ESTRUTURA E REPLICAO DO DNA

ATIVIDADE BIOLGICA

Qual a natureza qumica da molcula responsvel por estocar a informao gentica???

CARACTERSTICAS 1. 2. 3. Estocar a informao e transmitir com preciso para a prole. Deve controlar o desenvolvimento do organismo. Deve ser passvel de mudanas para suportar a evoluo.

Protenas cido nuclecos

4 nuc cleotdeos

20 aminoc cidos

X
1940-50

Princpio transformante de Griffith (1928)

Streptococcus pneumoniae Frederick Griffith Born 1879 Died 1971

Forma R: sem cpsula

Forma S: encapsulada

Caractersticas do princpio transformante: Sensivel a DNAse e insensvel a protease

Oswald Avery Born 1877 Died 1955

Colin MacLeod Born 1909 Died 1972

Maclyn McCarty Born 1911 Died 2005

Natureza quimca das unidades constituintes do DNA e RNA

Os cidos nuclicos so macromolculas compostas de subunidades chamadas nucloeotdeos.

cidos nuclicos

CLASSIFICAO DE NUCLEOTDEOS QUANTO AO NMERO DE RADICAIS FOSFATO

RIBONUCLEOTDEOS

DESOXIRRIBONUCLEOTDEOS

ESTRUTURA DE UM POLINUCLEOTDEO

Ligao fosfodiester entre os nucleotdeos. Ligao entre P ligado ao C 5 do nucleotdeo a ser incorporado na cadeia com a OH ligada li d ao C 3 d do nucleotdeo da cadeia.

The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1962

Linus Pauling

"for their discoveries concerning the molecular structure of nucleic acids and its significance for information transfer in living material"

James Watson Born 1928

Francis Crick Born 1916 Died 2004

Maurice Wilkins Born 1916 Died 2004

Rosalind Franklin Born 1920 Died 1958

Quais foram as informaes usadas por Watson e Crick para propor o modelo 3D para a molcula de DNA?

Rosalin Franklin

Imagem revelada Difrao de raio X

Maurice Wilkins
Experimentos de Franklin e Wilkins: Os polmeros so unidos por pontes de hidrognio. Os polmeros de desoxirribonucleotideos formam 2 hlices com 2 periodicidades (0,34 e 3,4nm) ao longo do eixo.

Erwin Chargaff Born 1905 Died 2002

Experimentos de Chargaff: Purinas (A G) = Pirimidinas (C T) A=TeC G

Pareamento de bases

Purina-Purina: volumoso Purimidina-Pirimidina: estreito Purina - Pirimidina: condizia com os dados de difrac~ao raio X

Resultados de Chargaff: propores de A=T, C=G

Adenina-Timina (2 pontes H)

Guanina-Citosina (3 pontes H)

Duas fitas de DNA com polaridades opostas (antiparalelas)

Face interna: bases nitrogenadas

Face externa: riboses e fosfato (carter negativo)

Dupla fita mantida por pontes de H entre as bases

Estrutura 3D da molcula de DNA proposta por Watson, Crick e Wilkins (1953)

ESTABILIDADE DUPLA HLICE

PONTES DE H E EMPILHAMENTO ENTRE BASES

Outras formas de DNA: in vitro

Fosfatos
Sulco menor

Bases

Sulco maior

3.4/0.34 10 nt por volta

Sulco maior

Sulco menor

Hlice dextrgira: giro p/ direita

Condies desidratadas + compacto

Condies normais

Rico em GC Hipermetilado

ALGUMA COISA ERRADA COM ESTA FOTO?

sciencewriter.org/images/righthanded.jpg

ESTA A FOTO CORRETA

right-handed double helix

left-handed double helix

10

REPLICAO DO DNA

O CICLO CELULAR E A REPLICAO DO DNA EM EUCARIOTOS

Como acontece em procariotos?

11

CARACTERSTICAS UNIVERSAIS DO MECANISMO DE REPLICAO DE DNA:

SEMI-CONSERVATIVO BIDIRECIONAL SEMI-DESCONTNUO

MESELSON-STAHL (1958) Modelo de replicao semi-conservativo

12

DEMONSTRAO DA BIDIRECIONALIDADE DO PROCESSO DE REPLICAO DO DNA A PARTIR DA ORIGEM DO SV40

A BOLHA E AS FORQUILHAS DE REPLICAO DO DNA

PROCARIOTOS EUCARIOTOS

Genoma pequeno e circular nica origem de replicao biderecional

Genoma grande e linear Mltiplas origem de replicao biderecional

13

Como so classificadas as enzimas envolvidas na sntese de DNA, chamadas DNA-polimerases?

TIPOS DE DNA POLIMERASES E SUAS RESPECTIVAS FUNES

DNA POLIMERASE DNA-DEPENDENTE
Envolvida em replicao, reparo e recombinao do DNA. Catalisa a adio de um desoxiribonucleotdeo ao terminal 3 de uma cadeia preexistente, utilizando uma cadeia de DNA complementar como molde . Portanto, depende de uma fita molde e de um primer.

DNA POLIMERASE RNA-DEPENDENTE Transcriptase reversa

Envolvida na replicao de retrovrus. Descoberta por Temein e Baltimore, em 1970. No apresenta atividade exonuclease 3-5. Alm da atividade DNA polimerase RNA dependente, apresenta tambm as atividades RNAse H e DNA polimerase DNA-dependente. Catalisa a adio de desoxiribonucleotdeos ao terminal 3 de uma cadeia de DNA preexistente, utilizando uma cadeia de RNA complementar como molde e um primer exgeno especfico. Num estgio seguinte, a fita hbrida DNADNA RNA convertida em DNA-DNA, por ao das atividades RNAse H e DNA polimerase DNAdependente. Portanto, depende de uma fita molde e de um primer.

Telomerase
Envolvida na manuteno do tamanho dos telmeros. Catalisa a adio de um desoxi-ribonucleotdeo ao terminal 3 de uma cadeia pr existente, utilizando uma seqncia de RNA complementar interna (grupo prosttico) como molde. Portanto, depende apenas de uma fita molde de DNA. Enzima encontrada em clulas germinativas de eucariotos.

14

PIADA DE BIOLOGISTA MOLECULAR

CARACTERSTICAS DAS DNA POLIMERASES (parte 1)

1. No so capazes de iniciar sntese de novo. Precisam de 3 OH livre fornecido pelo iniciador (primer)

2. Necessidades de ons de Mg2+ 3. Acrescentam nucleotdeos fita recm sintetizada obedece do pareamento obedecendo o pa ea e to de bases com a fita molde.

15

CARACTERSTICAS DAS DNA-POLIMERASES (parte 2)

4. Remoo de nucleotdeos: atividade exonuclease (5 3) replicao, reparo de mutaes atividade exonuclease (3 5) reviso ( ) Enzima fi l com E i fiel frequncia de erro de ~ 10-5 a 10-6

REAO CATALISADA PELA DNA POLIMERASE

PIROPHOSPHATASE

Figure 5-4 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

16

A REPLICAO DO DNA EM PROCARIOTOS

17

ETAPAS DA REPLICAO DO DNA EM PROCARIOTOS:

INCIO
ALONGAMENTO TRMINO

O SITIO DE INICIO DE REPLICAO DO DNA, DENOMINADO ORIGEM DE REPLICAO (ori-C).

(APRESENTA SEQUENCIAS CONSENSO ESPECFICAS)

18

FORMAO DO COMPLEXO DE INICIAO DA REPLICAO

19

DESNATURAO DO DNA E SNTESE DE UMA SEQUNCIA INICIADORA DE RNA

ETAPAS DA REPLICAO DO DNA EM PROCARIOTOS: PROCARIOTOS

INCIO

ALONGAMENTO
TRMINO

20

FORQUILHAS DE REPLICAO:
3` 3` 3` 5` 5` 3`

FITA CONTNUA FITA DESCONTNUA

5` 5`

5 3
3` 3` 3` 3`

ETAPAS DA REPLICAO DO DNA EM PROCARIOTOS: PROCARIOTOS

INCIO ALONGAMENTO

TRMINO

21

SEQUNCIAS TERMINADORAS DA REPLICAO DO DNA

RESOLUO DOS CONCATMEROS DE DNA

22