UNIVERSIDAD CATLICA DEL NORTE

FACULTAD DE CIENCIAS Departamento de Qumica y Farmacia Anlisis de Medicamentos II

CARRACTERIZACIN DE LA AMOXICILINA MEDIANTE LA TCNICA DE DIFRACCIN DE RAYOS X

DOCENTE: DR. JAIME LLANOS S. AYUDANTE: CAROLA ACUA. AUTORES: WAI-HOUNG CHOU K., RODRIGO ZEBALLOS L. FECHA: 02 DE JUNIO DE 2011. JUSTIFICACIN: La difraccin de rayos X corresponde a una de las tcnicas ms usadas en la actualidad, por la comunidad cientfica, para poder determinar de manera clara las estructuras cristalinas de distintas sustancias, debido a su alta precisin, y adems obtener un anlisis cualitativo y cuantitativo de ella. Una de sus principales ventajas es su aplicacin como herramienta en el campo farmacutico, por ejemplo, en el control de calidad de medicamentos, pudiendo determinar el principio activo y sus excipientes. Su principal desventaja es que slo puede utilizarse en muestras slidas y cristalinas, por ende, no es aplicable a fluidos y slidos no cristalinos o amorfos. OBJETIVOS: Determinar el difractograma de rayos X del antibitico amoxicilina. Determinar los planos de los critstales de la celda unitaria de la amoxicilina. Determinar la diferencia entre la amoxicilina genrica y una de marca. Determinar la diferencia que podra existir entre una amoxicilina viable y otra calentada. INTRODUCCIN: Histricamente, mucho del entendimiento que tenemos de los arreglos atmicos y moleculares en los slidos han sido resultado de investigaciones mediante rayos-X. Los rayos X corresponden a ondas incoloras pertenecientes al espectro electromagntico, que comprende longitudes de onda desde los 10 a los 0,01 nm (fig. 1). Fueron descubiertos por el fsico alemn Wilhem Rntgen, en el ao 1895.

Figura 1: Espectro de radiacin electromagntica, incluida la regin de los rayos X.

La difraccin de rayos X, como su nombre lo indica, utiliza el fenmeno fsico de la difraccin, que consiste en un movimiento netamente ondulatorio en el que esta onda se dispersa al encontrarse con un obstculo en su camino. Esta tcnica se basa principalmente en la ecuacin o ley de Bragg. Los fsicos britnicos William Henry Bragg y su hijo William Lawrence Bragg, en 1913, observaron que los slidos cristalinos difractaban los rayos X, emitidos por una fuente, produciendo unos diagramas caracterizados por picos muy intensos en direcciones determinadas. Para interpretar este fenmeno, se supuso que el cristal estaba formado por planos paralelos de tomos espaciados a una distancia d, en los que se produca una reflexin de tipo especular de los rayos X (fig. 2).

Figura 2: Fenmeno observado por Bragg.

Esta tcnica, como bien se dijo anteriormente, slo es sensible para muestras en estado slido, capaces de formar estructuras de tipo cristalinas, por ende, una muestra slida de tipo amorfa, no puede ser utilizado para esta tcnica. Un cristal corresponde a la organizacin de los tomos de un compuesto ubicados ordenadamente en las tres dimensiones del espacio (eje de las abscisas x, de las ordenadas y y de las cota o de traslacin z). La unidad fundamental o bsica de un cristal se denomina como celda unitaria, la cual consta de tres vectores distintos de traslacin (a, b y c), y ngulos formados por la interseccin por los vectores (, y ). Adems, los cristales pueden adoptar distintos sistemas de organizacin conocidos como redes de Bravais, de los cuales podemos encontrar: Sistema Cbico: Los vectores de traslacin y sus ngulos son idnticos entre s (ngulos rectos), es decir: a = b = c ; = = = 90 Puede adoptar tres formas diferentes: a) Simple o primitivo (fig. 3).

Adems, se tiene que la diferencia de camino ptico entre dos rayos reflejados por planos contiguos ser 2 veces la distancia d por el seno del ngulo formado (), obtenindose as la ecuacin de Bragg:

Figura 3: Sistema cbico simple o primitivo

b) Centrado en el cuerpo (fig. 4). Cuando dicha diferencia valga un nmero entero de veces (n) de longitud de onda, la interferencia ser de tipo constructiva y aparecer un pico.

Figura 4: Sistema cbico centrado en el cuerpo.

c) Centrado en las caras (fig. 5).

Figura 9: Sistema centrado en las bases. Figura 5: Sistema cbico centrado en las caras.

ortorrmbico

Sistema Ortorrmbico: Todos los vectores de traslacin son distintos entre s y los ngulos comprendidos entre ellos son idnticos (ngulos rectos), es decir: a b c ; = = = 90 Pueden adoptar 4 formas distintas: a) Simple (fig. 6).

Sistema Hexagonal: Dos de los vectores de traslacin son iguales entre s y distinto del otro y dos ngulos son idnticos entre s (ngulos rectos) y distinto del tercero (ngulo obtuso), es decir (fig. 10): a = b c ; = = 90; = 120

Figura 10: Sistema hexagonal.

Figura 6: simple.

Sistema

ortorrmbico

b) Centrado en el cuerpo (fig. 7).

Sistema Tetragonal: Dos de los vectores de traslacin son iguales entre s y distinto del tercero y sus tres ngulos son idnticos entre s (ngulos rectos), es decir: a = b c ; = = = 90 Puede adoptar dos formas distintas: a) Simple (fig. 11).

Figura 7: Sistema centrado en el cuerpo.

ortorrmbico

c) Centrado en las caras (fig. 8).

Figura 11: Sistema tetragonal simple.

b) Centrado en el cuerpo (fig. 12).

Figura 8: Sistema centrado en las caras.

ortorrmbico Figura 12: Sistema tetragonal centrado en el cuerpo.

d) Centrado en las bases (fig. 9).

 Sistema Trigonal o Rombodrica: Dos de los vectores de traslacin son iguales entre s y distinto del tercero y dos de sus ngulos son idnticos entre s (ngulos rectos) y distinto del tercero (ngulo obtuso), es decir (fig. 13): a = b c ; = = 90; = 120

Figura 16: Sistema triclnico.

Figura 13: Sistema trigonal o rombodrica.

Sistema Monoclnico: Los tres vectores de traslacin son distintos entre s y dos de sus ngulos son idnticos (ngulos rectos) y distinto del tercero, es decir: a b c ; = = 90 Puede adoptar dos formas diferentes: a) Simple (fig. 14).

Figura 14: simple.

Sistema

monoclnico

b) Centrado en las bases (fig. 15).

Figura 15: Sistema centrado en las bases.

monoclnico

Sistema Triclnico: Los tres vectores de traslacin y sus tres ngulos son distintos entre s, es decir (fig. 16): a b c ; 90

Esta tcnica de difraccin consiste en utilizar polvos de la muestra en estudio, la cual consiste de partculas orientadas al azar que estn expuestos a una radiacin electromagntica de tipo rayos X monocromticas. Cada partcula de polvo es un cristal, y teniendo una gran cantidad de stos con orientaciones al azar asegura que algunas partculas estn apropiadamente orientadas, de manera que cada grupo posible de planos de difraccin sea capaz de difractarse. El difractmetro es un aparato usado para determinar los ngulos a los cuales la difraccin ocurre en nuestra muestra. La muestra a estudiar (S), dispuesta en una placa, se coloca de manera que la rotacin se lleve a cabo en el eje O. Este eje es perpendicular al plano de la pgina (fig. 17). El haz de rayos X monocromtico es generado en el punto T, y las intensidades de los haces difractados son detectadas por un contador C. La muestra, la fuente de rayos X y el contador son todos coplanares (mismo plano). El contador se encuentra en un dispositivo mvil, el cual tambin puede ser rotado alrededor del eje O; su posicin angular en trminos de 2 se marca en una regla graduada. El contenedor y la muestra estn mecnicamente acoplados, de tal manera que la rotacin de la muestra en un ngulo est acompaada por una rotacin del contador n de 2; esto asegura que los ngulos incidentes y de

reflexin se mantengan igual uno con respecto al otro.

Figura 19: Ncleo central del antibitico Penicilina semi-sinttico.

PROCEDIMIENTOS: Materiales y Reactivos:

Figura 17: Diagrama esquemtico de un difractmetro de rayos-X; T= fuente de rayos X, S = muestra, C = detector y O = eje de rotacin alrededor del cual rota el detector y la muestra.

En esta prctica, las muestras analizadas correspondieron a distintas marcas del medicamento amoxicilina trihidratada (fig. 18), que es un antibitico similar al ncleo semisinttico de la penicilina (fig. 19). Se trata de un aminopenicilina que acta contra un amplio espectro de microorganismos, gram positivos y gram negativos. Debido a su mejor absorcin gastrointestinal, la amoxicilina provee niveles ms altos de antibitico en sangre y menos efectos colaterales a nivel gastrointestinal. La amoxicilina trihidratada acta como inhibidor de la sntesis de la pared celular bacteriana.

Amoxicilina Trihidratada genrica (C16H19N3O5S 3H2O). Amoxicilina Trihidratada de marca (Amoval). Amoxicilina Trihidratada tratada a 110C. Mortero de gata. Difractmetro de Rayos X modelo Bruker D8 Advance. El primer paso consiste en pulverizar las dos muestras de amoxicilina (genrico y de marca), de forma separada en el mortero de gata, hasta obtener un polvo fino. Ambas muestras son colocadas en dos portamuestras distintas (una para cada anlisis), de manera azarosa, y se alisa la superficie, con una placa plana de vidrio (cabe destacar que microscpicamente el vidrio posee poros), para eliminar el exceso de la muestra a analizar. Por otra parte, se pulveriza una muestra de amoxicilina genrica y se calienta a una temperatura de 110 C hasta observar un cambio de color, de blanco a amarillo. Se deja enfriar y se coloca en el portamuestra de igual manera que las muestras anteriores. Se enciende el difractmetro de rayos X, modelo Bruker D8 Advance, y se

Figura 18: El antibitico Amoxicilina.

ensambla el portamuestra (una por anlisis) en el portaobjetos imantado presente en la maquinaria, este paso debe realizarse con sumo cuidado para evitar que los cristales de amoxicilina se disperse por todo el portamuestra. Se selecciona el ngulo deseado y se procede con el anlisis. El difractograma obtenido o experimental, mediante un software computacional, es analizado y comparado con el difractograma terico de la amoxicilana, presente en la base de datos. RESULTADOS: Los resultados del anlisis de la amoxicilina, mediante la tcnica de difraccin de rayos X, fueron las siguientes (observar el difractograma, adjuntado al final del informe): Datos: ngulo 2: 15,1 (observado en el peak ms intenso del difractograma experimental). de Cobre: 1,54051 .

Se sabe que la amoxicilina cristaliza en un sistema de tipo ortorrmbico y sus vectores de traslacin a, b y c, son las siguientes: a = 15,62 . b = 18,78 . c = 6,645 .

Por lo tanto, al aplicar la funcin de raz cuadrada a la ecuacin anterior (caracterstico de un sistema ortorrmbico), se tiene que:

Se aplica la ecuacin de Bragg, para obtener la distancia de los planos (d):

En consecuencia, la suma de las coordenadas de los planos (h + k + l) corresponde a 7,00. Por lo tanto, para poder obtener dicha suma de coordenadas, existen 36 puntos distintos, que en teora, debera satisfacer la ecuacin anterior (tabla 1):

Por lo tanto, la distancia entre los planos es de 5,86 .

PLANOS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36

h 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 4 4 4 4 5 5 5 6 6 7

k 0 1 2 3 4 5 6 7 0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 0 1 2 3 0 1 2 0 1 0

L 7 6 5 4 3 2 1 0 6 5 4 3 2 1 0 5 4 3 2 1 0 4 3 2 1 0 3 2 1 0 2 1 0 1 0 0

h+k+l

DISCUSIN: Analizados la cantidad de planos existentes para los cristales de amoxicilina, se procedi comprobar cada uno de ellos en la frmula del sistema ortorrmbico:

Todos los puntos (h,k,l) de los 36 planos que se pudo obtener, no cumpli con satisfacer la ecuacin anterior, por ende, tampoco se pudo comprobar cul es el plano analizado y con el que se pudo obtener el peak ms alto en el difractograma.

Por otra parte, obtenidos los difractogramas de la amoxicilina genrica y la amoxicilina de marca (Amoval), se procedi a compararlos entre s, y con el difractograma presente en la base de datos, la mayor parte de los peaks coinciden, tanto entre las amoxicilinas genrica y de marca como con la amoxicilina terica, por lo tanto, no existe prcticamente alguna diferencia entre ellas. El difractograma obtenido de la amoxilina calentada a 110 C consista en peaks no definidos y de muy baja amplitud y que comparado con el difractograma de la amoxicilna genrica, se pudo deducir que hubo un cambio en la conformacin cristalina de la amoxicilina, pasando de un sistema ortorrmbico hacia un sistema amorfo, que el difractmetro de rayos X no puede detectar (de ah provienen los peaks no definidos).

Tabla 1: Tabulacin de las coordenadas (h,k,l) de todos los planos posibles.

CONCLUSIN: Se pudo determinar el difractograma de la amoxicilina genrica y de la amoxicilina de marca (Amoval) y se concluye que prcticamente no existe alguna diferencia en el principio activo ni excipientes en su composicin. Ya que las composiciones fsicas de las muestras de amoxicilina analizadas (genrica y de marca), fueron muy parecidas, podremos deducir tambin, que su efecto farmacocintico debera ser el mismo y se estara pagando ms, por un medicamento que cumple la misma funcin, que otro de menor precio. No se pudo determinar, con exactitud, el plano del peak mayor del difractograma de la amoxicilina, ya que no satisfaca la ecuacin de un sistema ortorrmbico. Se pudo determinar que la amoxicilina tratada con calor a 110 C perdi su estructura cristalina, ya que su difractograma es poco claro y sus peaks son poco definidos e intensos, convirtindose en un slido amorfo. Por ltimo, esta prctica de laboratorio nos permiti complementar nuestros conocimientos con respecto a la difraccin de rayos X, siendo sta de gran utilidad para nuestra formacin profesional.

BIBLIOGRAFA: Barceinas J., Jurez A., ORDENAMIENTO ATMICO DE LOS SLIDOS <http://prof.usb.ve/hreveron/capitulo 3.pdf>. SIMULACIN DE LA DIFRACCIN DE RAYOS X <http://www.uv.es/cantarer/esol/p2. pdf>. Cervantes M., Cifuentes F., Islas S., COMPARACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE AMOXICILINA TRIHIDRATADA ORIGINAL, SIMILAR Y GENRICA <http://www.cch.unam.mx/ssaa/natu rales/pdf/Amoxicilina.pdf>.