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E.T.E.C.A.P.

Escola Tcnica Estadual Conselheiro Antnio


Prado
Fluorimetria
2005
Prof. Marcos
Fluorimetria
3TC
Anderson de Jesus Bonon N02
Franciana de Cssia Padela N09
Gisele Roberto de Oliveira N10
2
Liliane Samara Ferreira Leite N15
SUMRIO
INTRODUO
A fluorescncia causada pela absoro de radiao e a re-emisso de uma
parte da energia em forma de luz visvel. A luz emitida quase sempre do comprimento de
onda mais alto do que foi absorvido. Na verdadeira fluorescncia a absoro e emisso levam
um curto mais mensurvel tempo
1
; na ordem de 10
-12
10
-9
segundos. Se a luz emitida com
tempo superior a 10
-8
segundos
2
o fenmeno ento ser a fosforescncia
3
. Essa demora pode
variar entre uma frao de segundos e varias semanas. Ento a diferena entre os dois
fenmenos pode ser considerada como um de grau. Ambos os fenmenos podem ser
designados por Luminescncia
4
; o posterior ento o termo geral aplicado ao processo de
absoro e emisso de energia luminosa
5
.
3
Conceitos Fluorimtricos
A fluorescncia
6
causada pela absoro
7
de energia radiante e reemisso, de uma parte
desta, sob a forma de radiao visvel
8
.
Na maioria dos casos a luz emitida tem comprimento de onda maior do que a
absorvida, seguindo a lei de Stokes
9
. Quando a fluorescncia
6
ocorre na mesma freqncia
que a radiao absorvida, conhecida como radiao de ressonncia ou fluorescncia de
ressonncia
10
.
Na fluorescncia
6
, a absoro
7
e a emisso ocorrem em um tempo muito curto, porm
mensurvel, da ordem de 10
-12
a 10
-9
segundos. Se ocorre um retardamento (mais que 10
-8
segundos) o fenmeno conhecido como fosforescncia
11
.
4
As caractersticas dos espectros de fluorescncia
6
podem ser racionalizadas pela
considerao dos orbitais moleculares.
O princpio de excluso de Pauli
12
diz que quaisquer dois eltrons em um tomo no
podem ter os mesmos valores dos quatro nmeros qunticos. Essa restrio limita a
quantidade de dois eltrons por orbital, tendo estados de spin
13
opostos. Quando isso ocorre
diz-se que os spins
13
esto emparelhados. Desse modo, a maioria das molculas
diamagntica
14
. Os radicais livres, que contm eltrons desemparelhados
15
, tm momento
magntico e conseqentemente so atrados por um campo eletromagntico, sendo
paramagnticos
16
, o contrrio das molculas que no so atradas e nem repelidas por campos
magnticos estticos.
Um estado eletrnico molecular em que todos os spins
13
eletrnicos esto
emparelhados chamado estado singlete
17
e nenhuma separao de nveis de energia ocorre
quando a molcula exposta a um campo magntico. O estado fundamental para um radical
livre, por outro lado, o estado dublete
18
, porque o eltron isolado pode ter duas orientaes
em um campo magntico, o que d energias diferentes ao sistema. Quando um eltron de um
par em uma molcula excitado
19
a um nvel mais alto de energia, forma-se um estado
singlete
17
ou um triplete
20
, onde os spins
13
dos dois eltrons ficam desemparelhados
15
e so,
desta forma paralelos. O estado excitado triplete
20
tem energia menor que o estado singlete
17
correspondente. Esses estados podem ser representados pela figura
21
a seguir, onde as setas
representam as direes de spins
13
.
As propriedades de uma molcula no estado excitado triplete
20
diferem muito
daquelas do estado excitado singlete
17
.
A transio singlete/triplete
22
(ou o oposto) menos provvel que a transio
singlete/singlete
23
correspondente. Como conseqncia, o tempo de vida mdio de um estado
excitado triplete
20
pode variar de 10
-4
a vrios segundos, em comparao ao tempo de vida
mdio de 10
-5
a 10
-8
segundos para um estado singlete
17
.
A excitao induzida por radiao de uma molcula no estado fundamental
24
a um
estado excitado triplete
20
tem pouca probabilidade de ocorrer e os picos de absoro
decorrentes desses processos so ordens de magnitude menores que as transies
singlete/singlete
23
anlogas.
A figura
25
a seguir mostra um diagrama parcial de nveis de energia de uma molcula
fotoluminescente comum.
5
A linha horizontal grossa mais inferior representa a energia do estado fundamental
24
da molcula (S
0
), que normalmente um estado singlete
17
. Esse estado representa as energias
de essencialmente todas as molculas em uma soluo temperatura ambiente.
As linhas grossas superiores so os nveis de energia para os estados vibracionais de
trs estados eletrnicos excitados
26
. As duas linhas a esquerda representam o primeiro (S
1
) e o
segundo (S
2
) estados eletrnicos excitados
26
singletes
17
. A da direita (T
1
) representa a energia
do primeiro estado eletrnico triplete
20
, que menor que a energia do estado singlete
17
correspondente.
Muitos nveis de energia vibracionais
27
esto ligados a cada um dos quatro estados
eletrnicos, o que so demonstrados pelas linhas horizontais mais finas.
A excitao
19
da molcula, representada na figura
25
pode ser conseguida pela
absoro
7
de duas bandas de radiao, uma entre o comprimento de onda
1
(S
0
S
1
)
28
e a
segunda no comprimento de onda menor
2
(S
0
S
2
)
29
.
O tipo de fotoluminescncia
30
mais usado hoje em dia em qumica analtica a
fluorimetria
31
, que se distingue das demais pelo fato de a molcula excitada retornar ao estado
fundamental
24
imediatamente aps a excitao
19
. Quando uma molcula absorve um fton
32
de radiao ultravioleta, ela sofre uma transio a um estado eletrnico excitado
33
e um de
seus eltrons promovido para um orbital de energia mais alta.
A estrutura molecular, assim como o ambiente qumico, influencia a ocorrncia ou
no da luminescncia
34
de uma molcula. Esses fatores
35
tambm determinam a intensidade
da emisso, quando esta ocorre. As variveis que afetam a fluorescncia
6
e a fosforescncia
11
esto a seguir.
Rendimento quntico ou eficincia quntica
36
:
6
a razo do nmero de molculas que luminescem pelo nmero total de molculas
excitadas. Quanto mais fluorescente uma espcie qumica for, maior ser o rendimento
quntico
36
, que poder se aproximar da unidade. Espcies qumicas que no fluorescem
apreciavelmente tm um rendimento quntico
36
que se aproxima do zero.
Para que uma molcula emitir radiao por fluorescncia
6
, ela deve ser primeiro
capaz de absorver
7
radiao. Nem todas as molculas que absorvem no ultravioleta ou no
visvel
8
so fluorescentes e til quantificar a fluorescncia
6
de uma dada molcula.
Alguns conceitos so necessrios para que se possa obter o rendimento quntico
36
de
uma espcie qumica. So eles:
Velocidades de absoro e emisso
37
: Na fluorescncia
6
o tempo de vida do estado
excitado est inversamente relacionado absortividade molar do pico de absoro
correspondente ao processo de excitao. Assim, para absortividades molares no intervalo de
10
3
a 10
5
, os tempos de vida dos estados excitados so de 10
-7
a 10
-9
segundos. Em sistemas
onde a absoro
7
fraca a probabilidade de transio menor e os tempos de vida podem ser
longos como 10
-6
a 10
-5
segundos.
Processos de desativao
38
: Uma molcula excitada pode voltar ao seu estado
fundamental
24
por uma combinao de vrias etapas mecansticas. A fluorescncia
6
envolve a
emisso de um fton de radiao. Ocorrem tambm outras etapas de desativao
38
que so
processos no reativos. Se a desativao
38
por fluorescncia
6
rpida em relao aos
processos sem radiao, tal emisso observada, mas se a trajetria no radiativa tem uma
constante de velocidade mais favorvel, ou no h fluorescncia
6
ou pouco intensa.
Entre os processos de desativao
38
sem a emisso de radiao est a relaxao
vibracional
39
. Ela ainda pode resultar no fenmeno da pr-dissociao
40
, onde a molcula vai
de um nvel eletrnico superior para um nvel vibracional superior de um estado eletrnico
mais baixo, no qual a energia vibracional grande o suficiente para a ruptura de uma ligao.
Ocorre geralmente em molculas grandes, pois estas apresentam maior possibilidade de
existncia de ligaes mais fracas. Na dissociao
41
a energia absorvida excita um
cromforo
42
diretamente a um nvel vibracional
27
alto o suficiente para causar uma ruptura de
ligaes cromofrica. Os processos de dissociao
41
competem com a fluorescncia
6
.
Converso interna
42
o termo que descreve processos intermoleculares pelos quais uma
molcula passa para um estado eletrnico de energia menor sem emisso de radiao. Esses
processos no so bem compreendidos, mais evidente que so altamente eficientes, porque
poucos compostos exibem fluorescncia
6
devido a maior probabilidade da converso interna
42
ocorrer.
Converso externa
43
a desativao de um estado eletrnico excitado
19
envolvendo
interao e transferncia de energia entre a molcula excitada e o solvente ou outros solutos.
A converso externa inclui o efeito exercido pelo solvente sobre a intensidade de
fluorescncia
6
. Condies que tendem a reduzir o nmero de colises entre partculas (baixa
temperatura e alta viscosidade) geralmente aumentam a fluorescncia
6
.
As transies no-radioativas para o estado fundamental a partir dos estados excitados
singlete
17
e triplete
20
mais baixos provavelmente envolvem converses internas e externas
36
.
Uma molcula pode ser levada a qualquer um dos nveis vibracionais
27
durante o
processo de excitao
21
eletrnica. Porm, quando em soluo, a energia vibracional em
excesso perdida imediatamente, como conseqncia de colises entre as molculas da
espcie excitada
21
e as do solvente. O resultado uma transferncia de energia e um aumento
minsculo da temperatura do solvente.
7
A fluorescncia
6
de uma soluo ocorre a quando h uma transio a partir do nvel
vibracional
27
mais baixo de um estado eletrnico excitado. Essa transio denominada
relaxao vibracional
44
.
Cruzamento intersistemas
45
: o processo no qual o spin
13
de um eltron excitado
21

invertido resultando uma mudana na multiplicidade da molcula. Como na converso
interna
42
, ele ocorre quando existe a superposio dos nveis de energia vibracionais. O
cruzamento intersistemas
45
mais comum em molculas que contm tomos pesados. As
interaes spin-rbita se tornam maiores na presena de tais tomos, que fazem com que uma
mudana de spin
13
seja mais favorvel. A presena de espcies paragnticas
16
, tal como
oxignio molecular, na soluo tambm facilita o cruzamento intersistema
45
e um
conseqente decrscimo na fluorescncia
6
.
Fosforescncia
46
: ocorre quando depois do cruzamento intersistemas
45
para um
estado triplete
20
acontece uma desativao subseqente por converso interna
42
ou externa
43
,
ou fosforescncia
11
. A emisso a partir de tal transio
38
pode persistir por algum tempo aps
a irradiao ter sido interrompida. Esse tipo de emisso comumente observado apenas a
baixas temperaturas, em meios altamente viscosos, ou em molculas que esto absorvidas em
superfcies slidas.
Com base na teoria sobre os processos de desativao
38
, pode-se concluir que o
rendimento quntico
36
de fluorescncia
6
de um composto determinado pelas constantes
de velocidades relativas
37
k
x
dos processos pelos quais o estado excitado singlete
17
mais baixo
desativado
38
a saber a fluorescncia
6
(k
f
), cruzamento intersistema
45
(k
i
), converso
externa
43
(k
ce
), converso interna
42
(k
ci
), pr-dissociao
40
(k
pd
) e dissociao
41
(k
d
). Pode-se
expressar essas relaes pela equao
47
:
d pd ci ce i f
f
K K K K K K
K
+ + + + +

Essa equao
47
permite uma interpretao qualitativa de muitos dos fatores estruturais
e ambientais que influenciam a intensidade da fluorescncia
6
. As variveis que conduzem a
valores altos da constante de velocidade de fluorescncia
6
k
f
e valores baixos para os outros
termos em k aumentam a fluorescncia
6
.
A constante de velocidade de pr-dissociao
42
k
pd
e a constante de velocidade de
dissociao
41
k
d
so dependentes principalmente da estrutura qumica. As demais constantes
so mais influenciadas pelo ambiente.
Tipos de transies
16
na fluorescncia
6
:
Normalmente, uma molcula excitada
21
eletronicamente volta ao seu estado excitado
mais baixo por uma srie de relaxaes vibracionais
44
rpidas e converses internas
42
que no
produzem emisso de radiao. Assim, a fluorescncia
6
, comumente se origina de uma
transio do nvel vibracional
27
mais baixo do primeiro estado eletrnico excitado
19
para um
dos nveis vibracionais do estado eletrnico fundamental
24
. Para a maior parte dos compostos
fluorescentes, ento, a radiao produzida pelas transies
27
: n*
48
, em que um eltron
de um orbital no-ligante promovido a um orbital antiligante; e transio *
49
, em
que um eltron de um orbital ligante promovido a um orbital antiligante.
A excitao do tipo *
49
provoca fluorescncia
6
significativa. A excitao do tipo
n *
48
produz fluorescncia
6
pouco intensa. As transies eletrnicas de bandas de
transferncia de cargas tambm provocam fluorescncia
6
intensa.
8
Eficincia quntica
36
e tipo de transio
16
:
A fluorescncia
6
est mais comumente associada a transies *
49
, porque
apresentam tempos de vida mdio menores e porque os processos de desativao
38
que
competem com a fluorescncia
6
so de ocorrncia menos provvel.
Fluorescncia e estrutura
52
:
A fluorescncia
6
mais intensa e mais til encontrada em grupos funcionais
aromticos com nveis de transio
28
*
49
de baixa energia. Compostos contendo
estruturas alifticas, alicclicas carbonlicas ou estruturas de ligaes duplas altamente
conjugadas tambm podem apresentar fluorescncia
6
, mas em menor nmero se comparado
ao dos sistemas aromticos.
A maioria dos hidrocarbonetos aromticos no-substitudos fluoresce em soluo e a
eficincia quntica
36
aumenta com o nmero de anis e seu grau de condensao. Os
heterocclicos simples como a pirina, furano, tiofeno e pirrol no apresentam fluorescncia
6
;
por outro lado, estruturas com anis condensados apresentam. Acredita-se que, em compostos
heterocclicos nitrogenados, a transio eletrnica de nvel mais baixo seja um processo n
*
48
que rapidamente se converte em um estado triplete
21
e previne a fluorescncia
6
. A
condensao de anis benznicos a ncleos heterocclicos, no entanto, resulta em um
aumento da absortividade molar
51
do pico de absoro
21
. O tempo de vida de um estado
excitado
19
menor em tais estruturas; a fluorescncia
6
ento observada em compostos como
a quinolina, isoquinolina e indol.
A substituio do anel benznico causa deslocamentos nos comprimentos de onda dos
mximos de absoro
21
e mudanas correspondentes nos picos de fluorescncia
6
.
Adicionalmente, a substituio afeta, com freqncia, a eficincia de fluorescncia
6
.
A influncia de substituio por halognios ocasiona no decrscimo na fluorescncia
6
.
Acredita-se que a pr-dissociao
40
tenha um papel importante em iodobenzeno e
nitroderivados , pois esses compostos tm ligaes de fcil ruptura que podem absorver a
energia de excitao
19
em seguida converso interna
42
.
A substituio de um grupo carboxlico ou carbonlico em um anel aromtico
geralmente inibe a fluorescncia
6
.
9
Efeito da rigidez estrutural
53
:
Sabe-se empiricamente que a fluorescncia
6
favorecida em molculas que possuem
estruturas rgidas. A influncia da rigidez tem sido utilizada para explicar o aumento na
fluorescncia
6
de determinados agentes quelantes orgnicos quando eles esto complexados
com um on metlico.
Uma parte de uma molcula no-rgida pode executar vibraes de freqncia baixa
em relao s outras partes. Esses movimentos resultam na perda de energia.
A falta de rigidez em uma molcula resulta, provavelmente, um aumento na constante
de converso interna
42
.
Efeitos do solvente e da temperatura
54
:
Quando ocorre o aumento da temperatura das molculas aumenta tambm a
freqncia das colises e a probabilidade de desativao por converso externa
43
. O mesmo
acontece com a diminuio da viscosidade do solvente.
A fluorescncia
6
de uma molcula diminuda por solventes contendo tomos
pesados ou outros solutos com tais tomos em suas estruturas. Interaes spin-rbita causam
um aumento na velocidade da formao de triplete
17
e um correspondente decrscimo na
fluorescncia
6
.
Efeito do pH na fluorescncia
55
:
Em um composto aromtico com substituintes cidos ou bsicos no anel tem a sua
fluorescncia dependente do pH. Tanto o comprimento de onda como a intensidade de
emisso possivelmente sero diferentes para as formas ionizada e no-ionizada do composto.
As mudanas na emisso ocorrem devido ao surgimento de diferentes espcies
ressonantes associadas s formas bsica e cida das molculas.
Atravs da variao em fluorescncia de certos compostos em funo do pH pode-se
realizar titulaes cido/base com a deteco do ponto final atravs destes. Por exemplo
56
, a
fluorescncia
6
da forma fenlica do cido 1-naftol-4-sulfnico no detectvel visualmente,
porque ocorre na regio ultravioleta. Mas, quando acontece a converso do cido para on
10
fenolato por adio de base o pico de emisso se desloca para comprimentos de onda no
visvel, onde a fluorescncia
6
pode ser notada facilmente. Utilizando-se a constante de
dissociao cida do composto seria previsto o pH no qual ocorre a variao, porm no
isso que acontece devido a diferena entre a dissociao cido na molcula excitada e da
mesma espcie no estado fundamental.
Variaes nas constantes de dissociao bsica ou cida so grandes e comuns. Por
isso, na anlise fluorimtrica o controle rigoroso do pH indispensvel.
Efeito do oxignio dissolvido
57
:
A reduo da intensidade de emisso de fluorescncia
6
de uma soluo ocasionada
pela presena de oxignio dissolvido que oxida a espcie fluorescente. Essa oxidao
induzida fotoquimicamente.
Porm, reduo da intensidade de emisso de fluorescncia ocorre com maior
freqncia devido as propriedades paramagnticas
16
do oxignio molecular, que como outras
espcies tambm paramagnticas
16
, promove cruzamento intersistema e converso das
molculas excitadas ao estado triplete
20
.
Efeito da concentrao na intensidade de fluorescncia
58
:
A potncia de emisso de fluorescncia
6
F proporcional potencia radiante do feixe
de excitao que absorvido pelo sistema. Ento, tem-se a equao: F = K(P
0
-P)
59
, onde P
0
a potncia do feixe que incide na soluo e P a potncia aps atravessar uma distncia b
do meio. A constante K` depende da eficincia quntica
36
do processo de fluorescncia
6
.
Para se relacionar F com a concentrao da espcie fluorescente c, escreve-se a lei de
Beer
60
na forma
bc
P
P

10
0
, onde a absortividade molar das molculas
fluorescentes
6
e bc
60
a absorbncia
61
A. Ento, podemos obter a seguinte equao: F = K
P
0
(1- 10
-

bc
)
62
, que pode ser expandida em srie de Maclarium
63
:
1
]
1

+
! 3
... ) 303 , 2 (
! 2
) 303 , 2 (
303 , 2
2 2
0
bc bc
bc P k F

Uma vez que 2,303 bc = A < 0,05


64
, todos os termos subseqentes entre parnteses
so pequenos em relao ao primeiro. Nestas condies, o erro relativo mximo ao se
desprezar estes termos, exceto o primeiro, 0,13%
65
. Assim, podemos escrever:
F = 2,3 KbcP
0
66
, ou, com P
0
constante: F = Kc
67
.
Ento, o grfico da potncia de fluorescncia
6
de uma soluo em funo da
concentrao da espcie emissora deveria ser linear para concentraes baixas. Quando c se
torna grande o suficiente para que a absorbncia
61
seja maior que 0,05
68
, a linearidade
perdida, com F se situando abaixo da extrapolao da parte linear.
A auto-supresso
69
e auto-absoro
70
tambm so responsveis por desvios negativos
da linearidade em concentraes altas. Na primeira ocorre uma transferncia de energia no-
radioativa, assim como na converso externa
43
, pelas colises de molculas excitadas. Ela
aumenta de acordo com a concentrao
71
.
11
A auto-absoro
70
acontece quando um comprimento de onda de emisso se superpe
a um pico de absoro.A fluorescncia
6
diminui medida que a emisso atravessa a soluo
reabsorvido por outras molculas fluorescentes.
12
Princpios bsicos de Raios-X e
Fluorescncia de Raios-X

1. Radiao
Energia na forma de ondas ou partculas, que se propagam desde a sua origem
atravs do espao, em linhas retas divergentes (partculas carregadas podem ser
defletidas de sua trajetria por campos eltricos e/ou magnticos).
71
2. Raios-x
Raios-X so radiaes eletromagnticas de comprimento de onda () entre 0,1
a 100 (1 = 10
-10
m)
72
, produzidas pela desacelerao de eltrons de alta energia
e/ou transies de eltrons nas rbitas mais internas dos tomos.
A regio espectral de interesse na espectrometria de florescncia de raios-X
de 0,1 (UK

) a 20 (FK

) ou 133 (BeK

)
73
.
3. Propriedades dos Raios-x
Os raios-X apresentam as seguintes propriedades
74
:
Propagam-se com a velocidade da luz.
Propagam-se sem transferncia de massa.
Propagam-se em linha reta
No so afetados por campos magnticos ou eltricos.
So invisveis e no detectveis pelos sentidos humanos.
Sofrem absoro diferencial pela matria.
Sofrem difrao pelos cristais.
Sofrem reflexo, refrao e polarizao.
Alteram propriedades eltricas de gases, lquidos e slidos.
Ionizam gases.
Induzem a fotlise e outros efeitos qumicos da matria.
Impressionam chapas fotogrficas.
Produzem luminescncia visvel e ultravioleta em certos tipos de materiais.
Matam, danificam e/ou causam mudanas genticas em tecidos biolgicos.
Interagindo com a matria podem produzir fotoeltrons, eltrons Auger e eltrons de
Comton-recuo.
Produzem espectros com linhas caractersticas de raios-X quando interagem com a
matria (base as espectrometria de fluorescncia de raios-X).
13
4. Unidades de Medida de Raios-x
A espectrometria de fluorescncia de Raios-X relaciona quatro grandezas
fsicas para medir os raios-X:
Freqncia ().
Comprimento de ondas ().
Energia dos ftons (E).
Intensidade dos ftons (I).
4.1. Unidades de Medida de Raios-x
expressa em vibraes por segundo (S
-1
) ou em Hertzs (Hz):
1 Hz = 1 S
-1 75
4.2. Comprimento de Onda
Pode ser expresso em centmetros (cm), metros (m), Angstron () ou
nanmetros (nm), sendo a unidade Angstrons a mais usada.
1 = 0,1 nm = 10
-10
m = 10
-8
cm
75
A relao entre a unidade de comprimento de onda e freqncia :
(S
-1
) =
) (cm
C

Onde C a velocidade da luz


77
.
4.3. Energia
A energia de um fton de raios X (E) em erg dada por:
E (erg) = h . =
) (
.
cm
C h

Onde h a constante de Planck


78
.
4.4. Intensidade
A intensidade de um feixe de raios X definida, fisicamente, em termos de
energia por unidade de tempo (ergs.cm
-2
.s)
79
. na espectrometria de fluorescncia de
14
raios X, a intensidade definida em termos de constantes por unidades de tempo, isto
numero de ftons por unidade de rea por unidade de tempo.
5. Emisso de Espectro de Raios-x
Os raios X podem ser produzidos, mais comumente, por meio do
bombardeamento dos materias com eltrons, raios gama ou mesmo por raios X
produzidos por um tubo de raios
80
.
Dois tipos de distintos de espectros de raios X podem ser observados:
Espectro contnuo.
Espectro de linhas caractersticas.
6. Espectro contnuo
O espectro contnuo, tambm conhecido como espectro geral ou de
Bremsstralung, caracterizado por quatro aspectos:
Faixa continua de comprimento de onda (similar a luz branca).

0
limite brusco do lado de menor comprimento de onda.
Intensidade mxima ocorre aproximadamente em max 1,5
0
81
Diminuio gradativa na intensidade para comprimento de onda maiores.
Exemplo de espectro contnuo de raos-X
O espectro contnuo aparece quando eltrons de alta energia (velocidade)
sofrem desacelerao ao se chocarem com os tomos do anodo do tubo de raios-X
(colises inelsticas). Um eltron pode sofrer uma srie de colises at finalmente
perder toda a sua energia
82
.
O espectro contnuo no pode ser formado por excitao secundaria, ou seja,
por radiao florescente, portanto ele formado apenas pela radiao primria
proveniente do tubo de raios X.
15
A distribuio de energia do espectro continuo dada pela relao de
Kramer
83
:
I () i Z
2
0
1 1 1

,
_

Onde i a corrente aplicada ao tubo de raios X e Z o numero atmico do


material do anodo do tubo de raios X.
O comprimento de onda mnimo (
0
) corresponde a energia mxima qus os
eltrons esto submetidos, ou seja, a tenso mxima que o tubo de raios X est sendo
operado.
O comprimento de onda mximo obtido pela diferenciao da relao de
Kramer
84
:
0
d
dI
O espectro contnuo de raios X e do material do anodo do tubo de raios X.
quando a tenso do tubo aumenta, os comprimentos de onda mnimos diminuem e a
intensidade dos raios X aumenta.
A intensidade dos raios X do espectro continuo, proporcional corrente
aplicada ao tubo de raios X.
6.1. Tubo de Raios X
A estrutura bsica de um tubo de raios X um tubo de vcuo, que consiste de
um filamento como ctodo, gerando termo-eletrons e do anodo (alvo), geralmente de
Rdio, que gera os raios X pela interceptao de eltrons acelerados por meio de um
potencial positivo. Prximo ao alvo h uma janela que permite a passagem dos raios
X para o exterior do tubo
84
.
O berlio utilizado como material da janela, pois um excelente transmissor
de raios X.
Existem dois tipos de tubos de raios X
85
:
Janela frontal ou de fundo
Janela lateral
16
Exemplos de tubos de raios X
O espectrofotmetro de fluorescncia de raios X que utiliza o tubo de janela
frontal, necessita de um sistema de circulao de gua fechado, com gua deionizada,
devido ao aterramento do catodo. O tubo de janela lateral possui aterramento no
anodo, portanto pode ser utilizada gua comum de abastecimento, para a sua
refrigerao
86
.
A eficincia de gerao de raios X (), definida pela seguinte relao:
= 1,1 .10
-9
. Z . V
Onde Z o numero atmico do material do anodo e V a tenso do tubo de
raios X
87
.
A razo entre a intensidade de vrios tubos de raios X com a do tubo padro
com anodo de W mostrada na figura a seguir
88
:
17
Razo entre a intensidade de Vrios tubos de raios X com a do tubo padro com anodo de W
O tubo de Rh com janela frontal, muito sensvel para elementos de numero
atmico menores que o S
16
, apresentando tambm, boa sensibilidade para os
elementos pesados. A vantagem do uso deste tubo que ele pode fazer medidas de
elementos pesados e leves sem necessidade de trocar o tubo de raios X e a freqncia
de utilizao deste tubo grande para a analises de controle de processo.
No caso dos tubos com janela lateral, alvos de W, Mo sero aplicados para
analise de elementos pesados e alvos de Cr para analise de elementos leves.
Tubos com alvo de Mo so especialmente aplicados para analises de
elementos poluentes ambientais (Hg, Pb, As e outros)
89
.
7. Espectro de Linhas Caractersticas de Raios X
O espectro de linhas caractersticas de raios X consiste de uma serie de
comprimentos de onda discretos caractersticas do elemento emitido
90
.
18
Espectro Contnuo e de linhas caractersticas para os tubos de raios X de W, Cr e Rh.
Quando um fton de raios X energtico interage com um tomo, muitos
fenmenos podem ocorrer. Uma interao envolve a transferncia da energia do fton
para um eltron desse tomo (camada K ou L), resultando na sua ejeo. Em curto
espao de tempo as transies eletrnicas internas podem produzir as radiaes
fluorescentes
91
.
Incidncia de um Raio X em um tomo.
Essas transies eletrnicas, obedecem critrios de seleo de acordo com a
teoria atmica quntica
92
.
19
8. Configuraes eletrnicas para os Elementos Qumicos
Nmero quntico principal n
Indica a posio do nvel energtico em relao ao ncleo atmico. Equivalente a
caracterizar a distancia media que o eltron ocupa em relao ao ncleo
93
:
n = 1 camada K
n = 2 camada L
n = 3 camada M
Nmero quntico secundrio ou azimutal - I
Representa a forma da nuvem eletrnica e varia de 0 a (n-1)
94
n = 1 I = 0 s
n = 2 I = 0 s
I = 1 p
n = 3 I = 0 s
I = 1 p
I = 2 d
Numero quntico magntico m
Est relacionado com a orientao da nuvem eletrnica no espao e varia de
-1...0...+1
95
.
n = 2 I = 0 m = 0
I = 1 m = 1
m = -1
Numero quntico Spin s
Representa o sentido do campo magntico do eltron, apresentando os valores
96
:
S = +1/2 e S = -1/2
Numero quntico interno j
Representa o momento angular total
97
:
j = I + s
fornecendo os nveis de transies em que os eltrons podem ser transferidos.
20
9. Potenciais de Excitao
Para que um eltron seja retirado de uma camada eletrnica, o fton incidente deve
ter energia maior ou igual que liga esse eltron ao ncleo
98
.
10.Linhas Caractersticas e as regras de seleo
Para que uma transio eletrnica ocorra, dando origem a uma linha caracterstica,
necessrio que sejam obedecidas as trs regras de seleo
99
:
n 0 I = t 1 j = t 1 ou 0
Por conveno (Siegbahn), as varias series do espectro de raios X possuem as
seguintes notaes:
As linhas so escritas com letras maisculas indicando o nvel final da transio
envolvida.
As letras maisculas so seguidas de letras gregas minsculas, subscrita e seguidas de
nmeros.
Cada linha caracterstica pode ser representada pela diferena entre as energias de
ligao inicial e final dos nveis de energia envolvidos na transio.
11.Excitao do espectro de linhas caracterstico
O espectro de linhas caractersticas pode ter suas excitaes por meio de
100
:
Bombardeamento por eltrons, prtons, deutrios, partculas alfa e ons pesados.
Irradiao por raios X primrios obtidos por meios de tubos de raios X.
Irradiao por alfa, beta gama ou raios X emitidos por istopos radioativos.
Irradiao por raios X secundrios de um radioistopo.
Auto excitao por radioistopos adicionados ou gerados na amostra.
12.Espalhamento Coerente
O espalhamento coerente, tambm conhecido como no modificado, elstico ou
Rayleigh tem o fton de raios X defletido sem perda de energia, isto , sem aumentar o
comprimento de onda.
21
Na disperso coerente, os raios X incidentes induzem os eltrons, na matria
irradiada, a oscilarem na mesma freqncia dos raios X. Os eltrons oscilando, emitem raios
X em todas as direes, novamente em uma mesma freqncia
101
.
Espalhamento dos raios X em todas as direes.
13.Espalhamento Incoerente
O espalhamento incoerente, tambm conhecido como modificado, inelstico ou
Compton tem o fton de raios X defletido com perda de energia e aumento no comprimento
de onda
102
.
O fton de raios X incidente colide com um eltron fracamente ligado com o impacto,
deixa o tomo levando uma parte da energia do fton, e a parte restante defletida com a
correspondente perda ou com um aumento de comprimento de onda.
O choque segue as leis de conservao de energia, tendo o eltron direo e
velocidade previstas e os raios X a mudana do comprimento de onda:
= 0,0243 ( 1- Cos )
103
onde o ngulo de espalhamento e no dependente do comprimento de onda
dois raios X e do numero atmico do material.
Tanto as linhas do espectro continuo do material alvo do tubo de raios X como as do
espectro de linhas caractersticas da amostra podem sofrer espalhamento.
O espalhamento incoerente muitas vezes indesejvel, por complicar o espectro e
causar interferncias espectrais, mas em muitos casos ele muito utilizado para corrigir o
efeito matriz de absoro intensificao
104
.
22
Espalhamento incoerente
14.Efeito Auger
Num tomo, alternativamente emisso de raios X, a energia pode ser libertada como
Auger e caracterstico para cada elemento qumico.
Pode-se supor que a transio de um eltron no nvel L para o K resulte na produo
de um fton K na forma usual. Entretanto neste caso, o fton no deixa o tomo de origem,
mas absorvido pelo prprio tomo com conseqente expulso de um eltron L ou M. nesse
processo, o tomo passa por uma dupla ionizao, tendo dois buracos, um deles criado pelo
inicial e o outro pelo processo Auger
105
.
Efeito Auger
O efeito Auger ocorre mais comumente em tomos de baixo numero atmico, devido
aos eltrons serem mais fracamente ligados e os ftons caractersticos mais facilmente
absorvidos
105
.
O efeito mais marcante para a srie L que para a K pela mesma razo e maior a
excitao.
23
Esse efeito produz as linhas satlites das linhas espectrais, tendo comprimento de
onda levemente diferente daquele originado da mesma transio eletrnica em um tomo
unicamente ionizado.
24
Equipamentos
Os instrumentos usados para medir a fluorescncia
6
so denominados fluormetros
106
ou Fluorofotmetros
107
. Eles se dividem em duas categorias, os fluormetros de filtros
108
e
espectrofluormetros
109
, empregando sistemas a bases de filtros ou monocromadores
110
,
respectivamente, para isolar a radiao excitadora
111
e a radiao fluorescente emitida.
Os fluormetros
106
podem ser construdos como modelos de feixe simples ou feixe
duplo, os seus componentes do pouco diferem dos usados na construo dos
absorcimetros
112
. As fontes empregadas so lmpada de arco de mrcurio
113
e de xennio
114
.
A lmpada de arco de mercrio
113
produz um intenso espectro de raias, j a lmpada de arco
de xennio
114
produz um espectro contnuo fraco de 230 a 320nm, substancial de 330 a
1000nm com mximo a 470nm e novamente fraco para comprimentos de ondas maiores at
2500nm.
A vantagem da lmpada de xennio
114
produzir um espectro contnuo com suficiente
intensidade para qualquer comprimento de onda em sua faixa de operao. O espectro
descontnuo da lmpada de mercrio, por sua vez, oferece intensidade muito altas nas faixas
centradas em torno das raias de emisso.
Fluormetro de filtro
3

Os fluormetros de filtros
108
so bastante utilizados na anlise quantitativa, como os
filtro deixam passar faixas de radiao bastante largas e permitem o uso de aberturas mais
largas, um fluormetros de filtros
108
capaz de maior sensibilidade do que um
espectroflumetro
109
. Os filtro utilizados se dividem em duas categorias, os filtros de vidro
115
,
que operam somente no visvel e ultravioleta prximo, e filtros de interferncia
116
, que
permitem operar mais alm no ultravioleta.
Em um fluormetros de filtros
108
de feixe simples a fonte uma lmpada de
mercrio
113
, a radiao de comprimento de onda apropriada para a excitao selecionada
com o auxilio de um primeiro filtro (primrio), situado entre a fonte e o recipiente contendo o
sistema fluorescente. A radiao fluorescente
117
isolada atravs de um segundo filtro
(secundrio) situado antes do fotodetector
118
; o filtro secundrio deve absorver qualquer
radiao primria refletida ou espalhada e transmitir a radiao fluorescente
117
, ento a
radiao fluorescente
117
depois de passar pelo filtro secundrio alcana o fotodetector
13
, que
nos instrumentos mais sensvel um tubo fotomultiplicador
120
. O sinal do fotodetector
119
,
depois de amplificado lido em um galvanmetro
121
ou outro dispositivo de medida da sada
da fotoclula
122
. O instrumento calibrado antes de cada anlise com referncia a uma
soluo padro com fluorescncia algo mais forte do que qualquer amostra analisar.
25
Em um fluormetro de filtro
108
de feixe duplo, h um interruptor rotatrio que obriga o
fixe de referncia provindo da fonte e o feixe florescente emitido pela amostra a alcanar
alternadamente a superfcie sensvel do tubo fotomultiplicador
120
. O sinal do detector
119
uma
corrente alternada, que pode ser facilmente amplificada.Uma ponte ptica
123
(semelhante a
uma ponte de Wheatstone para medir resistncia eltrica) detectar a diferencia entre o feixe
fluorescente e o feixe de referncia. A ponte levada em condio de equilbrio movendo o
dial linear de modo que as quantidades de luz do feixe de fluorescncia se igualem a do feixe
de referncia. A leitura sobre o dial linear d a potncia do feixe fluorescente.
Para que a ponte ptica possa ser ajustada com preciso, necessrio que se possa
alcanar o ponto zero de ambas as direes. No caso de uma soluo totalmente carente de
fluorescncia, e uma das fases no ocorre incidncia de luz sobre o detector e, ento, o ponto
zero somente poderia ser alcanado de uma direo. Para evitar que isso acontea, um feixe
auxiliar de potncia constante dirigido contra o detector em fase com o feixe fluorescente;
assim, sempre haver incidncia de alguma radiao sobre o detector
119
. O efeito do feixe
auxiliar na medida de fluorescncia corrigido colocando o dial linear em zero som o
solvente na clula; ento, ajusta-se o feixe de referncia por meio do boto do branco, que
opera o obturador, at ser indicado o zero ptico.
26
Espectrofluormetros
4

J os epectrofluormetros
109
possuem um sistema a base de dois monocromadores
110
,
um monocromador
110
faz a seleo de uma estreita faixa da radiao excitadora
111
e o outro
permite isolar uma estreita faixa da radiao fluorescente, em geral os epectrofluormetros
122
empregam monocromadores reticulares.
Os epectrofluormetros
121
podem ser utilizados na anlise quantitativa, mas so mais
importantes no estudo dos espectros de excitao
124
e emisso
125
das espcies fluorescentes;
os espectros servem para a identificao de numerosos compostos.
Para traar o espectro de excitao
124
, se fixa o monocromador
110
de emisso a um
apropriado comprimento de onda e mede-se a fluorescncia a pequenos inervados de
comprimentos de ondas variando o monocromador
110
de excitao. Para se obter o espectro
de emisso
125
o processo o contrrio, se fixa o monocromador
110
de excitao e mede-se a
fluorescncia a pequenos intervalos variando o monocromador
110
de emisso.
Os espectrofotmetros
125
podem ser utilizados para medir fluorescncia, para isso
basta adapt-lo com um equipamento acessrio, que consiste em uma fonte separada, (como
uma lmpada de mercrio
113
), um filtro para limitar a radiao excitadora
111
, um suporte para
a clula com a amostra e um sistema ptico para refletir a radiao fluorescente na fenda de
entrada do espectrofotmetro
126
27
28
Fluorescncia para o Diagnstico de
Displasias
A tcnica de espectroscopia de fluorescncia vem mostrando bons resultados na
diferenciao entre tecidos normais dos diversos tipos de cncer, e pode, em um futuro
prximo, se tornar uma importante ferramenta de diagnstico clnico. Uma das tcnicas que
vem ganhando fora como ferramenta para a anlise patolgica dos tecidos a
Espectroscopia de Fluorescncia Induzida por Laser (LIFS, Laser-Induced Fluorescence
Spectroscopy), que vem se mostrando bastante promissora na diferenciao entre tecidos
normais e patolgicos.
A identificao dos tecidos baseia-se na determinao das diferenas espectrais entre
os fluoroforos presentes nos tecidos normais e displsicos. Esta tcnica vem sendo usada
como ferramenta de diagnstico de aterosclerose, displasias no clon, cncer no esfago,
alguns tipos de cncer do pulmo e bexiga. A tcnica de espectroscopia de fluorescncia, que
vem sendo denominada de "bipsia ptica", apresenta grande interesse por parte dos
cientistas e mdicos devido ao fato de que a fluorescncia pode ser gerada e coletada
remotamente por meio de fibras pticas. Desta maneira, cateteres baseados em fibras pticas
podem ser facilmente introduzidos em endoscpios e outros instrumentos de inspeo,
permitindo assim uma anlise in vivo em tempo real, sem a necessidade de remoo de
tecido. Da a denominao de "bipsia ptica", uma vez que a identificao do tecido feita
pelo uso da radiao luminosa. Esta aplicao particularmente interessante para deteco de
displasias em tecidos biolgicos. A tcnica de anlise espectral atravs da multi-excitao da
fluorescncia d origem aos mapas de contornos (EEMs), que so bastante utilizados em
anlises biolgicas, para a deteco de microorganismos, produtos resultantes de
metabolismos celulares e alvos fluorescentes, onde certos microorganismos possuem a
habilidade de absorver certos corantes. A aplicao desta tcnica vem sendo conduzida para a
determinao dos comprimentos de onda de excitao ideais para diferenciao entre os
diversos tipos de disfunes.
O maior inconveniente encontrado pelos sistemas atualmente disponveis para estes
estudos o fato de que so extremamente lentos, inviabilizando qualquer tentativa de
aplicao in vivo. Os espectrofluormetros
109
comercialmente disponveis para a aquisio de
espectros de multi-excitao utilizam uma lmpada de luz branca contnua (geralmente
xennio
114
) combinada com um monocromador
110
fornecendo o comprimento de onda de
excitao, e um monocromador
110
de emisso combinado com uma fotomultiplicadora
120
, para
deteo da fluorescncia. Estes sistemas so versteis, podendo ser programados para a
excitao e deteco em uma faixa de comprimentos de onda desde o ultravioleta prximo
at o infravermelho prximo. Entretanto, estes sistemas apresentam tempo de coleo dos
espectros bastante longos para aplicaes in vivo, devido ao fato de que a energia entregue
amostra extremamente baixa, e ao fato de que o sistema de deteco dos espectros de
emisso feito atravs de um monocromador
110
controlado por motor de passo e uma
fotomultiplicadora
120
, que necessita de um tempo de integrao tpico de 1s. Desta maneira, o
tempo tpico para coletar um espectro de EEM normalmente da ordem de 30 a 40 minutos e
o uso destes sistemas est limitado a estudos de tecidos in vitro. Alm do mais, devido ao
tipo de configurao geomtrica de excitao das amostras, possvel a introduo de
distores espectrais quando aplicadas a anlise de meios com altos coeficientes de absoro
29
e espalhamento, como o caso dos tecidos biolgicos. O sistema visa a obteno da
autofluorescncia em tecidos humanos, em diferentes comprimentos de onda de excitao,
durante procedimentos clnicos. Este instrumento capaz de excitar amostras de tecidos
biolgicos em dez comprimentos de onda diferentes, na faixa de 337 a 506 nm, coletar a
autofluorescncia em uma faixa entre 360 e 700 nm, de uma maneira rpida e confivel, em
um tempo inferior a um segundo.Ele permite ainda a medida simultnea da reflectncia
difusa do tecido, pelo uso de uma fonte de luz branca, fornecendo uma importante
informao adicional, com respeito a absoro da luz por parte das molculas do sangue.
Alm disto, o instrumento endoscpio-compatvel, atravs do uso de cateteres baseados em
fibras pticas, onde tem sua aplicao particularmente direcionada para o diagnstico de
tecidos anormais no aparelho digestivo e intestino grosso. O equipamento dever ser
compacto e porttil, para ser transportado e operado por uma nica pessoa dentro do
ambiente hospitalar.
Diagrama esquemtico do sistema de multi-excitao baseado em laser de nitrognio bombeando diversas cubetas de corante, para a
obteno de autofluorescncia in vivo.
O sistema foi concebido e desenvolvido no Spectroscopy Laboratory, Massachusetts
Institute of Technology, e capaz de gerar a multi-excitao da autofluorescncia de tecidos
biolgicos em 600 ms.
30
O sistema apresentado possui a caracterstica de gerao de 10 comprimentos de onda
de excitao, alm da reflexo difusa no mesmo local do tecido, numa faixa de
excitao/emisso de 337nm - 500nm/350nm - 700nm. A obteno dos comprimentos de
onda de excitao obtida atravs de cubetas contendo diferentes corantes bombeados por
um laser de nitrognio pulsado, em uma cavidade laser fixa. O porta-cubetas constitudo de
um disco de alumnio que gira em torno de seu prprio eixo, permitindo a fixao das
cubetas. O sinal coletado disperso por um espectrgrafo compacto, e detectado por um
detector multicanal do tipo "array" de fotodiodos (PDA). Este sistema passar ainda por uma
bateria de testes de validao do sistema, passando ento para estudos clnicos em hospitais
da regio, visando a obteno de dados para a avaliao da tcnica, e o desenvolvimento de
um algoritmo de identificao da patologia baseado na multi-excitao da fluorescncia. Os
espectros de multi-excitao de tecidos do clon humano obtidos com o sistema mostram
diversas caractersticas marcantes entre tecidos normais e aqueles adenomatosos: alta
absoro em plipos (da ordem de trs vezes maior que a dos tecidos normais) e diferenas
em composio bioqumica, visto que os plipos apresentam como caracterstica a emisso
da protoporfirina endgena (particularmente a PP IX), aparecendo como um pico na regio
de emisso de 600-650nm, quando excitados com comprimentos de onda em 415 nm.
Fluorometria quantitativa
Importantes mtodos fluoromtricos foram desenvolvidos para a determinao de
numerosos compostos orgnicos de interesse n tecnologia alimentar, farmacologia e patologia
clnica, que exibam forte fluorescncia. Poucas espcies inorgnicas possuem suficiente
fluorescncia prpria para serem determinados fluorometricamente, entretanto, muitos
ctions reagem com agentes quelatantes apropriados com formao de complexos
fluorescentes e podem ser, ento, determinados.
Fazendo uma comparao da fluorometria com a absorciometria, a fluorometria tem
um campo de aplicao menor, j que o nmero das espcies fluorescentes limitado, por
esta razo os mtodos fluorometricos so mais seletivos e possui uma maior sensibilidade.
Outro fator que garante uma maior seletividade que envolve a escolha de dois
comprimentos de onda. Alm disso, o fluorometria oferece a possibilidade de determinar
certas em nvel de parte por trilho. Nela a concentrao achada em funo da potncia da
fluorescncia. J na absorciometria a concentrao dada pela absorbncia A.
Para a realizao de um mtodo analtico fluoromtrico necessrio escolha os
comprimentos de ondas para a radiao excitadora e a medida da fluorescncia emitida e
tambm preciso se conhecer o espectro de fluorescncia da espcie analisa; o espectro de
fluorescncia pode ser traado com a ajuda de um espectrofluorometro15. Observando o
espectro de emisso, o comprimento de onda timo para medir a fluorescncia corresponde
fluorescncia mxima observada. Ento se fixa o monocromador de fluorescncia no valor
timo e traa o espectro de excitao. Estabelecidos os comprimentos de onda de excitao e
de fluorescncia timos, garantir uma maior sensibilidade e preciso.
Um fator que pode prejudicar o processo analtico a variao do pH, j que a isso
afeta a fluorescncia de muitos sistemas, por este motivo muitos processos requerem um
rigoroso controle do pH. O pH timo para uma espcie fluorescncte em um dado solvente
geralmente achado experimentalmente.
31
A fluorometria quantitativa requer a construo de curvas de calibrao (leitura do
instrumento x concentrao). Em virtude da dificuldade em medir uma potencia de
fluorescncia absoluta, as medidas na anlise padro arbitrariamente escolhida.O ajustamento
nas anlises tambm pode ser efetuado com referncia a uma soluo de uma substncia
fluorescente estvel, como uma soluo diluda de quinina em cido sulfrico 0,5M ou de
fluoresceinato de sdio. Equilibrado o circuito, a soluo de referncia substituda pelas
sucessivas solues padres das espcies fluorescentes em analise, e mede-se a fluorescncia
para cada uma das solues.
Espectrometria de Fluorescncia de Raios X
32

15.Definio
Espectrometria de fluorescncia de raios X envolve um grupo de mtodos
instrumentais no destrutivos de analises qumicas qualitativas e quantitativas para elementos
qumicos baseados na medida do comprimento de onda ou da energia e intensidade de suas
linhas espectrais de emisso secundaria.
127
15.1. Mtodos de Espectrometria de Florescncia de Raios X.
Existem vrios mtodos instrumentais de analises qumicas que utilizam a
espectrometria de florescncia de raios X, entre os mais utilizados encontram-se:
15.1.1. Mtodos de Espectrometria de Florescncia de Raios X
por Comprimento de Onda Dispersivo.
As linhas espectrais de raios X secundrios de todos os elementos presentes na
amostra so excitadas e detectadas simultaneamente, e ento separadas na base de seus
comprimentos de onda antes da deteco.
15.1.2. Mtodos de Espectrometria de Florescncia de Raios X
por Energia Dispersiva.
As linhas espectrais de raios X secundrios de todos os elementos presentes na
amostra so excitadas e detectadas simultaneamente e os pulsos restantes so separados
eletronicamente com base nas energias dos ftons de raios X emitidos.
15.1.3. Mtodos de Espectrometria de Florescncia de Raios X
por Reflexo Total.
As linhas espectrais de raios X secundrios dos elementos presentes na amostra so
excitadas simultaneamente (semelhante com a disperso de energia), sendo utilizada para
amostrar na forma de filme e para baixos teores (ng ou pg).
33
Mtodo de Espectrometria de Florescncia de
Raios X por Comprimento de Onda Dispersivo.
Descrio do sistema de Deteco do Espectrmetro PW2400
espectrmetro Philips PW2400
128
Estrutura interna do sistema PW 2400
34
Tubo de Raios X
O tubo de raios X tem sua construo em cermica e projetado de tal forma a
ter uma distancia mnima entre o anodo e a amostra. Neste tipo de tubo o anodo tem
seu potencial de 60 kV e esfriado usando gua deionizada. O filamento tambm
esfriado com gua.
O anodo de Rdio normalmente usado no tubo de raios X, mas podem ser
promovidos outros anodos para aplicaes especificas.
O anodo do tubo de rdio pode ser operado at 60kV e corrente de at
125mA; a um nvel de potencia mxima de 3kW.
Voltagens geralmente mais altas so usadas para a excitao de comprimento
de onda de elementos de linhas caractersticas menores e voltagens baixas com
corrente alta para elementos com linhas de onda de comprimento mais longas. As
colocaes timas de kV e mA para cada elemento so geradas automaticamente pelo
software analtico.
A janela do anodo do tubo de Rdio feita de Berlio e tem densidade de
75m para dar mais eficincia nas linhas de transmisso do Rh L, linhas
caractersticas que so importantes para excitao das linhas caractersticas de
elementos de baixo numero atmicos.
129
Filtro do Tubo
O equipamento PW 2400 podem ser providos com at cinco filtros de tubo.
Os filtros disponveis so:
Filtro de 100 micron de lato, para melhorar o efeito da radiao de fundo e
limites de deteco no range de 20-30keV.
Filtro de 200 micron de alumnio, para melhorar o efeito da radiao de fundo e
limites de deteco no range de 6-10keV.
Filtro de 300 micron de alumnio, para reduo das linhas Rh K do tubo.
Filtro de 750 micron de alumnio, para melhorar o efeito da radiao de fundo e
limites de deteco na range de 10-20keV.
Filtro de 1mm de chumbo, para proteger o tubo de p e prevenir deteriorao de
detector quando em modo auxiliar.
130
Posio de amostra
A amostra suspendida sobre o tubo em um suporte e levada a posio 2 do
carrossel. Existem uma grande variedade de tamanho de suporte de amostra disponveis para
diversos tipos de amostra. A amostra introduzida no carrossel e levada a posio acima do
tubo por uma rotao 180.
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35
Cristais Analisadores
O equipamento PW 2400 pode ser providos com um conjunto de ate 8 cristais
analisadores para ao ser selecionado podem cobrir todos os comprimentos de onda
necessrios para uma aplicao. Eles esto montados ao redor de um tambor chamado o
moinho cristalino que girado para colocar o cristal selecionado no cominho ptico do
espectrmetro. O propsito do cristal separar os comprimentos de onda fluorescente da
amostra e transmitiu pelo colimador atravs de difrao de acordo com a relao de Bragg.
132
Detectores
At 3 detectores podem ser providos no gonimetro do PW 2400. O tipo de
detector a ser usado para elementos a serem analisados. O detector de cintilao usado para
elementos mais pesados que o Nquel (Z=28), enquanto que os detectores de fluxo so mais
eficientes para determinar elementos mais leves que o Zircnio (Z=40).
133
Meio de Medida
O espectrmetro PW 2400 pode utilizar o Vcuo, gs de Helio ou Nitrognio.
O vcuo utilizado para amostras slidas (pastilhas prensadas, fundidas, metais, etc). o gs
Helio utilizado para amostras liquidas e recomendado para a leitura de Na U, j a
utilizao de nitrognio mais restrita, sendo utilizado para leituras de amostras liquidas de
Ti U. Para que no sejam introduzidos porta-amostras especficos e o software reconhece a
aplicao e o tipo de porta amostra.
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36
COMENTRIO
Apesar do nmero de mtodos fluorimtricos ser grande, atualmente, ainda pouco
utilizado, devido a esse nmero ser maior que o nmero de possveis aplicaes. Isso ocorre
porque o nmero de espcies que emitem fluorescncia prpria limitado.
Porm, a anlise fluorimtrica tem campo de atuao diversificada. H projetos para o
desenvolvimento dessa na rea patolgica clnica, o que facilitaria os diagnsticos de doenas
que seriam feitos em tempos menores do que so necessrios.
Fazendo uma comparao com a absorciometria os mtodos fluorimtricos tm maior
sensibilidade e maior seletividade, porque envolvem a escolha de dois comprimentos de onda
que permitem o melhor traado dos espectros de emisso e de excitao, possibilitando uma
maior preciso.
37
Referencias Bibliogrficas
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