CRECIMIENTO

Reproduccin bacteriana
Fisin binaria

Las bacterias generalmente se reproducen por fisin binaria.

Una clula se divide en dos despus de desarrollar una pared transversa. Generalmente es asexual aunque en algunas especies puede ser precedida de conjugacin.

Crecimiento
Se define como un incremento ordenado de los principales

constituyentes de un organismo. Involucra sntesis de estructuras celulares, cidos nucleicos, protenas y otros componentes celulares a partir de nutrientes. Todos los seres vivos toman nutrientes y excretan productos de desecho.

Crecimiento en Lote
En un sistema cerrado:
a)El crecimiento est determinado por un equilibrio dinmico entre la velocidad de crecimiento y la velocidad de muerte b)El crecimiento depende de la composicin del medio de cultivo, principalmente de un sustrato limitante, de las condiciones ambientales y del inculo inicial

FASES DE LA CURVA DE CRECIMIENTO EN LOTE

Fases de crecimiento.
I. Fase lag

Es un perodo de adaptacin, cuando un cultivo de microorganismos es llevado de un ambiente a otro. Los microorganismos sufren una reorganizacin tanto en su velocidad de crecimiento como en sus constituyentes macromoleculares. Durante esta etapa la masa celular puede cambiar sin cambiar el nmero de clulas.

Fases de crecimiento.
II. Fase de aceleracin del crecimiento

Fases del crecimiento

III. Fase exponencial

Es un perodo de balance o de estado estacionario en el crecimiento, durante el cual la velocidad especfica de crecimiento es constante. La composicin qumica del medio de cultivo esta cambiando debido a que los nutrientes se estn consumiendo y productos metablicos son producidos.

Fases del crecimiento

IV. Fase de desaceleracin

La velocidad de crecimiento disminuye y los microorganismos dejan de reproducirse empezando a entrar a la fase estacionaria

Fases de crecimiento.
V. Fase estacionaria

Los nutrientes se agotan y los productos txicos se acumulan. La masa total puede permanecer constante pero el nmero de clulas puede descender. La tasa de crecimiento es igual a la tasa de muerte.

Fases de crecimiento.
VI. Fase de declinacin o muerte

La tasa de muerte es mayor que la tasa de crecimiento. Los nutrientes se agotan y se acumulan productos txicos

Tiempo de generacin o duplicacin

Una

clula crece progresivamente y se divide en dos clulas iguales.

que la clula se divida (o para que la poblacin de un organismo se duplique en nmero) se conoce como tiempo de generacin o duplicacin.

n=1

n=2

El tiempo requerido para

n=3

n=4

2n
En donde n = al nmero de generaciones

Clculo del nmero de generaciones

En donde:

n t0 t g

= Nmero de generaciones = Tiempo inicial de incubacin = Tiempo final de incubacin = Tiempo de duplicacin (o generacin)

Clculo del tiempo de generacin

g=
En donde:

ln (N N0)

t t0

g .-Tiempo de generacin N0.- Nmero de microorganismos inicial N.- Nmero de microorganismos final t0.- Tiempo Inicial t.- Tiempo final

La velocidad especfica de crecimiento es obtenida a partir de la pendiente de una grfica de lnX vs tiempo

Velocidad de Crecimiento...
Bajo condiciones exponenciales se describe:

dX/dt=X dN/dt= n N

(1) (2)

donde: X = Concentracin de m.o. en g/l N = Concentracin de m.o. en clulas/l t = Tiempo = Velocidad especfica de crecimiento en h-1 (masa) n = Velocidad especfica de crecimiento en h-1 (nmero)

Velocidad de Crecimiento...
dX/x=dt Xt=X0et

(3) Xt es la concentracin final de microorganismos en g/l en tiempo (t) X0 es la concentracin inicial de microorganismos en g/l e es la base de logaritmo natural Si la velocidad especfica de crecimiento es constante lnXt=lnX0+ t (4) La ec. 4 puede ser resuelta para el caso en el cual Dt=td el tiempo requerido para X2=2X1 td=ln2/ =0.693/ (5) si td es igual al tiempo de generacin, entonces:

Que significa la constante ? Es la velocidad especfica de crecimiento en un sustrato dado, y significa la afinidad del microorganismo por el sustrato Que indica la Ecuacin de Monod?

Explica la velocidad de crecimiento en funcin del sustrato limitante Que significa la constante max ?

Distribucin de los tiempos mximos de duplicacin para diferentes microorganismos

Tasas de crecimiento de algunos microorganismos bajo condiciones ptimas

Efecto de la fuente de carbono sobre el crecimiento

MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO MICROBIANO

1.Determinacin de la masa celular o biomasa 1.1 Mtodos directos:
Peso seco Peso hmedo Volumen hmedo

1.2 Mtodos indirectos:

Determinacin de Nitrgeno total

Espectrofotometra Radiacin IR

ESPECTROFOTOMETRA

MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO MICROBIANO

2. Determinacin del Nmero de microorganismos 2.1 Mtodos Directos Cuenta total microscpica (Cmara de Neubauer, de Petroff) Cuenta viable (Vaciado en placa, Extensin con varilla de vidrio, Cuenta en tubo de Hungate, Tincin con azul de tripano) Medicin lineal o radial

2.2 Mtodos Indirectos Nmero ms Probable (NMP) Turbidimetra Nefelometra

CUENTA DIRECTA DE CLULAS EN LA CMARA DE NEUBAUER

Diluciones para cuenta viable

Cuenta viable

Recuento de anaerobios por la tcnica de Hungate

DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO POR NEFELOMETRA

Solucin de BaCl2 al 1.0% ml 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 Solucin de H2SO4 al 1.0% ml 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.3 9.2 9.1 9.0
Nefelmetro de Mc Farland
Consiste en varios tubos de vidrio hermticamente cerrados que contienen BaCl2 al 1% + cantidades crecientes de H2SO4 al 1%; por lo tanto, en cada tubo se origina un precipitado de BaSO4, origen de la turbidez, la cual se relaciona con un nmero de clulas/ mL.

Escala de UFC Mc. Farland Millones/ml 4.0 3.7 3.5 3.4 3.3 3.2 3.15 3.10 3.04 3.00 300 600 900 1,200 1,500 1,800 2,100 2,400 2,700 3,000

Inconveniente: es un mtodo poco preciso, que slo se emplea cuando no hace falta exactitud. Ha sido desplazado por los mtodos espectrofotomtricos.

MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO MICROBIANO

3. Determinacin de metabolitos asociados a crecimiento
3.1 Mtodos Directos Componentes de Pared celular Protenas cidos nucleicos 3.2 Mtodos Indirectos Produccin de cidos orgnicos Produccin de alcoholes y glcidos Produccin de CO2

DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO POR CUANTIFICACIN DE PROTENAS

Por ejemplo: Mtodo de Lowry Mtodo de Bradford

DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO POR CUANTIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS

Extraccin del ADN en cada tiempo de muestreo. Determinacin de la pureza del ADN por el clculo de la

relacin de absorbancia a 260 nm y 280nm (A260/ A280). Valores obtenidos entre 1.8 y 2.0, indican que las muestras no contienen residuos proteicos ni fenol. La concentracin del ADN extrado se determina por medio de la siguiente frmula: D.O.260 = 1 contiene 50 g de ADN de doble cadena por mililitro(Ausubel et al., 1995)

MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO MICROBIANO

4. Determinacin de la utilizacin de algn nutriente

4.1 Mtodos Indirectos Oxgeno Azcares CO2 cidos grasos

Crecimiento en contnuo
A diferencia del crecimiento por lote, es un sistema abierto:
a)
b) c)

Hay administracin constante de medio de cultivo Por lo tanto el sustrato no es limitante, Depende de la tasa de dilucin