Facultad de Farmacia y Bioqumica UNMSM 2012

DROGAS CON CARBOHIDRATOS: OLIGOSACRIDOS

Mara REYNEL TARAZONA, Lizeth M. PREZ LANDA, Deisy M. CLERQUE VARGAS, Cristhian F. SALAS COTAQUISPE,Percy J. SNCHEZ VSQUEZ Los disacridos son carbohidratos que estn compuestos de dos monosacridos unidos por un enlace glucosdico, la unin entre monosacridos se forma entre el carbono anomrico de un azcar y el grupo hidroxilo de la otra. La presente prctica se centr en la identificacin y cuantificacin de disacridos en 2 muestras a analizar, una en polvo y otra lquida, mediante tres tipos de anlisis. El anlisis organolptico evalu las caractersticas apreciables a los sentidos, mientras que el anlisis cualitativo utiliz reacciones generales y particulares para definir al disacrido, resultando positivo en la identificacin de azcares reductores y observndose la presencia de cristales correspondientes a maltosa. Por ltimo, el anlisis cuantitativo comprendi al mtodo de Fehling, con el cual se obtuvo un 4,45% de azcares reductores y 4,23% de sacarosa. Palabras clave: carbohidratos, disacridos, mtodo Fehling, reacciones de identificacin, azcares reductores. The disaccharides are carbohydrates which are composed of two monosaccharides linked by a glycosidicbond, the bond between monosaccharide is formed between the anomeric carbon of a sugar and the hydroxyl group of the other. This practice focused on the identification and quantification of disaccharides in 2 samples to be analyzed, a powder and liquid form, through three types of analysis. Sensory analysis evaluated the characteristics visible to the senses, while the qualitative analysis used general and specific reactions to define the disaccharide, resulting in positive identification of reducing sugars and the presence of crystals was observed for maltose. Finally, the quantitative analysis method of Fehling realized, which was obtained with a 4.45% reducing sugars and 4.23% sucrose. Keywords: carbohydrates, disaccharides, Fehlingmethod, identification reactions, reducing sugars.

INTRODUCCIN
Un carbohidrato que puede ser hidrolizado en dos molculas de monosacridos es llamado disacrido, los ms importantes son la lactosa (leche), la sacarosa (azcar comn) y la maltosa, por otro lado un carbohidrato que tiene entre tres y diez monosacridos unidos tambin por enlaces de carcter covalente, llamados enlaces glucosdicos, es denominado oligosacrido. Los oligosacridos (del griego oligos que significa pocos) tienen generalmente gusto dulce, son solubles en agua y si presentan un grupo

hemiacetlico libre, presentan poder reductor. Muchos de estos compuestos existen como tales en la naturaleza, mientras que otros pueden obtenerse por una degradacin enzimtica o una hidrlisis cida controlada de polisacridos.Segn el nmero de monosacridos que presente pueden ser trisacridos, tetrasacridos, etc., los cuales no se encuentran libres, sino que se unen a otro tipo de molculas formando estructuras hbridas o glucoconjugados. Es por todo esto que los oligosacridos representan un grupo de azcares muy importantes para ser

Ctedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional

Facultad de Farmacia y Bioqumica UNMSM 2012 estudiados en relacin de su presencia en el reino vegetal. (1) OBJETIVOS 1. Identificar la presencia de carbohidratos mediante el anlisis organolptico y las reacciones de Molish y Antrona a partir de la muestra problema D. 2. Determinar clase de azcares presentes en la muestra problema D, mediante las reacciones de diferenciacin y/o identificacin de azcares reductores, reacciones particulares y la reaccin de cristalizacin. 3. Cuantificar azcares reductores en la muestra problema A lquida por el mtodo de Fehling. Diferenciacin de monosacridos y disacridos: Mediante la reaccin de Barfoed, 0.5 mL de solucin reactivo (cido actico + acetato cprico). Presencia de azcares reductores: Por las reacciones de Fehling (Cu2SO4 + tartrato de sodio y potasio +NaOH), Benedict (citrato de sodio + Cu2SO4 + NaCO3) y de Tollens (AgNO3 + NH4OH). En todos estos casos se utiliz 1.0 mL de solucin reactivo y se calent para obtener un precipitado coloreado. Identificacin de osazonas formadas: Por la reaccin de cristalizacin con 1.0 mL de solucin reactivo de fenilhidrazina y el posterior calentamiento de dicha solucin. Mtodo cuantitativo Se realiz la determinacin cuantitativa de azcares por el mtodo de Fehling a la muestra problema A, que contena una solucin de sacarosa. Se utilizaron como reactivos soluciones de Fehling A, B y C, as como tambin NaOH 10% y HCl concentrado. (2)

MATERIALES Y MTODOS
Se trabaj con dos muestras problema proporcionadas por la Ctedra de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. La muestra problema D, que contena un oligosacrido, se determin mediante anlisis cuantitativo; mientras que la muestra problema A se determin mediante anlisis cuantitativo (Mtodo Fehling). Mtodos cualitativos Se realiz la determinacin cualitativa de azcares con 0.5 mL de la muestra problema A en cada uno de los ensayos, de la siguiente manera: (2) Reacciones generales (identificacin de carbohidratos): La primera, con 0.5 mL de solucin reactivo de Molish (alfa naftol 2% +H2SO4) y la segunda, con 0.5 mL de solucin reactivo de Antrona (antrona 2% + H2SO4).

RESULTADOS
La muestras a analizar fueron la muestra D (recibida como polvo) y la muestra A (recibida en frasco de vidrio de color mbar).Los resultados obtenidos estn comparados y basados en la teora presentada en la gua de prctica de Farmacognosia I. I. Anlisis Organolptico (Muestra D)
COLOR OLOR SABOR ASPECTO Blanquecino Inodoro Dulce Pulvurulento

Ctedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional

Facultad de Farmacia y Bioqumica UNMSM 2012 II. Anlisis Cualitativo (muestra D) REACCIONES GENERALES ENSAYO REACCIN RESULTADO REACCIN POSITIVA R.MOLISH (Alfa naftol 2% +H2SO4) Formacin de anillo purpura Positivo R.ANTRONA (Antrona 2% + H2SO4) Coloracin verdeazulada REACCIONES PARTICULARES ENSAYO REACCIN RESULTADO REACCIN POSITIVA HERAIL (nitrato cobaltoso +NaOH 50 %) Coloracin violetaazulado Negativo Formacin de anillo violeta

POZZI- SCOT (Molibdato de amonio 15%)

Positivo REACCIN DIFERENCIACIN MONOSACRIDOS Y DISACRIDOS ENSAYO REACCIN RESULTADO REACCIN POSITIVA
R.BARFOED

(c.actico + acetato cprico)

Precipitado rojo(10-12 min.)

Positivo

Negativo REACCIN DE CRISTALIZACIN ENSAYO REACCIN RESULTADO REACCIN POSITIVA Formacin de R. osazonas, FENILHIDRAcristales ZINA de color amarillo MALTOSA (Forma estrellada) GLUCOSA (Forma de plumeros)

REACCIONES AZCARES REDUCTORES ENSAYO REACCIN RESULTADO REACCIN POSITIVA R.FEHLING Cu2SO4 + Tartrato de Na y K +NaOH) R.BENEDICT (Citrato de sodio + Cu2SO4 + NaCO3) R.TOLLENS (AgNO3 + NH4OH) Precipitado rojo ladrillo Positivo Precipitado rojo ladrillo Positivo Formacin de espejo de plata Positivo III. Anlisis Cuantitativo Mtodo Fehling (muestra A) Clculo

10mL (V. inicial) ----100mL (V. final) X ---- 10mL (Gasto) X=1 mL(gasto real del volumen inicial)

Ctedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional

Facultad de Farmacia y Bioqumica UNMSM 2012 precipitado color rojo (oxido cuproso) mientras que para los disacridos reductores es a los 10 minutos aproximadamente.La muestra D reaccion luego de 10 minutos demostrndose que la muestra tiene disacridos. Dicho fundamento sirvi para corroborar la presencia de maltosa en la muestra problema. (4) Las reacciones caractersticas de la sacarosa, Herail y de Pozzi-Scott, resultan ser negativas debido a la presencia reductora de la maltosa en la muestra D. (5) Los carbohidratos reductores son aquellos carbohidratos (fundamentalmente monosacridos y oligosacridos), que tienen su grupo funcional aldehdo o cetona libre o potencialmente libre. Libre si la molcula existe en forma abierta, potencialmente libre si la molcula existe en forma cclica. Los disacridos que tengan el hidroxilo del carbono anomrico de alguno de los dos monmeros libres, tambin sern reductores, aunque ms lentamente, por ejemplo, la maltosa y la lactosa. Pero aquellos que estn unidos por sus dos carbonos anomricos, como la sacarosa, no sern reductores, a menos que se hidrolice la unin y queden libres los monmeros. Mediante el anlisis cualitativo se determin que la muestra D recibida presentaba maltosa, la cual es un azcar reductor. Las reacciones de identificacin de azcares reductores de Fehling, Benedict y Tollens dieron resultados positivos, al observarse el precipitado rojo ladrillo. (6) Los derivados de la hidrazina, fenilhidrazina y 2,4-dinitrofenilhidrazina, se condensan con aldehdos y cetonas formando hidrazonas que dan

Porcentaje de azcares reductores 1mL(X) ---- 0.0445 (T.F.) 100mL----- 4.45%( Porcentaje de azcares reductores) Porcentaje de sacarosa 4.45X0.95=4.23% de sacarosa

DISCUSIN
La presencia de carbohidratos en una muestra se manifiesta mediante las reacciones generales de Antrona y Molish. Esta ltima se basa en la accin hidrolizante y deshidratante del cido sulfrico sobre los hidratos de carbono, en dicha reaccin el cido sulfrico cataliza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos de la muestra y la deshidrata a furfural(pentosas) o hidroxifurfurales(hexosas), estos furfurales se condensan con el alfa-naftol y de esta manera se obtiene un producto coloreado(anillo prpura).(3) La muestra D recibida tuvo una reaccin positiva, observndose el anillo purpura caracterstico, debido a que se trata de un carbohidrato.De la misma manera, se demostr que es un carbohidrato empleando el reactivo de Antrona para el cual result positivo presentando una coloracin verdeazulada.La prueba de Barfoed sirve para distinguir monosacridos de disacridos reductores, basndose en la velocidad de reaccin; en los monosacridos reductores a los 7 minutos da un

Ctedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional

Facultad de Farmacia y Bioqumica UNMSM 2012 precipitados de color amarillo, mediante la reaccin con fenilhidrazina se produjo la formacin de cristales amarillos de forma de plumero para la glucosa y de forma estrellada para la maltosa (glucosa+glucosa). Este resultado indica que la muestra problemaD sera una mezcla de glucosa (monosacrido) y maltosa (disacrido). (7)

REFERENCIA BIBLIOGRFICAS 1. Eyzaguirre J. Qumica de los hidratos de carbono. 1 ed. Chile: Andrs Bello, 2001. 2. Ctedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional. Gua de prctica Farmacognosia I: Practica N3: Drogas con carbohidratos, Oligosacridos. 2012. 3. Giraldo, G. Laboratorio de Bioqumica: Una Visin Prctica. 1 ed. Colombia. Editorial: Quindio, 2010:75-78 4. Guarnizo A. Experimentos de Qumica Orgnica: con enfoque en las ciencias de la vida. 1 ed. Colombia: Ediciones Elizcom, 2009: 136-145 5. Vjar E. Prcticas de Bioqumica descriptiva. 1 ed. Ciudad de Mxico: Editorial; UniSon, 2005:134-138. 6. McMurry, J. Qumica Orgnica. Quinta edicin, Thomson editores, Mxico, 2001 7. Pasto D.J., Johnson C.R. Determinacin de estructuras orgnicas. Barcelona: Revert; 2008.

CONCLUSIONES 1. Se identific la presencia de carbohidratos en la muestra problema en polvo D, mediante un anlisis organolptico y las reacciones generales de Molish y Antrona. 2. Se determin las clase de azcares que presentaba la muestra, resultando reacciones positivas en la identificacin de azcares reductores, mientras que dieron negativo para las reacciones particulares; por tanto se descart que la muestra problema D pudiese contener algn azcar no reductor. Se determinaron los disacridos que contena la muestra problema D, mediante la observacin de los cristales formados en la reaccin con fenilhidrazina. Estos cristales tenan la forma estrellada, indicando la presencia de maltosa; y algunos cristales en forma de plumero correspondiente a monosacridos de glucosa. 3. Se cuantific la cantidad de azcares reductores segn el Mtodo de Fehling, resultando un 4,45% de azcares reductores en la muestra problema lquida A y 4,23% de sacarosa.

Ctedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional