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NOMBRE: Yellsin Vsquez Tafur CDIGO: 20102151B PROFESOR: Jorge Gilberto Tello Cebreros CURSO: Microbiologa Sanitaria 1
6 de octubre de 2011
OBJETIVOS
Reconocer la cantidad de bacterias en el agua de distintos lugares. Determinar la calidad del agua debido a la cantidad de microorganismo presentes en ella. Poder determinar los factores que permiten el desarrollo de bacterias en el agua a partir de los resultados obtenidos en el conteo. Aprender a realizar un estudio de la calidad del agua.
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FUNDAMENTO TERICO
AGUA
El agua es esencial para la vida. La cantidad de agua dulce existente en la tierra es limitada, y su calidad est sometida a una presin constante. La conservacin de la calidad del agua dulce es importante para el suministro de agua de bebida, la produccin de alimentos y el uso recreativo. La calidad del agua puede verse comprometida por la presencia de agentes infecciosos, productos qumicos txicos o radiaciones.
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nutricin y provisin de alimentos para muchas viviendas), su uso no controlado generalmente est relacionado con impactos significativos sobre la salud humana. Estos impactos en la salud se pueden minimizar cuando se implementan buenas prcticas de manejo. Las guas para el uso seguro de aguas residuales en la agricultura deben encontrar el balance justo entre la maximizacin de los beneficios de salud pblica y las ventajas de usar recursos escasos. Es necesario que las Guas sean lo suficientemente flexibles para poder adaptarlas a las condiciones locales, sociales, econmicas y ambientales. Adems, se deben implementar paralelamente con otras intervenciones de salud como la promocin de la higiene, los servicios de agua potable y saneamiento adecuados y otras medidas de atencin primaria de la salud. MICROBIOLOGA DEL AGUA El tipo de microorganismo encontrado en un ambiente acutico viene determinado por las condiciones fsicas y qumicas que prevalecen en ese ambiente. Estas condiciones ambientales varan de un extremo a otro dependiendo de la temperatura, luz, pH y nutrientes. Temperatura: La temperatura de la superficie est comprendida entre los 0 C de los polos y los 40 C del ecuador. En las profundidades la temperatura ronda los 5 C. Luz: La mayor parte de las formas de vida acutica dependen, directa o indirectamente, de los productos metablicos de los organismos fotosintticos. Los principales organismos fotosintticos de los ambientes acuticos son las algas y cianobacterias. Su crecimiento est restringido a las capas altas de las aguas (0-50 m y en condiciones ptimas de claridad hasta 125 m). pH: Los microorganismos acuticos crecen mejor a pH: 6,5 - 8,5. El pH del agua de mar va de 7,5 a 8,5. Los lagos y ros presentan un gran rango de pH dependiendo de las condiciones ambientales locales (pH: 1,0 - 11,5). Nutrientes: La cantidad y tipo de nutrientes presentes en un ambiente acutico influye significativamente en el crecimiento microbiano. Los nitratos y fosfatos son constituyentes inorgnicos comunes que promueven el crecimiento de las algas. Cantidades excesivas de ellos causan un crecimiento excesivo de las algas de tal manera que se reduce la cantidad de oxgeno en el agua provocando asfixia en otras formas de vida acutica. Microorganismos en el agua que pueden causar enfermedades En el agua de mar, en las lagunas, los ros y, en general, en todos los cuerpos de agua existen millones de microorganismos que habitan en ellos de manera normal. Sin embargo, algunas especies como las bacterias, los virus, los protozoarios y las lombrices llegan a ser perjudiciales a la salud, como las que contienen las aguas negras no tratadas. En el caso de llevarse a cabo descargas de aguas negras directamente al mar o a otros cuerpos de agua, stos pueden resultar contaminados de manera importante y, de no tomar precauciones, los baistas pueden correr un riesgo.
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Microorganismos que se encuentran en aguas negras y provocan enfermedades Microorganismos Bacterias Algunas enfermedades y sntomas Gastroenteritis (incluye diarrea y dolores abdominales), salmonelosis (intoxicacin por alimentos), clera, otitis, conjuntivitis, enfermedades respiratorias, de la piel, etctera. Fiebre, resfros, gastroenteritis, diarrea, infecciones respiratorias, hepatitis. Gastroenteritis, criptosporidiosis y giardiasis (incluye diarrea y calambres abdominales), disentera. Perturbaciones digestivas, vmito, inquietud, tos, dolor en la caja torcica, fiebre y diarrea.
Virus
Protozoarios
Lombrices
Uno de los indicadores ms utilizados en el mundo para evaluar la calidad del agua es la medicin de microorganismos, generalmente bacterias de origen fecal. La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) recomienda realizar un registro peridico de este grupo de bacterias. En nuestro pas se estn llevando a cabo diversos estudios de monitoreo con fines de manejo y control de los contaminantes. Ac alguna bacterias que se pueden encontrar en aguas superficiales, y las enfermedades que causan.
Bacteria Aeromonas Campylobacter jejuni Enfermedad/infeccin Enteritis Campilobacteriosis Sntomas Diarrea muy lquida, con sangre y moco Gripe, diarres, dolor de cabeza y estmago, fiebre, calambres y nuseas Diarrea acuosa, dolores de cabeza, fiebre, uremia homiltica, daos hepticos Nuseas, dolores de estmago y diarrea acuosa, a veces fiebre, dolores de cabeza y vmitos Fiebre Mareos, calambres intestinales, vmitos, diarrea y a veces fiebre leve Dolores de estmago, diarrea y fiebre, a veces vmitos Fuerte diarrea
Escherichia coli
Plesiomonas shigelloides
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Se emplean recipientes esterilizados en horno de aire caliente, o autoclave y protegidos con tapas seguras y recubiertas con papel. Si esto no es posible, se pueden usar botellas perfectamente limpias y mantenidas en bao caliente (hirviendo) durante 10 a 15 minutos, junto con el tapn. Si no se cuenta con esto, se procede a lavar repetidas veces el recipiente con la misma fuente de agua de la muestra, antes de proceder a la toma de muestra definitiva. Si la muestra se va a extraer de un ro, se realiza en contra de la corriente, no de la orilla, sino en el centro del cauce, ya que siempre en la orilla hay restos orgnicos, por lo tanto hay mayor actividad microbiana en esa zona y aparecera en los resultados, pero no reflejara lo que en realidad est sucediendo en el cauce del ro. Si la muestra se va a extraer de una canilla de agua corriente, se abre la canilla por 5 minutos y se deja que salga el agua para que arrastre lo que qued en la caera (limpie). Se cierra el cao, se flamea la boca con un mechero, se abre nuevamente y se llena el frasco. Inmediatamente se tapa el frasco y se lleva al laboratorio o se guarda en heladera hasta su anlisis (6-12 hs.). Una vez obtenida la muestra, se debe realizar el anlisis bacteriolgico lo ms rpido posible. Si no se puede, se coloca la muestra en termos especiales (telgopor con hielo) y se debe tratar de que llegue al laboratorio dentro de las 6 horas de extrada (para aguas sospechosas) y 12 horas (para exmenes rutinarios). Debe mantenerse a una T de 6-10C hasta su anlisis. Todo 8
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esto debe hacerse porque se pueden obtener resultados falseados, debido a la rpida multiplicacin de los microorganismos, sobre todo si la muestra contiene materia orgnica (se seguiran multiplicando y esto no sera representativo). Una vez llegada la muestra al laboratorio, se homogeniza para poder obtener una mayor distribucin, ya que los esporulados se encuentran en el fondo.
Dilucin: Esto depende del material con que se trabaja. Si se sospecha que el agua contiene muchos microorganismos, se hacen las diluciones y recin se siembra. Se puede hacer en tubos de ensayo con 9 cc de agua estril en frascos con 90 cc, agregando 1 cc de la muestra problema y as hacer la dilucin.
Siembra: Se puede sembrar por: a) Inclusin en el medio: Para ello se coloca, con pipeta estril, 1 cc de la muestra en cajas de Petri estril, por otro lado se lican medio agar caldo nutritivo, se vuelca el medio en la caja y se mezcla bien para distribuir el material de siembra. Las colonias al desarrollar, quedarn incluidas en el medio. b) Con esptula de Drigalsky: En una caja de Petri en la que se ha volcado medio agar caldo nutritivo y solidificado, se agrega con pipeta estril 0,1 cc de la muestra y se disemina en superficie.
Incubacin: Es a 37C durante 48 hs., en estufa de cultivo y colocando las cajas invertidas. La T de incubacin es de 37C en este caso, debido a que como lo que se est buscando son grmenes provenientes de aguas cloacales, sa es la T normal de desarrollo (la del cuerpo humano).
Recuento: Se hace el conteo con un lpiz marcador de vidrio, marcando cada colonia formada (suponiendo que cada colonia proviene de un microorganismo). Tambin se pueden usar cmaras cuenta colonias, o dividir la caja en 4 cuadrantes, contar uno y luego multiplicar por cuatro. 9
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Clculo: Se consideran las cajas que tienen entre 30 y 300 colonias; las que estn por arriba o por debajo de estos valores, se descartan, porque inducen a errores.
En el mtodo directo, al nmero total de colonias se lo multiplica por 10, si se sembr 0,1 cc y luego por la dilucin usada, y as nos d el nmero de microorganismos/cc de agua. Interpretacin (Escala de Miquel) 300 colonias / cc 50 colonias / cc < 50 colonias / cc para Aguas superficiales para Aguas profundas para Aguas de consumo
010 microorganismos/cc 10 100 100 - 1000 1000 - 10.000 10000 100.000 Ms de 100.000 ANALISIS CUALITATIVO
Corresponde a la verificacin de bacterias patgenas en la muestra de agua a analizar. Las enfermedades son producidas por microorganismos contenidos en las deyecciones humanas y se adquieren mediante el consumo de aguas contaminadas con materia fecal o aguas cloacales. El examen cualitativo se reduce por su rapidez y comodidad a la bsqueda de identificacin del coli-bacilo, que si bien no es patgeno, es un indicador de contaminacin por los microorganismos que estn asociados a l. Las bacterias del grupo coliformes; son bacilos, Gram (-), no esporulados, fermentan la lactosa con formacin de cido y gas. Escherichia coli es el representante que se encuentra en el intestino del hombre y animales de sangre caliente. Otro es Aerobacter aergenes que se encuentra en el suelo, aire y granos. Toma de muestra: Del mismo modo que para el anlisis cuantitativo. Prueba presuntiva: Permite suponer o no, la presencia de microorganismos correspondientes al grupo coliaergenes.
Para ello se utilizan tubos de ensayos con medio de caldo lactosado con campana de Durhan. En un tubo de ensayo con 20 cc de medio, se agrega 10 cc de la muestra y se incuba a 37C, durante 24 hs.
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Si a las 24 hs. hay formacin de gas, la prueba es positiva (+), por lo que se contina con la siguiente prueba. Si a las 24 hs. no hay formacin de gas, se lo deja otras 24 hs. y si ac tampoco se form gas, la prueba es negativa (-). Si hay formacin de gas a las 48 hs., se considera dudosa, por lo tanto se sigue con el anlisis o se repite la prueba presuntiva. Prueba Confirmativa: En esta prueba se siembra a partir de los tubos que dieron (+) en la prueba anterior. Se puede hacer en medios lquidos slidos.
En medios lquidos: Se siembra en tubos con caldo bilis verde brillante, que es un medio especfico para coliformes. Se incuba a 37C - 24hs. y si hay formacin de gas, prueba confirmativa (+). En medios slidos: Se utiliza medio eosina azul de metileno. Se siembra en estras y se incuba a 37C - 24 hs. Puede haber formacin de colonias tpicas o atpicas. Las colonias tpicas (coliformes) Escherichia coli: colonias con centro oscuro con un brillo metlico caracterstico verdoso, debido a la reaccin entre la eosina y el azul de metileno. Aerobacter aergenes: presenta colonias con centro pardo sin brillo metlico. Otro medio es el Agar Endo: Que es el caldo lactosado + fucsina decolorada con sulfito. Se siembra, se incuba a 37C - 24 hs. y se observa si se regener el color rosa de la fucsina y las colonias aparecen rosadas y de aspecto dorado. Esto se debe a que el sulfito forma un compuesto de adicin con el colorante; al desarrollar el microorganismo, se forman compuestos que toman al sulfito y liberan al colorante (se separa) y reaparece el color rosa. El brillo dorado se debe a la precipitacin del colorante libre por los cidos orgnicos (cido lctico) producido por Escherichia coli. Prueba Final: Consiste en tomar de una colonia de la prueba anterior (de medio slido) y pasar a un tubo de ensayo que contiene caldo lactosado con Campana de Durhan. Se incuba a 37C - 24 hs. Si hay formacin de gas y si haciendo una coloracin de Gram, son Gram (-), la prueba completa (+): presencia de coliformes en el agua. Pruebas Diferenciales: Debido a la semejanza morfolgica y fisiolgica entre Escherichia coli y Aerobacter aergenes y ambos pertenecen al subgrupo coliformes y desde el punto de vista sanitario tiene mucha importancia su diferenciacin. Para ello, se recurre a las Pruebas IMViC
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recipiente y fuego permanente que produzca ebullicin en el agua por al menos tres minutos y mximo cinco. Si bien es efectivo como tratamiento casero, no es un mtodo factible para abastecimientos pblicos de agua. Despus de que se enfra, se recomienda airearla (traspasarla de un recipiente a otro para que retome partculas de aire y su sabor mejore) y dejarla reposar para que las sales o sedimentos se queden en el fondo del recipiente y luego se puedan retirar. Hervir el agua tiene la desventaja de que no proporciona proteccin contra la recontaminacin. Otro mtodo fsico que desafortunadamente no se puede llevar a cabo en el hogar es la desinfeccin por radiacin de luz ultravioleta. Sirve para desinfectar aguas claras, pero su efectividad se reduce significativamente cuando el agua es turbia o contiene componentes como nitrato, sulfato y hierro en su forma ferrosa. Este mtodo de desinfeccin no produce residuo alguno que proteja el agua de una nueva contaminacin. La luz ultravioleta se ha empleado para desinfectar en varios pases desarrollados, pero muy rara vez se aplica en pases en desarrollo. Mtodos qumicos
Son rpidos y efectivos para eliminar microorganismo s patgenos presentes en el agua. En las concentraciones que se requieren para desinfeccin, son fcilmente solubles en agua, y son capaces de proveer una accin residual. No aportan sabor, olor o color al agua. No son txicos para la vida humana ni animal. Son de fcil manejo, transporte, aplicacin y control. Por lo general estn disponibles a un costo moderado.
Las sustancias qumicas que se han usado exitosamente para desinfeccin son: cloro, compuestos de cloro y yodo dosificados en forma adecuada, ozono y otros oxidantes, como permanganato de potasio y perxido de hidrgeno. Cada uno de estos tiene sus ventajas y limitaciones. Por lo general, la cloracin es el mtodo ms seguro y econmico de desinfeccin. Comenz a realizarse a principios del siglo XX y ha sido quiz el evento tecnolgico ms importante en la historia del tratamiento del agua. Los materiales que se requieren estn ampliamente disponibles y constituyen un proceso relativamente fcil. Debido a que contiene desinfectante residual, el agua clorada puede transferirse de un envase a otro sin riesgo de recontaminacin. 13
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En cuanto a las desventajas, cualquier producto que contenga cloro concentrado es potencialmente nocivo para los nios, ya sea por contacto con la piel o por ingestin. De all que el producto, as como la solucin bsica, deban almacenarse fuera del alcance de los nios. En algunas situaciones, lograr la dosificacin apropiada podra presentar problemas: si se aade poco cloro, puede resultar que el agua no sea inocua. Adems, el agua sobredorada tiene un sabor y un olor caractersticos que pueden desagradar a muchas personas. A pesar de sus atractivas propiedades como desinfectante, el yodo tiene serias limitaciones. Se requieren dosis adecuadas (10-15 mg/1) para lograr una desinfeccin satisfactoria. No es efectivo cuando el agua presenta color o est turbia. La elevada volatilidad del yodo en soluciones acuosas es tambin un factor en contra de su uso, excepto si se trata de situaciones de emergencia. El permanganato de potasio es un poderoso agente oxidante y se ha descubierto que es efectivo contra el vibrin del clera, pero no contra otros patgenos. Deja manchas en el contenedor y por eso no es un desinfectante muy satisfactorio para abastecimientos pblicos de agua. El ozono se usa cada vez ms para desinfectar abastecimientos de agua potable en pases industrializados, ya que es efectivo para eliminar compuestos que dan sabor o color objetables al agua. Al igual que los rayos ultravioletas, el ozono normalmente no deja ningn residuo cuantificable que pudiera servir para controlar el proceso. La ausencia de un residuo tambin significa que no hay proteccin contra una nueva contaminacin del agua despus de su desinfeccin. Los elevados costos de instalacin, operacin y la necesidad de un suministro continuo de energa hacen que el uso del ozono no sea una prctica recomendada para pases en desarrollo. Agua limpia = salud La desinfeccin en el hogar no ser eficaz a menos que est apoyada por prcticas que mejoren la salud. La higiene personal es vital. La importancia de lavarse las manos con jabn y agua descontaminada despus de cualquier contacto con las heces y antes de comer es algo que vale recalcar en todo momento, y cualquier persona que manipule alimentos deber tener un cuidado especial. Esto significa lavarse las manos antes de preparar o servir los.ailimentos o de alimentar a los nios, pero tambin despus de manipular alimentos crudos o cualquier otra cosa que pudiera contaminarlas. El agua desinfectada (as como la solucin para desinfectar) deben cubrirse y almacenarse en un lugar oscuro, ya que la luz solar y el aire aceleran el deterioro del cloro. Los envases de almacenamiento deben limpiarse una vez por mes con una solucin de cloro. Si existe la posibilidad de que el agua desinfectada haya sido recontaminada al entrar en contacto con un vaso o utensilio sucio o con una mano sucia, el envase deber desecharse y lavarse minuciosamente.
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El ms ligero contacto con una superficie contaminada puede introducir patgenos en el agua y ocasionar recontaminacin. Por tanto, es importante que el envase de almacenamiento est diseado de forma que evite el contacto entre el agua, las manos y los utensilios. Hay varios desinfectantes comerciales que se utilizan para volmenes pequeos de agua, generalmente para uso individual o domstico. Estos desinfectantes son eficaces contra la mayora de los agentes patgenos transmitidos por el agua a las temperaturas y tiempos de contacto recomendados por los productores. Cuando se utilizan, es muy importante seguir las instrucciones al pie de la letra. La mayora de estos desinfectantes son compuestos de cloro o de yodo. La desinfeccin del agua potable debe ser una estrategia de salud pblica fundamental y si se aplica como es debido, reduce la incidencia de la mayora de las enfermedades que se transmiten por el agua. Un abastecimiento de agua y prcticas de saneamiento seguros, acompaados de campaas de educacin en salud, forman parte importante de las estrategias recomendadas para reducir la incidencia de enfermedades transmitidas por el agua, y constituyen el nico medio permanente de controlar su incidencia.
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PROCEDIMIENTO
MATERIALES
PIPETAS
TUBOS DE ENSAYO
GRADILLA
EQUIPO
BALANZA
MECHERO
TRPODE
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Segn instrucciones del envase se debe usar la proporcin de 23gr por 1Lt de agua. Se pesa 3.105 gr de caldo nutritivo seguidamente se vierte en un vaso de precipitado con 135 ml de agua destilada, movemos con la vaqueta hasta la disolucin. Luego se calienta el vaso con la solucin en el mechero hasta los 85 C. Luego colocamos 15ml de la solucin en 9 tubos de ensayo respectivamente y los llevamos a la autoclave. 3.- Distribucin de los medios: Distribuir en 9 tubos de ensayo 15ml de agar nutritivo El agua peptonada se coloc en 2 frascos cada uno con 99ml. Aparte se tena un frasco con agua peptonada.
4.-Llevar tubos de prueba con agar al autoclave 5.-Esterilizar los materiales de vidrio: Se esterilizan los materiales de vidrio en el horno a una temperatura de 180C con un tiempo de exposicin de alrededor de 90 minutos.
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PROCEDIMIENTO
1. Preparar placas con medio agar de la muestra de agua obtenida de cada luar especificado despus, sembrando 1.0, 0.1 y 0.01 ml en agar nutritivo.
MUESTRAS OBTENIDAS DE CADA GRUPO Grupo1 Grifo de Bao FIA 20/09/11 Hora: 11:18 Temperatura: 20 C Grupo3 Estanque de Arquitectura 20/09/11 Hora: 11:17 Temperatura: 15.2 C Grupo5 Estanque del pabelln central 20/09/11 Hora: 11:16 Temperatura: 17.5 C
2. A continuacin se incuban las placas invertidas a 20C por 48 horas o a 37C por 24 horas, y se cuentan las bacterias desarrolladas. El nmero colonias de una placa dada, multiplicando, multiplicada por la recproca de la fraccin sembrada da el nmero de bacterias por ml. Solamente las placas que contienen de 30 a 300 colonias deben considerarse satisfactorias para el recuento de bacterias. En caso que ninguna placa est dentro de stos lmites, se contar la placa que se aproxima ms al nmero de 30 300.
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RESULTADOS
Estos son los resultados de las placas de cada grupo: muestra Grupo 1 Grifo bao FIA Grupo 3 Estanque de arquitectura Grupo 5 Estanque pabelln central 1ml 15 10^-1 5 10^-2 1 UFC/ml observaciones Conteo a partir de dimetro > 1mm Conteo a partir de dimetro > 1mm -
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GRUPO 1:
1ml
10^-2ml
10^-1ml
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GRUPO 5:
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CONCLUSIONES
A mayor concentracin de muestra el crecimiento de colonias fue mayor en todas las muestras, lo cual demuestra que la dilucin disminuye la cantidad de microorganismos en el agua. En la primera dilucin se observ que la mayor cantidad de microorganismos fue del estanque de arquitectura, aunque no se puede asegurar eso ya que a mayores diluciones las proporciones cambian. Esto nos indica que el experimento no se hizo con el mayor cuidado. Por eso sera conveniente obtener ms muestras. Aunque el agua del cao de la FIA es potable se observa crecimiento de microorganismos. El agua del pabelln central es cambiada cada cierto tiempo, a diferencia del estanque del estanque de arquitectura. Debido a eso la cantidad de microorganismos en el estanque de arquitectura es mayor que en el del pabelln central. Una sola muestra insuficiente para determinar la calidad del agua. Con varias muestras y observando el desarrollo de muestra a travs de la historia del estanque se puede dar una conclusin segura acerca del estado del agua.
RECOMENDACIONES
Siempre hay que esperar a que el agar solidifique antes de agregar las muestras a la placa petri. Se debe elegir un lmite del tamao de las colonias para que el conteo sea ms satisfactorio. Como se puede ver se eligieron colonias con ms de 1mm de dimetro. Es conveniente obtener varias muestras para comparar el resultado y sacar el valor ms probable.
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BIBLIOGRAFA
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