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Captulo XX - Resduos de Pesticidas

CAPTULO

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RESDUOS DE PESTICIDAS

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Mtodos Fsico-Qumicos para Anlise de Alimentos - 4 Edio 1 Edio Digital

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RESDUOS DE PESTICIDAS

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esticidas ou agrotxicos e afins so definidos no Decreto n 4074, de 04 de janeiro de 2002, do Ministrio da Agricultura como: produtos e agentes de processos fsicos, qumicos e biolgicos, destinados ao uso nos setores de produo, no armazenamento e beneficiamento de produtos agrcolas, nas pastagens, na proteo de florestas, nativas ou plantadas e de outros ecossistemas e de ambientes urbanos, hdricos e industriais, cuja finalidade seja alterar a composio da flora ou da fauna, a fim de preserv-la da ao danosa de seres vivos considerados nocivos, bem como as substncias e produtos empregados como desfolhantes, dessecantes, estimuladores e inibidores de crescimento. Podem ser classificados quanto sua ao como inseticidas, fungicidas, herbicidas, raticidas, acaricidas e outros e quanto ao grupo qumico a que pertencem como organoclorados, organofosforados, carbamatos, ditiocarbamatos, piretrides e outros. Cronologicamente, segundo seu aparecimento e desenvolvimento, os pesticidas podem ser classificados de acordo com uma sucesso de geraes, sendo que na primeira gerao temos os inorgnicos, orgnicos vegetais, minerais e na segunda gerao, os orgnicos sintticos: organoclorados, organofosforados, carbamatos e piretrides. Na terceira gerao, temos os microbianos e os feromnios sexuais, na quarta, temos os hormnios juvenis e na quinta, os anti-hormnios vegetais e microrganismos.

Do ponto de vista toxicolgico, os pesticidas podem ser classificados em extremamente, altamente, moderadamente ou pouco txicos, de acordo com a dose letal (DL50) oral e drmica para ratos e outros indicadores relacionados a danos na crnea, leses na pele e concentrao letal inalatria (CL50) para ratos, segundo a Portaria n 3 do Ministrio da Sade, de 16 de janeiro de 1992.
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Durante o registro de pesticidas, so estabelecidos os limites mximos de resduos, conhecidos como LMR. A resoluo n 165, de 29 de agosto de 2003, do Ministrio da Sade, contm os ndices das monografias dos ingredientes ativos dos agrotxicos com emprego autorizado, com os respectivos LMR para cada binmio pesticida/cultura. As atualizaes so publicadas pela ANVISA/MS. O uso de pesticidas em lavouras cujos produtos so destinados ao consumo humano ou animal pode conduzir a resduos aps a colheita. Os alimentos ainda podem conter resduos remanescentes de utilizao durante o armazenamento e transporte. Por outro lado, os pesticidas podem se mover do local de aplicao e se transportar para outro lugar no meio ambiente e podem ser transferidos para a cadeia alimentar. A capacidade de um pesticida persistir por um certo perodo de tempo pode ser desejvel e tem sido reconhecido como importante em algumas situaes para o controle bem sucedido de pestes e doenas. Todavia, a presena de resduos de pesticidas nos alimentos e no meio ambiente preocupa o consumidor e as autoridades competentes, j que pode oferecer riscos para a sade humana e ambiental. A populao rural corre risco de exposio aguda, se no forem tomados os devidos cuidados na aplicao dos produtos e o consumidor pode estar sob risco de exposio crnica a pesticidas se estiver ingerindo alimentos contendo resduos de pesticidas acima dos LMR. Devido possibilidade da presena de vrios pesticidas ou seus metablitos, ou outros componentes contaminantes sejam de origem sinttica ou natural, torna-se impossvel especificar um nico procedimento analtico que determine satisfatoriamente o resduo de um pesticida particular em qualquer substrato. necessrio usar um procedimento validado para a situao ou adaptar e validar um procedimento aceitvel para circunstncias particulares envolvidas, tais como a natureza da amostra e do resduo e as interferncias a serem encontradas. Alm disso, algum mtodo de confirmao da identificao do resduo do pesticida necessrio como, a utilizao de fase estacionria de diferente polaridade ou detector seletivo de massa. Os sistemas de anlise de multi-deteco, baseados no uso da cromatografia a gs, cromatografia a lquido de alta eficincia com detectores especficos, tm a grande vantagem de proporcionarem evidncias de identidade e meios de medir um ou mais pesticidas de uma ampla gama de resduos. O controle de resduos de pesticidas em alimentos necessrio, tanto para a proteo direta do consumidor como em relao aceitabilidade da mercadoria no comrcio. Seus resultados podem ser usados para introduzir medidas corretivas de preveno de risco sade.

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Devido ao grande nmero de mtodos, apresentamos nesse captulo os principais, incluindo os multi-resduos. 370/IV Mtodo multi-resduo para determinao de pesticidas em frutas e vegetais As amostras so trituradas em blender e homogeneizadas e os pesticidas so extrados com acetona e uma mistura de diclorometano e n-hexano. A determinao feita por cromatografia a gs com detectores de captura de eltrons, fotomtrico de chama ou de nitrognio e fsforo e cromatografia a lquido de alta eficincia com detector ultravioleta ou fluorescncia ou CG/MS. A determinao de resduos de pesticidas em frutas e vegetais est distribuda conforme a Tabela 1. Tabela 1 -- Distribuio de pesticidas para finalidade analtica
(a) Aldrin Aletrina Azoxistrobina Bifentrina Bioaletrina Captana Clorotalonil Ciflutrina Lambda-cialotrina Cipermetrina DDT total (opDDT, ppDDT, op DDE ppDDE, opDDD, ppDDD) Deltametrina Dicofol Dieldrin Dodecacloro Endosulfam (alfa, beta e sulfato) Endrin Esfenvalerato Fenpropatrina Fenvalerato HCH total (alfa, beta, gama) (b) Acefato Azinfs-etlico Azinfs-metlico Carbofenotiona Clorfenvinfs Clorpirifs Clorpirifs-metilico Diazinona Diclorvos Dimetoato Disulfotona Etiona Etoprofs Etrinfs Fenamifs Fenitrotiona Fentiona Fentoato Folpete Forato Fosfamidona
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(c) Aldicarbe Carbaril Carbendazim Carbofurano Tiabendazol

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(a) Heptacloro Heptacloro epxido Hexaclorobenzeno Imazalil Iprodiona Permetrina Procimidona Procloraz Propargito Tetradifona Trifluralina Vinclozolina

(b) Malationa Metamidofs Metidationa Mevinfs Ometoato Parationa-etlica Parationa-metlica Pirimifs-etlico Pirimifs-metlico Profenofs Pirazofs Terbufs Triazofs Triclorfom

(c)

a) Cromatografia a gs com detector de captura de eltrons (ECD). b) Cromatografia a gs com detector fotomtrico de chama (FPD) ou de nitrognio e fsforo (NPD). c) Cromatografia a lquido de alta eficincia com detector UV ou fluorescncia. Material Cromatgrafo a gs com detectores: ECD, FPD ou NPD, cromatgrafo a lquido de alta eficincia com detector UV ou fluorescncia, capela de exausto para solventes, centrfuga, rotavapor, blender, balana analtica, balana semi-analtica, estufa, refrigerador, freezer, bomba de vcuo, ultra-turrax, sistema de purificao de gua para CLAE, bales volumtricos de diferentes capacidades, bales de fundo chato de 125 e 300 mL com boca esmerilhada 24/40, frascos de nalgene, pipetas volumtricas de diferentes capacidades, pipetas graduadas de diferentes capacidades, pipetas Pasteur, funis de Bchner, kitassatos, funis analticos, bqueres, provetas, tubos graduados com tampa de 10 mL, seringas hipodrmicas de vidro de 5 mL, frascos de vidro com tampa de 100 mL com tampa e batoque de teflon, tubos graduados com tampa e septo de teflon para injetor automtico, coluna de extrao em fase slida (SPE-diol de 500 mg, 3 mL) e coluna de extrao em fase slida (SPE-silica amino propil de 500 mg, 3 mL). Reagentes Acetona grau resduo Acetonitrila para CLAE
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gua purificada para CLAE Diclorometano grau resduo Dihidrogenofosfato de Potssio cido fosfrico Algodo tratado n-Hexano grau resduo lcool metlico para CLAE Hidrxido de sdio Isooctano Padres analticos de pesticidas de alta pureza com certificado Tolueno grau resduo Nota: faa, previamente, brancos de cada reagente para certificar-se de que no possuem interferentes para a anlise. Solues-padro estoque Pese, com preciso, 0,01 g (ou conforme requerido pelo mtodo), do padro de pesticida em pesa-filtro ou bquer de 10 mL. Dissolva com uma pequena quantidade de isooctano (padres de pesticidas item a e b da Tabela 1), acetonitrila (aldicarbe, carbofurano e carbaril) ou lcool metlico (carbendazim e tiabendazol). Transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL. Complete o volume com isooctano, acetonitrila ou lcool metlico, conforme a classe do princpio ativo preparado. Transfira para frasco de vidro com tampa e batoque de teflon. Todo frasco deve conter uma etiqueta com dados de procedncia, identidade, concentrao, estabilidade, data de preparao, prazo de validade, temperatura de armazenamento. Armazene em freezer. Esta a soluo a partir da qual sero preparadas as soluespadro intermedirias. Solues-padro intermedirias A partir da soluo-padro estoque, prepare misturas de padres de pesticidas e pipete 0,1 mL, 0,2 mL ou a quantidade necessria para obter a concentrao desejada de cada princpio ativo, para um balo volumtrico de 10 mL. Complete o volume com n-hexano (pesticidas do item a e b da Tabela 1) ou acetonitrila (aldicarbe, carbaril, carbofurano) ou lcool metlico (carbendazim e tiabendazol). Transfira para um frasco, cole etiqueta e armazene em refrigerador. Solues-padro de trabalho A partir das solues intermedirias, pipete 0,1 mL e/ou a quantidade necessria para obter a concentrao desejada, para um balo volumtrico de 10 mL. Adicione solvente apropriado e complete o volume. Transfira para um frasco de armazenamento, cole etiqueta e guarde em congelador. Para os pesticidas dos itens a e b da Tabela 1, as diluies so feitas com n-hexano. Para aldicarbe, carbofurano, carbaril, carbendazim e tiabendazol, as diluies so feitas na fase mvel. A concentrao deve ser adequada faixa de linearidade do detector do cromatgrafo e metodologia utilizada. Prepare as solues de trabalho em cinco nveis de concentrao (1/2 LQ, 1 LQ, 2 LQ, 5 LQ, 10 LQ) para a construo da curvapadro.
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Nota: Limite de quantificao (LQ) Menor concentrao do analito na amostra que pode ser quantificada com preciso e exatido aceitveis, sob determinadas condies experimentais adotadas. Diclorometano-n-hexano 1:1 (v:v) Transfira 500 mL de diclorometano para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com n-hexano. Fase mvel para anlise de resduos de aldicarbe, carbofurano e carbaril gua purificada para CLAE e acetonitrila 65:35 (v:v) Transfira 350 mL de acetonitrila para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua purificada para CLAE. Fase mvel para anlise de resduos de carbendazim e tiabendazol (soluo de KH2PO4 a 0,1% e lcool metlico 30:70) Transfira 300 mL da soluo KH2PO4 a 0,1% para balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com lcool metlico. Misture bem, homogeneze em ultra-som e filtre em membrana de 0,45 m Isoctano-tolueno 9:1(v/v) Transfira 90 mL de isoctano para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com tolueno. Soluo KH2PO4 0,1% Pese 1 g de KH2PO4 em bquer de 10 mL e dissolva com gua purificada para CLAE. Transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 1000 mL, lavando o bquer com pequenas quantidades de gua purificada para CLAE. Tratamento do algodo Coloque, em frasco de Soxhlet, o algodo e extraia com 200 mL de n-hexano por pelo menos cinco horas. Coloque em bquer e seque em estufa. Armazene em frasco de vidro com tampa. Procedimentos A seleo das partes de um material vegetal que devem ser analisadas depende do objetivo da anlise e da natureza de amostra. Deve-se amostrar o produto de acordo com as normas do Joint FAO/WHO Food Standards Programme Codex Alimentarius Commission. Preparao da amostra Materiais modos, gros e pequenas frutas Simples mistura. Frutas, legumes e outros produtos vegetais A reduo das amostras deve ser realizada por corte manual. Quarteie antes de misturar. Pique, triture, moa em liqidificador com copo de vidro ou ao inox.
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Verduras Retire as folhas aleatoriamente. Pores selecionadas Quarteie e misture a quantidade total das pores selecionadas a fim de obter um material homogneo. Coloque aproximadamente 1 kg em frasco de vidro com tampa de vidro ou com batoque de teflon. Armazene em geladeira para anlise imediata ou em freezer caso no seja realizada imediatamente. Extrao Pese 30 g da amostra em frasco de nalgene. Adicione 30 mL de acetona e agite no ultra-turrax por 30 segundos. Adicione 60 mL de uma mistura de diclorometano-n-hexano 1:1 (v/v) e agite novamente em ultra-turrax por 30 segundos. Centrifugue por 20 minutos ou filtre em funil de vidro com algodo tratado para uma proveta de 100 mL. Para analisar resduos de pesticidas do item a da Tabela 1, prossiga a partir do extrato orgnico como indicado no item 1. Para analisar os resduos de pesticidas do item b da Tabela 1 prosiga como indicado no item 2. Para analisar resduos de aldicarbe, carbofurano e carbaril prossiga como indicado no item 3. Para analisar resduos de carbendazim e tiabendazol prossiga como indicado no item 4. 1. Resduos dos pesticidas do item a Pipete 0,2 mL do extrato orgnico para vial. Concentre at quase secura, ressuspendendo em n-hexano, completando o volume a 1 mL. Injete 2 L em cromatgrafo a gs. 2. Resduos dos pesticidas do item b Pipete 5 mL do extrato orgnico para um tubo graduado. Concentre at quase secura e ressuspenda em isoctano-tolueno 9:1 (v/v), a 1 mL. Injete 2 L em cromatgrafo a gs. 3. Resduos de aldicarbe, carbofurano e carbaril Do extrato, transfira uma alquota de 10 mL para um balo de 25 mL, concentre em rotavapor at quase secura e ressuspenda em diclometano, completando o volume a 2 mL. Condicione uma coluna de extrao em fase slida (SPE slica aminopropil de 500 mg, 3 mL).Transfira a amostra. Elua com 4 mL de diclorometano com 1% de lcool metlico em tubo de vidro. Concentre secura e ressuspenda na fase mvel. Filtre em membrana de 0,45 m atravs de uma seringa de vidro de 5 mL. Recolha em tubo de vidro com tampa. Transfira para o vial e injete 40 L em cromatgrafo a lquido de alta eficincia. 4. Resduos de carbendazim e tiabendazol Do extrato, transfira uma alquota de 10 mL para um balo de 25 mL e concentre em rotavapor at quase a secura e ressuspenda em lcool metlico, completando o volume a 2 mL. Condicione uma coluna de extrao em fase slida (SPE diol de 500 mg, 3 mL) com 5 mL de lcool metlico. Transfira a amostra. Lave com 2 mL de lcool metlico e descarte o eluato. Elua com 4 mL da soluo de H3PO4 0,1 M/L e recolha em tubo de vidro. Adicione 100 L de NaOH 1 M/L. Filtre em membrana de 0,45 m atravs de uma seringa de vidro de 5 mL. Recolha em tubo de vidro com tampa. Transfira para o vial e injete 40 L em cromatgrafo a lquido de alta eficincia.
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Anlise da testemunha e estudos de recuperao Para cada matriz a ser analisada, realize a anlise em triplicata da testemunha e estudos de recuperaes com 5 repeties em pelo menos dois nveis: 1 LQ e 10 LQ. Condies cromatogrficas Pesticidas do item a: cromatgrafo a gs, com ECD, equipado com workstation, coluna capilar, fase estacionria: 5% de fenil metil siloxano (30 m x 0,32 mm x 0,25 m de filme), temperatura do detector: 320C, temperatura do forno: 60C (1 min), (60 - 220)C (10C/min), (220 - 280)C (3C/min.), 280C (17 min) tempo total: 60 min, fluxo do gs de arraste: nitrognio: 1 mL/min, temperatura do injetor: 240oC, modo de injeo: splitless. Pesticidas do item b: cromatgrafo a gs, com FPD, coluna megabore: fase estacionria: 5% de fenil metil siloxano (30 m x 0,53 mm x 2,65 m de filme), temperatura do detector: 280C, temperatura do forno: (50 - 150)C (30C/min), (150 - 240)C (10C/min), fluxo do gs de arraste: nitrognio: 18 mL/min, fluxo de hidrognio: 75 mL/min, fluxo de ar sinttico: 100 mL/min, temperatura do injetor: 240oC, modo de injeo: splitless. Aldicarbe, carbofurano e carbaril: cromatgrafo a lquido de alta eficincia, detector de UV ( : 195 nm-aldicarbe e carbofurano e 210 nm - carbaril), coluna: ao inox, 125 mm x 4 mm, fase estacionria; Spherisorb ODS-2,5 m, fase mvel: gua purificada para CLAE-acetonitrila 65:35 v:v, fluxo da fase mvel: 0,75 mL/min, temperatura: 30C. Carbendazim e tiabendazol: cromatgrafo a lquido de alta eficincia, detector de UV ( : 285 nm), coluna: ao inox, 125 mm x 4 mm, fase estacionria: Spherisorb ODS-2,5 m, fase mvel: soluo de KH 2PO 4 a 0,1% lcool metlico 30:70 v:v, fluxo da fase mvel: 0,60 mL/min, temperatura: 25C. Curva-padro Injete as solues de trabalho com no mnimo cinco diferentes concentraes por duas ou trs vezes ou at que haja repetitibilidade dos cromatogramas. Construa a curvapadro dentro da faixa de linearidade do detector. Quantificao A quantificao dos pesticidas do item a feita por cromatografia a gs com detector de captura de eltrons e a dos pesticidas do item b por cromatografia a gs com detector fotomtrico de chama (FPD) ou detector de nitrognio e fsforo. Aldicarbe, carbofurano, carbaril, carbendazim e tiabendazol so quantificados por cromatografia a lquido de alta eficincia com detector ultravioleta ou de fluorescncia. A anlise qualitativa feita por padronizao externa, por meio da comparao do tempo de reteno dos respectivos princpios ativos e a confirmao em coluna de diferente polaridade ou por detector seletivo de massa.

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Clculo A anlise quantitativa feita por meio da curva-padro, por comparao de rea, levando em considerao o fator de diluio e a quantidade de amostra. O resultado deve ser expresso em miligrama do princpio ativo por quilograma da amostra (mg/Kg).

Figura1 - Esquema do mtodo multi-resduo para determinao de resduos de pesticidas em frutas e vegetais
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Referncias bibliogrficas ANALYTICAL METHODS FOR PESTICIDE RESIDUES IN FOODSTUFFS, 6th ed. Inspectorate for Health Protection, Ministry of Public Health, Welfare and Sports, The Hague/Rijswijk, The Netherlands, 1996 (Part 1 Multiresidue methods) HIEMSTRA, M.; JOOSTEN J.A.; KOK, A. Fully automated Automated solid-phase extraction clean-up and on-line liquid chromatographic determination of benzimidazole fungicides in fruit and vegetables. J. A.O.A.C. Int., p. 78, 1267-1274,1995. KOK, A. AND ; HIEMSTRA, M. Optimization, automation, and validation of the solid-phase extraction clean-up and on-line liquid chromatographic determination of Nmethylcarbamate pesticides in fruits and vegetables. J. A.O.A.C. Int., 75, 1063-1074, 1992. JOINT FAO/WHO FOOD STANDARDS PROGRAMME CODEX ALIMENTARIUS COMMISSION. Portion of commodities to wich Codex Maximum Residue Limits apply and which is analyzed, v .2, Section 4, p. 391-404,1993. 371/IV Mtodo multirresduo para determinao de pesticidas e bifenilas policloradas em produtos gordurosos Este mtodo aplica-se determinao de resduos dos pesticidas: lambdacialotrina, cipermetrina, DDT total (opDDT, ppDDT, ppDDE, ppDDD), dieldrin, deltametrina, endosulfam total (alfa, beta e sulfato de endosulfan), endrin, HCH total (alfa, beta e gama HCH), heptacloro, heptacloro epxido, hexaclorobenzeno, mirex, bifenilas policloradas policloradas (PCBs congneres: 28, 52, 101, 138, 153, 180) em produtos gordurosos como: leite, ovo, manteiga, carnes (frango, peixe), etc. Os pesticidas so extrados com uma mistura de solventes, a purificao feita em uma nica etapa em coluna de slica gel e a determinao qualitativa e quantitativa feita por cromatografia a gs com detector de captura de eltrons. Material Cromatgrafo a gs com detector de captura de eltrons, rotavapor, estufa, mufla, aparelho de Soxhlet, bales volumtricos de diferentes capacidades, pipetas volumtricas, pipetas Pasteur, coluna cromatogrfica de vidro de 15 mm de dimetro por 30 cm de altura, com reservatrio de 300 mL e torneira de teflon, provetas de diferentes capacidades, bales de fundo chato de 300 mL com boca esmerilhada, tubos graduados de 10 mL, dessecador, frasco Erlenmeyer com tampa, almofariz com pistilo, vials de vidro com tampa e septos de teflon para injetor automtico.
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Reagentes n-Hexano grau resduo Diclorometano grau residuo Sulfato de sdio anidro granulado grau resduo Slica Gel 60, 70-230 mesh Nota: faa previamente um branco de cada reagente para certificar-se de que no possuem interferentes para a anlise. Soluo-padro Pese, com preciso, 0,010 g de cada padro analtico em bquer, transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com isoctano. Transfira para frasco de vidro com tampa e batoque de teflon. Todo frasco deve conter uma etiqueta com dados de procedncia, identidade, concentrao, estabilidade, data de preparao, prazo de validade e temperatura de armazenamento. Prepare solues intermedirias com n-hexano. Faa diluies necessrias com n-hexano em cinco nveis (1/2 LQ, 1 LQ, 2 LQ, 5 LQ e 10 LQ) para construo da curva-padro dentro da faixa de linearidade do detector. Nota: Limite de quantificao (LQ) Menor concentrao do analito na amostra que pode ser quantificada com preciso e exatido aceitveis, sob determinadas condies experimentais adotadas. Diclorometano-n-hexano 1:4 (v/v) Transfira 200 mL de diclorometano para um balo volumtrico de 1000 mL. Adicione n-hexano. Misture bem e complete o volume com n-hexano. Diclorometano-n-hexano 1:1 (v/v) Transfira 500 mL de diclorometano para um balo volumtrico de 1000 mL. Adicione n-hexano. Misture bem e complete o volume com n-hexano. Slica gel ativada Calcine quantidade suficiente de slica gel a 450C durante 4 horas. Deixe em dessecador at temperatura ambiente. Armazene em frasco de vidro com tampa e batoque de teflon. Ative a slica gel calcinada por 5 horas a 135C de dois em dois dias. Armazene em dessecador. Slica gel desativada a 10% Pese 13,5 g de slica gel ativada em frasco Erlenmeyer com tampa. Adicione 1,5 g de gua tratada e homogeneze. gua tratada Transfira gua para um funil de separao de 1000 mL e extraia trs vezes com 60 mL da mistura diclorometano-n-hexano 1:1 v/v. Despreze a fase orgnica e armazene a gua. Algodo tratado Coloque, em frasco de Soxhlet, o algodo e extraia com 200 mL de n-hexano por pelo menos cinco horas. Coloque em bquer e seque em estufa. Armazene em frasco de vidro com tampa.
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Preparao da Amostra Leite Homogeneze a amostra, pese 10 g, transfira para um almofariz contendo 15 g de slica gel calcinada e macere at resultar em p. Ovos Homogeneze a amostra (claras e gemas). Pese 5 g desta mistura e 5 g de gua tratada, transfira para um almofariz contendo 15 g de slica gel calcinada e macere at resultar em p. Manteiga, carnes e outros produtos gordurosos Homogeneze a amostra, extraia a gordura por refluxo em Soxhlet com 200 mL de n-hexano. Pese 2 g de gordura e dilua com nhexano em balo volumtrico de 25 mL. Procedimento Transfira para uma coluna cromatogrfica 15 g de slica gel desativada a 10%. Adicione aproximadamente 1 g de sulfato de sdio anidro e posteriormente a mistura com a slica de leite ou ovo ou uma alquota de 5 mL da soluo de gordura diluda, equivalente a 0,4 g. Empacote muito bem. Elua com 200 mL da mistura de n-hexano-diclorometano na proporo de 4:1 (v/v) e em seguida, com 200 mL da mistura de n-hexano-diclorometano na proporo de 1:1 (v/v). Recolha os dois eluatos em bales de fundo chato de 350 mL e concentre em rotavapor 40C, at quase a secura. Adicione aproximadamente 5 mL de n-hexano e concentre novamente at que todo o diclorometano seja evaporado. Transfira quantitativamente para um tubo graduado, completando o volume para 5 mL com n-hexano. Identifique e quantifique em cromatgrafo a gs com detector de captura de eltrons. Condies cromatogrficas Cromatgrafo a gs com ECD equipado com workstation, coluna capilar (30 m x 0,32 mm x 0,25 m de filme) : fase estacionria: 5% de fenil metil siloxano, temperatura do detector: 320C, temperatura do forno: 60C (1min ); (60220)C (10C/min.), 220-280C (3C/min), 280C (17 min) tempo total: 60 min.; fluxo do gs de arraste: nitrognio: 1 mL/min, temperatura do injetor: 240C, modo de injeo: splitless. Curva-padro Injete as solues de trabalho com diferentes concentraes por duas ou trs vezes ou at que haja repetitibilidade dos cromatogramas. Construa a curva-padro dentro da faixa de linearidade do detector. Anlise da testemunha e estudos de recuperao Para cada matriz a ser analisada, realize anlise da testemunha e estudos de recuperaes com 5 repeties em pelo menos dois nveis: 1 LQ e 10 LQ.

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Clculo A anlise quantitativa feita por meio da curva-padro com padronizao externa, por comparao de rea, levando em considerao o fator de diluio e quantidade de amostra. A anlise qualitativa feita por padronizao externa, por meio da comparao do tempo de reteno dos princpios ativos e a confirmao em coluna de diferente polaridade ou por detector seletivo de massa. O resultado deve ser expresso em miligramas do princpio ativo por quilograma da amostra (mg/Kg). Referncia bibliogrfica STEIWANDTER, H. Contributions to slica gel application in pesticide residue analysis. III. An on-line method for extracting and isolating chlorinated hidrocarbon pesticides and polychlorinated biphenyls (PCBs) from milk and dairy products. Fresenius Z. Anal. Chem., 312: 342-345, 1982. 372/IV Mtodo para determinao de ditiocarbamatos em frutas e vegetais Este mtodo aplica-se determinao de resduos de ditiocarbamatos em frutas e vegetais. Consiste na decomposio de ditiocarbamatos em meio de soluo de cloreto estanoso e cido clordrico, gerando o CS2, que, aps purificao, coletado em uma soluo de acetato de cobre e dietanolamina. Dois complexos cpricos [cprico-N-Nbis(2-hidroxietil)] so formados e medidos em conjunto por espectrofotometria na regio de absoro no visvel, no comprimento de onda de 435 nm, usando como referncia um branco dos reagentes. Material Espectrofotmetro UV/VIS com cubetas de 1 cm; balana analtica; balana semi-analtica; manta de aquecimento para balo de 1000 mL com 3 bocas; sistema de purificao de gua; aparelho de destilao e decomposio constitudo de: um balo de 1000 mL com 3 bocas, um destilador, um funil de separao, condensador, tubos lavadores de gases e conexes apropriadas (Figura 1); pipetas volumtricas de diferentes capacidades, bales volumtricos de diferentes capacidades, bqueres e provetas. Reagentes lcool Dissulfeto de carbono com alto teor de pureza (D = 1,266 g/mL) Hidrxido de sdio cido clordrico Acetato de chumbo Acetato de cobre Dietanolamina
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Cloreto estanoso di-hidratado Lactose Mancozebe - padro analtico certificado Nitrognio comum gua destilada e desmineralizada Nota: faa previamente brancos de cada reagente para certificar-se de que no possuem interferentes na anlise. Soluo R1 - acetato de chumbo Dissolva 30 g de acetato de chumbo em gua com aquecimento. Esfrie e transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Soluo R2 - acetato de cobre Dissolva 0,4 g de acetato de cobre mono-hidratado [Cu(CH3COO)2.H2O] em 200 mL de lcool etlico com leve aquecimento. Esfrie e transfira para um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com lcool. Soluo R3 Dilua 25 mL da soluo R2 em um balo volumtrico de 100 mL com lcool. Soluo R4 - reagente de cor Adicione 100 mL de lcool, 30 mL da soluo R3 e 25 g de dietanolamina em balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com lcool. Soluo R5 - cloreto estanoso Dissolva 40 g de cloreto estanoso dihidratado (SnCl2. 2H2O) em cido clordrico e transfira para um balo volumtrico de 100 mL. Complete o volume com cido clordrico. Soluo R6 Transfira cuidadosamente 20 mL da soluo R5 e 20 mL de cido clordrico concentrado para um balo volumtrico de 200 mL e complete o volume com gua. Soluo R7 - Hidrxido de sdio Pese 10 g de hidrxido de sdio e dissolva em gua. Transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Soluo-padro em lactose para estudos de recuperao Pese, em balo de rotavapor, quantidade suficiente de padro para a realizao das recuperaes, adicione lactose, de maneira a obter a concentrao desejada. Misture com cuidado at perfeita homogeneizao, girando o balo durante 4 horas em rotavapor. Soluo-padro me CL1 Em um balo de 50 mL contendo 40 mL de lcool, pese 1 mL de dissulfeto de carbono (D = 1,266 g/mL) e complete o volume com lcool.
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Captulo XX - Resduos de Pesticidas

Soluo-padro intermediria CL2 Dilua 5 mL da soluo CL1 em um balo volumtrico de 50 mL e complete o volume com lcool . Soluo-padro intermediria CL3 Transfira 5 mL da soluo CL2 para um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com lcool, obtendo-se assim uma concentrao de 50,64 g/mL de dissulfeto de carbono. Solues-padro de trabalho Em um balo volumtrico de 25 mL, contendo 15 mL da soluo R4 (reagente de cor), pipete 0,2; 0,4; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 e 8,0 mL da soluo-padro intermediria CL3 e complete o volume com lcool etlico, resultando, respectivamente, nas concentraes de 0,4; 0,8; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0; 12,0; 14,0 e 16,0 g, CS2 por mL. Soluo-branco de reagentes Transfira 15 mL da soluo R4 para um balo volumtrico de 25 mL e complete o volume com lcool. Procedimento Quarteie e corte a amostra em pedaos pequenos. Homogeneze e armazene em frasco de vidro com tampa, no freezer. Monte o aparelho de destilao e decomposio, conforme Figura 1. Transfira 300 g da amostra para o frasco com trs bocas do conjunto de destilao. Conecte o condensador na boca central e nas laterais, o tubo de nitrognio e o funil de separao contendo 240 mL da soluo R6. No condensador (boca central do balo de 3 bocas) conecte, em seqncia, trs tubos lavadores de gases, adicionando a cada tubo respectivamente: 10 mL da soluo R1, 10 mL da soluo R7 e 15 mL da soluo R3. Abra o fluxo de nitrognio brandamente. Aquea o frasco rapidamente at a ebulio por 60 minutos. Aps o trmino, desligue o fluxo de nitrognio e desconecte o terceiro tubo. Transfira para um balo volumtrico de 25 mL, completando o volume com lcool. Mea a absorbncia a 435 nm em espectrofotmetro, contra o branco de reagentes. Anlise da testemunha e estudos de recuperao Para cada matriz a ser analisada, realize anlise da testemunha e estudos de recuperao com 5 repeties em pelo menos dois nveis: 1 LQ e 10 LQ. Nota: Limite de quantificao (LQ) Menor concentrao do analito na amostra que pode ser quantificada com preciso e exatido aceitveis, sob determinadas condies experimentais adotadas. Curva-padro Mea a absorbncia de todas as solues de trabalho em espectrofotmetro, a 435 nm contra o branco de reagentes. Trace a curva absorbncia versus concentrao de CS2.
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Figura 1 Aparelho de destilao e decomposio para determinao de ditiocarbamatos em frutas e vegetais. Clculo O resduo, em mg/kg, de CS2 calculado por padronizao externa com a curva de calibrao, levando em considerao o fator de diluio e a quantidade de amostra. Fatores de converso do CS2 para alguns ditiocarbamatos:
Ditiocarbamatos Mancozebe Manebe Zinebe Tiram Fator de converso 1,776 1,742 1,810 1,578

O resultado deve ser expresso em miligramas do princpio ativo ou de CS2 por quilograma da amostra (mg/Kg).

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Captulo XX - Resduos de Pesticidas

Referncias bibliogrficas KEPPEL, G.E. Modification of the carbon dissulfide evolution method for dithiocarbamate residues. J. Assoc. Off. Anal. Chem. v. 52, p. 162-169, 1969. KEPPEL, G.E. Collaborative study of the determination of dithiocarbamate residues by a modified carbon dissulfide evolution method. J. Assoc. Off. Anal. Chem. v. 54, p. 528-532, 1971. THEIR H.; ZEUMER, H. editors. Multiresidue method SIS. Ditiocarbamate and thiuram disulfide fungicides photometric determination. In: Manual of Pesticide Residue Analysis. Deutsche. Forschungsgemeinschaft, Pesticides Comm. Weinhein; Verlag, 1987. v. 1 p. 353-360.

Colaboradores Helosa Helena Barretto de Toledo, Snia Bio Rocha, Tereza Atsuko Kussumi e Vera Regina Rossi Lemes
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