso e temperatura baixas no se mostram eficientes para extrao utilizando a frao insaponificvel da RBOS na ESC. Os valores de rendimento de extrato a 300 bar e 45 C e 300 bar e 60 C no diferiram significativamente, sendo os valores de 6,11 % e 6,31 %, respectivamente.

Resultados e Discusso

71

Comparando com os rendimentos obtidos para a ESC utilizando o saponificado da RBOS (5.2.1), os valores foram inferiores, porm os maiores rendimentos obtidos foram nas mesmas condies de presso e temperatura para as duas amostras. Os resultados de rendimento global para a ESC da frao insaponificvel extraida do saponificado da RBOS obtidos nas condies de presso de 100 a 300 bar e temperaturas de 30 a 60 C foram submetidos ANOVA, utilizando o software Statistica 6.0 for Windows. Segundo a ANOVA tanto a temperatura (p=0,000001) quanto a presso (p=0,000012) tiveram efeito significativo no rendimento global da ESC com CO2 ao nvel de 5 % de significncia. O grfico de superfcie de resposta, apresentado na Figura 20, apresenta o comportamento do rendimento global em funo da presso e temperatura de extrao, onde a regio mais escura representa a regio de maior rendimento.

Figura 20 Superfcie de resposta obtida para a frao insaponificvel extrada da RBOS. Observa-se atravs dessa superfcie de resposta que presses e temperaturas mais altas aumentam o rendimento de extrato, sendo que presses altas e temperaturas baixas, assim como temperaturas altas e presses baixas diminuem o

Resultados e Discusso

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rendimento de extrao. A utilizao de presses e temperaturas maiores necessria para verificar as melhores condies de extrao, visto que a superfcie no se apresenta centralizada. Observa-se que o comportamento da superfcie de resposta para o rendimento da ESC do insaponificvel presente na RBOS foi diferente que o comportamento observado na ESC do saponificado da RBOS (Figura 19), onde no foram observados menores rendimentos em presses altas e temperaturas baixas. Porm, quanto ao maior rendimento, ambos apresentaram comportamento semelhante, onde temperaturas e presses mais elevadas resultaram em maior rendimento do extrato.

5.8.2.1 Rendimento de orizanol

Aps os testes de rendimento do extrato, os mesmos foram analisados quanto ao teor de orizanol presente, para averiguar as condies de presso e temperatura em que se obteve o maior teor de orizanol. Foram verificados tanto o rendimento da extrao de orizanol, quanto a sua pureza. Na Tabela 17 apresenta-se os valores de presso e temperatura utilizados, assim como o teor de orizanol no extrato e a recuperao de orizanol com base no teor de orizanol na RBOS.

Resultados e Discusso
Tabela 17 Valores de densidade do CO2, do teor de orizanol e da recuperao de

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orizanol da RBOS obtido nas condies de presso e temperatura do planejamento experimental da ESC da frao insaponificvel da RBOS. Experimentos P (bar) T (C) CO2 (kg/m3) Teor orizanol (%) 4,5 3,0 0,34 3,7 3,7 4,6 4,3 9,9 7,4 Recuperao de orizanol (%) 0,51 0,47 0,03 0,57 1,15 2,31 0,64 6,26 4,83

1 2 3 4 5 6 7 8 9

100 100 100 200 200 200 300 300 300

30 45 60 30 45 60 30 45 60

772,16 499,66 290,11 891,18 813,52 724,51 948,59 891,09 830,44

Observa-se, na Tabela 17, que o teor de orizanol aumentou com o aumento da presso, sendo que os maiores teores foram a 300 bar e 45 C e 300 bar e 60 C, com valores de 9,9 % e 7,4 % respectivamente. A 100 bar e 60 C houve o menor teor de orizanol (0,34 %). Nota-se que o maior teor de orizanol obtido utilizando a matria insaponificvel extrada da RBOS foi menor que o maior teor obtido utilizando a RBOS saponificada na ESC, onde o teor mximo foi de 16 %. Embora a concentrao de orizanol seja maior no material insaponificvel (5,5 %), algum fator dificultou a extrao do orizanol desse material, podendo ser devido ao aspecto pastoso do material e a formao de caminhos preferenciais observados na amostra. Para o clculo da recuperao do orizanol foi utilizado o clculo apresentado no item 5.5, onde 8,25 g da matria insaponificvel apresentavam 0,454 g de orizanol. No extrator foram usados 15 g de material insaponificvel, o que representa uma quantidade de 0,825 g de orizanol possvel de ser extrado. No maior rendimento de extrato, foi extrado 6,31 % da matria inicial, ou seja, 0,947 g de extrato. Dessa

Resultados e Discusso

74

massa 7,4 % era de orizanol, o que equivale a 0,07 g de orizanol. Calculando a recuperao utilizando a equao (8) temos que a recuperao de orizanol foi de 4,83 % do orizanol inicial, presente na RBOS e de 8,49 % do orizanol presente no insaponificvel.

Recuperao de orizanol(%) = Morizanol final/Morizanol inicial*100

(8)

O mesmo clculo foi aplicado a todos os extratos obtidos e os valores se encontram na Tabela 17. A maior recuperao de orizanol ocorreu na presso de 300 bar e temperatura de 45 C, com valores de 6,26 % de recuperao do orizanol presente na RBOS e 11 % do material alimentado no extrator (insaponificvel extrado da RBOS). Nota-se que a recuperao do orizanol, quando se optou por extrair os insaponificveis da RBOS antes de extrair supercrticamente, foi muito inferior recuperao obtida quando se utilizou o saponificado da RBOS como material de alimentao no extrator supercrtico. Assim, alm das dificuldades encontradas em trabalhar com o material insaponificvel estes resultados mostram que utilizar o saponificado diretamente como material de alimentao no extrator supercrtico mais vantajoso, visto que os valores de rendimento e teor de orizanol foram superiores. Isso se deve ao fato de no se formarem caminhos preferenciais, visveis, quando se utiliza o saponificado da RBOS, enquanto que no insaponificvel, possivelmente devido a consistncias pastosa da mesma, o mesmo foi observado.

5.8.3 Inverso das isotermas de rendimento para ESC utilizando o saponificado da RBOS e do material insaponificvel extrado da RBOS

As Figuras 21 e 22 apresentam, respectivamente, as isotermas de rendimento global da ESC da saponificado da RBOS e do insaponificvel em funo da presso de operao conforme os dados das Tabelas 14 e 16. Como pode ser observado na Figura 20, a inverso das isotermas de rendimento da ESC do saponificado da RBOS ocorre na faixa de presso de 240 bar a 270 bar, enquanto que para o material insaponificado extrado da RBOS (Figura 21) a inverso ocorre entre 120 e 130 bar. Deste modo, para presses abaixo da faixa de inverso das isotermas, o efeito da

Resultados e Discusso

75

densidade dominante sobre a solubilidade do soluto no solvente supercrtico fazendo com que o rendimento diminua com o aumento da temperatura. Porm, para presses acima da faixa de inverso o efeito da presso de vapor do soluto domina fazendo com que o rendimento aumente com o aumento da temperatura.
14 Rendimento em extrato (%) 12 10 8 6 4 2 0 0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 Presso (bar) 30 C 45 C 60 C

Figura 21 Grfico da inverso das isotermas de rendimento para a ESC da RBOS saponificada.

Rendimento em extrato (%)

6 5 4 3 2 1 0 0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330

30 C 45 C 60 C

Presso (bar)
Figura 22 Grfico da inverso das isotermas de rendimento para a ESC do material insaponificvel extrado da RBOS.

Resultados e Discusso

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Observa-se, ao comparar os dois materiais de alimentao da ESC, que a faixa de inverso das isotermas na RBOS saponificada ocorreu numa presso superior ocorrida no material insaponificvel, sendo que a inverso da RBOS saponificada ocorreu em presses superiores s observadas por outros autores, utilizando outras matrias-primas e outras condies de presso e temperatura. O fenmeno de inverso foi observado, tambm, por Michielin et al. (2005) para a oleoresina de cavalinha onde a inverso das isotermas de 30 C e 40 C ocorreu entre 120 bar e 150 bar. Genena (2005) observou que a inverso das isotermas (30 C, 40 C e 50 C) para o extrato de alecrim ocorre a 165 bar.

Resultados e Discusso

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5.8.4 Cintica e modelagem matemtica da ESC utilizando o saponificado da RBOS e o material insaponificvel extrado da RBOS

a) Cintica da ESC

A Figura 23 apresenta a curva de extrao a 300 bar, 60 C e vazo de 0,6 kg/h, representada pela massa de extrato acumulado, versus o tempo de extrao, utilizando a RBOS saponificada. Como pode ser observado, para um tempo total de extrao de aproximadamente 90 min, a curva j alcana a etapa de taxa decrescente de extrao (FER).

saponificado, 300 bar, 60 C, 0,6 kg/h


4,50 4,20 3,90

Massa de extrato (g)

3,60 3,30 3,00 2,70 2,40 2,10 1,80 1,50 1,20 0,90 0,60 0,30 0,00 0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 360 390

Tempo (min)

Figura 23 Curva de extrao utilizando RBOS saponificada, nas condies de 300 bar, 60 C e 0,6 kg/h.

Na Figura 24 pode-se observar a curva de extrao a 300 bar, 60 C e vazo de 0,6 kg/h, representada pela massa de extrato acumulado, versus o tempo de extrao, utilizando a frao insaponificvel da RBOS, onde a etapa FER alcanada com aproximadamente 100 minutos de extrao.

Resultados e Discusso

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Insaponificvel, 300 bar, 60 C, 0,6 kg/h


1,20 1,10 1,00

Massa de extrato (g)

0,90 0,80 0,70 0,60 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 0,00 0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 360 390 420 450

Tempo (min)

Figura 24 Curva de extrao utilizando o material insaponificvel extrado da RBOS nas condies de 300 bar, 60 C e 0,6 kg/h.

Comparando as Figuras 23 e 24, a massa acumulada de extrato, quando se utiliza a RBOS saponificada, quatro vezes maior que a massa acumulada ao utilizar a frao insaponificvel da RBOS. Esta diferena pode ser explicada pelos canais preferenciais que se formam quando se utiliza a frao insaponificvel, o que prejudica a extrao. Estes canais so visivelmente percebidos, visto que a frao insaponificvel possui consistncia pastosa ficando ressecada e esbranquiada somente na parte que teve contato com o solvente supercrtico. Outro possvel fator que explica a diferena entre os valores de massa acumulada que parte dos compostos extrados na ESC da RBOS saponificada podem ter sido extrados com o solvente orgnico durante a extrao dos insaponificveis da RBOS ou at mesmo precipitados e separados por filtrao durante o tratamento da frao insaponificvel com soluo de metanol-acetato (item 4.5). A diferena entre os materiais utilizados na ESC est no processo que os mesmos sofreram, sendo que a frao insaponificvel da RBOS foi obtida por extrao com solvente orgnico, a partir da RBOS saponificada, e foi posteriormente tratada com solventes e filtrada. Durante estes processos pode haver perda de parte dos compostos extraveis na ESC, disponveis na RBOS saponificada e removidas da frao insaponificvel pelos processos pelas quais a mesma passou.

Resultados e Discusso
Os parmetros t
CER

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(tempo de durao da etapa CER), MCER (taxa de extrao

da etapa CER) e tFER (tempo de durao da etapa FER) foram determinados utilizando o pacote estatstico SAS for Windows verso 8.5 (SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA) e so apresentados na Tabela 18.

Tabela 18 Tempo de durao das etapas CER e FER e taxa de extrao na etapa CER. Curva Insaponificvel Saponificado tCER (min) 104,1 85,9 tFER (min) 413,4 360,0 MCER (g/min) 0,00708 0,04340

Observa-se na Tabela 18, ao comparar os diferentes materiais utilizados na ESC, que o tCER e o tFER para a frao insaponificvel da RBOS so maiores, ou seja o tempo para atingir a etapa decrescente e posteriormente a etapa nula de extrao maior do que quando se utilizou o saponificado da RBOS. A Mcer, que representa a taxa de extrao na etapa de taxa de extrao constante, foi maior quando se utilizou o saponificado da RBOS, obtendo assim uma maior quantidade de extrato em um tempo menor de extrao. Essas diferenas observadas podem ser devido s diferenas nas caractersticas dos materiais (a frao insaponificvel da RBOS se apresenta na forma pastosa, dificultando a ESC e formando canais preferenciais) e na composio dos materiais (por sofrerem processos diferentes, alguns compostos podem estar presentes na RBOS saponificada e no estar presente na frao insaponificvel da RBOS).

b) Modelagem Matemtica

Para a modelagem das curvas de extrao foi utilizado um modelo de transferncia de massa baseado no balano de massa do leito de extrao: o modelo logstico (LM) apresentado por Martnez et al. (2003); um modelo baseado na analogia transferncia de calor, o modelo difusivo de placa (SSP) apresentado por Gaspar et al. (2003) e o modelo de Esquvel et al. (1999).

Resultados e Discusso

80

As Figuras 25 e 26 apresentam as curvas de ESC experimentais e modeladas na QCO2 de 0,6 kg/h, nas condies de 300 bar de presso e 60 C de temperatura, para o saponificado da RBOS e a frao insaponificvel extrada da RBOS, respectivamente.

Figura 25 Curva experimental e modelada para a ESC da RBOS saponificada na vazo de CO2 de 0,6 kg/h presso de 300 bar e temperatura de 60 C.

Figura 26 Curva experimental e modelada para ESC da frao insaponificvel extrada da RBOS na vazo de CO2 de 0,6 kg/h, presso de 300 bar e temperatura de 60 C.

Resultados e Discusso

81

A Tabela 19 apresenta os coeficientes, parmetros ajustveis e os erros mdios quadrticos (EMQ) obtidos para os modelos utilizados.

Tabela 19 Coeficientes, parmetros ajustveis e o erro mdio quadrtico (EMQ) obtidos atravs de modelagem das curvas de ESC utilizando a RBOS saponificada e o insaponificvel extrado da RBOS. Extrato RBOS saponificada insaponificvel Esquvel b (m2/min) 47,28 53,78 EMQ 0,145 0,005 b (min-1) 0,0159 0,0108 Logstico tm (min) -54,56 EMQ 0,0042 SSP Dm (m2/min) EMQ 5,39 E-13 4,63 E-13 0,109 0,003

-4089,3 0,0001

Atravs dos dados apresentados nas Figuras 25 e 26 e na Tabela 18, pode-se dizer que o modelo LM apresentou o melhor ajuste s curvas de ESC da frao insaponificvel e da RBOS saponificada. Isto se deve provavelmente por este modelo possuir dois parmetros ajustveis (b e tm) enquanto os demais que possuem apenas um. O modelo que teve o pior ajuste s duas curvas foi o modelo de Esquvel et al. (1999). O parmetro ajustvel tm, do modelo Logstico, corresponde ao tempo em que a taxa de extrao mxima. Nas curvas o valor deste parmetro foi negativo, perdendo seu significado fsico. Nestes casos, a taxa de extrao decrescente, ou seja, tem o seu valor mximo no instante inicial da extrao (MARTNEZ et al., 2003). Observa-se na Tabela 18 que ao comparar o EMQ, de todos os modelos, para os dois tipos de material utilizado na ESC, os valores encontrados para a frao insaponificvel foram menores, ou seja, os modelos tiveram um melhor ajuste quando se utilizou a frao insaponificvel extrada da RBOS.

Concluses
6. CONCLUSES

82

Com os resultados obtidos neste trabalho para recuperao do orizanol presente na borra de neutralizao do leo de farelo de arroz pode-se concluir que: As melhores condies de saponificao e secagem da RBOS, para posterior extrao do orizanol, foram utilizando aquecimento em banho-maria, a 90 C e secagem at umidade inferior a 3 %. O rendimento de saponificao foi de 41,06 % 4,34 %. Quanto extrao da frao insaponificvel da RBOS, o rendimento da extrao no variou significativamente entre os tempos de 4 h, 6 h e 8 h, sendo que o mesmo ficou entre 10,69 % 0,45 % e 11,69 % 0,66 %. O teor de orizanol na frao insaponificvel, ps-tratamento com soluo de acetato de etila foi de 5,6 %. A perda de orizanol desde a RBOS at esta etapa foi de 68%, mostrando que este mtodo no foi eficiente para recuperao do orizanol desta RBOS. As etapas de purificao do orizanol utilizando coluna cromatogrfica e cristalizao do orizanol no foram eficientes para este tipo de RBOS, sendo que houve perda de orizanol durante estes processos. A ESC da RBOS saponificada permitiu a recuperao de 69,00 % do orizanol presente na RBOS, sendo que o mesmo foi obtido com teor de 16 %. As condies que proporcionaram a maior recuperao e teor de orizanol foram a 300 bar e 60 C, sendo que o maior rendimento de extrato tambm ocorreu nestas condies. A presso de 100 bar e te proporcionaram o menor rendimento de orizanol. A utilizao da frao insaponificvel extrada da RBOS na ESC no foi eficiente, sendo que a melhor recuperao de orizanol foi de 6,26 %, com teor de 9,9 % de orizanol nas condies de 300 bar e 45 C. O modelo que apresentou o melhor ajuste s curvas de ESC da RBOS saponificada e da frao insaponificvel extrada da RBOS foi o modelo LM, provavelmente por possuir dois parmetros ajustveis, sendo que os modelos se ajustaram melhor as curvas da frao insaponificvel da RBOS. possvel o uso da tecnologia supercrtica para recuperao do orizanol presente na RBOS, no entanto nota-se necessrio testar condies de presso e temperaturas mais elevadas para verificar a mxima recuperao do orizanol mperaturas de 45 C e 60 C

Concluses

83

utilizando ESC. A combinao de processos de separao, junto com a ESC, necessria para purificao do orizanol dos extratos da ESC, visto que a pureza mxima obtida foi de 16 %.

Sugestes de Trabalhos Futuros


7. SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS

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Testar novos solventes para extrao da frao insaponificvel da RBOS, como o ter etlico.

Testar novas metodologias de cristalizao para purificao do orizanol presente na RBOS e do orizanol presente nos extratos da ESC.

Utilizar solventes como o acetato de etila, metil-etil-cetona, entre outros em que o orizanol possua uma alta solubilidade, de cossolvente na ESC da frao insaponificvel da RBOS para aumentar a recuperao de orizanol.

Utilizar outros processos de separao para purificao do orizanol obtido nos extratos da ESC, como, por exemplo, membranas.

Utilizar a ESC seguida de adsoro em leito com alumina ou slica para obteno de uma frao enriquecida de orizanol.

Analisar a composio dos extratos da ESC para obter o perfil qumico dos mesmos.

Analisar o poder antioxidante dos extratos obtidos, utilizando o mtodo do radical livre DPPH e outras metodologias.

Referncias Bibliogrficas
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